大豆肽对大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流的影响

目的探讨大豆肽对大鼠心室肌细胞L-钙通道电流(ICa-L)的影响。方法采用全细胞膜片钳技术观察不同剂量(0.03、0.1、0.3mmol.L-1)大豆肽酶法对急性分离的成年大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流(ICa-L)的影响。结果大豆肽0.03、0.1、0.3 mmol.L-1均明显抑制ICa-L,分别使ICa-L峰值降低21.7%(P<0.05),23.6%和30.7%(P<0.01),该作用具有剂量依赖性。大豆肽使ICa-L的I-V关系曲线上移,但原有的I-V依赖性特征不变。结论大豆肽对大鼠心室肌细胞ICa-L具有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性。     

肿瘤坏死因子α抑制豚鼠急性缺血心室肌细胞L型钙通道电流

为探讨肿瘤坏死因子α对正常及模拟缺血状态下豚鼠心室肌细胞L型钙通道电流的影响。全细胞膜片技术记录豚鼠心室肌细胞单个L型钙通道电流。肿瘤坏死因子α(100、300和500 ku/L)对豚鼠心室肌细胞L型钙通道电流峰值的影响与对照组均无明显差异(P>0.05),但模拟急性缺血时,同浓度的肿瘤坏死因子α却明显抑制豚鼠心室肌细胞L型钙通道电流峰值并呈浓度依赖性,抑制率分别为46.5％±3.5％、62.7％±3.0％和80,7％±3.7％,与对照组和单纯缺血组相比差异明显(均P<0.05)。正常灌流液中不同浓度的肿瘤坏死因子α对豚鼠心室肌细胞峰值L型钙通道电流无明显影响;但模拟急性缺血时其却呈浓度依赖性地增强缺血对豚鼠心室肌细胞的L型钙通道电流峰值抑制作用。     

自发高血压大鼠肥厚心肌L型钙通道电流变化及与左室肥厚的关系

目的探讨自发高血压大鼠肥厚心肌L型钙通道电流的动态演变规律及与左室肥厚的关系。方法采用全细胞膜片钳技术记录10,24和34周龄组(n均为10)自发高血压大鼠左室心肌L型钙通道电流(ICa-L)及膜电容(MC),同时测定大鼠动脉收缩压(SBP)和左室质量指数(LVMI),以10周龄Wistar大鼠为对照组(n=10)。结果①自发高血压大鼠的LVMI及MC明显大于对照组(P<0.01)。在自发高血压大鼠中,各周龄组的MC和LVMI具有明显差别(P<0.01)。②10周龄组ICa-L电流密度明显大于对照组(-7.2±0.9pA/pFvs-5.7±0.6pA/pF,P<0.05),34周龄组ICa-L电流密度明显小于对照组(-4.2±0.3pA/pFvs-5.7±0.6pA/pF,P<0.05)。③ICa-L电流密度与LVMI呈负相关关系(r=-0.95,P<0.01),同时LVMI和大鼠周龄是影响ICa-L电流密度的主要因素(P<0.01)。结论左室肥厚越明显,ICa-L电流密度越降低。     

2型糖尿病大鼠心房钙通道及钙电流的变化

目的研究2型糖尿病大鼠心房组织钙离子通道的表达及钙电流的改变情况。方法 30只雄性Wistar成年大鼠随机分为对照组和糖尿病组。其中糖尿病组高脂高糖饮食4周后给予小剂量链脲佐菌素35mg/kg腹腔注射,建立2型糖尿病模型。8周后取两组大鼠的血清测定血糖、胰岛素、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白以及高密度脂蛋白,判定两组的代谢情况。将固定后的大鼠心房组织切成冰冻切片,通过免疫荧光双标染色法测定两组的Cav1.2,Cav3.1和Cav3.2的表达情况。采用Langendorff装置进行急性分离成年大鼠心房细胞,通过全细胞膜片钳技术分别测定两组L型和T型钙电流的峰值电流、I-V曲线、稳态激活和失活电流曲线等数据。结果与对照组相比,糖尿病组有严重的代谢紊乱,Cav1.2的蛋白表达降低,Cav3.1的蛋白表达升高,Cav3.2的蛋白表达未见明显改变。另外,糖尿病组L型钙电流的峰值电流显著降低(P0.05)、电流-电压(I-V)曲线下移、稳态激活和失活电流曲线未见明显差异(P0.05),T型钙电流的峰值电流显著升高(P0.05)、电流-电压(I-V)曲线上移、稳态激活电流曲线未见明显差异(P0.05)。结论 2型糖尿病大鼠心房肌细胞有着明显的钙通道重构,导致L型钙电流密度下降,T型钙电流密度上升。     

卡维地洛对大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

目的研究卡维地洛对大鼠心室肌细胞L型钙电流(ICa,L)的影响,探讨卡维地洛在离子通道水平的药理机制。方法用急性酶解法获得大鼠单个心室肌细胞,用标准全细胞膜片钳技术记录ICa,L,观察不同浓度卡维地洛对ICa,L的影响。结果①卡维地洛呈浓度依赖性抑制ICa,L,1μmol/L卡维地洛能使心肌细胞ICa,L电流-电压关系曲线明显上移,峰电流密度减少(7.80±0.65pA/pFvs4.89±0.52pA/pF,n=10,P<0.05),但激活电位、峰电位和翻转电位无明显改变。②卡维地洛能使ICa,L失活曲线明显左移,但对ICa,L激活和复活曲线无明显影响。③0.1μmol/L卡维地洛对钙电流无明显影响,但可以明显阻断异丙肾上腺素增加钙电流效应。同时,卡维地洛对钙电流的抑制效应不能被哌唑嗪和普奈洛尔阻断。结论卡维地洛呈浓度依赖性地抑制心室肌细胞L型钙通道。     

急性低氧对家兔心室肌细胞钙、钾通道电流的影响

目的:研究急性低氧对单个家兔心室肌细胞L-型钙通道电流(L-Ica)、ATP敏感性钾通道电流(Ik(ATP)以及短暂外向钾电流(Ito)的影响,以探讨急性低氧导致动作电位时程(APD)缩短的机制。方法:应用膜片钳全细胞记录方法。结果:低氧15分钟后心室肌细胞APD明显缩短(由491±57ms降至287±53ms,P<0.01);L-Ica峰值降低(由1.57±0.29 nA降至0.83士0.15 nA,P<0.01),电流-电压曲线上移;IK(ATP)通道开放,短暂外向钾电流(Ito)峰值增大(由4.76士0.43nA升至5.41±0.53hA,P<0.05);复氧2分钟后,IK(ATP)受到抑制(由2.98±0.37nA降至610.9±42.IPA,P<0.01)。结论:急性低氧时APD的缩短是L-Ica、IK(ATP)以及Ito变化综合作用的结果。     

何首乌二苯乙烯苷对大鼠海马神经元L型钙离子通道的影响

目的 研究二苯乙烯苷对大鼠海马神经元L型钙离子通道的影响.方法 用全细胞膜片钳技术记录大鼠海马神经元钙通道电流.结果 ①细胞外给予2.0和6.0μnol/L二苯乙烯苷对正常的高电压激活钙通道电流的抑制差异不具有统计学意义(P＞0.05).②细胞外给予1 μnol/L的Aβ后再分别给予2.0和6.0μmol/L二苯乙烯苷,显示L型钙电流/电压(Ⅰ-V)曲线逐渐上移,但对钙离子的抑制作用与Aβ组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 二苯乙烯苷对大鼠海马神经元L型钙离子通道可能不具有影响.     

к阿片受体介导的抗心律失常作用

目的:研究激动к阿片受体对大鼠心肌缺血性心律失常的影响. 方法:在结扎大鼠冠状动脉的同时,静脉注射选择性к阿片受体激动剂U50488H,观察其对大鼠心率(HR)、左心室内压(LVSP)和室性心律失常发生的影响;分离大鼠心室肌细胞,观察U50488H对细胞内钙和L-型钙电流的影响. 结果:心肌缺血后,大鼠HR无明显变化,LVSP 显著降低,心电图显示了缺血性改变和心律失常发生;心肌缺血并给予U50488H后,HR显著减慢,LVSP进一步降低,大鼠心肌缺血性心律失常的发生率以及心律失常评分明显降低.U50488H可明显降低心肌细胞的钙瞬变,并能显著降低L-型钙电流.U50488H的作用均可被选择性к阿片受体阻断剂nor-BNI阻断.结论:激动к阿片受体可减少大鼠心肌缺血性心律失常的发生,其机制可能与其抑制L-型钙通道和细胞内钙有关.     

辛伐他汀对舒张功能不全大鼠心房肌细胞L型钙通道电流及蛋白表达的影响

目的探讨辛伐他汀对舒张功能不全衰大鼠心房肌细胞L型钙通道电流和L型钙通道相关基因Cav1.2蛋白表达的影响。方法30只雄性SD大鼠,随机分组:对照组、模型组、辛伐他汀组。采用腹主动脉缩窄建立舒张功能不全心力衰竭模型,对照组只开腹和分离腹主动脉。辛伐他汀组大鼠术后灌胃给予辛伐他汀2mg/(kg·d);对照组和模型组大鼠灌胃给予同等量的生理盐水共4周。4周末颈动脉插管记录血流动力学变化,用急性酶解法获得单个大鼠心房肌细胞和标准全细胞膜片钳技术记录通道电流。凝胶电泳法记录心房肌细胞Cav1.2的蛋白表达。结果(1)与对照组比较,模型组大鼠血流动力学显示左心室收缩压和左心室舒张末期压升高,左心室松弛时间常数延长,平均左心室内压最大下降速率下降;辛伐他汀组左心室收缩压、左心室舒张末期压和左心室松弛时间常数明显低于模型组,平均左心室内压最大下降速率明显高于模型组;三组大鼠心率、平均左心室内压最大上升速率以及三组细胞膜电容无明显差异。(2)与对照组比较,模型组L型钙通道电流密度峰值明显少于对照组,激活、失活和复活动力学特征无显著差异;辛伐他汀组L型钙通道电流密度峰值明显大于模型组,失活减慢,激活和复活动力学特征差异均无显著性。(3)与对照组比较,模型组大鼠心房肌细胞Cav1.2蛋白表达水平明显下降;辛伐他汀组心房肌细胞Cav1.2蛋白表达水平明显大于模型组。结论辛伐他汀明显抑制舒张功能不全心力衰竭大鼠心房肌L型钙通道电流下调,此作用与增加心房肌Cav1.2蛋白表达水平有关。     

κ阿片受体介导的抗心律失常作用

目的：研究激动κ阿片受体对大鼠心肌缺血性心律失常的影响。方法：在结扎大鼠冠状动脉的同时，静脉注射选择性κ阿片受体激动剂U50488H，观察其对大鼠心率(HR)、左心室内压(LVSP)和室性心律失常发生的影响；分离大鼠心室肌细胞，观察U50488H对细胞内钙和L—型钙电流的影响。结果：心肌缺血后，大鼠HR无明显变化，LVSP显著降低，心电图显示了缺血性改变和心律失常发生；心肌缺血并给予U50488H后，HR显著减慢，LVSP进一步降低，大鼠心肌缺血性心律失常的发生率以及心律失常评分明显降低。U50488H可明显降低心肌细胞的钙瞬变，并能显著降低L—型钙电流。U50488H的作用均可被选择性κ阿片受体阻断剂nor—BNI阻断。结论：激动κ阿片受体可减少大鼠心肌缺血性心律失常的发生，其机制可能与其抑制L一型钙通道和细胞内钙有关。     

关附甲素对单个心肌细胞钠通道的阻断作用

用膜片钳全细胞记录法研究关附甲素（ＧＡ）对豚鼠单个心室肌细胞钠离子通道电流（Ｉ_（Ｎａ））的作用。结果表明：ＧＡ明显地抑制Ｉ_（Ｎａ），使其最大峰值由８．０２±２．５３ｎＡ降至４．４１±１．８１ｎＡ（ｎ＝８，Ｐ＜０．０１）；使Ｉ_（Ｎａ）的电流－电压曲线上移，但不使其峰值发生偏移；使钠通道灭活曲线左移，明显减慢钠通道灭活后的恢复过程。由此提示ＧＡ与失活态的钠通道结合而抑制Ｉ_（Ｎａ）对Ｉ_（Ｎａ）的阻滞作用为其抗心律失常作用的主要机制。ＧＡ对Ｉ_（Ｎａ）的作用可以用受体调节学说解释。     

卡维地洛对抗乌头碱诱发的大鼠心律失常作用的研究

评价卡维地洛抗大鼠实验性心律失常的作用 ,探讨其抗心律失常作用的离子通道机理 ,为临床用药提供理论依据。采用乌头碱诱发大鼠心律失常模型 ;采用膜片钳技术 ,观察乌头碱、卡维地洛对急性分离的大鼠心室肌细胞钠通道电流 (INa)的影响。结果 :诱发大鼠出现室性早搏、室性心动过速、心室颤动及心脏停搏时 ,对照组及卡维地洛组所用乌头碱的量 (μg)分别为 :室性早搏 :2 1.75± 3.4 7vs 31.81± 2 .0 4 ;室性心动过速 :2 3.5 2± 4 .13vs 36 .0 6± 3.79;心室颤动 :37.6 3± 7.94vs 6 4 .13± 1.4 0 ;心脏停搏 :6 9.31± 1.85vs 84 .6 5± 5 .2 5。利用膜片钳技术观察到 :对照组INa密度为 :5 8.6 3± 11.6 5 pA/pF ;卡维地洛组加入乌头碱后以及再加入卡维地洛后的INa密度分别为73.35± 12 .80 (pA/pF) ;10 .19± 0 .0 2 (pA/pF) ,与自身加药前相比P <0 .0 5。乌头碱及卡维地洛使INaI V曲线分别向下方及向上方移位。结论 :卡维地洛具有抗乌头碱诱发的大鼠心律失常的作用 ,其抗心律失常作用机制之一可能与Ⅰ类抗心律失常药类似 ,即抑制INa。     

心力衰竭家兔左室短暂外向钾电流下调的分子基础

目的为探讨心力衰竭(简称心衰)兔左室短暂外向钾电流(Ito)下调的分子基础。方法采用结扎家兔冠状动脉左前降支的方法制备缺血性心衰模型。应用膜片钳全细胞记录方法记录左室心肌细胞Ito,描记电流-电压(I-V)曲线;应用半定量-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测电压依赖性Kv1.4和Kv4.3钾通道α亚单位mRNA表达,并以图象分析系统对其进行半定量分析。结果心衰组家兔左室心肌细胞Ito密度较对照组显著降低,I-V曲线明显下移;指令电压为+70mV时,心衰组Ito密度(9.73±0.94pA/pF,n=5)显著低于对照组(14.35±1.16pA/pF,n=4)(P<0.01)。Kv1.4和Kv4.3钾通道α亚单位mRNA表达心衰组(分别为0.66±0.05,0.21±0.02,n=5)也较对照组(分别为0.95±0.07,0.531±0.04,n=5)显著降低(P均<0.01)。结论心衰家兔左室Ito电流密度下调可能受转录水平调节。     

三磷酸腺苷敏感性钾通道开放剂对模拟缺血/再灌注乳鼠窦房结细胞内钙及L-型钙电流的影响

通过观察三磷酸腺苷敏感性钾通道(KATP)开放剂对模拟缺血/再灌注(I/R)时乳鼠窦房结细胞内Ca2+及ICaL的影响,探讨模拟缺血预适应(IP)对模拟I/R时窦房结细胞的保护机制。取培养2天的乳鼠窦房结细胞,随机分为①对照组;②模拟I/R组;③模拟IP组;④Diazoxide(线粒体KATP开放剂)+模拟I/R组;⑤5HD(线粒体KATP阻断剂)+模拟IP组。以免疫荧光技术标记细胞内Ca2+,通过激光共聚焦显微镜检测荧光强度变化;以全细胞膜片钳技术检测ICaL。结果:①Diazoxide预处理能模拟IP效应,显著降低I/R后窦房结细胞内Ca2+荧光强度(P<0.01),增加相应电压下的ICaL电流密度,使电流电压曲线相对下移。②5HD预处理阻断了IP效应,其窦房结细胞内Ca2+荧光强度及ICaL电流密度与I/R组接近。结论:KATP开放剂预处理能模拟IP效应,减轻模拟I/R引起的窦房结细胞内Ca2+超载,改善受抑的ICaL。     

Functional remodeling of Ca2+-activated Cl-channel in pacing induced canine failing heart

To determine whether Ca²⁺ activated Cl^-current (I_Cl（Ca）) contributes to the functional remodeling of the failing heart. Methods Whole cell patch-clamp recording technique was employed to record the I_Cl（Ca） in cardiac myocytes enzymatically isolated from rapidly pacing induced canine failing hearts at room temperature and compared that of the normal hearts （Nor）.Results The current density of DIDS （200M） sensitive I_Cl（Ca） induced by intracellular Ca²⁺ release trigged by L-type Ca²⁺ current (I_Ca,L) was significantly decreased in heart failare （HF） cells compared to Nor cells.At membrane voltage of 20mV,the I_Cl（Ca） density was 3.02±0. 54 pA/pF in Nor （n=6） vs.1.31±0.25 pA/pF in HF （n=8） cells,（P<0.01）,while the averaged I_Ca,L density did not show difference between two groups.The time constant of current decay of I_Cl（Ca） was similar in both types of cells.On the other hand,in intra cellular Ca²⁺ clamped mode,where the [Ca²⁺]_i was maintained at 100nmol/L,I_Cl（Ca） density be increased significantly in HF cells when the membrane voltage at +30mV or higher.Conclusions Our results suggest that I_Cl（Ca） density was decreased in pacing induced failing heart but the channel function be enhanced.Impaired Ca²⁺ handing in HF cells rather than reduced I_Cl（Ca） channel function itself may have caused this abnormality.The I_Cl（Ca） density reduction might contribute to the prolongation of action potential in failing heart.The I_Cl（Ca） channel function up-regulation is likely to cause cardiac arrhythmia by inducing a delayed after depolarization,when Ca²⁺ overload occurred in diastolic failing heart cells.     

盐酸关附甲素对豚鼠和大鼠心肌细胞钾通道的阻断作用

目的用膜片钳全细胞记录法观察盐酸关附甲素(GFA)对分离的单个豚鼠心室肌细胞缓慢激活型延迟整流钾电流(IKs),大鼠内向整流钾电流(IK1)、瞬时外向钾电流(Ito)的影响。方法用急性酶解法分离获得单个豚鼠和大鼠心室肌细胞。用标准的全细胞膜片钳技术记录IKs、IK1、Ito离子通道电流,观察不同浓度的GFA对豚鼠心室肌细胞IKs,大鼠心室肌细胞IK1、Ito的影响。结果50,150,500μmol/LGFA使IKs尾电流(IKs,tail)最大峰值电流密度分别降低11.4%±3.32%、23.3%±7.36%、36.7%±4.99%,P<0.05;使IK1稳态电流密度分别降低5.1%±0.6%、7.5%±0.9%、7.2%±0.9%;50,500μmol/LGFA使Ito最大峰值电流密度分别降低6.1%±0.64%、8.6%±1.13%。结论GFA对IKs具有浓度依赖性阻滞作用,这可能是其延长动作电位时程而对静息电位影响不大的电生理基础,是其抗心律失常作用的机制之一。     

Nicorandil Improves Ischemic Changes in Epicardial ECG During Short-Term Coronary Occlusion by Opening ATP-Sensitive Potassium Channels in Pigs

The aims of this study were to investigate whether nicorandil(NIC), an ATP-sensitive potassium channel (KATP) opener and nitrate, hasantiischemic effects during transient ischemia in pigs, and to investigatewhether its effects are due to its K_ATP-opening action ornitrate action. Myocardial ischemia was induced by ligating the proximalportion of the left anterior descending coronary artery for 1 minute inanesthetized open-chest pigs, and was measured as the magnitude ofST-segment elevation on epicardial electrocardiogram (ECG). EpicardialST-segment elevation during coronary occlusion was significantlyreduced by pretreatment with NIC (3 mg, intracoronary [ic]), butnot by pretreatment with nitroglycerin (NTG, 0.2 mg, ic). Pretreatment withglibenclamide (GLB, a KATP blocker, 6 mg, ic) significantly augmented theST-segment elevation during coronary occlusion. The augmentation ofST-segment elevation by GLB was significantly reduced by subsequentadministration of NIC, but not by that of NTG (0.2 mg, ic). There were nosignificant differences between hemodynamic variables immediately beforecoronary occlusion with and without pretreatment. The intracoronaryadministration of NIC (3 mg) significantly shortened the endocardialmonophasic action potential durations at 50% (MAPD50) and90% repolarization (MAPD90) by 28.3 ± 6.9% and 17.0± 4.7%, respectively. These results suggest that theintracoronary administration of NIC has antiischemic effects duringtransient ischemia via KATP activation in myocardium     

缬草单萜氧化物对兔单个心室肌细胞L-型钙电流的影响

利用全细胞膜片钳记录技术研究30μg/L和100μg/L缬草单萜氧化物(VMO)对兔单个心室肌细胞L型钙电流(ICaL)和动作电位的影响。结果:30μg/L和100μg/L的VMO使兔心室肌细胞ICaL峰值由6.04±0.59pA/pF分别减至3.99±0.31pA/pF和2.31±0.24pA/pF(n=8,P<0.01);VMO使ICaL的电流电压曲线上移,但不改变其激活电位、电位峰值和反转电位;VMO还使钙电流失活曲线左移。30μg/LVMO可使动作电位时程(APD)明显缩短,APD50和APD90分别缩短了50.3%和29.6%(n=16,P<0.05),而静息电位和动作电位幅值无明显改变。结论:VMO对LCaL具有浓度依赖性阻滞作用。这可能是其对心血管作用的重要机制之一。     

大白鼠心室肌细胞ClC-2型氯通道的特性

目的研究在生理及病理条件下C lC-2型氯通道(简称C lC-2)的特性。方法以酶解法分离大白鼠心室肌细胞,先后用正常、改变渗透压以及不同的pH值的灌流液灌流,并采用膜片钳全细胞记录法观察心室肌细胞C lC-2通道的活性变化。结果①正常心室肌细胞的C lC-2通道具有电压依赖性。它在细胞膜超极化(-40~-100 mV)时激活,由C l-介导的一种内向整流电流(IC I,ir)。低渗时细胞膨胀会加速激活,增加电流强度。高渗时反之。它可以被9-蒽甲酸(9-AC)所阻断,但对乙拌磷1,2-二苯乙烯衍生物SITS不敏感。②当pH值从7.4升高到8.0时,IC l,ir强度减小;当pH值从7.4下降到6.8时IC l,ir强度明显增加。在pH值为5.5的时候,电流几乎为零。结论C lC-2通道介导的IC l,ir,在超极化、低渗、细胞肿胀及酸性环境下其电流强度明显增加。