佐剂FCA与Quil A对rGST-Sj32的免疫增强作用的比较

目的比较弗氏完全佐剂(FCA)与皂素的纯化物Quil A的免疫增强作用,进一步提高重组抗原rGST-Sj32的免疫效果.方法rGST-Sj32+FCA或Quil A免疫NIH小鼠3次,ELISA法检测抗体水平,用减虫率及减卵率表示保护效果.结果与PBS对照组比较,rGST-Sj32+FCA免疫小鼠减虫率为42.9%,每克肝卵(LEPG)减少率51.0%,每雌肝卵(LEPF)减少率为23.9%,抗体滴度达125 600.rGST-Sj32+Quil A免疫小鼠减虫率为46.0%,LEPG减少率39.4%,LEPF减少率为8.5%,抗体滴度达151 200.结论FCA和Quil A均可增强rGST-Sj32免疫小鼠的抗感染保护性免疫力;FCA亦可增强rGST-Sj32诱导小鼠抗生殖免疫,Quil A无增强抗生殖免疫的作用.     

日本血吸虫重组抗原rSjGST-32诱导小鼠保护性免疫效果的比较

目的　探索日本血吸虫重组抗原rSjGST-32适合的免疫剂量。　方法　以50、100、200μg3个不同剂量rSjGST-32加佐剂皂角甙A(QuilA)50μg免疫BALB/c小鼠,同时设QuilA和PBS对照组。ELISA法检测抗体水平。末次免疫4wk后攻击感染,用减虫率及减卵率表示保护力。　结果　与PBS对照组比较,50、100、200μgrSjGST-32组的减虫率分别为38.1%,47.8%和48.8%;每克肝卵(LEPG)减少率分别为39.1%,53.5%和53.6%;每条雌虫每克肝所含虫卵数(LEPF)减少率分别为22.5%,22.8%和21.8%;抗体滴度分别达1∶51200,1∶102400和1∶102400。　结论　重组抗原rSjGST-32加QuilA佐剂免疫小鼠,以100μgrSjGST-32剂量较为适合。     

IL-12对日本血吸虫重组SjGST-Sj32蛋白保护性免疫效果的影响

为进一步提高重组SjGST-Sj32(rSjGST-Sj32)的免疫保护作用,用IL-12作为佐剂进行免疫增强效果的观察。在0、2、6周用rSjGST-Sj32经皮下免疫小鼠3次,攻击感染后1、3、5、7、9d经腹腔注射佐剂IL-12，用减虫率及减卵率表示保护性免疫力。结果与PBS对照组相比,rSjGST-Sj32/IL-12组减虫率为38.2%(P<0.01),每克肝卵数（LEPG）减少率为75.1%（P<0.01）,每雌肝卵数(LEPF)减少率为72.9%(P<0.01)；与单独注射rSjGST-Sj32组相比，rSjGST-Sj32/IL-12组减虫率为26.8%(P<0.05),LEPG减少率为72.5%（P<0.01）,LEPF减少率为66.2%(P<0.05)。表明IL-12作为佐剂，可同时增强rSjGST-Sj32诱导小鼠产生的抗感染和抗生殖免疫保护力。     

重组日本血吸虫副肌球蛋白诱导小鼠保护力的研究

目的 用重组日本血吸虫副肌球蛋白（rSj97)免疫小鼠,观察保护效果。方法 小鼠随机分为3组,免疫组在0、2、15周,皮下注射rSj97加佐剂Quil,同一时间佐剂对照组和空白对照组注射等量QuilA和缓冲液A,第3次免疫后,每鼠经腹部贴片攻击感染50条尾蚴,感染后45d剖杀小鼠,观察其减虫和减卵效果。结果 与缓冲液和QuilA对照组相比,rSj97 QuilA免疫组的减虫率分别为44．1％（P＜0．01）和17．8％（P＜0．05）,每克肝组织虫卵数（LEPG）减少率分别为76．5％（P＜0．01）和16．9％（P＜0．05）,每雌肝组织虫卵数（LEPF）减少率分别为62．2％（P＜0．01）和6．1％（P＜0．05）。结论 rSj97加佐剂QuilA可诱导小鼠产生明显的抗血吸虫攻击感染的保护性免疫力及抗生殖免疫力。     

日本血吸虫组织蛋白酶B核酸疫菌血清抗体与抗生殖免疫关系的初步研究

目的 探讨日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗（Sj31B1N）抗生殖免疫的可能机理。方法 用Sj31B1N免疫小鼠,每2周1次,每次免疫前均尾静脉采血1次,作血清抗体动态变化分析,免疫4次后尾蚴攻击感染,感染后45天,计数成虫负荷和肝、肠组织内虫卵数。结果 用Sj312B1N免疫小鼠后第2周部分小鼠血清中出现了抗体,随时间延长,出现抗体阳性组小鼠数量增多,抗体滴度增加。抗体阳性组小鼠与阴性组小鼠对比,成虫减少率40.6%,肝组织减卵率为48.0%,肠组织减卵率为45.4%。结论 核酸疫苗Sj31B1N可有效地诱导小鼠产生抗体,并且具有免疫保护作用。核酸疫苗Sj31B1N所诱导的体液免疫可能是抗日本血吸虫生殖免疫的机理之一。     

日本血吸虫31kDa组织蛋白酶B DNA疫苗保护性免疫效果观察

目的观察日本血吸虫31kDa组织蛋白酶BDNA疫苗(Sj31B1N)在小鼠体内的保护性免疫效果.方法用Sj31B1N和Sj31B1N+pUCDNA疫苗肌注免疫BALB/C小鼠,用空白质粒载体VR1012做对照,在0、4、8周共免疫3次,每次免疫前及末次免疫后4周从尾静脉采血收集血清,经ELISA法检测小鼠血清抗体升高时,用日本血吸虫尾蚴攻击感染小鼠.结果Sj31B1N和Sj31B1N+pUC减虫率分别为24.2%和22.0%;肝卵减少率分别为34.9%和39.5%,每雌肝卵减少率分别为30.4%和35.3%.结论小鼠接种Sj31B1N后对日本血吸虫感染有减虫、减卵作用及抗雌虫生殖的作用.加质粒佐剂pUC未见有增强免疫效果的作用.     

日本血吸虫二价DNA疫苗的免疫保护效果研究

目的观察本课题组所构建日本血吸虫大陆株二价DNA疫苗VR101 2-SjGST-Sj31和VR1012-SjGST-Sj32的免疫保护效果.方法用纯化质粒免疫昆明鼠:60只小鼠分为5组,2个对照组的小鼠分别于股四头肌注射生理盐水100μl或空质粒VR1012 100μg,3个实验组的小鼠则同法分别注射VR1012-SjGST、VR1012-SjGST-Sj31和VR1012-SjGST-Sj32各100μg,每隔3周免疫1次,共免疫3次,以间接免疫荧光法观察VR1012-SjGST-Sj31、VR1012-SjGST-Sj32在肌肉组织中的表达后,每只鼠经腹部感染10条尾蚴,45 d后剖杀计数各小鼠成虫数及肝卵数,并用ELISA分析小鼠血清中的抗体.结果ELISA分析表明,第3次免疫后小鼠出现特异性IgG抗体.与生理盐水组比较,3个实验组的减虫率分别为33.90%、33.90%及27.14%(P＜0.01),减卵率分别为61.86%、74.88%及68.87%(均为P＜0.01),每雌肝减卵率分别为44.67%、59.40%、54.32%(P＜0.01).与VR1 012-SjGST组相比,VR1012-SjGST-Sj31和VR1012-SjGST-Sj32组的减卵率分别为34.19%(P＜0.01)、1 8.51%(P＜0.01),每雌肝减卵率为26.62%、17.46%(P＜0.01).结论DNA疫苗VR101 2-SjGST-Sj31和VR1012-SjGST-Sj32能在组织中正常表达,能诱导小鼠产生一定水平的抗日本血吸虫感染保护作用,二价疫苗的抗生殖免疫效果要大于单价疫苗.     

日本血吸虫rSj338及膜蛋白rSj22.6抗原表位联合免疫对小鼠的保护性研究

目的 观察日本血吸虫（中国大陆株）的线粒体相关蛋白rSj338及膜蛋白rSj22.6有效抗原表位混合后对小鼠的免疫保护性，为将来复合疫苗的研制提供理论依据。方法 分别用特异性抗rSj338抗体和抗rSj22.6的抗体筛选噬菌体随机12肽库，将获得的rSj338的有效抗原表位与rSj22.6有效抗表位混合后免疫BALB／c小鼠，并与rSj338的有效抗原表位混合免疫组进行比较。结果 rSj338的4种表位和rSj22.6抗原的4种表位混合免疫组小鼠获得了45．4％（P＜0．01）的减虫率及59．1％（P＜0．01）肝总减卵率，rSj338的4种表位混合免疫组小鼠获得了34．2％（P＜0．01）的减虫率及46．8％（P＜0．01）肝总减卵率；rSj338 4种表位和rSj22.6的4种表位混合免疫组获得的减虫率和肝总减卵率均高于rSj338的4种表位混合免疫组，差异有显著性（P＜0．05）。结论 两种抗原分子的有效抗原表位联合免疫的效果优于单个抗原分子的有效抗原表位。     

日本血吸虫模拟短肽诱导小鼠的免疫保护性研究

目的　研究日本血吸虫模拟短肽对小鼠的免疫保护效果,预测其在抗血吸虫感染中的作用。　方法　用粗提纯大鼠血清IgG为配基对噬菌体肽库进行3轮免疫学筛选。随机挑取噬菌体克隆,检测其特异性并进行序列分析;用阳性克隆免疫小鼠,以40条日本血吸虫尾蚴攻击感染,感染后42d剖杀取虫,计算减虫率和减卵率;用ELISA测定免疫鼠抗体反应。　结果　经过3轮筛选,特异性噬菌体得到有效富集;自动测序仪测序获得2个模拟肽分子;将其用于免疫小鼠后,各免疫组与对照组相比,2个模拟肽混合免疫组的减虫率为34.9%P<0.05,肝内减卵率为67.6%(P<0.001)。 2个模拟肽分子分别免疫小鼠 ,各组的减虫率为31.0%(P<0.05)和14.5%(P>0.05)及肝内减卵率为61.2%(P<0.001)和35.7%(P<0.05)。ELISA检测其免疫组鼠血清特异性IgG抗体滴度均大于1∶6 400以上。　结论　利用噬菌体表面呈现技术获得的2个模拟肽分子均可诱导部分抗日本血吸虫感染的免疫保护力     

重组日本血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团对小鼠免疫保护作用的研究

目的探讨重组日本血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团融合蛋白（GST-TSP2HD）抗血吸虫感染免疫保护效果。方法采用Glutathione sepharose 4B胶亲和层析法大量制备GST-TSP2HD蛋白。实验组以GST-TSP2HD融合蛋白的福氏佐剂抗原免疫C57BL/6J小鼠,同时设置佐剂对照组及GST蛋白免疫对照组,每2周加强免疫1次。加强免疫2次后每只小鼠经腹部皮肤感染（45±2）条血吸虫尾蚴。感染42 d后剖杀小鼠,经生理盐水静脉灌注收集成虫,计数减虫率,用KOH溶液消化肝组织收集虫卵,计算减卵率。组织切片观察小鼠肝组织病理变化,通过酶联免疫吸附试验检测小鼠血清中的抗体水平。结果与佐剂对照组相比,GST-TSP2HD融合蛋白免疫组的减虫率为27.10%,减卵率为32.30%;与GST蛋白免疫组相比,GST-TSP2HD融合蛋白免疫组可获得39.57%的减虫率,43.53%的减卵率。GST-TSP2HD融合蛋白免疫组肝组织中的虫卵肉芽肿数量明显减少,单个虫卵肉芽肿平均直径比佐剂对照组、GST蛋白免疫组分别下降了27.08%（P〈0.05）和40.53%（P〈0.01）,差异均有统计学意义。GST-TSP2HD能诱导高水平抗TSP2HD蛋白的特异性抗体IgG,其中IgG1、IgG2b和IgG2c亚类可能在小鼠抗血吸虫感染保护性免疫中发挥重要作用。结论日本血吸虫四跨膜蛋白是一个有效的日本血吸虫病疫苗候选分子。     

旋毛虫机蚴抗原诱导小鼠抗日本血吸虫保护性免疫的研究

目的：探讨旋毛虫幼虫抗原免疫小鼠对日本血吸虫攻击感染的交叉保护作用。方法：用4种不同的旋毛虫幼虫抗原制剂经颈部皮下多点免疫小鼠，然后用日本血吸虫尾蚴30条或100条攻击感染，攻击后45d剖杀小鼠，收集成虫、肝组织和粪便中的虫卵，并计数。结果：4种不同制剂均可诱导不同程度的保护性免疫效应，以旋毛虫幼虫匀浆上清可溶性抗原（TsSA）效果较好，减虫率为21．3％，加用福氏佐剂时，其减虫率为29．3％，肝组织和粪便中的虫卵减少率分别达48％和58．5％，平均每鼠肝组织和粪便中的虫卵EPG减少率分别为41．7％和48．9％；当抗原剂量为10000条旋毛虫并加用福氏佐剂时，其减虫率达39．6％。结论：旋毛虫抗原免疫小鼠能诱导抗日本血吸虫攻击感染的免疫效应。     

旋毛虫肌蚴抗原诱导小鼠抗日本血吸虫保护性免疫的研究

目的：探讨旋毛虫幼虫抗原免疫小鼠对日本血吸虫攻击感染的交叉保护作用。方法：用４种不同的旋毛虫幼虫抗原制剂经颈部皮下多点免疫小鼠，然后用日本血吸虫尾蚴３０条或１００条攻击感染，攻击后４５ｄ剖杀小鼠，收集成虫、肝组织和粪便中的虫卵，并计数。结果：４种不同制剂均可诱导不同程度的保护性免疫效应，以旋毛虫幼虫匀浆上清可溶性抗原（ＴｓＳＡ）效果较好，减虫率为２１．３％，加用福氏佐剂时，其减虫率为２９．３％，肝组织和粪便中的虫卵减少率分别达４８％和５８．５％，平均每鼠肝组织和粪便中的虫卵ＥＰＧ减少率分别为４１．７％和４８．９％；当抗原剂量为１００００条旋毛虫并加用福氏佐剂时，其减虫率达３９．６％。结论：旋毛虫抗原免疫小鼠能诱导抗日本血吸虫攻击感染的免疫效应     

SD大鼠天然抗日本血吸虫感染免疫特性的初步研究

为探讨SD大鼠天然抗日本血吸虫（Schistosoma japonicum,Sj)感染的免疫学特性,用间接ELISA检测正常大鼠血清（NRS）与感染大鼠血清（IRS）中抗成虫可溶性抗原（AWA）及抗可溶性虫卵抗原（SEA）的特异性抗体,并用酶联免疫印迹技术分析NRS、IRS对AWA的识别;将NRS经尾静脉被动转移至昆明小鼠,攻击感染后第45d解剖冲虫,计算减虫率与减卵率。结果显示NRS与IRS中抗AWA、抗SEA特异性IgG抗体水平均高于正常昆明小鼠血清中相应的抗体水平。AWA中有两个抗原分子可被NRS特异性识别,分子量为272kDa与236kDa;IRS则识别AWA中分子量为272kDa、236kDa和80kDa的特异性条带。用NRS被动转移后,与对照组相比,实验组小鼠的减虫率与减卵率分别为19.10%及46．42％。故大鼠血清中存在天然抗Sj感染的抗体,对Sj攻击感染及生殖发育具有一定的拮抗作用。     

日本血吸虫云南品系SIEA对小鼠感染皖鄂品系血吸虫的免疫保护作用

目的观察日本血吸虫云南品系未成熟卵可溶性抗原SIEA免疫小鼠后攻击感染皖鄂品系血吸虫尾蚴,是否也能诱导出免疫保护效果。方法20只ICR小鼠随机分为免疫组和对照组,经日本血吸虫云南品系SIEA免疫后攻击感染皖鄂品系血吸虫尾蚴,感染后46d观察减虫率、粪卵减少率、雌虫子宫内虫卵数、肝表面虫卵结节数、肝脏各期虫卵数及各期虫卵构成比。结果SIEA免疫后粪卵及雌虫子宫内虫卵减少率分别为34．45％,23．69％（P〈0．05）;肝表面虫卵结节密度下降29．03％（P〈0．05）;肝组织内虫卵减少29．07％（P〈0．05）,成熟虫卵减少48．41％（P〈0．05）。肝组织内成熟虫卵比例下降,未成熟卵比例增加（P〈0．05）。结论日本血吸虫（云南品系）未成熟卵可溶性抗原（SIEA）的抗原性较强,小鼠经云南品系SIEA免疫后攻击感染皖鄂品系血吸虫尾蚴也诱导小鼠产生了抗卵胚发育及抗雌虫生殖免疫力,结果提示将来在中国大陆使用SIEA疫苗时,似可不必考虑血吸虫品系的影响。     

日本血吸虫SIEA66-68kDa抗原的分离、纯化及免疫保护性研究

目的研究日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原66-68kDa（SIEA66-68kDa）的动物免疫保护力,并对其作为天然分子疫苗的可行性进行评估。方法采用电泳切胶、电洗脱、超滤离心等技术,分离纯化SIEA66-68kDa天然分子抗原,免疫小鼠,待其产生抗体后进行尾蚴攻击感染（40尾/只）,计算减虫率和减卵率。结果 SIEA66-68kDa天然蛋白质分子能刺激机体产生抗日本血吸虫的作用,其减虫率为41.70%,每克肝脏减卵率为51.23%,雌虫子宫减卵率为29.30%,每克大肠减卵率为59.26%,每克粪便减卵率为45.17%,与对照组相比差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 SIEA66-68kDa天然分子抗原具有刺激小鼠产生较好的抗日本血吸虫感染的免疫保护作用,可作为抗日本血吸虫感染候选分子疫苗的靶标。     

日本血吸虫极低密度脂蛋白结合蛋白重组抗原的免疫保护性研究

目的?摇探讨日本血吸虫极低密度脂蛋白结合蛋白（SVLBP）重组抗原的免疫保护性及其作为候选疫苗的潜在价值。 方法 用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导克隆菌大量表达SVLBP重组抗原，以镍-次氮基三乙酸琼脂糖树脂（Ni-NTA）亲和层析法纯化制备SVLBP重组抗原；将纯化的重组抗原加福氏佐剂经皮下免疫C57BL/6小鼠，每隔2周免疫1次，在第3次免疫后10 d，经腹部皮肤攻击感染日本血吸虫尾蚴35±1条，感染后45 d剖杀，计数检获虫数和每克肝虫卵数（LEPG）。小鼠在免疫前和攻击感染后分别采眶窦血，用ELISA测定特异性IgG及其亚群抗体水平。 结果 相对于佐剂对照组，免疫组小鼠的减虫率为33.4%，减卵率为47.6%；免疫后小鼠产生高水平的特异性IgG（>1:6 400）；抗体亚类检测结果显示，免疫组小鼠 IgG2a、IgG2b、IgG1明显高于免疫前和佐剂对照组。 结论 日本血吸虫皮层蛋白SVLBP重组抗原能诱导小鼠产生一定的保护性免疫，是潜在的疫苗候选抗原分子。     

重组日本血吸虫副肌球蛋白诱导水牛保护性免疫的研究

为观察重组日本血吸虫副肌球蛋白(rSj97)对水牛的保护效果。20头水牛随机分为佐剂(QuilA)对照组和抗原(rSj97)免疫组。对照组仅注射QuilA,而免疫组注射QuilA加rSj97,在第0、2、15周肌肉注射。第3次免疫后两周经腹部贴片攻击感染1000条日本血吸虫尾蚴,感染后第49d剖杀冲虫,计数虫数和肝卵数。结果显示,与对照组相比,rSj97免疫组的减虫率为49.9%(P<0.05),肝脏减卵率57.3%(P<0.01)。提示rSj97可诱导水牛产生一定程度的抗血吸虫攻击感染的保护性免疫力,并具有一定程度的抗病作用,进一步证实了副肌球蛋白可作为抗血吸虫病的候选疫苗分子。     

日本血吸虫云南品系SIEA对小鼠感染皖鄂品系血吸虫的免疫保护作用(英文)

目的观察日本血吸虫云南品系未成熟卵可溶性抗原SIEA免疫小鼠后攻击感染皖鄂品系血吸虫尾蚴,是否也能诱导出免疫保护效果。方法 20只ICR小鼠随机分为免疫组和对照组,经日本血吸虫云南品系SIEA免疫后攻击感染皖鄂品系血吸虫尾蚴,感染后46 d观察减虫率、粪卵减少率、雌虫子宫内虫卵数、肝表面虫卵结节数、肝脏各期虫卵数及各期虫卵构成比。结果 SIEA免疫后粪卵及雌虫子宫内虫卵减少率分别为34.45%,23.69%(P<0.05);肝表面虫卵结节密度下降29.03%(P<0.05);肝组织内虫卵减少29.07%(P<0.05),成熟虫卵减少48.41%(P<0.05)。肝组织内成熟虫卵比例下降,未成熟卵比例增加(P<0.05)。结论日本血吸虫(云南品系)未成熟卵可溶性抗原(SIEA)的抗原性较强,小鼠经云南品系SIEA免疫后攻击感染皖鄂品系血吸虫尾蚴也诱导小鼠产生了抗卵胚发育及抗雌虫生殖免疫力,结果提示将来在中国大陆使用SIEA疫苗时,似可不必考虑血吸虫品系的影响。     

日本血吸虫核糖体蛋白SjRPS4基因及蛋白联合免疫保护性价值的研究

摘要：目的研究日本血吸虫核糖体蛋白（SjRPS4）基因和蛋白联合免疫对小鼠的保护效果。方法将SjRPS4 DNA疫苗和重组蛋白疫苗间隔2w 3次分别或联合免疫昆明鼠,2w后,每鼠感染尾蚴20条,45d后剖杀小鼠,计数成虫,肝、肠、粪及每雌子宫虫卵数。结果联合免疫组与生理盐水组相比较,获得了49.7%的减虫率、62.6%的粪减卵率、46.0%的每雌子宫减卵率、49.0%的肝减卵率、54.3%的肠减卵率（P均<0.01）,均显著高于单独的SjRPS4 DNA疫苗组36.2%的减虫率、48.7%的粪减卵率、35.2%的每雌子宫减卵率、41.8%的肝减卵率、40.5%的肠减卵率（P均<0.05）,及单独蛋白免疫组38.2%的减虫率、50.1%的粪减卵率、38.9%的每雌子宫减卵率、42.4%的肠减卵率（P均<0.05）。结论SjRPS4 DNA疫苗及重组蛋白疫苗均可诱导小鼠产生一定的免疫保护作用,且联合免疫方案保护效果优于单一疫苗。     

日本血吸虫重组32×103蛋白诱导小鼠保护力的研究

目的用重组日本血吸虫32×103蛋白(rSj32×103)免疫Balb/c鼠,检测特异性IgG抗体水平,并观察抗日本血吸虫的保护效果。方法用rSj32×103加佐剂免疫小鼠3次,分别在0、2、4周进行,第6周每鼠经腹部感染(40±1)条日本血吸虫尾蚴,感染后42d剖杀,计算减虫率。并用ELISA方法检测免疫后的抗体反应。结果间接ELISA测得免疫鼠特异性IgG抗体滴度达1∶12800。与对照组相比,减虫率为21.9%。结论用rSj32×103免疫小鼠后可诱导特异性IgG抗体,并能发挥一定的免疫保护作用。