抗HIV-1核心抗原p24单克隆抗体的制备及特性的初步鉴定

目的 :建立分泌抗HIV 1p2 4单克隆抗体 (mAb)的杂交瘤细胞株 ,并对其特性进行初步鉴定。方法 :以纯化的基因工程制备的p2 4抗原免疫BALB/c小鼠 ,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2 /0骨髓瘤细胞融合 ,经HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化后 ,用间接ELISA法及Dotblot对其进行筛选和特性鉴定。结果 :筛选到 2株可分泌抗HIV 1p2 4mAb的杂交瘤细胞 ,其腹水效价为 1×10 -5,亲和力为 1.7× 10 4～ 1.8×10 4mol/L ,mAb的Ig亚类均为IgG1。两株mAb与HBcAg、HCVRNA阳性血清及HIVgp4 1等均无交叉反应 ,只与HIV 1p2 4抗原阳性血清产生特异反应。结论 :成功地建立了 2株可分泌抗HIV 1p2 4mAb的杂交瘤细胞 ,为进一步研制HIV 1p2 4抗原的ELISA检测试剂盒奠定了基础     

抗HIV-1 Tat蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的:制备抗HIV-1 Tat蛋白的单克隆抗体(mAb),并对其进行初步鉴定.方法:通过动物免疫、细胞融合、克隆化制备抗Tat蛋白的mAb,并用ELISA法对所得mAb的特异性、抗原识别表位及相对亲和力等做了初步鉴定.结果:获得了3株抗Tat蛋白的mAb,这3株mAb均能特异识别Tat蛋白.结论:获得了3株杂交瘤细胞系,均可以稳定分泌抗HIV-1 Tat蛋白的mAb,有望为HIV早期检测及HIV抗病毒治疗提供有用工具.     

抗p185单克隆抗体的制备及初步应用

抗ｐ１８５单克隆抗体的制备及初步应用许金华杜红杨蔚孙素莲（北京市肿瘤防治研究所，北京１０００３４）ｐ１８５是癌基因ｃ－ｅｒｂＢ－２（或称ＨＥＲ－２／ｎｅｕ）的表达产物，其分子量为１８５ｋＤ，故称ｐ１８５。已知ｐ１８５在腺癌类如乳腺癌、卵巢癌、胃癌及...     

抗HIV-1 gp120单克隆抗体的制备及其初步应用

目的：制备抗HIV-1 gp120单克隆抗体（mAb），并建立一种可用于检测gp120的ELISA法。方法：采用基因工程抗原HIV-1gp120免疫BALB／c小鼠，通过B细胞杂交瘤技术制备抗HIV-1gp120的mAb。用ELISA法答定mAb的Ig亚类、效价及特异性。用饱和硫酸铵（SAS）纯化mAb，并用HRP标记后建立双mAb夹心ELISA法。结果：筛选出10株稳定分泌抗HIV-1gp120 mAb的杂交瘤细胞株，9株为IgG，其中4株的腹水效价为32X10～256X10所得mAb与HIV-1gp41、HIV-1p24及HIV一2gp36Ag均无交义反应，仅与HIV-1gp120产生特异性反应。用mAb 6H9和9H12，建立了双夹心ELISA法，检测gp120抗原的灵敏度是10μg／L。结论：获得10株特异性强、效价高的机HIV-1gp120的mAb，并建立了灵敏度良好的双mAb夹心ELISA法.     

抗多菌灵单克隆抗体的制备、纯化及初步鉴定

目的:制备抗多菌灵小鼠单克隆抗体(mAb),并初步鉴定其特性,为快速检测蘑菇、干菇类中残留的多菌灵提供基础。方法:将小分子的多菌灵交联在大分子载体匙孔嘁血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)上,KLH交联物用于免疫BALB/c小鼠,采用B细胞杂交瘤技术,通过融合,筛选制备抗多菌灵mAb,并通过ELISA方法测定抗体亲和力,检测mAb的交叉反应,及初步竞争抑制检测。结果:通过ELISA筛选出7株稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,其亚型均为IgG1。与同属于苯并咪唑类杀菌剂的苯菌灵和甲基硫菌灵没有交叉反应。竞争抑制检测结果显示MC-3细胞株竞争效果较好。结论:获得1株高特异性、高亲和力、能稳定分泌抗多菌灵抗体的杂交瘤细胞株,为进一步研发多菌灵残留免疫检测技术和产品奠定基础。     

抗AGR2单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的:制备鼠抗AGR2单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定及其初步应用研究。方法:以AGR2-MBP融合蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗AGR2的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb。用间接ELISA法测定mAb的效价,以Western blot鉴定mAb的特异性。用免疫荧光、免疫沉淀和MTT法对mAb进行初步应用研究。结果:获得1株可持续、稳定分泌抗AGR2的mAb的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞分泌的mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),腹水mAb的效价达1×10-6。Western blot检测显示,在Mr为20000处有1条清晰的带。免疫荧光显示,该mAb可与乳腺癌细胞中的AGR2蛋白结合。免疫沉淀证实该mAb可与天然状态的AGR2有效结合。MTT实验显示该mAb对乳腺癌细胞MCF7的生长有抑制作用。结论:制备出的鼠抗AGR2的mAb效价高、特异性良好,可抑制细胞的生长,有一定的应用价值,为进一步研究AGR2的功能及其在乳腺癌、前列腺癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具。     

抗HBeAg单克隆抗体的制备及初步鉴定

为获得能替代抗ＨＢｅＡｇ多克隆酶标记抗体做ＥＬＩＳＡ，我们用纯化的ＨＢｅＡｇ阳性血清，免疫Ｂａ１ｂ／ｃ小鼠，采用杂交瘤技术，获得８株能稳定分泌小鼠抗ＨＢｅＡｇｍＡｂ的杂交瘤细胞。对其特性进行了初步鉴定，并就这些单克隆抗体（ｍＡｂ）在ＥＬＩＳＡ反应中的特性进行了分析。１　材料和方法１－１　材料　ｅ抗原阳性的人血清经亲和层析纯化的ＨＢｅＡｇ，由本室收集并纯化。Ｂａ１ｂ／ｃ小鼠，购自上海西普尔－必凯实验动物有限公司。小鼠Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞，由中国科学院上海细胞生物学研究所提供。１－２　杂交瘤细胞株的…     

抗TPO单克隆抗体的制备及初步鉴定

抗ＴＰＯ单克隆抗体的制备及初步鉴定徐荣佳，刘军权，方蕾，姚仁南，陈晓英，徐广奎，陈复兴甲状腺过氧化物酶（ＴＰＯ）现已证明是甲状腺微粒体（ＴＭ）的主要抗原成份［１］。国外就其分子已作了较为深入的研究，并重组了其分子和产生了单克隆抗体。它对研究甲状腺自身...     

抗BrdU单克隆抗体的制备及初步鉴定

溴脱氧尿嘧啶核苷（Ｂｒｏｍｏｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ　ＢｒｄＵ）是ＤＮＡ前体胸腺嘧啶核苷的类似物。通过检测ＢｒｄＵ掺入Ｓ期细胞ＤＮＡ的基因片段,可避免用同位素标记所产生的放射性污染等副作用。本文在过碘酸氧化法偶联抗原的基础上,已制备出具有均一分泌活性...     

抗人μ链单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的:制备高效价的鼠源性抗人μ链单克隆抗体(mAb),并建立可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。方法:以人IgM全分子免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合,用间接ELISA法筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗μ链mAb的杂交瘤细胞株。mAb的特性(效价、Ig亚类、特异性及相对亲和力)采用ELISA及Westernblot法鉴定。以纯化的mAb包被建立ELISA捕捉法,并用于可疑乙脑患者标本中特异性IgM抗体的检测。结果:筛选到1株可稳定分泌抗人μ链mAb的细胞株2E5。mAb腹水的ELISA效价为1×10-6,Ig亚类(型)为IgG1(κ),相对亲和力为1×10-5。Westernblot结果显示mAb2E5仅与IgM的μ链结合,Mr为75000。以辛酸硫酸铵法纯化的mAb2E5包被,建立了ELISA捕捉法,用于30份乙脑患者血清IgM的检测,敏感性及特异性良好。结论:成功地制备1株抗人μ链mAb2E5,建立了可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。     

抗人NGF单克隆抗体的制备及初步鉴定

神经营养因子（　ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ　ｆａｃｔｏｒｓ，　ＮＴＦｓ）是一类对中枢和外周神经系统均有营养活性的蛋白质，其主要功能是促进神经系统的发育，保护并修复受损神经元，以及促进生长和增进认知记忆过程中神经元之间的连结［］。神经生长因子（ｎｅｒｖｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ，　ＮＧＦ）是发现最早、研究最多的一种ＮＴＦ。制备抗ＮＧＦ单克隆抗体（ｍＡｂ）可为研究其在体内组织中表达及分布提供一种工具，并可为基因工程制备ＮＧＦ提供检测方法。我们受澳大利亚Ｆｌｉｎｄｅｒ大学周兴福教授委托，研究制备了分…     

抗红细胞生成素单克隆抗体的制备及初步鉴定

红细胞生成素（ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ，ＥＰＯ）是一种主要由肾小管内皮细胞产生的酸性糖蛋白，正常人血浆和尿中含量甚微。ＥＰＯ的主要生理功能是通过刺激骨髓多能干细胞进入红细胞系，并促进其增殖、分化而调节外周血液中红细胞的数量。ＥＰＯ用于治疗慢性肾衰...     

抗ARL-1单克隆抗体的制备及初步应用

目的: 制备抗醛糖还原酶相似蛋白(aldosereductaselikeprotein, ARL- 1)的单克隆抗体 (mAb)并进行初步应用。方法: 用纯化的ARL- GST蛋白免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备mAb。间接ELISA法、Westernblot及免疫组织化学染色法, 对mAb进行鉴定及初步应用。结果: 获得 1株可稳定分泌抗ARL -1蛋白mAb的杂交瘤细胞系。mAb的Ig亚类为IgG2b, 轻链属于κ型。腹水mAb的效价为: 1∶4. 096×105。Westernblot的结果表明, ARL 1蛋白在被检测的肝癌组织中呈高表达, 而在相应的癌旁组织中不表达。免疫组织化学染色的结果表明, ARL -1蛋白在肝癌组织中呈高表达且主要定位在胞质内。结论: 成功地制备 1株抗ARL -1蛋白的mAb。初步应用的结果表明, ARL- 1蛋白在肝癌组织中呈高表达, 为进一步研究ARL -1蛋白的功能, 以及其与肝癌的确切关系奠定了基础。     

抗人重组IL－1单克隆抗体的制备及初步鉴定

以重组人ＩＬ－１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞６５３融合，得到一组分泌抗人重组ＩＬ－１单克隆抗体的杂交瘤细胞。对其中的３株ＹＡ１３３、ＹＡ１４０和ＹＡ１６３进行了初步鉴定；抗体类别为ＩｇＧ，亚类均为ｌｇＧｌ；免疫转印显示，３株抗体均能特异性地识别分子量为１７．５ｋＤ的ＩＬ－１蛋白条带；ＥＬＩＳＡ法证明与其它细胞因子如：ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＴＮＤ－α、ＩＦＮ－γ和ＧＭ－ＣＳＦ均无交又反应；放射免疫测定结果证实，３株抗体分别识别ＩＬ－１分子上两个不同的抗原决定簇。     

抗GRP78单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的:原核表达GRP78并制备抗GRP78的特异性单克隆抗体(mAb),并初步鉴定相应mAb的特性。方法:从肺癌患者组织中抽提总RNA,RT-PCR获得grp78全长基因,并通过原核重组表达GRP78蛋白;以纯化的GRP78蛋白免疫BALB/c小鼠,成功免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤Sp2/0细胞融合,筛选得到分泌特异性抗GRP78的mAb的杂交瘤细胞株;并通过Western blot及免疫组化初步鉴定其特异性。结果:成功构建重组表达质粒PET-28a-grp78并由大肠杆菌表达获得GRP78蛋白,被该蛋白免疫的BALB/c小鼠与Sp2/0细胞融合、筛选,获得3株稳定分泌抗GRP78抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2A1、4B8和4A12。采用其中1株4A12 mAb对3个肺癌患者组织样本进行Western blot检测以及免疫组化分析,结果均显示4A12 mAb能够特异识别肺癌组织表达的GRP78。结论:成功制备了抗GRP78的mAb,并能够特异识别肺癌组织表达的GRP78,为进一步研究GRP78在肿瘤治疗中的作用提供基础。     

抗肝癌NMP单克隆抗体的制备及初步鉴定

为制备出具较高特异性抗肝癌核基质蛋白单克隆抗体,以用于肝癌的基础和临床的研究。首次免疫用肝癌细胞纯核,用高盐抽提法提取的肝癌细胞核基质蛋白加强免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,ＥＬＩＳＡ法同时测定培养上清对肝癌核基质蛋白及正常肝细胞核基质蛋白的免疫反应,ＬＳＡＢ法进行单抗的鉴定。结果：建立了一株能稳定分泌抗肝癌核基质蛋白单抗的杂交瘤细胞株２Ｇ８,染色体数目为８６－９２,Ｉ     

抗人重组IL—1单克隆抗体的制备及初步鉴定

以重组人ＩＬ－１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞６５３融合，得到一组分泌抗人重组ＩＬ－１单克隆抗体的杂交瘤细胞。对其中的３株 ＹＡ１３３、ＹＡ１４０和ＹＡ１６３进行了初步鉴定，抗体类别为ＩｇＧ，亚类均为ＩｇＧ１，免疫转印显示，３株抗体均能特异性地识别分子量为１７．５ｋＤ的ＩＬ－１蛋白条带，ＥＬＩＳＡ法证明与其它细胞因子如：ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＴＮＤ－α，ＩＦＮ－γ和ＧＭ－ＣＳＦ均无     

抗人DcR3单克隆抗体的制备、鉴定及应用

目的 制备抗DcR3单克隆抗体(mAb),鉴定其生物学特性,并应用于ELISA、Western blot、How cytometry(FCM)检测.方法 以纯化的可溶性DcR3(sDcR3)免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗DcR3 mAb.用Ig亚类EHSA试剂盒鉴定抗DcR3mAb的亚类.用ELISA方法测定抗DcR3 mAb与sDcR3结合的特性,SDS-PAGE鉴定抗DcR3 mAb与SW480细胞上清中DcR3结合的特性,以鉴定mAb的特性.用间接ELISA法检测腹水mAb的效价、亲和常数并进行表位分析.Western blot检测mAb的特异性及应用,并用所获抗DcR3单克隆抗体(mAb)通过流式细胞仪检测肿瘤细胞表面DcR3的表达水平.结果 获得4株可分泌DcR3 mAb的杂交瘤细胞系ZZ-393、ZZ-394、ZZ-151和ZZ-268.其中DcR3 mAb ZZ-268(下文简称为ZZ-268)的Ig亚类为IgGl(k型);腹水效价为1×10-5;亲和常数为1.28×109水平;ZZ-268和ZZ-151可识别与其他2种抗体小同的抗原表位;Westem blot证实,获得的ZZ-268可特异性地识别DcR3;通过流式细胞术可敏感地检测到不同肿瘤细胞表面DcR3的表达水平.结论 获得4株抗DcR3的mAb,其中ZZ-268效价高、特异性强,将此抗体用于膜DcR3与sDcR3的检测分析.     

抗HIV核心蛋白p24单克隆抗体的研制及鉴定

抗ＨＩＶ核心蛋白ｐ２４单克隆抗体的研制及鉴定王宏伟金宁一刘仔郭军庆郭志儒毛春生李萍殷震（解放军农牧大学研究所病毒室，长春１３００６２）人Ｉ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ１）是导致人获得性免疫缺陷综合征（ＡＩＤＳ）的主要病原［１］。对ＨＩＶ１感染的诊断，常...