粘着斑激酶对Tca8113舌鳞癌细胞生物学特性的影响

目的研究粘着斑激酶（FAK）在Tca8113舌鳞癌细胞中的表达及对其生长、粘附、侵袭转移能力的影响。方法采用FAK寡核苷酸转染的方法处理Tca8113舌鳞癌细胞,采用逆转录- 聚合酶链反应（RT- PCR）测定FAKmRNA水平的变化,间接免疫荧光方法检测胞浆FAK蛋白的表达,以Transwell小室和冲刷实验的方法计数细胞,测定细胞的粘附和侵袭能力的变化,MTT法检测细胞的生长抑制情况。结果反义FAK寡核苷酸转染后,Tca8113细胞侵袭、粘附、趋化运动能力均显著降低。转染48 h后,FAKmRNA和蛋白水平明显下降（P<0.05）。结论FAK对Tca8113细胞的增殖、存活、粘附及侵袭具有重要作用。     

RhoA小干扰RNA对舌癌细胞Tca8113增殖、侵袭影响的体外实验

目的 体外实验研究Ras基因家族同源物A(ras homolog gene family,member A,RhoA)小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)在舌癌转移中的作用.方法 登录Genebank确定人RhoA基因序列,利用RNA干扰技术针对RhoA的基因序列设计4条短链RNA,构建干扰表达载体,利用LipofectamineTM2000介导法将RhoA siRNA转染至舌癌细胞系Tca8113.转染细胞后48 h检测瞬时表达效率,经杀稻瘟菌素筛选及克隆化培养获得稳定抗性克隆转染株后,蛋白质印迹法检测RhoAsiRNA转染后的抑制效应,细胞计数绘制细胞生长曲线以观察RhoA siRNA转染前后细胞株的生长速度;划痕实验和Millicell小室实验检测转染细胞株的迁移力与侵袭力.结果 舌癌细胞转染RhoA siRNA后:RhoA蛋白表达下降;细胞倍增时间从38.0 h延长至45.7 h;细胞克隆形成率由35.2%降低至15.8%;细胞迁移能力减弱;细胞侵袭能力由100%降至58.9%,显著减弱.结论 RhoA siRNA能有效抑制舌癌Tca8113细胞中RhoA的表达,从而降低细胞增殖水平以及细胞侵袭力和迁移力,表明RhoA siRNA具有抑制舌癌细胞生物学特性的能力,提示RhoA在舌癌转移中可能发挥重要作用.     

Fas基因转染对舌鳞癌细胞系Tca8113凋亡的影响

目的探讨外源性Fas基因介导舌鳞癌细胞凋亡的可行性及其可能的分子机制。方法脂质体法将重组人Fas真核表达载体转染人舌鳞癌细胞系Tca8113，抗Fas单克隆抗体诱导其凋亡，Western blotting检测转染前后Tca8113细胞Fas蛋白表达水平，TUNEL法检测转染前后细胞凋亡水平。结果转染后Tca8113细胞Fas蛋白表达上调；抗Fas单克隆抗体可诱导Tca8113细胞凋亡，凋亡指数升高。结论上调Fas基因表达及应用抗Fas单克隆抗体可诱导肿瘤细胞凋亡，有可能作为肿瘤基因治疗的新途径。     

姜黄素对人舌鳞癌Tca8113细胞形态学的影响

目的 探讨姜黄素对体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的形态学影响.方法 以30、40、50 μmol/L的姜黄素溶液处理体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞,倒置显微镜下观察细胞生长状态,吖啶橙荧光染色和透射电镜观察细胞形态学变化.结果 倒置显微镜下可观察到细胞皱缩成圆形,核染色质浓集呈球形;激光共聚焦显微镜(吖啶橙染色)可见凋亡细胞的多种形态学改变;透射电镜见核染色质浓缩并沿核膜排列,可见凋亡小体.结论 姜黄素作用于人舌鳞癌Tca8113细胞后可出现细胞凋亡的形态学改变.     

Fas转染及抗体处理对舌鳞癌细胞Tca8113移植瘤形成和增殖的影响

目的　研究Fas转染和抗Fas单克隆抗体对舌鳞癌细胞系Tca8113裸鼠体内移植瘤形成和增殖的影响,探讨相关机制。方法　脂质体法以真核表达重组质粒pBK-fas转染舌鳞癌细胞系Tca8113。部分转染细胞行抗Fas单克隆抗体处理。未转染细胞、Fas转染细胞、Fas转染抗体处理细胞分别接种裸鼠皮下。观测移植瘤生长,绘制生长曲线。RT-PCR检测肿瘤细胞Fas mRNA表达。流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞凋亡、增殖及Fas蛋白表达。结果　Fas转染和抗体处理延迟肿瘤形成,抑制肿瘤增殖。Fas转染上调移植瘤Fas mRNA表达,提高Fas蛋白表达强度和凋亡指数,但不影响Fas蛋白阳性表达率和增殖指数。抗体处理不影响Fas mRNA和蛋白表达,但可提高凋亡指数,降低增殖指数。结论　Fas转染抑瘤效应是上调Fas转录和表达、促进凋亡的结果。抗Fas单克隆抗体抑瘤效应则与激活凋亡和抑制增殖有关。     

外周血DC-CIK对人舌鳞癌细胞系Tca8113的抑瘤作用

目的:探讨体外致敏成熟树突状细胞(DC)与细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)共培养细胞群对人舌鳞癌细胞系Tca8113移植瘤裸鼠的体内抑瘤效果.方法:人舌鳞癌外周血分离培养DC,体外诱导培养CIK细胞,将致敏成熟的DC与CIK体外扩增获得共培养细胞群DC-CIK细胞;于裸鼠单侧腋下接种Tca8113,将实验动物分为对照组A、实验组B和实验组C;接种后24h,A组移植瘤区注射生理盐水,B组于对侧腋下注射DC-CIK,C组同侧腋下注射DC-CIK,饲养4周;观察移植瘤的成瘤时间、成瘤率、生长曲线及组织学观察,采用SAS 6.12软件包对数据进行t检验、方差分析和x2检验.结果:A组平均成瘤时间为7.63d,B组为9.5d,C组为12d,A、C组有显著差异(P=-0.0132);注射后2周,A组成瘤率为100％,B组为87.5％,C组为62.5％,P＞O.05;观察期内,从移植瘤生长曲线观察,A组瘤体增长最快,B组其次,C组最慢,A、B组无显著差异(P＞0.05),A、C组差异显著(P=0.036).结论:致敏DC-CIK共培养细胞对Tca8113移植瘤裸鼠有一定的体内抑瘤效应.     

SPHK1在舌鳞癌中的表达及其表达下调对Tca8113细胞迁移能力的影响

目的:研究鞘氨醇激酶1(SPHK1)在舌鳞癌组织中的表达及其表达下调对Tca8113细胞迁移的影响。方法:采用免疫组织化学检测45例舌鳞癌组织、36例癌旁异常增生组织和45例正常舌上皮组织中SPHK1蛋白的表达。利用脂质体2000将SPHK1 siRNA和对照siRNA分别转染Tca8113细胞,Western blotting检测细胞中SPHK1蛋白的表达;分别采用CCK-8和Boyden小室检测细胞增殖和细胞迁移能力的变化;用Western blotting检测细胞迁移相关蛋白MMP-2和MMP-9表达的变化。结果:舌鳞癌组织中SPHK1蛋白的表达显著高于癌旁异常增生组织和正常舌上皮组织(χ2=55.608,P=0.000)。SPHK1 siR-NA能显著下调Tca8113细胞中SPHK1蛋白的表达,其表达下调能明显抑制舌鳞癌细胞的增殖和降低细胞的迁移能力。SPHK1表达的下调能明显降低舌鳞癌细胞中MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结论:SPHK1的过表达可能在舌鳞癌的发生发展过程中发挥重要作用,其表达下调介导的舌鳞癌细胞迁移能力的降低可能与MMP-2和MMP-9的下调密切相关。     

舌鳞癌细胞系Tca8113 Fas表达水平与凋亡的关系

目的研究舌鳞癌Tca8113细胞Fas表达水平与细胞凋亡的关系,了解细胞凋亡的相关机制。方法采用脂质体法将含Fas基因片段的真核表达重组质粒pBK-Fas导入舌鳞癌Tca8113细胞,检测转染前后FasmRNA表达水平、Fas蛋白阳性表达率和阳性表达强度。以及细胞凋亡指数,分析细胞凋亡的相关因素。结果Fas转染不提高舌鳞癌Tca8113细胞Fas蛋白阳性表达率(P>0.05),但能提高FasmRNA表达水平、Fas蛋白表达强度,以及细胞凋亡指数。各项指标分别由转染前的0.201±0.015,31.02±4.63,0.88%±0.16%上升到0.399±0.073,54.32±6.38和10.21%±1.46%,统计分析均有显著性差异(P<0.01)。结论Fas介导Tca8113凋亡与Fas蛋白阳性率可能无关,而与Fas蛋白阳性强度有关。Fas蛋白激活细胞凋亡可能存在阈值。只有Fas表达达到一定强度,细胞凋亡才被激活。     

半导体量子点对舌鳞状细胞癌Tca8113系生物学行为影响的研究

目的：研究新型发光纳米材料半导体量子点（semiconductor quantumdots，QD）对舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113生物学行为的影响。方法：用不同浓度最大发射波长为605nm的QD与Tca8113共培养，观察QD对Tca8113细胞生长的影响。用QD标记Tca8113细胞（Tca8113-QD），利用transwell小室法和冲刷实验，观察Tca8113-QD细胞侵袭、黏附和趋化运动能力的变化。结果：Tca8113细胞与不同浓度QD共培养后，其细胞的生长曲线基本一致，差异无统计学意义。Tca8113-QD细胞和Tca8113细胞的侵袭、黏附和趋化运动能力差异无统计学意义。结论：用QD标记Tca8113细胞后，不影响肿瘤细胞生长、侵袭和转移能力，为半导体量子点在活体生理条件下用于肿瘤细胞和细胞内分子成像及示踪研究提供了科学依据。     

姜黄素对舌鳞状细胞癌Tca8113侵袭和迁移影响的实验研究

目的 研究姜黄素对舌鳞状细胞癌明胶酶分泌的影响,探讨舌鳞癌侵袭和转移的机制.方法 收集不同浓度(0～100μmol/L)姜黄素作用Tca8ll3 24 h后的细胞上清液,采用明胶酶谱法(gelatin zymography)检测上清液中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2和MMP-9活性的变化;同时采用Transwell小室建立细胞体外侵袭迁移模型,检测不同浓度姜黄素对Tca8113细胞侵袭和迁移能力的影响.结果 25 μmol/L姜黄素作用24 h后,MMP-9活性降低86.8%,50～100μmol/L姜黄素作用24 h后,则检测不到MMP-9的活性,抑制率接近100%;25μmol/L和50μmol/L姜黄素作用24 h后,MMP-2活性降低40%左右,在75 μmol/L和100μmol/L时,抑制率达90%.姜黄素可显著降低细胞的侵袭迁移能力,经分析,以上结果具有统计学意义(P＜0.01).结论 姜黄素可以通过抑制明胶酶的分泌抑制Tca8113细胞的侵袭和迁移.     

表皮生长因子受体抑制剂AG1487对舌鳞癌细胞Tca8113的抑制增殖作用

目的:了解表皮生长因子受体抑制剂AG1487对舌鳞癌细胞的抑制增殖作用。方法:应用不同浓度(0、50、100、200nmol/L)的AG1487处理培养的舌鳞癌细胞Tca8113,采用MTT方法和流式细胞技术测定AG1487对细胞生长曲线和细胞周期分布的影响。结果:经不同浓度AG1487处理的肿瘤细胞,随抑制剂浓度的增加,其生长曲线逐渐向下移动,即随浓度的增加,抑制细胞增殖的作用逐渐增强。同时,AG1487使细胞周期的分布发生改变,G1期细胞显著增加,而S期细胞则明显减少;AG1487对细胞周期的影响具有明显的时间和剂量依赖关系。结论:表皮生长因子受体抑制剂AG1487可对舌鳞癌细胞产生明显的增殖抑制作用。     

骨形态发生蛋白-2基因转染对舌癌细胞增殖活性的影响

目的 探讨腺病毒介导的人骨形态发生蛋白-2 (BMP-2)基因转染舌癌Tca8113细胞后,对Tca8113细胞形态和增殖活性的影响.方法 分别以感染复数(MOI)为0、50、100的腺病毒为载体的BMP-2基因转染体外培养的舌癌Tca8113细胞.采用荧光倒置显微镜观察转染前后Tca8113细胞形态的变化,Weste...     

微小RNA对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖的影响

目的 探讨微小RNA(microRNA,miRNA)对体外培养的人舌鳞状细胞癌TeaS113细胞增殖的影响.方法 用脂质体把miRNA-31和miRNA-139的类似物或抑制物分别导人人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,分别为实验组,脂质体试剂为对照组,然后用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖情况.结果 对照组吸光度值(A值)在24、48和72 h时分别为(0.125±0.002)、(0.169±0.002)和(0.216 4±0.004);miRNA-31类似物可促进Tca8113细胞增殖,使其A值分别增至(0.136±0.001)(P<0.001)、(0.186±0.004)(P<0.001)和(0.249±0.012)(P<0.01);miRNA-139抑制物也使A值分别增加到(0.148±0.002)(P<0.001)、(0.214±0.002)(P<0.001)和(0.250±0.009)(P<0.01).与此相反,miRNA-31抑制物在48、72 h时抑制Tea8113细胞增殖,其A值分别降至(0.145±0.001)和(0.155±0.011)(P<0.001);mjRNA-139类似物在24、48 h也分别使A值降至(0.135±0.001)和(0.170±0.009)(P<0.001).结论 miRNA-31和miRNA-139在人舌鳞状细胞癌发生过程中起着重要作用,调整其活性有可能成为一种有效治疗口腔癌的新方法.     

两种干扰素抗Tca8113、ACC—M体外增殖的比较研究

目的比较干扰素α和干扰素γ分别对舌鳞状细胞癌(Tca8113)和腺样囊性癌(ACC-M)直接抗癌作用及抗癌特异性.方法采用MTT法和集落法(HTCA),分别检测两种干扰素对Tca8113、ACC-M及L929细胞增殖活性的影响.结果1000U/ml干扰素α、干扰素γ对Tca8113细胞生长抑制率分别为(45.4±4.1)%,(45.9±5.4)%;集落形成抑制率分别为(52.0±2.9)%,(54.6±4.1)%;对ACC-M细胞生长抑制率分别为(23.1±2.1)%,(26.5±1.3)%;集落形成抑制率分别为(26.2±2.0)%,(27.3±1.8)%.两种干扰素之间无显著性差异(P＞0.05),两种细胞系(株)之间有显著性差异(P＜0.05).1000U/ml干扰素α、干扰素γ对L929细胞生长抑制率分别为(3.9±1.1)%,(4.1±0.7)%,与Tca8113相比有显著性差异(P＜0.01).两种干扰素均有较好的抗癌作用特异性.结论干扰素α、干扰素γ对舌鳞状细胞癌有较强的直接抗癌作用和较好的抗癌特异性,但对腺样囊性癌抑制作用不明显.     

rhbFGF/rhBMP-2对成骨样细胞增殖影响的实验研究

目的 :研究不同浓度rhbFGF、rhBMP 2独立或联合对体外培养兔成骨样细胞增殖的影响 ,探讨两者协同作用的可能最适浓度。方法 :取经矿化诱导第三代兔骨髓基质细胞获得的兔成骨样细胞以 2× 10 6/ml的浓度接种于 96孔板 ,用 3种浓度rhFGF、单一rhBMP 2、不同浓度rhFGF和rhBMP 2的组合等 7种条件培养基进行诱导培养 ,设空白对照组 ,每组 8孔。于 1、4、7、10d后用MTT比色法检测细胞增殖情况。结果 :第 4d ,10ngrhbFGF 10 0ngrhBMP 2 /ml组的MTTOD值与 10ng/mlrhbFGF组无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,但大于 10 0ng/mlrhBMP 2组、1ngrhbFGF 10 0ngrhBMP 2 /ml组和 5 0ngrhbFGF 10 0ngrhBMP 2 /ml组 ,且有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :rhbFGF和rhBMP 2的不同浓度组合对兔成骨样细胞的增殖有不同影响 ,其中 10ngrhbFGF 10 0ngrhBMP 2 /ml组合对细胞的增殖有最强的促进作用。     

放射线对舌鳞癌细胞端粒酶活性的影响

目的：端粒酶活性存在于人类几乎所有永生细胞株中,放射治疗仍是目前口腔癌综合治疗的重要组成部分,本研究旨在探讨X线对人舌鳞状细胞癌系Tca8113细胞端粒酶活性的影响。方法：体外培养的人舌鳞癌细胞系Tca8113经0、2、4、8、12、20Gy剂量X线照射,于照射后0．5h、1h、3h、5h收集细胞,采用TRAP法检测不同剂量X线照射前后Tca8113细胞中端粒酶活性。结果：未经X线照射时,Tca8113细胞呈端粒酶阳性,照射后仅2Gy组存在端粒酶活性,其它各照射剂量组细胞均呈端粒酶阴性。结论：人舌鳞癌细胞系Tca8113是端粒酶阳性细胞系,端粒酶活性是Tca8113细胞经放射线照射后赖以生存的重要因素;Tca8113细胞的端粒酶活性具有放射剂量依赖性,经X线照射后,端粒酶活性显著下调;2Gy是体外Tca8113细胞能够耐受的单次照射剂量。     

放疗对舌鳞癌Tca 8113细胞及其耐药细胞株耐药性的影响

目的：探讨舌鳞癌Tca 8113细胞和耐药的Tca 8113/CBDEA细胞对放疗的敏感性及放疗对其耐药性的影响.方法：应用MTT法测定Tca 8113和Tca 8113/CBDEA细胞的放疗成活曲线,实时定量逆转录PCR（real-time quantitative PCR,RT-PCR）检测放疗对多药耐药基因1（mdr1）、多药耐药相关蛋白1基因（mrp1 ）和谷胱甘肽硫-转移酶π基因（gst-π）表达的影响和对细胞内阿霉素浓度的影响.结果：Tca 8113/CBDEA对放疗的ID50是Tca 8113的1.24 倍（P＜0.01）.Tca 8113/CBDEA细胞在放疗后4 h mdr1,mrp1,gst-π耐药基因表达无明显上升,24 h耐药基因的表达明显升高（P＜0.01）,Tca 8113细胞的耐药基因表达在4 h和24 h时均有明显上升（P＜0.01）.放疗以后肿瘤细胞内阿霉素（ADM）浓度有明显下降.结论：耐药的舌鳞癌细胞表现放疗耐受性,放疗可引起舌鳞癌细胞的耐药.对舌癌患者进行放疗和化疗的方案设计时应考虑此点.     

转染BMPⅡ型突变受体前后Tca8113舌癌细胞中p27和p57表达的定量分析

目的：明确转染BMP—Ⅱ型突变受体对Tca8113舌癌细胞的作用，以进一步探讨、认识BMPs对口腔上皮恶变的作用机理。方法：检测转染BMP—Ⅱ型突变受体的Tca8113舌癌细胞(Tca8113ZR细胞)和Tca8113细胞的细胞周期相关因子p27和p57的表达，以明确突变受体对细胞周期及生长的影响。结果：转染了BMPⅡ型突变受体后，肿瘤细胞的增殖能力显著减弱。结论：BMPs信号在口腔舌癌细胞的恶性变化中起着重要的调控作用，BMPs信号的改变可能导致细胞的恶性程度的改变。     

乏氧对人舌癌Tca8113细胞uPA 活性的影响

目的：研究乏氧对人舌癌Tca8113细胞尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA） 活性的影响.方法：根据人舌癌Tca8113细胞不同乏氧时间,分为0、6、12、24 h 4 组,分别给予乏氧.采用免疫组化检测Tca8113细胞uPA蛋白表达,原位杂交方法检测Tca8113细胞uPA mRNA表达,并用Spot及IPP图像采集分析系统处理原位杂交染色结果.结果：Tca8113细胞uPA阳性表达呈棕黄色,定位于细胞质和细胞膜.Tca8113细胞uPA mRNA阳性表达呈紫蓝色,定位于细胞质;随着乏氧时间逐渐延长,紫蓝色着色逐渐加深变浓;吸光度逐渐增大,且两两比较均有显著性差异（P〈0.05）.结论：乏氧可促进人舌癌Tca8113细胞uPA mRNA高表达.提示：乏氧可能通过激活肿瘤细胞高表达uPA而促进口腔癌侵袭和转移.     

转染BMP-II型突变受体基因对Tca8113舌癌细胞增殖的影响

目的：明确转染BMP-Ⅱ型突变受体对Tca8113舌癌细胞的作用，以进一步探讨BMPs对口腔上皮恶变的作用机制。方法：用FuGENll6(Transfection Reagent Kit)真核转染试剂盒将携带BMP-Ⅱ型突变受体cDNA的真核表达载体转染Tca8113细胞(命名为Tca8113ZR细胞)；然后对Tca8113ZR和Tca8113细胞分别进行生长曲线、MTT检测，FCM分析，BrdU标记检测细胞的增殖活性及DNA合成；以观察转染前后舌癌细胞生物学性状的变化。结果：Tca8113ZR细胞和Tca8113细胞相比，形态未见明显变化，但是细胞的增殖活力明显下降。结论：BMPs信号表达水平的改变在口腔上皮组织的恶变过程中起着十分重要的调控作用。