维吾尔族妇女宫颈病变与CALCA基因启动子甲基化的关系

目的： 研究维吾尔族妇女宫颈病变与降钙素相关肽α(calcitonin-related polypeptide alpha,CALCA)基因启动子区CpG位点甲基化的关系,进一步揭示宫颈癌组织中该基因表达调控的表观遗传学机制。方法：收集维吾尔族妇女宫颈病变患者手术切除或活检组织标本50例,其中宫颈鳞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)25例、宫颈内上皮内瘤样变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)9例及慢性宫颈炎16例,应用Sequenom MassARRAY 甲基化DNA定量分析平台,对组织DNA的CALCA基因启动子区CpG位点进行甲基化水平的定量分析。结果：宫颈炎、CIN和CSCC组织中CALCA基因启动子区CpG片段甲基化率分别为0.22、0.26和0.33,经统计学分析,CSCC与CIN以及CSCC与宫颈炎之间均有显著差异(P<0.05)。从单一CpG位点角度分析,CSCC与宫颈炎组织CpG-2、CpG-3、CpG-9.10.11和CpG-12等6个CpG位点甲基化率均有显著差异(P<0.05)。结论：CALCA基因启动子甲基化与维吾尔族妇女宫颈癌发生密切相关,其中特定CpG位点甲基化水平变化可能成为宫颈癌早期诊断的分子标志物。     

宫颈癌CDX2基因启动子区域甲基化的临床意义

摘 要：［目的］ 研究检测宫颈癌尾型同源盒基因2(caudal-related homeobox 2,CDX2)基因启动子区域甲基化程度的临床意义。［方法］ 选择50例诊断为宫颈癌患者(观察组)和50例宫颈良性病变患者(对照组),采用甲基化特异性聚合酶链式反应检测组织中CDX2启动子甲基化水平,荧光定量聚合酶链式反应法检测CDX2 mRNA的表达量。根据TNM分期选择治疗方案,记录无瘤生存期、复发率和死亡率。［结果］ 观察组的甲基化率为70.0%(35/50),对照组为20.0%(10/50) (P＜0.05)。观察组中随肿瘤淋巴结转移分期增加,组织学分级越低及病灶越大,甲基化越高(均P＜0.05)。观察组CDX2 mRNA明显低于对照组(P＜0.05)。观察组中随TNM分期增加、组织学分级越低及病灶越大,CDX2 mRNA表达越低(P＜0.05)。观察组甲基化阳性者无瘤生存期缩短,复发率和死亡率增高。临床分期、组织学分级、病灶大小、CDX2 mRNA和甲基化是宫颈癌生存的独立危险因素(P＜0.05)。 ［结论］ 宫颈癌CDX2基因启动子区域甲基化增加,CDX2蛋白表达降低,导致患者无瘤生存期缩短,复发率和死亡率增高。     

食管癌组织中hMSH2基因启动子区甲基化检测

目的检测食管癌组织中hMSH2基因启动子区甲基化状态,探讨与食管癌发生、发展的关系。方法32例食管癌患者术前均未接受放疗、化疗等其他治疗,手术切除后30min内,在癌组织及正常食管黏膜组织各取约1.0cm×1.0cm×1.0cm大小的组织块标本,立即储存于-80℃冰箱中,冻存备提DNA。采用甲基化特异PCR法(MSP法)检测食管癌及正常食管黏膜组织中错配修复基因hMSH2启动子区甲基化的表达。结果32例食管癌组织中,hMSH2启动子区甲基化发生率为34.4%(11/32),正常食管黏膜组织未发现甲基化,两组甲基化阳性率相比较,差异有统计学意义(P<0.01)。高龄患者(≥70岁)癌组织中启动子区hMSH2甲基化发生率(85.7%)明显高于较低龄患者(<70岁,20.0%;P<0.05)。病理组织学Ⅲ~Ⅳ级食管癌组织中,hMSH2启动子区甲基化发生率(70.0%)明显高于Ⅰ~Ⅱ级(18.2%,P<0.05)。结论食管癌组织中,hMSH2基因启动子区甲基化与年龄和病理组织学分级可能有关。     

胰腺癌Panc-1细胞TFPI-2基因甲基化状态与其体内体外侵袭能力的关系

目的:探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2-deoxycytidine,5-Aza-dC)对胰腺癌Panc-1细胞体内体外侵袭能力及裸鼠皮下移植肿瘤组织TFPI-2基因甲基化状态及表达的影响.方法:用不同浓度的5-Aza-dC处理胰腺癌Panc-1细胞.Transwell法测定各组Panc-1细胞的体外侵袭能力.将用药物处理过的各组Panc-1细胞分别接种于裸鼠皮下,观察各组成瘤率及肿瘤大小.用MSP及RT-PCR检测裸鼠移植瘤组织TFPI-2基因甲基化状态及TFPI-2基因mRNA表达情况.结果:与对照组相比,药物处理组Panc-1细胞体外侵袭能力明显下降,裸鼠成瘤率明显降低,第八周时,肿瘤体积明显低于对照组(P<0.05).与对照组相比,TFPI-2基因异常甲基化状态在药物处理组裸鼠移植瘤组织中得到逆转,药物处理组移植瘤TFPI-2基因mRNA重新表达,并呈剂量依赖性(P<0.05).结论:甲基化酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷可能在一定程度上抑制人胰腺癌Panc-1细胞系的体内体外侵袭和生长能力,其机制可能与逆转TFPI-2基因高甲基化状态从而恢复其表达有关.     

胰腺癌Panc-1细胞TFPI-2基因甲基化状态与其体内体外侵袭能力的关系

目的：探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-aza-2-deoxycytidine,5-Aza-dC）对胰腺癌Panc-1细胞体内体外侵袭能力及裸鼠皮下移植肿瘤组织TFPI-2基因甲基化状态及表达的影响。方法：用不同浓度的5-Aza-dC处理胰腺癌Panc-1细胞。Transwell法测定各组Panc-1细胞的体外侵袭能力。将用药物处理过的各组Panc-1细胞分别接种于裸鼠皮下,观察各组成瘤率及肿瘤大小。用MSP及RT-PCR检测裸鼠移植瘤组织TFPI-2基因甲基化状态及TFPI-2基因mRNA表达情况。结果：与对照组相比,药物处理组Panc-1细胞体外侵袭能力明显下降,裸鼠成瘤率明显降低,第八周时,肿瘤体积明显低于对照组（P〈0.05）。与对照组相比,TFPI-2基因异常甲基化状态在药物处理组裸鼠移植瘤组织中得到逆转,药物处理组移植瘤TFPI-2基因mRNA重新表达,并呈剂量依赖性（P〈0.05）。结论：甲基化酶抑制剂5-氮杂-2＇-脱氧胞苷可能在一定程度上抑制人胰腺癌Panc-1细胞系的体内体外侵袭和生长能力,其机制可能与逆转TFPI-2基因高甲基化状态从而恢复其表达有关。     

宫颈癌高发区新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织中HPV DNA的测定

目的 研究我国宫颈癌高发区新疆维吾尔自治区维族妇女宫颈癌发病与人类乳头状瘤病毒（HPV）的关系。方法 对75例新疆维吾尔族宫颈癌患者癌组织及20例正常宫颈组织,采用PCR（聚合酶链反应）技术检测HPV－C（总的HPV）、HPV16、HPV18及HPV6／11。结果 HPV－C、HPV16、HPV18及HPV6／11在宫颈癌患者及正常宫颈组织中的检出率分别为86．7％、72．0％、12．0％、0及20．0％、10．0％、0、10．0％。HPV16在HPV阳性患者中所占的比例为83．1％,宫颈癌患者中HPV－C、HPV16检出率明显高于正常对照组,鳞癌HPV16阳性率明显高于腺癌,而腺癌HPV18检出率明显高于鳞癌（P＜0．05）。HPV总感染率及HPV16阳性率,在不同临床分期及不同病理分级宫颈癌组织间无显著性差异。结论 HPV感染与我国宫颈癌高发区新疆维吾尔族妇女宫颈癌发病有密切相关,其中HPV16感染在其发病中起主要作用,但HPV感染对宫颈癌的进展影响不大。     

死亡相关蛋白激酶基因启动子区过甲基化与喉癌的关系

目的　探讨死亡相关蛋白激酶 (DAPK)基因启动子区过甲基化与喉癌的关系。方法采用MSP和RT PCR法分析喉部正常黏膜、喉癌及相应癌旁组织中DAPK基因启动子区过甲基化及其mRNA表达状况。结果　 5 8例喉癌组织中 ,有 39(6 7.2 % )例DAPK基因启动子区过甲基化 ,其在各病理分级和T分级之间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,而在N分级 (N0和N1)之间差异有显著性 (P <0 .0 0 1)。 5 8例癌旁组织中 ,有 6例甲基化 ,且均为喉癌组织中有甲基化的病例。RT PCR结果显示 ,所有甲基化的喉癌组织中均无DAPKmRNA表达 ,而喉部正常组织、非甲基化的喉癌组织和癌旁组织中均有其表达。结论　喉癌中DAPK基因启动子区过甲基化与其mRNA失表达有关 ,可能是喉癌发生、发展的原因之一 ,可作为喉癌诊断和预后分析的检测指标     

神经胶质瘤患者血浆中TF、TFPI-1及TFPI-2的表达及意义

摘 要：［目的］ 探讨组织因子（tissue factor,TF）、组织因子途径抑制物-1（tissue factor pathway inhibitor-1,TFPI-1)和TFPI-2的检测在神经胶质瘤患者诊疗中的意义。［方法］ 采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定45例神经胶质瘤患者及42例健康对照者血浆中的TF、TFPI-1及TFPI-2表达情况。［结果］ 神经胶质瘤患者血浆中的TF、TFPI-1及TFPI-2的水平分别为105.50±37.61pg/ml、39.21±7.51ng/ml、11.16±3.96ng/ml,高于健康对照组的82.13±23.45pg/ml、28.16±5.60ng/ml、7.10±3.07ng/ml(P=0.02、0.01、0.01);且高级别胶质瘤组患者血浆中的TF水平（117.33±31.19pg/ml）显著高于低级别胶质瘤患者（95.23±27.69pg/ml,P=0.03）,但其TFPI-2的水平（7.96±2.99ng/ml）低于低级别胶质瘤组（13.78±3.53ng/ml,P=0.01),两组TFPI-1水平差异无统计学意义。［结论］ TF、TFPI-1及TFPI-2在神经胶质瘤患者血浆中的水平明显高于健康人群,随着神经胶质瘤的恶性程度的增高,血浆TFPI-2的水平反而降低。     

新疆维吾尔族年轻妇女子宫颈癌临床特点分析

目的:探讨新疆维吾尔族年轻妇女宫颈癌发病趋势、临床表现及病理特征。方法:对1998~2002年（前5 年组）及2003~2007年（后5 年组）收治的维吾尔族年轻宫颈癌350 例的临床资料进行回顾性分析。结果:维吾尔族年轻宫颈癌占同期宫颈癌的比例由前5 年组的12.9% 下降到后5 年组的10.3% ,发病率呈下降趋势。接触性阴道流血为首发症状。职业分布均以农民为主,知识分子的比例呈上升趋势。两组比较初婚年龄及人流次数之间差异均有统计学意义,后5 年组的初婚年龄增加,5 次以上人流次数明显减少。两组比较临床期别有统计学意义,后5 年组多为较早期肿瘤,Ⅱ期占56.9% ;而前5 年组晚期患者多,Ⅱ期占18.1%%（P<0.05）,病理类型以鳞状细胞癌为主。结论:维吾尔族年轻妇女宫颈癌发病率呈下降趋势,这与近几年新疆偏远地区广泛宣传子宫颈癌普查普治,提倡晚婚、少育,宣传性卫生教育密不可分,但同时应加强筛查人员的培训。      

基于MetaCoreTM分析维吾尔族宫颈癌患者潜在血浆标志物分析*

  目的   基于维吾尔族宫颈癌蛋白质组学分析数据,借助MetaCoreTM在线生物信息学分析平台构建维吾尔族宫颈癌相关生物信号网络,探讨癌变机理,寻找血浆预警蛋白。   方法   运用MetaCoreTM在线生物信息学软件,针对前期研究中通过蛋白质组学技术筛选分析获得的维吾尔族妇女早期宫颈癌患者血浆中43个核心差异蛋白进行功能注释、细胞内组成以及在机体中所负责的生物学加工进程进行富集分析,并且构建生物信号通路网络、筛选候选生物标志物。   结果  发现宫颈癌患者血浆中的差异蛋白的生物功能主要集中在细胞内构成的负调节、胆固醇反向转运、应激反应的负调节等,涉及的通路主要有脂代谢中的胆汁酸代谢调节和受体依赖的胆汁酸浓缩负调节、炎症补体系统、细胞骨架肌动蛋白纤维、ESR1膜受体转导途径。通过MetaCoreTM最短路径算法分析构建出差异蛋白生物信号网络图,并且筛选出4种候选生物标志性蛋白,分别是抗凝血酶Ⅲ（ATⅢ）、凝集素（CLU）、绒毛蛋白1（VIL1）和免疫球蛋白κ（IGK@）。   结论  ATⅢ、CLU、VIL1、和IGK@可作为宫颈癌的候选标志物蛋白。通过生物信息学MetaCoreTM分析进一步阐述了宫颈癌及癌前病变发生与发展的机理,丰富了宫颈癌早期筛查体系。      

新疆维吾尔族妇女子宫颈癌DBC1基因启动子甲基化分析

背景与目的：近年来,表观遗传学研究已经成为癌症研究的一个新方向。大量研究结果显示,表观遗传修饰的异常改变与癌症有着十分密切的联系,全基因组范围内的表观遗传修饰改变已经成为癌症的新标志。该研究旨在探讨膀胱癌缺失基因1(deleted in bladder cancer 1,DBC1)启动子甲基化与新疆维吾尔族妇女子宫颈癌的关系及与人类乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染的相关性,分析其能否作为高敏感性及特异性的工具用于子宫颈癌筛选。方法：用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法对43例正常子宫颈组织、35例子宫颈上皮内瘤样变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)组织以及54例子宫颈癌组织进行HPV16、HPV18感染的检测;运用甲基化特异性PCR方法检测上述组织DBC1基因启动子甲基化状况;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)方法检测10例甲基化阴性的正常子宫颈组织和10例甲基化阳性的子宫颈癌组织中DBC1基因mRNA表达情况。结果：正常子宫颈组织、CIN组织及子宫颈癌组织中HPV16的感染率分别为18.6%、34.3%和68.5%;HPV18的感染率分别为2.3%、8.6%和16.7%;DBC1基因发生甲基化率分别为23.3%、40.0%和87.0%;在79例高级别宫颈损伤及子宫颈癌样本中,其中50例HPV16/18感染阳性,29例HPV16/18感染阴性;阳性组中DBC1基因发生甲基化率88.0%,阴性组甲基化率为55.2%(P<0.05);10例甲基化阳性子宫颈癌组织中DBC1基因mRNA表达水平明显低于10例甲基化阴性正常子宫颈组织(P<0.05)。结论：DBC1基因甲基化可能作为新疆维吾尔族妇女子宫颈癌的分子标志物,结合HPV16/18感染检测有助于子宫颈癌的诊断。     

TFPI-2基因在调控胰腺癌细胞凋亡中的作用

背景与目的：组织因子途径抑制物2（tissue factor pathway inhibitor 2,TFPI-2）是新近发现的一种丝氨酸蛋白酶抑制物,与多种肿瘤发生发展有关。本实验研究将外源性TFPI-2基因转入对胰腺癌细胞株Panc-1观察TFPI-2对该细胞细胞增殖及凋亡的影响。方法：TFPI-2基因真核表达载体、空载体分别转染Panc-1细胞,并命名为Panc-1-TFPI-2,Panc-1-V细胞与未转染的对照细胞Panc-1分别测定细胞生长曲线,DNA片段化实验检测细胞凋亡,并用流式细胞仪分析3组细胞的细胞增殖、细胞周期情况。结果：Panc-1-TFPI-2细胞同Panc-1-V和Panc-1细胞相比,细胞生长缓慢,细胞生长受到抑制,被阻滞于G0-G1期;DNA片段化实验显示Panc-1-TFPI-2细胞呈现凋亡细胞特有的“梯状”条带,而Panc-1-V和Panc-1细胞无明显“梯状”条带;流式细胞仪分析显示早期Panc-1-TFPI-2细胞凋亡率（6.9±0.5）%较Panc-1-V和Panc-1细胞凋亡率[（3.0±0.4）%,（3.5±0.4）%]增加（P〈0.05）,统计学差异有显著性。结论：外源性TFPI-2基因能够抑制胰腺癌细胞生长、诱导胰腺癌细胞凋亡,可能具有抑制肿瘤细胞增殖的作用。     

维吾尔族妇女宫颈癌相关血浆候选肿瘤标志物的双向荧光差异电泳分析

目的:血清蛋白组学在肿瘤标志物的筛查研究中被广泛应用,本研究采用双向荧光差异电泳联合质谱技术,寻找与维吾尔族妇女宫颈鳞癌相关的血浆蛋白候选肿瘤标志物。方法:收集维吾尔族妇女宫颈病变血浆标本(慢性宫颈炎患者22例,宫颈癌早期患者26例),制备血浆低丰度蛋白质组样品,通过蛋白质双向荧光差异电泳技术分离与鉴别分析,筛选出慢性宫颈炎与宫颈癌早期患者两组间血浆差异表达的蛋白位点,运用质谱和生物信息学技术对其进行鉴定和功能识别分析。结果:确定了宫颈炎和早期宫颈鳞癌患者的血浆低丰度蛋白质组差异荧光电泳图谱,筛选出43个差异表达蛋白位点,通过质谱技术鉴定出16种蛋白质,在宫颈鳞癌早期患者血浆中有7个蛋白上调表达、9个蛋白下调表达。通过生物信息学分析,差异蛋白涉及的通路主要有补体和代谢相关蛋白和酶类。结论:本研究针对新疆维吾尔族妇女宫颈癌及官颈炎患者,展开血浆低丰度蛋白组表达水平的研究,鉴定出多种差异表达蛋白质,为宫颈癌的早期诊断及癌变机制研究提供了依据。     

TFPI-2基因对Panc-1细胞凋亡的影响

[目的]研究TFPI-2基因对胰腺癌细胞系Panc-1细胞增殖及凋亡的影响。[方法]测定Panc-1-TFPI-2、Panc-1-V和Panc-1-P三组细胞的生长曲线．DNA片段化实验检测细胞凋亡，并用流式细胞仪分析三组细胞的细胞增殖、细胞周期情况。[结果]Panc-1-TFPI-2细胞同Panc-1-V和Panc-1-P细胞相比，细胞生长缓慢，细胞生长受到抑制，被阻滞于G0～G1期；DNA片段化实验显示Panc-1-TFPI-2细胞呈现凋亡细胞特有的“梯状”条带．而Panc-1-V和Panc-1-P细胞无明显“梯状”条带：流式细胞仪分析显示早期Panc-1-TFPI-2细胞凋亡率（6．93％± 0．53％）较Panc-1-V（3．01％± 0．39％）和Panc-1-P细胞凋亡率（3．52％±0．41％）增加，有显著性差异（P〈0．05）。[结论]TFPI-2能够抑制胰腺癌细胞生长、诱导胰腺癌细胞凋亡．可能具有抑制肿瘤细胞增殖的作用。     

Raf激酶抑制蛋白启动子甲基化与肺癌患者预后的关系

目的:观察Raf激酶抑制蛋白在肺癌中的表达及其启动子甲基化的情况,研究Raf激酶抑制蛋白启动子甲基化与肺癌患者预后的关系。方法:运用免疫组织化学（SABC）方法检测Raf激酶抑制蛋白在组织中的表达情况,采用甲基化特异性PCR法检测Raf激酶抑制蛋白启动子甲基化的情况,SPSS 15.0统计分析Raf激酶抑制蛋白表达和启动子甲基化的差异及其与肺癌患者预后的相关性。结果:Raf激酶抑制蛋白在肺癌组织的表达明显低于癌旁组织;Raf激酶抑制蛋白启动子甲基化在肺癌组织中发生甲基化或部分甲基化,明显高于癌旁组织;Raf激酶抑制蛋白启动子甲基化与肺癌患者的预后负相关。 结论:肺癌患者预后差的一个重要原因是Raf激酶抑制蛋白表达低,其机制主要是其启动子发生了甲基化。因此Raf激酶抑制蛋白启动子甲基化是预测肺癌患者预后的一个独立因素。     

新疆维吾尔族女性乳腺癌与HLA-DRB1基因多态性的关系及临床意义

目的:研究新疆维吾尔族女性乳腺癌的发生与人类白细胞抗原(HLA) DRB1等位基因多态性的关系,探讨乳腺癌的遗传易感性。方法:分别收集维吾尔族女性乳腺癌患者和健康人外周血标本196和230例,提取细胞基因组DNA,采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR- SSP)和毛细管电泳测序(CE)的方法进行HLA-DRB1基因多态性鉴定。结果：乳腺癌患者外周血DNA的HLA-DRB1*01多态性频率显著高于健康对照(χ²=10.180,OR=4.550,P<0.05),HLA-DRB1*16多态性低于对照(χ²=4.792,OR=0.492,P<0.05),而其他位点多态性两组间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:维吾尔族女性乳腺癌的发生可能与HLA-DRB1等位基因多态性存在密切关系,对于揭示乳腺癌发病机制及临床诊断提供了客观依据。     

Evaluation of a validated methylation triage signature for human papillomavirus positive women in the HPV FOCAL cervical cancer screening trial

Human papillomavirus (HPV)-based cervical cancer screening requires triage of HPV positive women to identify those at risk of cervical intraepithelial neoplasia grade 2 (CIN2) or worse. We conducted a blinded case–control study within the HPV FOCAL randomized cervical cancer screening trial of women aged 25–65 to examine whether baseline methylation testing using the S5 classifier provided triage performance similar to an algorithm relying on cytology and HPV genotyping. Groups were randomly selected from women with known HPV/cytology results and pathology outcomes. Group 1: 104 HPV positive (HPV+), abnormal cytology (54 CIN2/3; 50 <CIN2); Group 2: 103 HPV+, normal cytology with HPV persistence at 12 mo. (53 CIN2/3; 50 <CIN2); Group 3: 50 HPV+, normal cytology with HPV clearance at 12 mo. (assumed <CIN2), total n=257. For the combined groups, S5 risk score CIN2/3 relative sensitivity, specificity and positive predictive value (PPV) were compared with other triage approaches. Methylation showed a highly significant increasing trend with disease severity. For CIN3, S5 relative sensitivity and specificity were: 93.2% (95%CI: 81.4–98.0) and 41.8% (35.2–48.8), compared to 86.4% (75.0–95.7) and 49.8% (43.1–56.6) respectively for combined abnormal cytology/HPV16/18 positivity (differences not statistically significant at 5% level); adjusted PPVs were 18.2% (16.2–20.4) and 19.3% (16.6–22.2) respectively. S5 was also positive in baseline specimens from eight cancers detected during or after trial participation. The S5 methylation score had high sensitivity and PPV for CIN3, compatible with US and European thresholds for colposcopy referral. Methylation signatures can identify most HPV positive women at increased risk of cervical cancer from their baseline screening specimens.