p21、p27和bcl-2在大肠癌、大肠腺瘤及正常大肠黏膜中表达的意义及相关性研究

目的：探讨p21、p27、bcl-2蛋白在大肠癌、大肠腺瘤及正常大肠黏膜中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化方法,分别检测20例正常大肠黏膜、22例大肠腺瘤和69例大肠癌中p21、p27、bcl-2蛋白表达情况。结果：p21、p27、bcl-2蛋白总阳性表达率分别为44．93％、50．72％、52．17％,各种蛋白的阳性表达率在大肠癌组织与对照组间存在的差异有统计学意义（p〈0．05）。其中发生淋巴结转移的大肠癌组织中p21阳性表达率高于无淋巴结转移的大肠癌组织中的阳性表达率,差异具有统计学意义（P〈0．05）;p27蛋白的表达与肿瘤分化程度呈负相关（P〈0．05）;在发生淋巴结转移的大肠癌组织中bcl-2阳性表达率低于无淋巴结转移的大肠癌组织中的阳性表达率,差异具有统计学意义（P〈0．05）,高分化、中分化腺癌与低分化腺癌相比,差异均有统计学意义（P〈0．05）,TNMⅣ期bcl-2表达率显著低于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期（P〈0．05）。结论：p21、p27、bcl-2蛋白与大肠癌的发生、发展有密切关系,联合检测p21、p27、bcl-2对于临床诊断大肠癌及判断病情、预后有重要意义。     

幽门螺杆菌、端粒酶基因和p53在胃癌及癌前病变中的表达及相关性研究

目的探讨幽门螺杆菌（Hp）、端粒酶基因（hTERT）、p53在胃癌及癌前病变中的表达及相关性。方法采用特殊染色、免疫组化和原位杂交方法，分别检测130例石蜡包埋标本中的Hp感染、p53蛋白和hTERT mRNA的表达。结果①在慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、非典型增生和胃癌患者中Hp的感染率分别为40％、60％、70％和72．5％。胃癌与慢性浅表性胃炎比较差异有统计学意义（P〈0．05）。四种病变中p53蛋白的表达率分别为5％、25％、50％、62．5％，其中胃癌与慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎比较差异有统计学意义（P〈0．01）。hTERT mRNA的表达率分别为0、10％、30％、78．75％，胃癌与慢性萎缩性胃炎、非典型增生相比差异有统计学意义（P〈0．05）。②Hp感染阳性的胃癌病例，p53、hTERT mRNA阳性的表达率明显高于Hp阴性胃癌病例（P〈0．05）；p53阳性的胃癌中端粒酶基因表达均为阳性，p53阴性的胃癌中有部分端粒酶基因表达阳性（66．7％）。结论Hp感染与p53基因的突变、hTERT活性密切相关；p53基因突变可导致端粒酶活化，但端粒酶激活可能不完全依赖于p53基因的调控。     

脆性组氨酸三联体基因在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的探讨宫颈癌组织中脆性组氨酸三联体（FHIT）基因的表达及其与临床病理指标的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测FHIT在42例宫颈癌组织及13例癌旁组织中的表达。结果宫颈癌组织中FHIT蛋白阳性表达率显著低于癌旁组织（47．6％与92．3％,P〈0．01）。宫颈癌高、中分化组FHIT蛋白阳性表达率显著高于低分化组（54．2％与38．9％,P〈0．01）;淋巴结转移患者FHIT蛋白阳性表达率显著低于无淋巴转移组（45．9％与60．0％,P〈0．05）;临床病理Ⅰ期组FHIT蛋白阳性表达率显著高于Ⅱ期组（55．0％与45．5％,P〈0．05）。结论FHIT基因在宫颈癌的发生、发展中起重要作用,对其蛋白的检测可作为判断宫颈癌发生及转移能力的一项客观指标。     

BUB1和p16在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的探讨BUBl和p16在鼻咽癌组织中的表达、相互关系及临床意义。方法应用免疫组化法检测60例鼻咽癌组织、25例慢性鼻咽炎组织标本中BUB1和p16蛋白的表达,并分析两者与鼻咽癌患者临床特征的关系及两者表达的相关性。结果鼻咽癌组织中BUB1和p16的阳性表达率分别为45．0％（27／60）、36．7％（22／60）,显著低于慢性鼻咽炎组织的84．0％（21/25）、100．0％（25/25）,P均〈0．01;BUB1的表达与鼻咽癌颈淋巴结转移及临床分期相关（P均〈0．01）;BUBl与p16的表达呈正相关（P〈0．01）。结论BUBl和p16的低表达在鼻咽癌发生、发展中可能发挥重要作用,BUB1可作为鼻咽癌诊断及预后的参考指标之一。     

骨巨细胞瘤中p16和Rb蛋白表达及其意义

目的：探讨骨巨细胞瘤中p16和Rb蛋白的表达、相互关系及其意义。方法：应用免疫组织化学SP法检测60例骨巨细胞瘤患者组织中p16和Rb蛋白的表达情况。结果：60例骨巨细胞瘤中，p16和Rb总异常表达率良性为13.0％，恶生为86.5％；P16和Rb阳性率，良性（I级）分别为91.3％、87.0％；恶性（K级和II级）分别为32.4％、54.1％。肿瘤分化越差，p16及Rb阳性率越低。P16和Rb蛋白均阳性的肿瘤术后复发率低。结论：骨巨细胞瘤的发生发展与p16和Rb蛋白缺失有关；瘤组织分化程度越差，p16和助蛋白丢失越多；p16和Rb蛋白均阳性的肿瘤术后复发率低；p16和助蛋白的表达具有负相关系，两者共同作用才能阻止瘤细胞的增殖。     

K—ras和C—myc在肺癌中表达的意义

目的：探讨原发性肺癌中K—ras和c—myc的表达与肺癌发生发展之间的关系。方法：应用免疫组化法测定53例肺癌标本及19例正常人的肺组织中K—ras和c-myc的表达。结果：肺癌细胞中K—ras和c—myc的阳性表达率明显高于正常人肺组P〈0．01）；K-ras和c—myc在不同病理类型（确切p=1），和不同大小的肺癌组（P〉0．05）之间的差异无显著性；在三组不同分化程度的肺癌组间的阳性表达率差异有显著性（P〈0.05）；K—ras和c—myc在淋巴结有转移组的阳性表达率明显高于无转移组，差别有显著意义（P〈0．05）。结论：K—ras和c—myc蛋白的过度表达参与了人肺细胞癌的发生发展过程。     

p16及Ki67在子宫颈癌及癌前病变中的表达

目的探讨p16及Ki67在子宫颈癌及癌前病变中的表达及临床意义。方法采用免疫组化技术（S-P法）检测p16及Ki67在12例正常宫颈组织、24例宫颈上皮内瘤样变（CIN）Ⅱ～Ⅲ及55例子宫颈癌中的表达。结果p16及Ki67在正常宫颈组织、CINⅡ～Ⅲ及子宫颈癌中表达的阳性率分别为8．33％、70．83％、87．27％和16．67％、87．5％、90．90％。CINⅡ～Ⅲ、子宫颈癌与正常子宫颈组织相比,p16及Ki67表达率差异具有统计学意义（P〈0．01）;在CINⅡ～Ⅲ和子宫颈癌中p16的表达与Ki67表达呈正相关（P〈0．01）。p16表达率与临床分期及病理分级有关（P〈0．05）。结论p16和Ki67联合检测可能早期发现子宫颈癌前病变及早期子宫颈癌。     

乳腺癌ER、PR、p53、c-erbB-2表达的临床意义

目的 探讨乳腺癌ER、PR与p53、c-erbB-2阳性表达与临床病理参数的关系。方法 病理诊断为乳腺癌44例，检测乳腺癌中ER、PR、p53、c-erbB-2的阳性表达情况与临床病理的关系。结果 （1）44例乳腺癌中，ER、PR、c—erbB-2、p53阳性表达分别为81．8％（36／44）、63．6％（28／44）、79．5％（35／44）和47．7％（21／44）；ER阳性与p53阳性表达差异有统计学意义（P〈0．01）；（2）ER、PR、p53、c-erbB-2阳性表达与年龄有关；（3）乳腺癌的病理分型与ER、PR、p53、c．erbB-2之间的表达无差异；（4）乳腺癌同侧腋窝组淋巴结内有、无癌的转移与ER、PR、p53、c-erbB-2之间阳性表达无差异（P〉0．05）。结论 乳腺癌患者检测ER、PR是对激素内分泌治疗有价值的指标，特别是ER和p53两者之间阳性差异有统计学意义（P〈0.01），提示预后好。     

大肠腺癌p57^kip2和视网膜母细胞瘤蛋白表达及与临床病理关系研究

为探讨细胞周期调控抑制因子p57^kip2和视网膜母细胞瘤蛋白(Rb蛋白)在大肠腺癌发生发展中的作用，采用免疫组化技术SP法，检测p57^kip2和Rb蛋白在37例大肠癌和26例正常大肠粘膜组织中的表达。结果表明，p57^kip2蛋白阳性表达率在大肠腺癌组织中为40．5％，显著低于正常大肠粘膜组织的69．2％(x^2=5．039，P&;lt;0．05)，并与大肠腺癌组织分化程度和淋巴结转移均有关(x^2=8．914，x^2=4．416．P&;lt;0．05)；Rb蛋白阳性表达率在大肠腺癌组织中为51．4％。显著低于正常大肠粘膜组织的76．9％(x^20=4．234，P&;lt;0．05)，并与大肠腺癌淋巴结转移有关(x^2=14．596，P&;lt;0．05)，但与组织分化程度无关(P&;gt;0.05)；p57^kip2蛋白阳性表达组Rb蛋白阳性表达率高于p57^kip2蛋白阴性表达组。但两者之间呈正相关(r=0．369，P&;lt;0．05)。结论：p57^kip2和(或)Rb蛋白的低表达可能在大肠癌发生发展中发挥重要作用；p57^kip2和Rb蛋白在大肠癌细胞周期调控中可能存在着协同作用。     

HER-2、EGFR及P16在宫颈鳞癌中的表达及临床意义

目的探讨人表皮生长因子受体2（HER-2）、表皮生长因子受体（EGFR）及P16基因在正常宫颈组织及宫颈鳞癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组化检测15例正常宫颈组织及30例宫颈鳞癌组织中HER-2、EGFR及P16蛋白的表达情况。结果HER-2、EGFR及P16蛋白在宫颈鳞癌组织中的阳性表达率分别为66．67％、60．00％和73．33％。HER-2阳性表达与组织学分级和淋巴结转移有关（P〈0．05）;EGFR阳性表达与淋巴结转移有关（P〈0．01）;P16阳性表达与组织学分级和浸润深度有关（P〈0．05,P〈0．01）;HER-2和EGFR蛋白表达呈正相关（r=0．6000,P=0．0201）。结论联合检测宫颈鳞癌组织中HER-2、EGFR及P16蛋白的表达能更清楚地了解宫颈鳞癌的生物学行为,对宫颈癌的诊断、指导治疗及预后评估有重要的临床意义。     

Discovery of ABT-263, a Bcl-family protein inhibitor: observations on targeting a large protein–protein interaction

Background: The discovery of ABT-263, a rationally designed Bcl-2/Bcl-xL inhibitor at present in Phase I clinical trials for cancer, is described. Emphasis is placed on the specific hurdles overcome throughout the discovery process that relate to the nature of the targeted protein–protein interaction (PPI). Objective/methods: This review draws on observations from the experience of discovering ABT-263 and discusses them within the framework of the larger issue of discovering drugs targeting PPIs. Issues discussed include the ‘hot spot’ paradigm, hit and lead generation, serum protein binding, structure-based design, and in particular, hydrophobicity and molecular size and their relation to pharmacokinetic/pharmacodynamic properties. Results/conclusion: Approaches to understanding obstacles thought of as being specifically attached to PPIs, and existing techniques to combat these obstacles, were very helpful in overcoming them. The example of ABT-263 provides evidence that the larger family of PPI targets is more tractable than may have been thought.     

pTAT-XIAP融合蛋白的原核表达及纯化

目的将X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)插入质粒pTAT-HA,构建pTAT-XIAP原核表达载体,以获得高产量、高纯度的pTAT-XIAP融合蛋白。方法将pTAT-XIAP融合蛋白表达载体转入大肠杆菌BL21plysS,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,产物经镍离子亲和层析柱(Ni-NTA)亲和层析纯化,并用Western blot方法鉴定。结果 pTAT-XIAP融合蛋白在大肠杆菌中获得表达,纯化后蛋白呈单一条带,表达产物经Western blot分析证实目的蛋白表达。结论构建重组融合表达载体,在大肠杆菌中成功表达并纯化pTAT-XIAP融合蛋白。     

Pokemon蛋白和p53蛋白在卵巢癌组织中的表达及其意义

目的探讨卵巢癌组织中Pokemon蛋白和p53蛋白表达,明确其与临床病理的关系。方法选取52例卵巢癌组织作为观察组,60例卵巢良性病变组织作为对照组。免疫组化测定两组组织中Pokemon蛋白和p53蛋白的表达。结果观察组和对照组中Pokemon蛋白阳性率分别为69．2％（36／52）和11．7％（7／60）,差异有统计学意义（χ2=12．74,P〈0．01）。观察组和对照组中p53蛋白阳性率分别为78．8％（41／52）和15．0％（9／60）,差异有统计学意义（χ2=22．71,P〈0．01）。Pokemon蛋白表达与卵巢癌患者的肿瘤浸润深度（χ2=9．16,P〈0．05）、临床分期（χ2=5．86,P〈0．05）、淋巴结是否转移（χ2=32．28,P〈0．01）和是否复发（χ2=27．08,P〈0．01）均有显著的关系,与肿瘤分化程度（χ2=0．82,P〉0．05）无明显关系。p53蛋白表达与卵巢癌患者的肿瘤浸润深度（χ2=8．24,P〈0．05）、临床分期（χ2=9．24,P〈0．05）、淋巴结是否转移（χ2=19．62,P〈0．01）和是否复发（χ2=21．16,P〈0．01）均有显著的关系,与肿瘤分化程度（χ2=0．77,P〉0．05）无明显关系。经相关性分析,Pokemon蛋白和p53蛋白阳性表达有明显正相关关系（r=0．297,P〈0．05）。结论Pokemon蛋白和p53蛋白与卵巢癌的诊断、病变程度和预后均有密切关系。     

UPAN对去卵巢大鼠神经元退行性变的作用

目的　通过观察UPAN对卵巢切除大鼠学习、记忆功能 ,海马神经元超微结构以及有关蛋白质表达的影响来证实UPAN对神经元退行性变有改善作用。方法　♀大鼠 ,行双侧卵巢切除手术造模 ,并于 6wk后皮下注射UPAN进行治疗 ,12wk后行水迷宫实验 ,至 13wk开始行灌注固定 ,取脑组织作超薄切片进行电镜分析 ;作冰冻切片进行雌激素受体 (ERα)、糖元合成激酶 (GSK 3)、细胞周期动态激酶(CDK 5 )、蛋白磷酸酯酶 (PP 1、PP2A及PP 2B)免疫组化染色。结果　水迷宫检测卵巢切除组大鼠较正常组游完全程所须时间明显延长及错误反应次数明显增多 ,UPAN治疗组结果与正常组接近。去卵巢组大鼠海马神经元超微结构明显损害 ,ERα表达增高 ,GSK 3、CDK 5、PP 1、PP2A及PP 2B表达增高 ,但以蛋白激酶GSK 3和CDK 5增高最为明显。使用UPAN治疗后能明显改善海马神经元超微结构的损害 ,使上述有关蛋白质的表达恢复到正常水平。结论　去卵巢大鼠存在着学习、记忆功能障碍 ,海马神经元超微结构以及有关蛋白质的表达出现异常改变。UPAN能明显改善其学习、记忆功能 ,维持海马神经元超微结构的完整性以及使有关蛋白质表达恢复到正常水平。     

PTEN、BCL-2和C-erbB-2蛋白在子宫内膜癌的表达及临床意义

目的探讨检测PTEN、BCL-2和C-erbB-2蛋白在子宫内膜癌中表达的临床意义。方法采用免疫组化S-P法,分别检测20例正常子宫内膜组织、20例子宫内膜癌前病变、50例术后子宫内膜癌组织标本中PTEN、BCL-2和C-erbB-2蛋白的表达情况。结果 （1）子宫内膜癌组织与子宫内膜癌前病变、正常子宫内膜组织比较,PTEN、BCL-2蛋白阳性表达率明显降低,差异有显著性,C-erbB-2蛋白阳性表达率明显增加,差异有显著性。（2）PTEN蛋白与BCL-2蛋白的表达与组织学分级及临床分期均有关,且随着组织学分级和临床分期的升高,PTEN蛋白及BCL-2蛋白的阳性表达均显著降低;与有无淋巴结转移均无关。（3）C-erbB-2蛋白的表达与临床分期有关,随着临床分期的增加,C-erbB-2蛋白的阳性表达显著升高;与组织学分级及淋巴结转移无显著相关。（4）在子宫内膜癌中,PTEN与BCL-2蛋白的表达呈正相关,而PTEN与C-erbB-2蛋白的表达呈负相关,BCL-2与C-erbB-2蛋白的表达呈负相关。结论 PTEN、BCL-2蛋白失表达和C-erbB-2蛋白过表达在子宫内膜癌的发生、发展中发挥着一定的作用,三者的联合检测可能有助于子宫内膜癌的早期诊断、预后评估。     

Residue contacts in protein structures and implications for protein folding

The preferential association of amino acid side groups with specific side chain atoms are examined in 44 known protein structures. The resulting association potentials among residue side groups are used to detect structural homology in proteins displaying little or no homology in their primary sequences. Suggestions are also made regarding the nature of the protein folding process. They are based on statistical observations that delineate the extent of short and long range interactions and that display side group bias in association with other side chain atoms on their N-terminal side.     

人的核糖体蛋白S3a基因克隆、表达、纯化与亚细胞定位

目的克隆人核糖体蛋白S3a（Ribosomal protein S3a,RPS3a）基因,并表达、纯化其蛋白,分析RPS3a蛋白的细胞定位,为其功能研究奠定基础。方法应用RT-PCR从人胚肾HEK293细胞的总RNA中反转录并扩增出RPS3a基因,克隆到原核表达载体PET-21a中,转化大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（DE3）进行蛋白表达。在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导下,PET21a-RPS3a融合表达载体在大肠杆菌菌株BL21（DE3）中以可溶性蛋白的形式高效表达RPS3a蛋白,超声破碎细胞,通过Ni~（2＋）-NTA亲和层析柱初步纯化,再应用50kD超滤膜进一步纯化。用Western Blot印迹实验检测纯化后的蛋白。构建绿色荧光蛋白（Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP）的pEGFP-N1-RPS3a表达载体,转染HEK293细胞,通过荧光显微镜观察RPS3a重组荧光蛋白在细胞内的分布。结果获得了较高纯度的RPS3a蛋白,亚细胞定位分析表明RPS3a蛋白主要分布于细胞质。结论成功克隆了RPS3a基因并表达纯化了其蛋白,确定其亚细胞分布,为进一步研究RPS3a蛋白的性质和功能奠定了基础     

Recent advances in protein–protein interaction prediction: experimental and computational methods

Introduction: Proteins within the cell act as part of complex networks, which allow pathways and processes to function. Therefore, understanding how proteins interact is a significant area of current research.

Areas covered: This review aims to present an overview of key experimental techniques (yeast two-hybrid, tandem affinity purification and protein microarrays) used to discover protein–protein interactions (PPIs), as well as to briefly discuss certain computational methods for predicting protein interactions based on gene localization, phylogenetic information, 3D structural modeling or primary protein sequence data. Due to the large-scale applicability of primary sequence-based methods, the authors have chosen to focus on this strategy for our review. There is an emphasis on a recent algorithm called Protein Interaction Prediction Engine (PIPE) that can predict global PPIs. The readers will discover recent advances both in the practical determination of protein interaction and the strategies that are available to attempt to anticipate interactions without the time and costs of experimental work.

Expert opinion: Global PPI maps can help understand the biology of complex diseases and facilitate the identification of novel drug target sites. This study describes different techniques used for PPI prediction that we believe will significantly impact the development of the field in a new future. We expect to see a growing number of similar techniques capable of large-scale PPI predictions.     

妊娠期糖尿病与超敏C反应蛋白和同型半胱氨酸的相关性探讨

目的 通过检测超敏C反应蛋白和同型半胱氨酸在妊娠期糖尿病患者的水平变化,探讨它们与妊娠期糖尿病的相关性.方法 健康妊娠组38例和妊娠期糖尿病组39例分别检测,采用t检验分别测试受试者hs-CRP（超敏C反应蛋白）、HCY（同型半胱氨酸）、FBG（空腹静脉血糖）、FINS（胰岛素）、HOMA-IR（计算稳态模型（HOMA）、胰岛素抵抗指数（HOMA IR指数）的水平并进行比较分析.以P＜0.05为差异有统计学意义,hs-CRP、HCY、FGB、FINS,HOMA-IR的浓度均用（（x-）±s）表示,相关分析采用直线回归.结果 妊娠期糖尿病组FBG、FINS、HOMA-IR与hs-CRP、HCY水平较健康妊娠组明显增高,妊娠期糖尿病组患者hs-CRP与HCY、FGB、FINS、HOMA-IR呈显著正相关（r=0.89P＜0.05）,差异有统计学意义.结论 因此,hs-CRP、HCY的水平变化与妊娠期糖尿病有密切关系,并可作为妊娠期糖尿病病情发生发展的预测因子.     

Fluid shift and protein leakage corrections in protein binding equilibrium dialysis experiments

Conventional equilibrium dialysis methods used in the estimation of ligand-macromolecule binding parameters (affinities, capacities. unbound ligand fractions, etc.) tacitly assume and require that no ligand-macromolecule binding occurs on the buffer side of the dialysis chamber. Unfortunately, this is almost never a valid assumption, as small amounts of plasma proteins are invariably detected in the buffer chamber. Provided the extent of protein leakage is in the usual region (about 0.1%) and the extent of ligand binding does not exceed approximately 99%. errors associated with conventional free fraction estimations obtained from calculations ignoring the effect of protein leakage are usually small (about 1–10% error). As ligand binding exceeds 99%, significant errors may ensue. A generalized theoretical equilibrium dialysis method is developed which permits the estimation of association constants, the number of binding sites and free fraction determinations for a model employing any number of classes of binding sites. Application of the method requires a minimum of two experimental runs for each class of binding sites; volume shifts are automatically adjusted for by the method.