逆转录病毒载体介导人载脂蛋白与卵磷脂胆固醇酰基转移酶基因在骨骼肌的异源性共表达

为探讨人载脂蛋白AI和卵磷脂胆固醇酰基转移酶基因在肌源性细胞中异源共表达的可能性,构建含上述基因和新霉素磷酸转移酶基因的多顺反子重组逆转录病毒载体,以此制备重组病毒颗粒并转染小鼠原代肌母细胞及C2C12肌源性细胞株。酶联免疫吸附法和免疫组织化学检测证实转染后的细胞均具有异源共表达人载脂蛋白AI与卵磷脂胆固醇酰基转移酶的能力,经G418筛选则获得稳定转化的C2C12细胞株,60天后仍能有效共表达人载脂蛋白AI与卵磷脂胆固醇酰基转移酶,聚合酶链反应法检测显示人载脂蛋白AI cDNA与IRES序列均有效整合于靶细胞基因组中,提示以重组逆转录病毒为载体对肌源性细胞进行遗传修饰,再移植回骨骼肌使之在体内长期高效表达载脂蛋白AI和卵磷脂胆固醇酰基转移酶,可能是一种值得探讨的通过促进胆固醇逆转运途径来防止或减轻高脂血症和动脉粥样硬化的方法。     

血脂异常及其临床分型

脂代谢紊乱导致血脂异常,血中胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三醋(TG)升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)降低,临床上称高脂血症或高脂蛋白血症.脂代谢紊乱分原发性与继发性两类.原发性指由于参与脂蛋白代谢的关键酶如脂蛋白脂酶(LPL)、卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT),载脂蛋白如载脂蛋白CⅡ(apoCⅡ)、载脂蛋白B(apoB)、载脂蛋白E(apoE)、载脂蛋白CⅢ(apoCⅢ)及脂蛋白受体如LDL受体的遗传性缺陷所致,又分为单基因性异常和多基因性异常.继发性指继发于糖尿病、肝病、肾病、甲状腺功能低下等疾病,在病理演变过程中造成的脂代谢紊乱,原发性疾病好转或治愈,血脂异常也随之好转或恢复正常.     

高密度脂蛋白抗脂质氧化修饰作用

除参与胆固醇逆向转运以外,血浆高密度脂蛋白还具有多种重要生理功能。高密度脂蛋白含有的载脂蛋白、磷脂、二乙基对硝基苯磷酸脂酶、血小板激活因子乙酰水解酶、卵磷脂胆固醇酰基转移酶以及其它蛋白成份,不仅具有螯合过渡金属离子、中断脂质氧化链式增殖反应的作用,还具有摄取、贮存、转运、酶解清除脂质氧化产物的作用,因而可对抗脂质氧化修饰和动脉粥样硬化的发生。     

姜黄素对食饵性高脂血症大鼠血浆脂蛋白代谢相关酶活性的影响

为了探讨姜黄素降血脂、抗动脉粥样硬化可能的酶学机理．用高脂膳食喂饲Wistar大鼠4周，造成食饵性高脂血症，然后用高、低两种剂量的姜黄素和阳性对照药血脂康、非诺贝特进行实验性治疗。给药3周后处死动物，比较治疗前后血清和肝脏总胆固醇及甘油三酯含量、血清高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量，同时测定血浆卵磷脂胆固醇酰基转移酶、肝素化血浆总脂解酶、脂蛋白脂酶和肝脂酶活性。结果发现，高、低剂量姜黄素、非诺贝特和血脂康均能使血清总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇含量降低，降甘油三酯作用高剂量姜黄素和非诺贝特最优，降总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇作用低剂量姜黄素和血脂康最优，高剂量姜黄素和非诺贝特能增加高密度脂蛋白胆固醇含量，同时能降低肝脏总胆固醇和甘油三酯含量。高、低剂量姜黄素能显著提高血浆卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性．降低血浆游离胆固醇含量，高、低剂量姜黄素和非诺贝特能提高血浆总脂解酶和脂蛋白脂酶活性，高剂量姜黄素还能显著提高肝脂酶活性。结果提示，姜黄素具有明显的降低肝脏和血清脂质的作用，可能与提高血浆脂蛋白代谢相关酶的活性有关。     

高密度脂蛋白抗氧化作用及意义

血浆高密度脂蛋白除参与胆固醉逆向转运以外，还具有抗氧化等多种重要生理功能。高密度脂蛋白含有的载脂蛋白、磷脂、二乙基对硝基苯磷酸脂酶、血小板激活因子乙酰水解酶、卵磷脂胆固醇酰基转移酶以及清道夫受体BI、ATP结合转运子等其它蛋白成份，不仅具有螯合过渡金属离子、中断脂质氧化反应的作用，还具有摄取、转运、酶解等清除脂质氧化产物、调节抗氧化剂的作用，因而可对抗脂质氧化修饰和动脉粥样硬化的发生。     

急性肝损害时血浆脂蛋白分析对肝功能的评价

由于肝脏可合成和分泌脂蛋白,并可通过与脂蛋白降解有关的脂蛋白脂酶和与胆固醇酯化有关的卵磷脂-胆固醇转酰基酶的生成作用来调节脂蛋白的代谢,故作者曾探讨了脂蛋白的分析对评价肝病的意义。每周2次从病毒性、酒精性和药物诱发的肝炎患者抽血,作甘油三酯、总胆固醇和胆固醇酯百分比等分析,并作脂蛋白电泳、卵磷脂-胆固醇转酰基酶活性     

载脂蛋白AI水平与高密度脂蛋白亚类分布的关系

目的载脂蛋白AI是高密度脂蛋白（HDL）中主要的蛋白质，它是细胞胆固醇逆向转（RCT）的特殊重要因素。载脂蛋白AI能与磷脂，多种血浆因子及细胞膜受体结合，可以激活卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT），起着促进细胞内胆固醇的移出，酯化，转移，以及调节HDL代谢的作用。本研究旨在探讨载脂蛋白水平主要是载脂蛋白AI的水平对HDL亚类分布的影响。     

原发性卵磷脂胆固醇酰基转移酶缺乏症

原发性卵磷脂胆固醇酰基转移酶缺乏症是一类卵磷脂胆固醇酰基转移酶基因缺陷导致脂质代谢紊乱的分子病。根据其生物化学和临床表现分为鱼眼病和家族性卵磷脂胆固醇酰基转移酶缺乏症，导致卵磷脂胆固醇酰基转移酶缺陷的基因突变包括碱基置换、缺失和插入。其突变由常染色体隐性遗传。     

调肝导浊中药对血载脂蛋白含量及肝细胞膜脂蛋白受体的影响

为观察调肝导浊中药对血载脂蛋白的含量及肝细胞膜脂蛋白受体的影响。采用高胆固醇饮食造成动脉粥样硬化家兔模型，用免疫比浊法测定载脂蛋白AI和载脂蛋白B含量，体外培养大鼠肝细胞，将氧化型低密度脂蛋白直接加入培养液，采用原位杂交技术观察它对肝细胞膜脂蛋白受体的影响及调肝导浊中药对其的调节作用。结果发现，调肝导浊中药可有效升高载脂蛋白AI含量和降低载脂蛋白B含量，提示调肝导浊中药对脂蛋白受体途径具有良好的调节作用，可有效调节与脂质代谢密切相关的因素。从而防治高脂血症，抑制动脉粥样硬化的形成发展。     

载脂蛋白CI的分子生物学研究进展

人、狒狒、大鼠、小鼠、狗和树载脂蛋白CI基因已克隆，人也含有无功能的载脂蛋白CI假基因，二者共同位于第19号染色体，并与载脂蛋白E、CII和CIV基因形成一个紧密的基因簇。载脂蛋白CI主要在肝脏表达，其特异性表达受基因的肝特异表达调控区及肝转录活性因子相互作用所决定。除在体外可激活卵磷脂胆固醇酰基转移酶及抑制磷脂酶A2外，该蛋白对低密度脂蛋白受体亦有调节作用，从而影响血浆甘油三酯和胆固醇及相关脂蛋白的代谢。其多样的生物活性及其作用机制有待进一步研究。     

人卵磷脂胆固醇酰基转移酶基因在肌源细胞中的表达

为探索人卵磷脂-胆固醇酰基转移酶在骨骼肌细胞表达的可能性，构建了一个由人巨细胞病毒早期增强子和促进子驱动的卵磷脂-胆固醇酰基转移酶cDNA表达质粒。以阳离子介导其转染小鼠肌源性细胞株C2，获得成功表达，并在细胞培养液内测得有生物活性的卵磷脂胆固醇酰基转移酶。提示有可能通过将卵磷脂胆固醇酰基转移酶基因转移至骨骼肌细胞的方法来提高人体内卵磷脂胆固醇酰基转移酶水平。     

卵磷脂胆固醇酰基转移酶与动脉粥样硬化性心血管病

卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)是血浆脂蛋白中催化游离胆固醇酯化的关键酶,在高密度脂蛋白代谢和胆固醇逆转运中起着重要作用。尽管LCAT研究已经进行了半个世纪,其与动脉粥样硬化性心血管病的关系仍存在较大争议。本文就LCAT生物化学特性、在脂代谢中的作用机制、与心血管病的关系及准确测定存在的问题等作一综述。     

酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶-1与动脉粥样硬化

酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶目前认为是细胞内唯一合成胆固醇酯的酶,维持着细胞以及生物体胆固醇代谢的平衡,而酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶-1在动脉粥样硬化的发生、发展过程中发挥着至关重要的作用。自从酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶的cDNA在1993年首次被克隆之后,许多学者对酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶-1进行了大量的研究,现就近年来酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶-1与动脉粥样硬化关系的研究予以综述。     

对卵磷脂胆固醇酰基转移酶的全新认识

卵磷脂胆固醇酰基转移酶(lecithin cholesterol acyl transferase,LCAT)作为参与胆固醇逆转运(reverse cholesterol transport,RCT)、高密度脂蛋白(HDL)等脂蛋白代谢的关键酶,在抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的防御系统中起着重要作用。对其的进一步研究将会提高对CHD发生、发展的认识,为CHD的诊治带来新的思路。     

脂蛋白(a)对转基因家族性高脂血症家兔冠状动脉粥样硬化发生的影响

目的应用载脂蛋白(a)转基因家族性高脂血症家兔模型评价脂蛋白(a)在冠状动脉粥样硬化发展过程中的长期作用结果,以进一步探讨脂蛋白(a)在动脉粥样硬化中的作用机制。方法繁殖人类载脂蛋白(a)转基因家族性高脂血症家兔及同窝生非转基因家族性高脂血症家兔,24月龄,标准普通饲料喂养。测量家兔血浆脂蛋白(a)、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇及C反应蛋白水平,组织学染色测量病变内膜面积及狭窄率,并采用免疫组织化学染色分析病变的组成。结果24月龄的转基因家族性高脂血症家兔血浆脂蛋白(a)水平为9.1±3.5nmol/L;转基因与非转基因家族性高脂血症家兔的总胆固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇水平差异无显著性,但转基因家族性高脂血症家兔右冠状动脉病变面积比非转基因家族性高脂血症家兔高3.5倍(P<0.05)。转基因家兔右冠状动脉的病变大小并没有发生相应的管腔狭窄(狭窄率在非转基因组为26.9%±6.6%,转基因组为27.7%±5.0%),转基因家兔右冠状动脉直径由于血管的代偿性重塑而发生了显著的增加(血管面积在非转基因组为1.8±0.6mm2,转基因组为5.3±1.1mm2;P<0.05)。人类载脂蛋白(a)转基因家兔的病变与载脂蛋白B有关,主要分布在细胞外基质的周围。病变富含细胞外基质,病变中细胞成分所占的比例较少,不足10%。发现有33%转基因家兔及9%非转基因家兔发生了明显的心肌梗死。结论增加血浆脂蛋白(a)水平可加重有高脂血症背景家兔的冠状动脉粥样硬化。     

高密度脂蛋白与冠心病的关系

脂质代谢紊乱与冠心病的关系,长期以来虽受广泛重视,但多集中注意低密度脂蛋白(LDL,β脂蛋白)和最低密度脂蛋白(VLDL,前β脂蛋白)浓度升高对动脉粥样硬化的促进作用。近年来,一些研究指出,血浆中的高密度脂蛋白(HDL,α脂蛋白)具有抗动脉粥样硬化的作用。 HDL一般可再分为HDL_2和HDL_3,HDL_2密度为1.063～1.125,含蛋白质40％,脂质60％;HDL_3密度为1.125～1.210,含蛋白质55％,脂质45％。蛋白质中主要为载脂蛋白(又称阿朴蛋白或酶蛋白Apoprotein)A_1和A_2,占90％以上。HDL_2和HDL_3的关系未明。肝脏是合成HDL的主要部位。 HDL是胆固醇正常代谢所必需,它与细胞的游离胆固醇有高度亲和力。在卵磷酯-胆固醇酰基转移酶(LCAT)的参与下,HDL能将肝外组织,包括动脉壁的胆固醇转运至肝脏     

高密度脂蛋白的代谢相关基因表达产物与动脉粥样硬化

高密度脂蛋白胆固醇水平降低是动脉粥样硬化性心脏病独立和重要的危险因素。血浆高密度脂蛋白胆固醇水平不仅决定于它的生成速率,更重要的是取决于它的代谢水平。一系列的基因及其相关产物参与了高密度脂蛋白参与的胆固醇逆向转运过程,包括与升高血浆高密度脂蛋白胆固醇水平的基因及其产物如三磷酸腺苷结合盒转运A1、磷脂酰胆碱胆固醇酰基转移酶、磷脂转运蛋白和脂蛋白脂酶等,以及降低血浆高密度脂蛋白胆固醇水平的基因和产物如清道夫受体B1、胆固醇酯转运蛋白、肝脂肪酶和内皮细胞脂肪酶等。而高密度脂蛋白代谢与动脉粥样硬化的关系也是多方面的,不能仅由血浆高密度脂蛋白胆固醇水平来明确推断对动脉粥样硬化的影响,降低血浆高密度脂蛋白胆固醇水平与动脉粥样硬化有一定的关联但不是必然的联系。     

家兔动脉壁损伤后野生型脂蛋白脂酶的高表达与动脉粥样硬化早期病变形成的关系

脂蛋白脂酶 (LPL)是水解血浆脂蛋白中甘油三酯 (TG)的限速酶 ,目前认为LPL对动脉粥样硬化 (As)起着双重作用。LPL在脂肪、肌肉组织中起抗As作用 ,而在动脉壁内则起促As作用。本实验在球囊损伤家兔颈动脉内膜后 ,以腺病毒为载体 ,直接在血管壁局部表达LPL ,探讨动脉壁脂蛋白脂酶 (LPL)的高表达在动脉粥样硬化发生中的作用。新西兰兔 32只 ,随机分为两组 ,实验组通过球囊导管损伤兔颈总动脉后 ,以腺病毒基因转移技术 ,在血管壁局部高表达人LPL基因 ,局部高表达碱性磷酸酶 (AP)基因作对照。 1周 (8只 )、2周 (4只 )、8周 (4只 )分别通过油红O染色及免疫组织化学对血管壁的形态进行分析。结果发现 ,LPL高表达组血管壁内膜下有明显的脂质沉积 ,比局部转移AP基因的对照组增高近 4倍。同时发现载脂蛋白B在表达LPL的动脉壁内膜下沉积也增加 ,并伴有局部巨噬细胞浸润增多。而且这些改变在 8周时仍然存在。但两组实验动物的血浆总胆固醇、甘油三酯及高密度脂蛋白胆固醇水平均没有显著差异。结果提示 ,本研究首次在家兔模型上发现LPL在损伤的血管壁内膜下表达 ,能够引起脂质沉积 ,同时伴有巨噬细胞浸润 ,而且这种变化可以长期存在 ,从而促进As早期病变的形成。     

脂蛋白脂酶和冠心病

脂蛋白脂酶是富含甘油三酯酯蛋白代谢的关键酶,与动脉粥样硬化有密切关系。脂蛋白脂酶基因多态性影响血浆甘油三酯和高密度脂蛋白水平,与冠心病的发生有一定联系;脂蛋白脂酶可促进泡沫细胞形成;转基因动物模型显示其具有抗动脉粥样硬化作用;临床冠心病患者脂蛋白脂酶活性降低。     

酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶1基因过表达对泡沫细胞形成的影响

目的研究在三种不同细胞中过表达酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶1基因对泡沫细胞形成的影响。方法构建携带酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶1全长cDNA的pCDNA3.1质粒载体并稳定转染体外培养的人THP-1单核细胞、小鼠RAW264.7单核巨噬细胞和人胚肾293上皮细胞,以油红O染色法检测在乙酰化低密度脂蛋白作用下转染前后三种细胞形成泡沫细胞的情况。结果在相同的脂质负荷条件下,转染酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶1基因的THP-1单核细胞和RAW264.7巨噬细胞同未转染的细胞相比泡沫细胞的形成数量增加,而人胚肾293上皮细胞无论是否转染酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶1基因均不易形成泡沫细胞。结论单核巨噬细胞中过表达酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶1基因可促进泡沫细胞的形成。