蜈蚣油性提取液对肝癌细胞增殖的影响

目的 :探讨蜈蚣对肝癌细胞增殖的影响 ,开拓抗肿瘤的新的治疗方法。方法 :蜈蚣油性提取液加入至肝癌细胞株中一起培养 ,检测其对肝癌细胞增殖的抑制作用。结果 :蜈蚣油性提取液对肝癌细胞增殖抑制率为(82 .2± 8) % ,碘化油及对照组抑制率为 (5 3.4± 3) % ,两者有统计学差异 (P <0 .0 5 )。结论 :蜈蚣油性提取成份对肝癌细胞增殖有较强抑制作用。     

克隆BLCAP基因并重组原核细胞表达质粒研究

目的克隆BLCAP基因并构建原核表达质粒.方法利用RT-PCR方法,从骨肉瘤细胞SOSP-9607总RNA中克隆BLCAP基因ORF,通过酶切、连接、转化等手段,获得重组原核细胞表达质粒.结果成功克隆BLCAP基因ORF并构建重组质粒pGEX-4T-BLCAP.结论克隆BLCAP基因并重组原核细胞表达质粒,为分析蛋白特性、研究基因功能创造了条件.     

SOX4基因抑制肝癌细胞增殖与侵袭能力

【摘要】目的 探讨小干扰RNA技术（siRNA）沉默SOX4基因对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响。方法 构建siRNA转染人肝癌细胞株SMMC 7721,按转染质粒区别分为siRNA SOX4组、siRNA NC组,并设立空白对照组。实时荧光定量聚合酶联反应（RT PCR）检测各组细胞SOX4 mRNA,蛋白印迹法（WB）测定SOX4蛋白水平,噻唑蓝法（MTT）测定转染不同时间肝癌细胞增殖能力,流式细胞术测定肝癌细胞凋亡率,Transwell小室实验测定肝癌细胞侵袭能力。结果 转染后siRNA SOX4组SOX4 mRNA相对表达量低于空白对照组和siRNA NC组（P＜005）;转染后siRNA SOX4组SOX4蛋白表达量为低于空白对照组和siRNA NC组（P＜005）;转染不同时间siRNASOX4组细胞增殖活性均低于空白对照组和siRNA NC组（P＜005）;转染后siRNA SOX4组细胞凋亡率高于空白对照组和siRNA NC组（P＜005）;转染后siRNASOX4组穿膜细胞比例低于空白对照组和siRNA NC组（P＜005）。结论 siRNA技术沉默SOX4基因可降低肝癌细胞增殖及侵袭能力,促进癌细胞凋亡。     

肝癌患者锌指蛋白281的表达水平及其对肝癌细胞增殖凋亡的影响

目的探讨肝癌患者锌指蛋白281(ZNF 281)的表达水平,并分析其对人肝癌细胞Hep G2增殖和凋亡的影响。方法收集河南大学第一附属医院2014年1月至2017年1月经手术切除后病理切片证实的肝癌标本82例及癌旁正常组织标本50例,采用免疫组化法检测肝癌和癌旁正常肝组织标本中ZNF 281蛋白表达情况,并分析ZNF 281阳性表达与临床病理参数[性别、年龄、肿瘤直径、国际恶性肿瘤分期(TNM分期)、淋巴结转移、甲胎蛋白(AFP)]的关系;采用荧光定量PCR检测上述组织中ZNF 281mRNA的表达情况;采用沉默RNA(siRNA) ZNF 281转染人肝癌细胞Hep G2,根据转染情况分为空白对照组(正常培养的Hep G2)、阴性对照组[转染ZNF 281基因非特异性沉默RNA(siRNA)干扰组]、siRNA ZNF 281组[转染ZNF 281基因特异性siRNA干扰组],并用荧光定量PCR检测转染后Hep G2细胞中ZNF 281 mRNA的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染后细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果肝癌组织中ZNF 281 mRNA的相对表达量高于正常肝组织(P <0. 05);肝癌组织ZNF 281蛋白阳性表达率为74. 39%,高于癌旁正常肝组织的18. 0%(P <0. 05),且ZNF 281蛋白阳性表达患者肿瘤直径> 5 cm,TNM为Ⅲ～Ⅳ期,淋巴结转移比例分别为65. 57%、73. 77%、45. 90%,高于ZNF 281蛋白表达阴性的38. 10%、38. 10%、14. 29%(P <0. 05)。siRNA ZNF281组Hep G2细胞中ZNF 281 mRAN表达量低于空白对照组和阴性对照组(P <0. 05); siRNA ZNF 281组细胞生长抑制率和细胞凋亡率均高于空白对照组和阴性对照组(P <0. 05);空白对照组和阴性对照组Hep G2细胞中ZNF 281 mRAN表达量及细胞生长抑制率和细胞凋亡率比较,差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论肝癌组织中ZNF 281蛋白及其RNA均呈高表达;沉默ZNF 281基因可抑制人肝癌细胞Hep G2增殖,诱导其凋亡。     

硝苯地平对肝癌细胞增殖的影响

目的 观察钙通道阻断剂硝苯地平(Nifedipine)对人肝癌细胞(HHCC)增殖的影响。方法 将不同浓度的Nifedipine作用于HHCC，应用MTT比色分析法观察其细胞增殖情况。结果 Nifedipine使HHCC吸光度(OD)显著降低，去除后OD值逐渐恢复。结论 Nifedipine具有可逆的抑制HHCC增殖功能。     

骨髓间充质干细胞对HepG2肝癌细胞增殖的影响

目的:观察大鼠骨髓间充质干细胞对HepG2肝癌细胞增殖的影响,并初步探讨其机制?方法:全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞术鉴定其分子表面标志,体外扩增培养并收集培养上清?MTT法?平板克隆实验及软琼脂克隆实验检测大鼠间充质干细胞对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响,流式细胞术检测肝癌细胞周期的改变,Western blot法检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1表达情况?结果:骨髓间充质干细胞CD105和CD90表达阳性,CD34和CD45表达阴性?在骨髓间充质干细胞培养上清作用下,MTT法显示实验组肝癌细胞光密度值增加(P < 0.05),平板克隆法显示实验组肝癌细胞克隆形成率比对照组明显升高(P < 0.05),软琼脂克隆法显示实验组肝癌细胞空间克隆形成率比对照组明显升高(P < 0.05),流式细胞术显示实验组细胞周期G1期比例降低,S期?G2期比例增加?Western blot显示实验组细胞Cyclin D1表达量增加(P < 0.05)?结论:骨髓间充质干细胞可促进HepG2肝癌细胞的增殖及空间克隆形成能力,其促进肝癌细胞体外增殖可能与Cyclin D1表达上调有关?     

榄香烯联合热疗体外对肝癌SMMU7721细胞增殖的影响

目的观察榄香烯联合热疗对肝癌细胞增殖的影响。方法采用肝癌细胞系SMMC7721体外培养,MTT法测定单纯热疗、单纯榄香烯及榄香烯联合热疗对细胞增殖的影响。另外用流式细胞术的方法测定对细胞增殖核抗原（PCNA）和细胞周期的影响。结果榄香烯联合热疗对肝癌细胞增殖的抑制作用比单纯热疗和单纯榄香烯强,并且能够降低细胞PCNA的表达,使细胞周期中的S细胞减少,阻滞细胞于G0/G1。结论 榄香烯联合热疗可以增强对肝癌细胞增殖的抑制作用。     

RNA干扰肝癌细胞HBX基因表达及细胞增殖的实验研究

目的 探讨RNA干扰技术对肝癌细胞乙型肝炎病毒X基因(HBX)表达和细胞增殖的影响.方法 鉴定转染无关的对照序列(HK3细胞)和针对HBX基因shRNA的稳定肝癌细胞株(21543细胞);RT-PCR检测RNA干扰对HBX基因mRNA沉寂作用,利用流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 复苏后细胞形态差别不大;RT-PCR显示相对于MHCC-97H细胞,21543细胞的HBX mRNA水平的下降约91%,HK3细胞的HBX mRNA水平下降不明显;靶向HBX的RNA干扰后的肝癌细胞(21543细胞)较原肝癌细胞(MHCC-97H细胞)和对照细胞(HK3细胞)增殖明显减慢,而后两种细胞差别不显著;21543细胞周期显示RNA干扰后细胞延缓进入S期,增殖活性明显减低.结论 RNA干扰可降低肝癌细胞HBX表达水平,并可明显抑制肝癌细胞的增殖,改变细胞生长周期.     

小檗碱对人肝癌Bel-7402细胞增殖和凋亡的影响

目的观察小檗碱对人肝癌Bel-7402细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用.方法体外培养人肝癌Bel-7402细胞,台盼兰活细胞计数及集落形成抑制实验观察不同浓度小檗碱对Bel-7402细胞的增殖抑制作用,Hochest33258染色观察凋亡形态学变化,流式细胞仪分析细胞周期及凋亡率.结果小檗碱可显著抑制Bel-7402细胞生长,使集落形成能力明显下降,均呈时间、剂量依赖性.小檗碱处理后72 h,Hochest33258染色可观察到细胞核边集、固缩,有明显凋亡小体形成,流式细胞仪检测出现明显Sub-G1峰.结论小檗碱可以抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖,诱导细胞凋亡,小檗碱可能具有治疗人肝细胞癌的潜在应用价值.     

茶多酚对人类肝癌细胞增殖周期的影响

应用放射自显影法，以标记指数和标记有丝分裂指数为观察指标研究了茶多酚（ＧＴＰ）对人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１增殖周期的影响。提示ＧＴＰ是一种较有前途的防癌抗癌剂，实验为ＧＴＰ的开发应用提供了理论基础。     

渗透浓度对肝癌细胞增殖的影响

目的 :观察渗透浓度对人肝细胞肝癌 (HHCC)细胞系增殖的影响 ,为容积调控氯离子通道参与细胞增殖提供进一步证据。　方法 :改变培养液的渗透浓度 ,应用噻唑蓝比色分析法及细胞计数法观察细胞增殖情况 ;流式细胞仪检测细胞周期时相。　结果 :细胞在低渗培养液中增殖旺盛 ,在高渗培养液中增殖减慢 (P <0 .0 1 )。经高渗处理 4 8h的HHCC细胞G1 期细胞比例比对照组明显增高 ,S期及G2 期细胞比例明显低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,而经低渗处理 4 8h的细胞 ,G1 期细胞比例明显降低 ,S期及G2 期细胞比例明显高于对照组 ,并且低渗对细胞周期的影响可被氯离子通道阻断剂尼氟灭酸 (NFA)减弱 (P <0 .0 5 )。　结论 :渗透浓度可以通过影响细胞增殖周期而影响细胞增殖。     

土大黄苷对人肝癌细胞SMMC-7721增殖和分化的影响

目的探讨土大黄苷(rhaponticin)对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖和分化的影响并初步探讨其作用机制。方法采用MTT法检测土大黄苷对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖抑制率,镜下观察细胞形态改变,测定各组细胞SOD水平。结果不同浓度土大黄苷对SMMC-7721细胞的增殖抑制率随浓度和时间依赖性(P<0.01),并且药物浓度在100-250μmol/L的范围内显著抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖;药物在200μmol/L作用24h后,显微镜下可观察到肝癌细胞SMMC-7721的细胞形态和结构向正常肝细胞方向逆转;肝癌细胞在药物浓度为200μmol/L下作用12h、24h和48h后,各时间组肝癌细胞中SOD活力逐渐上升(P<0.05)。结论土大黄苷在体外可呈浓度和时间依赖性抑制人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖并促进其分化。其作用机制可能与提高SOD的活性有关。     

原花青素对人肝癌细胞SMMC-7721的诱导分化作用

目的探讨葡萄籽提取物原花青素（PA）对人肝癌细胞SMMC-7721细胞的诱导分化作用。方法用不同剂量的PA与SMMC27721细胞共同培养,以MTT法检测细胞增殖和PA对细胞增殖的抑制作用;镜下观察细胞形态改变;采用RT-PCR方法检测细胞甲胎蛋白mRNA表达,金氏法检测细胞碱性磷酸酶活性的变化。结果 PA在20～60μg/ml的浓度范围均能抑制细胞增殖,且抑制率随浓度的增加而增高（P〈0.05）,细胞形态和结构向正常肝细胞方向逆转,40μg/ml和60μg/ml的PA均可使细胞甲胎蛋白mRNA表达量明显下降,碱性磷酸酶活性明显升高。结论 PA对人肝癌SMMC27721细胞具有抗增殖和促分化作用。     

5-Aza-CdR对人肝癌细胞RASSF1 A甲基化的影响

目的：探讨5-氮杂-2ˊ-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对人肝癌细胞RASSF1A基因启动子甲基化以及mRNA表达的影响。方法体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,分别用0.5、5.0、30.0、50.0μmol/L的5-Aza-CdR与之孵育72 h,甲基化PCR检测处理前后启动子甲基化水平,RT-PCR检测RASSF1A mRNA表达。结果随着药物浓度的增加,甲基化RASSF1A含量逐渐降低,而未甲基化产物逐渐增高;5-Aza-CdR处理后,RASSF1A mRNA的含量随之增高。结论5-Aza-CdR可逆转SMMC-7721细胞株细胞中基因甲基化修饰状态。     

BLCAP蛋白多克隆抗体制备及其免疫学特性鉴定

目的:利用大肠杆菌BL21(DE3)表达BLCAP融合蛋白并制备和鉴定其多克隆抗体。方法:构建原核表达重组质粒pET32a(+)-BLCAP并转化到宿主菌BL21中,诱导表达带有His标签的目的融合蛋白,经Ni2+亲和层析纯化回收后免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体的效价,Western blot检测抗体的特异性和亲和性。结果:成功获得分子质量约为28 kU纯化的融合蛋白,免疫日本大耳白兔后得到抗BLCAP的多克隆抗体。ELISA测定显示抗体效价可达到1∶10 000。通过Western blot检测证明该抗体有较好的针对BLCAP蛋白的专一性。结论:重组质粒表达的BLCAP融合蛋白具有良好的抗原性。制备的特异性和效价良好的抗BLCAP的多克隆抗体,能够满足针对BLCAP免疫印迹和细胞免疫组化检测等实验要求,为今后深入研究BLCAP蛋白性质与功能提供了有用的实验工具。     

氧化苦参碱对大鼠肝星状细胞增殖的影响

研究氧化苦参碱地大鼠肝星状细胞增殖的影响,探讨其抗肝纤维化的机制。方法用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌流,Ｎｙｃｏｄｅｎｚ密度梯度离心分离大鼠肝星状细胞,并以氮蓝四唑试验比色法观察氧化苦参碱对肝星状细胞增殖效应。     

PNP-TK融合自杀基因系统对肝癌细胞杀伤作用的实验研究

目的分析PNP—TK融合自杀基因系统对HepG2肝癌细胞的杀伤作用及其对肝癌细胞的杀伤机制。方法利用重组PCR定点诱变法制备PNP—TK融合基因,将其插入真核表达载体pcDNA3．0中,构建融合基因表达载体pcDNA3．0／PNP—TK,经酶切、PCR及测序鉴定重组体,G418筛选获得稳定转染了pcDNA3．0／PNP—TK的抗性细胞克隆。RT-PCR和WesternBlotting检测PNP—TK基因在HepG2细胞中的表达。台盼兰排斥法测定细胞生长曲线,MTF法检测细胞对相应前药的敏感性及分别在一种和两种前药作用下所导致的旁观者效应。结果融合基因片段PNP—TK正确插入了pcDNA3．0载体中,pcDNA3．0／PNP—TK在肝癌细胞株HepG2中实现了表达。细胞抗性克隆对相应的前药十分敏感。在两种前药的联合作用下,pcDNA3．0／PNP—TK对肝癌细胞产生了良好的旁观者效应。结论具有双自杀基因功能的表达载体pcDNA3．0／PNP-TK对肝癌细胞HepG2有着良好的杀伤作用,有望将其应用于肝癌体内治疗。     

靶向PDCD5-Caspase-3 融合基因过表达 对HepG2 肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨靶向PDCD5-Caspase-3 融合基因过表达对HepG2 肝癌细胞体外增殖与凋亡的影响。 方法 利用基因重组技术构建PDCD5-Caspase-3 融合基因,克隆到带有EGFP 基因的GV358 慢病毒表达载 体,与辅助质粒共同转染293T 细胞,通过同源重组,获得融合基因重组慢病毒PDCD5-Caspase-3。体外 转染人肝癌HepG-2 细胞72 h 后,Western bolt 检测肝癌HepG-2 细胞中PDCD5 蛋白和Caspase-3 蛋白表 达,CCK-8 法检测PDCD5-Caspase-3 融合基因过表达对HepG-2 肝癌细胞增殖的影响,流式细胞术观察其 对细胞凋亡的影响。结果 PDCD5-Caspase-3 融合基因过表达可增加HepG-2 肝癌细胞中PDCD5 蛋白和 Caspase-3 蛋白合成（P <0.05）;与对照组或空白组相比,转染72 h 后实验组细胞增殖能力下降（P <0.05）; 与对照组或空白组比较,转染72 h 后实验组细胞凋亡率增加（P <0.05）。结论 促凋亡基因PDCD5 和 Caspase-3 联合表达可抑制HepG2 肝癌细胞增殖,并促进其凋亡,可作为肝癌治疗潜在靶点。