新型快速流行性感冒病毒抗原检测方法免疫荧光法在流行性感冒筛查中的应用价值研究

背景　与核酸检测相比,传统快速流行性感冒（流感）病毒抗原检测方法灵敏度偏低,因此需要探索新的流感快速检测方法。目的　探讨免疫荧光法流感病毒抗原检测在流感筛查中的临床应用价值。方法　分别于2017年7-12月、2019年1-2月选取北京大学第三医院感染疾病科发热门诊收治的患者472例,采集其鼻咽拭子。采用免疫荧光法流感病毒抗原检测试剂盒读取仪器（简称Sofia）和传统快速流感抗原检测方法（免疫渗滤法和胶体金法）、流感病毒核酸检测实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）进行病原学检测。结果　472例患者采用RT-PCR方法共检出甲型/乙型流感292例（61.9%）,其中甲型流感195例（41.3%）,乙型流感94例（19.9%）,另有3例同时检出甲型流感和乙型流感。472例患者采用免疫荧光法共检出甲型/乙型流感262例（55.5%）,其中甲型流感169例（35.8%）,乙型流感93例（19.7%）。以RT-PCR方法为金标准,免疫荧光法、免疫渗滤法、胶体金法检测甲型/乙型流感的灵敏度依次为89.0%、82.9%、84.6%,特异度依次为98.9%、97.2%、93.3%;免疫荧光法、免疫渗滤法、胶体金法检测甲型流感的灵敏度依次为85.4%、79.3%、79.3%,特异度依次为100.0%、99.3%、97.1%;免疫荧光法、免疫渗滤法、胶体金法检测乙型流感的灵敏度依次为93.8%、87.6%、89.7%,特异度依次为99.5%、99.2%、97.3%。以RT-PCR方法为金标准,免疫荧光法对甲型H1流感、甲型H3流感、乙型流感的检出阳性符合率分别为91.8%（56/61）、84.7%（111/131）、94.8%（91/96）。16~20岁、21~40岁、41~60岁、>60岁患者中,免疫荧光法对甲型/乙型流感检测的灵敏度依次为95.6%、90.2%、87.2%、78.4%,特异度依次为100.0%、98.2%、100.0%、100.0%。结论　与传统快速流感病毒抗原检测方法比较,免疫荧光法在甲型/乙型流感的检测中表现出更高的灵敏度,在流感筛查中有一定应用前景。     

定量实时PCR技术快速检测甲型H1N1流感病毒

目的:对采集来的疑似甲型H1N1流感患者咽拭标本进行核酸检测,不断摸索快速检测流感的PCR方法。方法:实验方法按照WHO标准的实时PCR(Real-time PCR)检测法操作,选取343份疑似甲型H1N1流感咽拭子采用实时定量核酸检测和快速分型。结果:在343份咽拭子标本检测结果中,甲型H1N1流感病毒核酸阳性为52份,阳性率15.16%,乙型流感病毒阳性11份,甲3型流感病毒阳性13份,甲1型流感病毒未检出。结论:实时PCR技术操作方法简便、耗时短、特异性强、灵敏度高,是一种适合应用于甲型H1N1流感病毒可靠、快速诊断的检测方法。     

RT—PCR法与血凝抑制法鉴定流感病毒的比较

目的比较逆转录聚合酶链反应法(RT—PCR)与血凝抑制法在流感病毒鉴定中的优劣，以期建立能快速、特异地从临床标本中检测并鉴定流感病毒的新方法。方法用常规细胞培养法增殖病毒后，分别用RT—PCR反应法和常规血凝抑制法进行流感病毒鉴定。结果在13份发生细胞病理变化的标本中RT—PCR阳性标本为9份，其中甲型7份(6份甲3亚型、1份甲1亚型)，乙型2份；而用血凝抑制法鉴定阳性标本仅6份。结论RT—PCR法快速、特异、灵敏，在流感病毒鉴定中具有较大的应用价值。     

抗原检测及聚合酶链反应在医院甲乙型流感病毒检测中的应用

目的 分析抗原检测及聚合酶链反应(PCR)在医院甲、乙型流感病毒检测中的临床应用价值,以期为临床早期诊断、制定治疗方案提供参考。方法 选取河南省洛阳市中心医院2020年1月至2023年1月诊治的120例疑似流感患者作为研究对象,入院后均采集咽拭子标本,采用抗原(胶体金法)检测甲、乙型流感病毒,实时荧光定量PCR法检测甲、乙型流感病毒核酸,比较胶体金法、实时荧光定量PCR法检测甲、乙型流感病毒的性能,分析胶体金法、实时荧光定量PCR法的稳定性及不同病毒核酸载量的胶体金法检测敏感性。结果 120例疑似流感患者胶体金法检测阳性89例(甲型49例、乙型40例),实时荧光定量PCR法阳性98例(甲型55例、乙型43例);两种方法特异度、敏感度相近,胶体金法检测用时仅为15 min,实时荧光定量PCR法用时需要3 h,胶体金法检测时间明显少于实时荧光定量PCR法;2种方法检测从性别、季节、年龄方面比较对阳性结果影响差异均无统计学意义(P>0.05);胶体金法甲型流感病毒检测阳性、阴性样本核酸载量平均值比较差异有统计学意义(P<0.001);乙型阳性、阴性样本核酸载量平均值比较差异有统计...     

免疫渗滤与胶体金快速检测在筛查甲型流感中诊断效率分析

目的 评价胶体金和免疫渗滤法在筛查临床甲型流感病毒感染中的诊断效率.方法 收集2009.6～2009.10我院发热门诊流感样病例咽拭子标本297例,分别用免疫渗滤法和胶体金法进行快速检测,同时采用实时荧光定量PCR和测序进行验证,以评价两种方法的诊断效率.结果 在实时荧光定量PCR法及测序证实为甲型流感166份,其中免疫渗滤法灵敏度为54.82%(91/166),与PCR法符合率为66.67%,Kappa值为0.35;胶体金法灵敏度为4.22%(7/166),符合率为45.79%,Kappa值为0.02;在131份甲型流感病毒阴性的标本中,免疫渗滤法特异性为81.68%(107/131),胶体金法特异性为98.47%(129/131);在实时荧光定量PCR检测为甲型H1N1阳性的99份标本中,免疫渗滤法检出率为67.3%,胶体金检出率为5.1%;在两种方法结果不符合108份标本中,免疫渗滤法阳性而胶体金阴性的标本107份,实时荧光定量PCR法并序列测定显示其中84份为甲型流感病毒阳性,23份为阴性:免疫渗滤法阴性而胶体金阳性的1份标本,甲型流感病毒实时荧光PCR检测为阴性.免疫渗滤法在甲型流感病毒的检出率和与PCR方法的符合率方面明显高于胶体金法(P＜0.05).结论 免疫渗滤法在甲型流感病毒筛查中优于胶体金法,显示出良好的临床应用前景.     

应用多重反转录PCR技术检测病毒性呼吸道感染

目的：为了寻求呼吸道感染病毒的快速诊断并指导治疗，建立一种多重反转录PCR体系。方法：分别设计针对肠病毒、腺病毒、乙型流感病毒和甲型流感病毒标准株的特异性引物，采用多重反转录PCR检测4种病毒。结果：应用此多重反转录PCR系统可以特异的同时检测到同一模板中的肠病毒、腺病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒。通过用多重反转录PCR和单一PCR对36份临床标本的检测相比较，结果表明多重反转录PCR的检测与单一PCR的检测结果是一致的。结论：通过与单一的PCR对比，证明该多重反转录PCR系统可替代单一的PCR用于肠病毒、腺病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒引起的呼吸道感染的快速诊断。     

甲型和乙型流感病毒抗原检测新方法

目的寻找一种更加简便的方法来定性检测流感病毒抗原阳性细胞。方法设计流式的方法来检测甲型流感病毒(IA)和乙型流感病毒(IB)抗原阳性细胞。采用2种荧光素标记抗体进行流式标记鼻咽拭子的上皮细胞,对157份鼻咽拭子进行甲型和乙型流感病毒抗原检测。结果 157例样本中,直接免疫荧光法检测到甲型流感病毒阳性44例,乙型流感病毒阳性35例,流式法检测到甲型流感病毒阳性39例,乙型流感病毒阳性29例,两种方法检测甲型和乙型流感病毒的阳性率差异无统计学意义(P0.05)。两种方法检测IA的阳性与阴性总符合率为93.0%,阳性率差异无统计学意义(P0.05),一致性系数检验κ=0.820,提示两种检测方法一致性较强且有统计学意义(P0.05)。两种方法检测IB的阳性与阴性总符合率89.8%,阳性率差异无统计学意义(P0.05),一致性系数检验κ=0.687,两种检测方法一致性基本满意且有统计学意义(P0.05)。结论采用流式法可及早快速筛查甲型、乙型流感标本,操作步骤简便,只需不到2 h就可完成检测,可以推广应用。     

河池市2010年流感病原学监测结果分析

目的 对河池市2010年流感病毒进行病原学监测,及时了解河池市流感病毒优势株的变化,分析预测流感流行的趋势和特点,为流感防治提供科学依据.方法 采集监测哨点医院、流感疫情常规监测流感样病例的咽拭子标本,先用real-time PCR法完成流感病毒核酸检测,病毒核酸阳性标本再用MDCK细胞进行病毒分离.结果 2010年共检测标本490份,流感病毒核酸阳性75份,检出率为15.31%;其中B型60份,季节性流感H3亚型3份,甲型H1N1流感12份;75份病毒核酸阳性标本经MDCK细胞培养后,有2份阳性,阳性率为2.67%,其中甲型H1N1流感1株,B型(Yamagata系)1株.结论 2010年河池市有甲型H1N1流感、B型流感及季节性流感H3亚型流感病毒共同流行,流行特点是春季、夏季两个高发季节,流行优势株为甲型H1N1流感和B型流感病毒,1月以甲型H1N1流感病毒为流行优势株,4～7月以B型流感病毒为流行优势株,8月份后则各型流感病毒活动明显减弱.     

实时RT-PCR方法和快速抗原检测方法(Dot-Elisa)检测甲型流感的比较

目的探讨实时逆转录聚合酶链扩增反应（real-time RT-PCR）和快速抗原检测方法（Dot-Elisa）在检测甲型流感中的应用。方法随机选择2009年5～10月在我院门诊就诊的318例流感样症状病例,采集咽拭子标本。采用real-time RT-PCR和Dot-Elisa同时检测咽拭子标本的甲型流感病毒核酸或甲型流感病毒抗原。结果在318例流感样病例中,real-time RT-PCR方法检测152例（47.8%）为甲型流感患者,其中118例（37.1%）为甲型H1N1流感（2009）,34例（10.7%）为普通甲型流感。快速抗原检测方法检测113例患者为甲型流感患者。与real-time RT-PCR方法比较,快速抗原检测方法检测甲型流感的敏感性为61.8%,特异性为88.5%,阳性预测值PPV为83.2%,阴性预测值为71.7%,总符合率为75.8%,一致性KAPPA检验κ=0.509（P〈0.01）。采用两种不同方法检测甲型流感阳性率的差异不受患者病程、年龄的影响（P均﹥0.05）。Ct值≤35的标本其抗原阳性检测率大于Ct值在35～37之间的抗原阳性率（U=0.00,P〈0.01）。结论快速抗原检测方法检测甲型流感的敏感性低于real-timeRT-PCR方法,其敏感性可能受标本的病毒量影响。     

B型流感病毒抗原诊断试剂盒与咽拭子流感病毒分离诊断效果比较

目的 利用病毒抗原诊断试剂盒建立B型流感病毒快速诊断的方法.方法 对129例流感样病例的咽拭子病毒分离及B型流感病毒抗原诊断试剂盒检测,评价其灵敏度和特异性.结果 咽拭子病毒分离阳性率为13.9%,B型流感病毒抗原诊断试剂盒检测阳性率为8.5%,两法阳性检出率比较差异无显著性(P＞0.05).B型流感病毒抗原诊断试剂盒灵敏度为36.36%,特异度为79.72%,符合率为89.15%.结论 本试剂盒能鉴定流感型别,操作简便快速,若能进一步提高灵敏度和特异性,有助于临床对流感病毒的早期诊断.     

人H7N9禽流感病毒、高致病H5N1禽流感病毒及H1N1流感病毒感染小鼠特征分析

目的 对比分析人高致病H5N1禽流感病毒、H7N9禽流感病毒及H1N1流感病毒分别感染BALB/c小鼠后的机体反应特征。方法 分别以H7N9病毒、H5N1病毒和H1N1病毒滴鼻感染BALB/c小鼠,观察小鼠存活率、体征变化及感染后肺组织病理损伤差异,检测小鼠感染流感病毒后肺组织增殖细胞核抗原（PCNA）表达并观察小鼠感染后修复状况。结果 H7N9病毒、H5N1病毒和H1N1病毒均感染BALB/c小鼠,小鼠存活率依次为H7N9>H1N1>H5N1,肺组织病理损伤严重程度依次为H5N1 >H1N1 >H7N9,PCNA表达水平依次为H7N9 >H1N1 >H5N1。结论 H7N9病毒感染后宿主炎症反应较小,感染后小鼠肺组织自我修复能力较强;H5N1病毒感染BALB/c小鼠后的机体反应最为强烈,感染后恢复能力差,致死率高。     

广州市某区2008年度流行性感冒的流行情况调查

目的了解广州市某区2008年度流感发病及抗原变异情况,为制定流感防治策略提供科学依据。方法利用流感监测点定期采集的流感样标本,以MDCK细胞分离病毒,并应用红细胞凝集抑制法进行型别鉴定,对流感的病原学以及流感疫情监测情况进行统计分析。结果全年共监测咽拭子763份,分离病毒株80株,其中A（H1N1）型37株,A（H3N2）14株,B（Victoria）23株,B（Yamagata）6株。15岁以下人群发病最多,占流感样病例的65．00％。全年发生流感疫情2起。春季以B（Victofia）为主,夏季以A（H1N1）为主。结论全年广州市某区流感发病呈散发,并以H1N1亚型为主,15岁以下人群为流感高危人群,流感发病高峰出现在3月份和7月份。     

2009-2010年度乌鲁木齐市流感哨点监测结果分析

目的对2009-2010年度乌鲁木齐市流行性感冒(流感)监测结果进行分析。方法统计2009-2010年度流感监测哨点医院监测诊室报告的流感样病例(influenza-like illness,ILI)就诊比例,采集流感样病例标本进行流感病原学检测,对监测结果进行整理、分析,并与2006-2008年度数据进行比较。结果流感样病例监测显示,35周ILI%(流感样病例占门诊就诊病例总数的百分比)开始呈波浪式上升,41周(十一长假后)至第44周ILI%开始急骤上升,44周达高峰(17.01%),是近几年最高水平。45周开始ILI%又呈快速连续回落趋势,下降到50周的4.35%。病原学检测显示,哨点医院采集的标1 915份本中,流感病毒阳性511份,阳性率26.68%,其中甲型H1N1阳性396份,占77.50%,H3N2阳性43份,8.41占%,H1N1阳性18份,占3.52%,B型阳性54份,占10.57%。结论在本监测年度乌鲁木齐市发生甲型H1N1暴发流行,高峰出现在44周,较往年提前了8周,进入2010年后则以B型流感病毒流行为主为主。     

贵州省2010-2011年流行性感冒监测结果分析

目的对贵州省2010-2011年流行性感冒的监测结果进行分析,了解流感的流行趋势,为流感防控提供科学依据。方法对哨点医院就诊的流感样病例(influenza-like illness,ILI)进行流行病学和病原学监测,以及对聚集性发热病例进行监测。结果 2010年哨点医院门诊ILI就诊比例为5.81%,2011年ILI就诊比例为5.91%;2010年和2011年以甲型为优势株,其次是乙型。2010年流感暴发疫情较2011年多,疫情主要集中在学校。结论流感病毒流行优势株逐渐由甲型转为乙型。做好流感监测和预测预报。     

贵州省2008-2009年流行性感冒监测结果分析

目的对贵州省2008-20O9年流行性感冒的监测结果进行分析,了解流感的流行趋势,为流感防控提供科学依据。方法对哨点医院就诊的流感样病例(ILI)进行流行病学和病原学监测,以及对集中发热疫情进行监测。结果 2008年哨点医院门诊ILI就诊比例为2.36%,2009年ILI就诊比例为9.14%;2008年流感病毒以乙型为优势株;2009年以甲型为优势株,尤以甲型H1N1居多。2009年流感暴发疫情较2008年增多,疫情主要集中在学校。结论流感病毒流行优势株由乙型转为甲型,做好流感监测和预测预报。     

云南省2016-2018年流行性感冒监测分析

目的 分析2016-2018年云南省流行性感冒(流感)监测结果,探讨云南省流感流行特征,为云南省流感防控提供科学依据.方法 利用描述流行病学方法,对2016-2018年云南省19个哨点医院监测到的流感样病例(influenza like illness,ILI)的流行病学特征、病毒分离鉴定结果、暴发疫情信息进行分析.结...     

甘肃省2009—2012年流感病毒流行特征分析

目的对2009—2012年甘肃省流感监测结果进行分析,为甘肃省的流感防控工作提供科学依据。方法采集全省19家国家级哨点医院门诊流感样病例的咽拭子和各地医疗机构送检流感样暴发疫情咽拭子。采样对象为发病3d之内未使用抗病毒类药物的流感样病例,采集咽拭子,以荧光PCR方法检测病毒核酸,用MDCK进行病毒分离培养。所获得数据采用Excel和SAS软件进行处理,不同样本类型的阳性率的比较使用χ2检验。结果对36 894份流感样病例咽拭子进行核酸检测,检测出流感病毒核酸阳性8 059份,检出率为21.84%,其中4 354份甲型H1N1,1 566份季节性H3N2,92份季节性H1N1,1 656份乙型,391份甲型未分型。按年度分析,2009—2012年流感病毒检出率依次为32.81%、14.10%、7.83%和19.67%;按月分析,在10~12月份甲型流感病毒阳性率及构成比均高于其他月份,阳性率平均为31.33%,构成比为97.61%;2~4月份乙型流感病毒阳性率及构成比分别为16.51%和81.10%。按年龄组分析,<5,5~,15~,25~和≥60岁组病毒核酸检出率分别是13.87%、28.36%、32.33%、16.83%和17.22%,除25~岁组与<60岁组的阳性率差异无统计学意义(P>0.05),其他各年龄组阳性率差异有统计学意义(χ2=26.88~908.11,P<0.01)。对7 073份标本进行病毒分离,分离到病毒1 149株。结论甘肃省2009年以甲型H1N1流感流行为主;2010—2011年流感活动很弱,仅为散发;2012年春季以乙型流感为主,11月开始以甲型H1N1流感及季节性H3N2流感为主。流感流行每年均有一个高峰,病毒型别表现为交替流行的规律,甲型流感是冬季儿童常见的传染病。     

河南省平顶山市2012年流感监测结果分析

目的了解河南省平顶山市流行性感冒(流感)流行特征,为流感预防控制工作提供依据。方法对2012年平顶山市流感监测中流感样病例(ILI)监测资料和病原学检测资料进行分析。结果 2012年平顶山市流感监测哨点医院共监测门、急诊就诊病例105 262例,ILI患者12 252例,ILI占门急诊就诊总数的11.64%。病例以0~岁年龄组为主,占66.67%。全年共采集ILI咽拭子标本355例,经实验室检测,病毒核酸检测阳性45例,总阳性率为12.68%。其中季节性H3为21例,占46.67%,B型23例,占51.11%;新甲H1N1病例1例,占2.22%。结论 2012年流感流行高峰在1~3月,ILI构成以0~岁年龄组为主,流感病毒以季节性H3和B型为优势流行株。     

类风湿关节炎患者HLA-DR4/1表型与流感病毒血凝素特异性T细胞增殖及其抗体的关系

目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者人类白细胞抗原(HLA)-DR4/1表型与流感病毒血凝素(HA)308-317多肽特异性T细胞增殖和血清抗HA308-317抗体之间的关系.方法 将HA308-317多肽与70例RA患者外周血单个核细胞(PBMC)共孵育5 d,3H掺入法测定T细胞增殖.用ELISA法检测RA患者血清HA308-317抗体水平.以序列特异性引物聚合酶链反应(PCR.SSP)技术对RA患者进行HLA-DR分型.结果 在70例RA患者中,27例HLA-DR4/1表型阳性.其中,HA308-317多肽可刺激T细胞增殖的RA患者有17例(62.9%),10例无反应性;15例(55.6%)HLA-DR4/阳性RA患者抗HA308-317抗体阳性.在HLA.DR4/I表型阴性的RA患者中,T细胞对HA308.317多肽有反应性者10例(23.3%),无反应性者33例;25例(58.1%)患者抗HA308-317抗体阳性.HLA-DR4/1表型阳性组HA308-317特异性细胞增殖高于HLA-DR4/1表型阴性组(P＜0.01),但两组血清中HA308-317抗体水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 RA患者HA308-317特异性T细胞增殖与HLA-DR4/1表型有关,HA308-317抗体生成与HLA-DR4/l亚型无明显关系;HA308-317多肽可能通过诱导HLA-DR4/1特异性T细胞活化参与RA的发病.     

2009—2012年石嘴山市流行性感冒监测结果分析

目的分析2009—2012年石嘴山市流行性感冒监测结果,了解其流行趋势及病毒优势株的变化,为防控提供科学依据。方法通过流行性感冒监测信息系统计算哨点医院流感样病例就诊比例,并采集病例标本进行病原学检测,通过疾病监测信息报告管理系统统计流感病例报告例数进行综合分析。结果石嘴山市流行性感冒毒株以A型为主,A（H1N1）亚型和A（H3N2）亚型同时存在,交替成为优势株,B型隔年出现,与A型共存。结论应加强流感监测,分析流行性感冒病毒优势毒株,以便预防控制流感的流行。