Ku70和Ku80基因在系统性红斑狼疮患者皮肤上的表达

目的：研究Ｋｕ７０和Ｋｕ８０基因在系统性红斑狼疮（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ，ＳＬＥ）患皮肤表达的变化及其与ＳＬＥ发病的关系。方法：利用Ｋｕ７０、Ｋｕ８０地高辛标记的ｃＤＮＡｓ探针对皮损区、非皮损区及正常对照皮肤进行原位杂交。结果：Ｋｕ７０、Ｋｕ８０ ｍＲＮＡｓ的表达量从高到低依次为ＳＬＥ皮损区、ＳＬＥ非皮损区、正常皮肤。另外还发现在皮肤的层次上真皮浅层单一核细胞Ｋ     

Ku70在Barrett食管、食管腺癌组织中的表达及其意义

目的：探讨Ku70在正常食管胃交界处贲门腺黏膜、Barrett食管、食管腺癌组织中的表达及其临床意义。方法：应用免疫组化方法检测Ku70在40例正常食管胃交界处贲门腺黏膜、38例Barrett食管和45例食管腺癌组织中的表达。结果：Ku70在食管胃交界处的贲门腺、Barrett食管、食管腺癌组织中都有不同程度的表达,但食管腺癌组织中Ku70的表达明显高于食管胃交界处黏膜、Barrett食管（P〈0．01）。结论：KuT0蛋白可能在Barrett食管、食管腺癌的发生发展过程中起重要作用。     

Ku70蛋白结构、功能及在人体组织中的异常表达

<正>Ku70蛋白是一种非常丰富的核蛋白,广泛存在于人类、哺乳类动物、线虫、昆虫、酵母、原核生物以及植物体内。现代研究发现,Ku70在DNA双链破裂修复、DNA复制、基因转录调控、端粒结构的维持等多种细胞活动中,均扮演着重要角色。已知的研究发现Ku70蛋白在乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、鼻咽癌、肝癌等多种恶性肿瘤组织中呈阳性表达,而且Ku70蛋白随着肿瘤恶性度的升高表达得越强烈。因此不难发现     

Ku70与hTERT在胃癌组织中的表达及其意义

目的探讨Ku70和人端粒酶逆转录酶(h TERT)蛋白表达与胃癌发生发展的关系及两者之间的联系。方法应用免疫组织化学方法检测Ku70和h TERT蛋白在10例正常胃黏膜、15例胃癌前病变黏膜和20例胃癌组织中的表达。结果 Ku70蛋白阳性表达定位于正常胃黏膜和胃癌组织的细胞核,胃癌前病变黏膜的细胞浆,其阳性表达率分别为90%、100%和80%;h TERT蛋白在正常胃黏膜几乎不表达,在胃癌前病变黏膜和胃癌组织中均定位于细胞浆,其阳性表达率分别为30%、100%和100%。胃癌组织中Ku70和h TERT蛋白的表达强度明显高于正常胃黏膜和胃癌前病变黏膜。Ku70和h TERT蛋白的表达显著相关。结论 Ku70和h TERT蛋白可能与胃癌的发生发展过程相关。     

Ku70在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达及意义

目的 探讨Ku70在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达及临床意义.方法 免疫组化方法检测20例正常卵巢、100例卵巢浆液性肿瘤(卵巢浆液性爱腺瘤30例、卵巢交界性浆液性囊腺瘤20例和卵巢浆液性囊腺癌50例)组织中Ku70的表达,分析其表达与临床病理参数之间的相关性.结果 Ku70在正常卵巢组织,良性、交界性和恶性卵巢浆液性组织中都有不同程度的表达,且在交界性和恶性卵巢浆液性组织中的表达明显高于正常卵巢组织和卵巢囊腺瘤(P＜0.01),卵巢癌组织分化程度越差Ku70的阳性率越高,表达强度亦越强,与肿瘤的临床分期、腹水、淋巴结转移均相关(P＜0.05).结论 Ku70的异常表达与卵巢浆液性肿瘤恶变相关.     

Ku80在人肺癌中的表达水平与放疗前后表达变化的实验研究

目的：基于Ku80在辐射诱导的DNA修复中的作用,研究不同病理类型肺癌中Ku80的表达水平,并以人肺癌A549细胞接种裸鼠模型评估放疗对Ku80表达的影响。方法使用免疫组化及荧光定量PCR分别检测不同病理类型肺癌Ku80蛋白和mRNA的表达水平。将A549细胞接种到裸鼠上再以不同剂量的射线照射,并分别在24、48h后处死,用免疫组化及荧光定量PCR检测Ku80蛋白和mRNA的表达水平。结果肺癌组织表达的Ku80蛋白、mRNA水平高于正常肺组织（均P＜0.01）。在肺癌亚组中,肺腺癌和鳞癌比小细胞肺癌表达更高的Ku80蛋白、mRNA水平（均P＜0.01）。接种在裸鼠的人肺癌A549细胞经过不同剂量射线照射后Ku80 mRNA的表达增加,并具有剂量和时间依赖性。结论 Ku80在放疗引起的DNA破坏过程中起到重要的作用。肺鳞癌和腺癌的Ku80表达高于小细胞肺癌,这可能是肺鳞癌和腺癌放射敏感性逊于小细胞肺癌的原因之一。Ku80表达水平可能在预测肺癌的放射敏感性方面具有重要价值,可以成为肺癌放射增敏治疗的一个新靶点。     

沉默Ku70后PARP1参与DNA双链断裂修复

目的研究碱基切除修复途径(base excision repair,BER)关键因子PARP1在Ku70缺失的条件下是否参加DNA双链断裂(double-strand break,DSB)的修复。方法针对人类Ku70构建编码shRNA序列的重组表达载体并转染细胞,建立Ku70蛋白表达沉默的细胞株。以高效的DNA双链断裂诱导剂刺孢霉素calicheamycin诱导DSB形成,在Ku70沉默或联合PARP1抑制剂条件下,通过结晶紫染色法检测DSB对细胞存活率的影响,以及Western blot检测H2AX的磷酸化状态。根据与染色质相互作用的差别,分段提取细胞蛋白组分,Western blot检测PARP1在各组分的分布变化。结果细胞Ku70蛋白水平在Ku70 shRNA干扰后显著下调。Ku70沉默和PARP1抑制剂明显降低细胞在calicheamycin处理后的存活率(P<0.01),两者有明显协同效应。在Ku70沉默的细胞诱导DSB后,PARP1主要分布在与染色质紧密结合的组分。结论在Ku70缺陷时,PARP1可与染色质结合,且抑制其功能影响细胞生存,说明PARP1可能参与了不依赖于Ku的DNA双链断裂修复的替代途径。     

下调Ku70促进DDB1/2在双链断裂DNA聚集

目的 探讨DNA损伤结合蛋白DDB 1/2复合物在Ku70缺失的条件下与双链断裂DNA(double-strand breaks,DSB)亲和力的变化及下调DDB1对DSB修复的影响.方法 针对人类Ku70构建编码shRNA序列的重组腺病毒并感染细胞,建立Ku70蛋白表达沉默的细胞株,以博来霉素(bleomycin,Bleo)或新制癌菌素(neocarzinostatin,Ncs)诱导DNA双链断裂,利用DNA损伤修复蛋白与损伤染色质的高亲和力,分段提取细胞蛋白组分,Western blot检测DDB1/2在各组分的分布变化.免疫荧光检测诱导DNA双链断裂前后DDB1与损伤染色质亲和力的变化.沉默DDB1,Western blot检测在不同条件下γ-H2AX的去磷酸化效率.结果 人乳腺癌MDA-MB-231细胞Ku70蛋白水平在Ku70shRNA重组腺病毒感染后4d显著下调,6d达到最低.与Ku70正常细胞相比,在Ku70沉默后诱导DSB,Western blot检测结果显示DDB1/2主要分布在与染色质紧密结合的组分,免疫荧光同样表现出其与染色质亲和力增高.并且在Ku缺失的条件下,Western blot显示下调DDB1能显著降低γ-H2AX去磷酸化效率(P＜0.01).结论 下调Ku70可促进DDB1/2在双链断裂DNA聚集,且下调DDB1影响DSB修复,说明DDB1/2可能参与了不依赖于Ku的双链断裂的修复途径.     

HSP70在乳腺癌中的表达及与乳腺癌生存期的关系

目的：研究HSP70在乳腺癌中的表达及与乳腺癌生存期之间的关系。方法选取行乳腺癌改良根治术或根治术的原发性乳腺癌患者150例,通过免疫组化方法检测HSP70的表达,回顾性分析其表达与OS之间的关系。结果40.6％乳腺癌标本中HSP70阳性表达。 HSP70表达及临床分期（ P＝0.039）有关。 HSP70阳性表达组5年总生存率为80.3％（49／61）,而阴性表达组患者的5年总生存率为89.9％（80／89）,阴性表达组明显高于阳性组。 HSP70阳性组10年总生存率为22.9％,明显低于阴性组的39.3％（ P＜0.05）。阴性表达组患者的总生存时间（ OS）明显高于阳性表达组患者（ P＝0.048）。乳腺癌OS的Cox分析结果显示HSP70阳性表达（ P＝0.051）可能为影响乳腺癌OS的不良预后因素。结论 HSP70在乳腺癌中普遍呈扩增和过表达,其过表达与乳腺癌的发生发展密切相关,扩增或过表达可能是乳腺癌的不良预后因素。     

沉默Ku70促进PARP1、ligase3和XRCC1在DNA双链断裂染色质聚集

目的 研究碱基切除修复途径(base excision repair,BER)关键因子PARP1、ligase3和XRCC1在Ku70缺失的条件下与DNA双链断裂(double-strand break,DSB)所在染色质的结合及抑制PARP1所产生的影响.方法 采用可经药物诱导Ku70 shRNA的细胞株,以高效的D...     

用Ku80 siRNA抑制Ku80基因表达以提高肺癌细胞放射敏感性的实验研究

目的探讨用小RNA干扰抑制Ku80基因表达以提高A549肺癌细胞的放射敏感性。方法设计并化学合成Ku80siRNA,转染体外培养的A549肺癌细胞。利用RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白质水平对转染后的细胞Ku80基因表达情况进行测定,同时上述转染的细胞分别照射2、4、6、8及10Gy,利用克隆形成实验测定放射敏感性的变化。结果 RT-PCR检测显示在A549肺癌细胞转染Ku80siRNA后24、48和72h三个时间点Ku80mRNA含量减少,Western blot分析显示在转染48和72h两个时间点Ku80蛋白含量减少,与对照组比较有统计学差异（P〈0.05）。克隆形成实验提示A549肺癌细胞转染Ku80siRNA后放射敏感性增强。结论 Ku80siRNA转染A549肺癌细胞后能够有效抑制Ku80基因表达,提高其放射敏感性。     

鼻咽癌组织中Pokemon、Ku70的表达及临床病理学意义

目的 研究鼻咽癌组织中Pokemon、Ku70的表达及其临床病理学意义.方法 采用免疫组织化学Envision二步法检测Pokemon、Ku70在47例鼻咽癌(鼻咽癌组)、20例鼻息肉(鼻息肉组)石蜡包埋组织中的表达,探讨与TNM分期、浸润、转移的关系.结果 (1)Pokemon在鼻咽癌组及鼻息肉组中阳性表达率分别为68.1%(32/47)、25.0%(5/20),差异有统计学意义(χ2=10.53,P＜0.05).不同分型的鼻咽癌组织中,角化性鳞状细胞癌组与非角化癌组Pokemon的阳性表达率分别为45.0%、85.2%,差异有统计学意义(χ2=8.54,P＜0.05).不同TNM的鼻咽癌组织中,Ⅰ期+Ⅱ期组、Ⅲ期+Ⅳ期组Pokemon的阳性表达率分别为88.0%、45.5%,差异有统计学意义(χ2=9.75,P＜0.05).在有无淋巴结转移的鼻咽癌组织中,有淋巴结转移组、无淋巴结转移组Pokemon的阳性表达率分别为86.7%、35.5%,差异有统计学意义(χ2=13.18,P＜0.05).⑵Ku70在鼻咽癌组及鼻息肉组中阳性表达率分别为61.7%(29/47)、30.0%(6/20),差异有统计学意义( χ2=5.65,P＜0.05).不同分型的鼻咽癌组织中,角化性鳞状细胞癌组与非角化癌组Ku70的阳性表达率分别为55.0%、66.7%,差异无统计学意义( χ2=0.66,P＞ 0.05).不同TNM分期的鼻咽癌组织中,Ⅰ期+Ⅱ期组、Ⅲ期+Ⅳ期组Ku70的阳性表达率分别为72.0%、50.0%,差异无统计学意义( χ2=2.40,P＞ 0.05).在有无淋巴结转移的鼻咽癌组织中,有淋巴结转移组、无淋巴结转移组Ku70的阳性表达率分别为73.3%、35.5%,差异有统计学意义( χ2=4.75,P＜0.05).结论 提示Pokemon及Ku70在鼻咽癌的发生发展中起重要作用;Pokemon与Ku70可能成为判定预后的生物标志物.     

Ku80基因在人A549肺腺癌细胞照射前后表达的对比研究

目的 探讨Ku80基因在人A549肺腺癌细胞中的表达水平.将A549肺腺癌细胞接种裸鼠,以不同强度的射线照射,探求Ku80蛋白和Ku80 mRNA在放射治疗前后水平变化.方法 利用免疫组化、荧光定量PCR方法检测经过不同强度的射线照射前后的A549肺腺癌细胞的Ku80蛋白含量和Ku80 mRNA的表达.结果 接种在裸鼠...     

人体内肺癌细胞Ku80蛋白含量与顺铂化疗敏感性的关系研究

目的探讨患者体内肺癌细胞Ku80蛋白含量与其对顺铂敏感性的相关性。方法收集肺癌患者胸腔积液中的肺癌细胞进行体外原代培养,通过传代进行纯化和扩增后进行实验。体外药敏试验采用CCK-8法测定肺癌细胞对顺铂的敏感性,获得各样本的半数抑制浓度(IC50)。利用Western blot法测定各样本细胞内Ku80蛋白含量。分析Ku80蛋白含量与顺铂敏感性的相关性。结果非小细胞肺癌(NSCLC)组IC50为(4.40±3.39)mg/L,小细胞肺癌(SCLC)组IC50为(1.02±0.54)mg/L,二者比较差异有统计学意义(P0.001)。NSCLC组Ku80蛋白相对含量为0.80±0.45,而SCLC组为0.48±0.25,二组之间比较差异有统计学意义(P0.05)。通过相关性分析得到肺癌患者Ku80含量与IC50呈正相关(r=0.618,P0.001)。结论 NSCLC患者Ku80基因表达高于SCLC患者,可能与NSCLC对化疗敏感性差有关。肺癌细胞Ku80蛋白含量与其对顺铂敏感性呈负相关。Ku80蛋白含量可作为预测肺癌患者以铂类为基础的化疗敏感性的候选指标。     

短干扰RNA抑制人宫颈癌HeLa细胞Ku80基因表达

目的 针对内源性Ku80基因序列体外构建短干扰RNA（siRNA）线性DNA转录载体，观察其在细胞内产生的siRNA对该基因表达的影响。方法 构建的线性DNA转录载体经脂质体导入宫颈癌HeLa细胞内，转录产生21bp的短双链siRNA，并用免疫印迹法分析Ku80基因在蛋白水平表达的情况。结果 体外成功构建出siRNA线性DNA转录载体LS1／LAS1和LS2／LAS2；载体分别导入HeLa细胞内生成相应siRNA；与空白对照组比较，实验组均能特异性抑制Ku80基因的表达；其抑制效果和时间点与所选基因靶位相关。结论 由线性DNA载体转录生成的siRNA在细胞内特异性抑制内源性基因表达，为Ku80用于肿瘤靶向基因治疗提供了一个新的实验依据。     

乳腺癌组织中DNA依赖蛋白激酶的表达变化

目的探讨乳腺癌组织中DNA依赖蛋白激酶（DNA—PK）的表达变化及其意义。方法采用免疫组化sP法检测56例乳腺癌组织及50例乳腺良性病变组织中DNA—PK的3个亚基DNA—PKcs、Ku70、Ku86的表达情况，同时检测这些组织中雌激素受体（ER）及癌基因c—erbB-2的表达。结果Ku70、Ku86在乳腺癌组织中的表达明显低于乳腺良性病变组织（P〈0，01），而且Ku70和Ku86的表达随乳腺癌病理分级的升高而降低，但DNA-PKcs在两者中的表达则无明显变化。Ku70与Ku86的表达在ER阳性组高于ER阴性组，在c—erbB-2阳性组的表达则低于c-erbB-2阴性组，差异均有极显著性意义（均P〈0．01）。结论Ku70和Ku86的低表达在乳腺癌的发生和发展中有重要意义，且其与ER、c—erbB-2关系密切，对乳腺癌的临床治疗及预后判断有一定的指导意义。