慢性牙周炎患者治疗前、后血清降钙素基因相关肽水平检测的临床意义

目的:探讨慢性牙周炎患者治疗前、后血清中降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)水平的变化及意义.方法:随机选择2014年8月--2015年6月在我院牙周科就诊的健康对照组30例,轻度、中度、重度牙周炎患者各30例,抽取空腹外周静脉血,离心、分离上清液,运用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测CGRP浓度.慢性牙周炎患者轻度、中度、重度3组分别于基础治疗后3个月再次检测CGRP浓度.采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析.结果:ELISA检测结果显示,健康组静脉血中CGRP的含量显著高于牙周炎患者.随着牙周炎炎症程度加重,静脉血中CGRP的含量依次降低,重度牙周炎患者的含量最低,差异显著(P＜0.01);轻度、中度、重度牙周炎患者基础治疗3个月后,血清中CGRP含量相比同组治疗前显著升高(P＜0.05),治疗后牙周炎患者组间CGRP含量相比差异无显著性(P＞0.05).结论:静脉血中CGRP的含量与慢性牙周炎存在相关性,其含量随慢性牙周炎逐渐加重而降低,推测CGRP可能参与慢性牙周炎的发生、发展过程.慢性牙周炎治疗后血清中CGRP含量明显增加,CGRP可作为慢性牙周炎患者治疗效果的临床检测指标.     

降钙素基因相关肽基因多态性与成人重度牙周炎关系的初步研究

目的:研究中国广东人降钙素基因相关肽(calcitoningene-relatedpeptide,CGRP)基因多态性与成人重度牙周炎易感性的关系。方法:收集40例成人重度牙周炎患者和46例健康对照组的颊黏膜拭子,抽提DNA,通过PCR扩增出CGRP基因片段。结果:基因测序法证明该扩增序列来自CGRP基因(参照Gen bank收录的X15943CGRP基因序列)。进一步检测来自重度牙周炎患者的扩增CGRP基因序列,发现在检测的CGRP 5247位点,发生了A-C单核苷酸基因多态性(SNP)。结论:CGRP 5247位点发现等位基因杂合子多态性现象的存在;CGRP 5247位点单核苷酸多态性,可能成为中国广东人牙周炎的易感因素之一。     

神经生长因子调控降钙素基因相关肽的表达及对MG-63细胞增殖的影响

目的 探讨创伤愈合过程中神经生长因子（NGF）调控降钙素基因相关肽（CGRP）的表达,以及影响MG-63细胞增殖的作用机制。方法 加入不同质量浓度的NGF刺激MG-63细胞,1、2、3、4 d后收集样本,采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测CGRP的表达,实时荧光定量聚合酶链反应（RT-QPCR）检测CGRP mRNA的表达,采用细胞计数法（CCK-8）检测MG-63细胞的增殖;在MG-63细胞中加入NGF受体阻断剂,采用RT-QPCR和CCK-8检测CGRP mRNA的表达及MG-63细胞的增殖效率。结果 在NGF作用下,MG-63细胞分泌的CGRP表达量明显上调,随NGF质量浓度升高,CGRP表达量也相应升高,具有浓度依赖性,CGRP表达量随NGF作用时间延长也相应增加（P<0.05）;随NGF质量浓度升高和作用时间延长,MG-63细胞的增殖效率也相应增加（P<0.05）。加入NGF受体阻断剂后此作用相应减弱（P<0.05）。结论 在创伤愈合过程中NGF能通过上调CGRP的表达量影响MG-63细胞的增殖,从而促进创伤愈合。     

龈沟液中神经肽及其与牙周炎的关系

牙周炎是造成牙齿缺失的主要原因之一,其发病机理尚不完全清楚。近年的研究发现感觉神经参与炎症、修复、免疫等生理病理过程,而神经肽在其中起重要作用。本文就其与牙周炎的关系作一综述。     

白细胞介素与牙周炎的研究进展

白细胞介素(Interleukin)是非常重要的细胞因子家族,它们在免疫细胞的成熟、活化、增殖和免疫调节等一系列过程中均发挥重要作用。近年来许多研究发现,白细胞介素在牙周炎的免疫发病机制中发挥着重要作用。深入研究白细胞介素和牙周炎的关系,对牙周炎的病因研究、预防、治疗以及预后判断有深远意义。     

基于连接酶检测反应的CGRP和IL-1A基因多态与重度慢性牙周炎的相关性研究

目的:建立一个基于连接酶检测反应(LDR)的基因多态性检测系统,探讨降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)和白介素-1A(Interleukin-1A,IL-1A)基因多态性与中国汉族人群重度慢性牙周炎遗传易感性的关系.方法:收集100例重度慢性牙周炎病人和118例健康对照组的颊黏膜拭子并抽提DNA,应用PCR-LDR方法检测CGRP 1210、CGRP 4218、CGRP 5247以及IL-1A-889基因型,并使用软件SHEsis进行单体型分析,进行各组间基因型分布和等位基因频率的x2检验.结果:重度慢性牙周炎病人组CGRP 1210、CGRP 5247以及IL-1A-889阳性基因型均显著高于健康对照组(P<0.05),CGRP 4218的基因型、等位基因频率在各组间的分布无显著性差异(P>0.05).结论:建立了一个基于连接酶检测反应的基因多态性并行检测系统,IL-1、CGRP基因多态性与重度慢性牙周炎有相关关系,IL-1A-889、CGRP 1210和CGRP 5247阳性基因型可能是重度慢性牙周炎易感性的遗传标志,同时提示IL-1、CGRP基因型在不同地域、不同人种中的分布可能是不相同的.     

大鼠正畸牙移动过程中牙周组织内CGRP的表达变化

目的:建立SD大鼠正畸牙移动模型,观察牙移动过程中牙周组织内降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)的表达变化,探讨其在正畸疼痛的外周神经机制中的作用.方法:将60只SD大鼠随机分为实验组(54只)和对照组(6只)2组,实验组大鼠施加50 g力后,分别在4h、8h、1d(1d组根据据力值大小分为1 d-30 g、1d-50g、1 d-80g3个亚组)、3 d、5 d、1周、2周,随机处死6只SD大鼠,收集牙周组织,进行实时定量PCR检测,观察牙周膜内CGRP随时间及力值大小的表达变化,采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:大鼠正畸牙移动过程中,牙周组织内CGRP表达随加力时间发生改变,加力4h后开始增强,1d后达到高峰并逐渐减弱,2周后与对照组相比无显著差异.不同力值组加力1d后,CGRP表达随加力力值增大而升高,80 g力组＞50 g力组＞30 g力组.结论:正畸牙移动过程中,牙周组织内CGRP表达随加力时间增加及加力力值增大出现规律性变化,提示CGRP可能在正畸疼痛的外周神经机制中具有重要作用.     

降钙素基因相关肽对体外大鼠破骨细胞形成的影响

目的 :了解降钙素基因相关肽 (CGRP)对体外培养大鼠破骨细胞形成的影响 ,探讨CGRP在局部骨改建中的作用机制。方法 :采用 1.2 5 (OH) 2 D3 体外诱导培养大鼠破骨细胞 ,观察不同浓度的CGRP对大鼠破骨细胞形成的影响。结果 :10 -9mmol/L、10 -8mmol/L、10 -7mmol/LCGRP不仅明显减少了TRAP阳性染色单核 /双核细胞的数量 ,同时也减少了多核细胞的数量 (P <0 .0 5 ) ,具有浓度依赖性。结论 :CGRP可能直接抑制破骨细胞的形成 ,在局部骨改建中发挥调节作用。     

大鼠根尖周炎中降钙素基因相关肽阳性神经纤维的变化

目的：观察降钙素基因相关肽阳性(CGRP—IR)神经纤维在大鼠根尖周炎中的变化，为进一步研究CGRP在根尖周炎中的作用提供形态学依据。方法：在大鼠磨牙制备近髓窝洞，封入新鲜龋坏组织，建立大鼠根尖周炎模型。免疫组织化学技术观察正常根尖周膜和炎症14、21d根尖周组织CGRP-IR神经纤维的变化。结果：根尖周炎时，大鼠磨牙根尖周膜CGRP—IR神经纤维增多、增粗、染色加重，并围绕在坏死组织周围。结论：根尖周炎时，根尖周膜内CGRP增多，并佗于炎症的前沿区，CGRP可能参与了根火周组织炎症及修复过程。     

大鼠正畸牙移动过程中牙周组织内降钙素基因相关肽的变化

目的：了解大鼠正畸牙移动过程中牙周组织内降钙素基因相关肤(Calctionin gene—related peptide CGRP)的变化，探讨CGRP对正畸牙移动过程中的作用。方法：将35只雄性Wistar大鼠(体重240-280g)分为7组，其中一组未加力为对照组。选择右上第一磨牙作为实验牙，制备大鼠正畸牙移动12h、24h、3d、7d、14d、21d时牙周组织切片，进行免疫组织化学研究。结果：正畸牙移动过程中，牙周组织不同区域CGRP表达发生改变。加力3d时，根尖牙周膜CGRP表达稍增加；加力7d时，所有观察区域牙周膜内CGRP表达显著增加。结论：CGRP在正畸牙移动过程中组织重建的多个阶段起作用，参与了牙周膜早期的重建和晚期的再生。     

牙周炎患者龈沟液中P物质和降钙素基因相关肽的变化

目的：测定正常人和重度牙周炎患者龈沟液中神经肽P物质和降钙素基因相关肽，以了解两种神经肽与牙周炎的关系。方法：应用放射免疫技术测定正常对照组、广泛型重度牙周炎、局限型重度牙周炎患者正常部位、牙周炎部位龈沟液中神经肽P物质和降钙素基因相关肽的含量，并计算出其浓度。结果：龈沟液中P物质的含量和浓度在四组间均有显著差异，而牙周炎部位的降钙素基因相关肽与牙周健康部位相比，检出率明显下降，有统计学意义。结论：神经肽如P物质、降钙素基因相关肽与牙周炎的发生及发展可能有一定的关系。     

Carboxypeptidase‐mediated metabolism of calcitonin gene‐related peptide in human gingival crevicular fluid – a rôle in periodontal inflammation?

Background: Metabolism by peptidases plays an important rôle in modulating the levels of biologically‐active neuropeptides. The metabolism of the anti‐inflammatory neuropeptide calcitonin gene‐related peptide (GCRP), but not the pro‐inflammatory neuropeptides substance P (SP) and neurokinin A (NKA) by components of the gingival crevicular fluid (GCF), could potentiate the inflammatory process in periodontitis. Aims: To characterise the extracellular hydrolysis of CGRP as a mechanism for the selective inactivation of this neuropeptide in GCF from periodontitis sites. Methods: Samples of GCF from periodontitis patients and periodontally‐healthy subjects were incubated with synthetic human SP, NKA or CGRP. Reaction between the GCF constituents and synthetic peptides was allowed to progress from 0–180 min. Results of neuropeptide metabolism at each time were analysed by matrix‐assisted laser desorption/ionisation mass spectrometry. Results: There was no evidence of metabolism of SP, NKA or CGRP by constituents of healthy GCF. Metabolism of synthetic SP and NKA was minimal even after extensive incubation with periodontitis GCF. However, loss of carboxy‐terminal amino acids was evident after only 1 min incubation with periodontitis GCF. The pattern of CGRP metabolism, which proceeded from the C‐terminus, indicated that the neuropeptide was degraded by a carboxypeptidase. After 180 min, there was extensive carboxypeptidase degradation of CGRP to an 11 amino acid peptide. Conclusions: It is concluded that carboxypeptidase activity in GCF from periodontitis patients is responsible for rapid breakdown of CGRP but not SP or NKA. The rapid action of this carboxypeptidase on the anti‐inflammatory neuropeptide CGRP is suggestive of a pathophysiological rôle for the enzyme in selectively degrading CGRP, thereby potentiating periodontal inflammation.     

Calcitonin gene-related peptide in gingival crevicular fluid in periodontal health and disease

The aims of the present study were to investigate whether calcitonin gene-related peptide (CGRP) was present in gingival crevicular fluid in both periodontal health and disease and to study the relationship with periodontal inflammation. Gingival crevicular fluid (GCF) was collected from a healthy, a gingivitis and a periodontitis site in 18 subjects with periodontitis and from a healthy site in 19 subjects without periodontitis. The volume of GCF was measured and each sample subsequently analysed for CGRP by radioimmunoassay. In subjects with periodontitis, CGRP immunoreactivity (CGRP-IR) was not detected in any periodontitis sites, nor in 67% of gingivitis and 28% of periodontally-healthy sites. The total amount of CGRP-IR was significantly elevated in periodontally healthy (p=0.0015) and gingivitis (p=0.027) compared with periodontitis sites. CGRP-IR was present in 89% of the healthy sites sampled in control subjects at comparable levels to those in healthy sites in periodontitis subjects. It is concluded that in periodontal inflammation, particularly in deep pockets, constituents of GCF process and degrade CGRP.     

降钙素基因相关肽在大鼠切牙和牙周组织中的表达

目的:研究降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related petide,CGRP)在大鼠切牙成釉细胞、成牙本质细胞和牙周膜细胞中的定位表达。方法:取6周龄Wistar大鼠的下颌骨,常规脱钙,切片,并进行HE染色和免疫组织化学染色,显微镜下观察CGRP在各组织细胞中的定位和表达。结果:CGRP在牙周膜细胞中呈阳性表达,在分泌期成釉细胞和成牙本质细胞中呈强阳性表达。结论:CGRP在牙齿硬组织发育细胞中呈强阳性表达,提示CGRP在釉质和牙本质发育的过程具有一定的意义。     

Calcitonin gene-related peptide levels in saliva of patients with burning mouth syndrome

Burning mouth syndrome (BMS) is an intraoral burning sensation for which no medical or dental cause can be found. Recent studies suggest that primary neuropathic dysfunction might be involved in the pathogenesis of BMS. Calcitonin gene-related peptide (CGRP) plays an important role in the development of pain and serves as a biological marker of trigeminovascular activation. The aim of this study was to determine the levels of CGRP in the saliva of BMS patients and estimate the trigeminovascular activation in BMS. CGRP levels were measured, by RIA method in 78 BMS patients and 16 healthy subjects. The levels of CGRP were non-significantly decreased in BMS patients in comparison to healthy subjects. These results suggest that trigeminal nerve degeneration may be the underlying cause of BMS.     

降钙素基因相关肽对血清饥饿作用下MC3T3-E1成骨细胞凋亡和自噬的影响

目的 研究血清饥饿条件下降钙素基因相关肽（CGRP）对小鼠MC3T3-E1成骨细胞凋亡、自噬的影响以及二者之间的关系,以进一步明确CGRP对成骨细胞的保护机制。方法 体外培养小鼠MC3T3-E1成骨细胞。采用流式细胞术和蛋白质印迹检测正常血清、无血清（血清饥饿）、3-MA预处理+血清饥饿培养的成骨细胞的凋亡和微管相关蛋白1轻链3（LC3）蛋白的表达。采用蛋白质印迹检测正常血清、血清饥饿、血清饥饿+不同浓度（10^-10、10^-9、10^-8、10^-7 mol·L^-1）CGRP培养的成骨细胞的LC3和P62蛋白表达;采用蛋白质印迹检测正常血清、血清饥饿、血清饥饿+10^-8 mol·L^-1 CGRP培养不同时间（2、6、12、24、48、72 h）的成骨细胞的LC3蛋白表达,流式细胞数检测细胞凋亡,MDC染色检测细胞自噬泡。采用流式细胞术检测正常血清、血清饥饿、血清饥饿+10^-8 mol·L^-1 CGRP、3-MA预处理+血清饥饿、3-MA预处理+血清饥饿+10^-8 mol·L^-1 CGRP培养24 h的成骨细胞的凋亡。结果 血清饥饿培养时成骨细胞的LC3Ⅱ蛋白表达及细胞凋亡较正常血清时增加,3-MA预处理+血清饥饿培养时成骨细胞的凋亡较血清饥饿时增加（P<0.01）。与正常血清相比,血清饥饿、血清饥饿+CGRP培养时LC3Ⅱ蛋白表达增加,P62蛋白表达降低,以血清饥饿+10^-8 mol·L^-1 CGRP培养24 h时LC3Ⅱ/Ⅰ比值最高;血清饥饿+10^-8 mol·L^-1 CGRP培养能抑制成骨细胞的凋亡,促进自噬泡的合成。3-MA预处理后MC3T3-E1成骨细胞凋亡增加,CGRP部分逆转3-MA预处理所增加的成骨细胞凋亡。结论 CGRP能够增强血清饥饿下MC3T3-E1成骨细胞的自噬活性,并可能通过促进自噬抑制成骨细胞的凋亡。     

正畸牙齿移动过程中大鼠三叉神经节CGRP mRNA表达变化

目的：观察正畸牙齿移动不同时期大鼠三叉神经节CGRP mRNA表达变化。方法：采用反转录。聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测正畸加力和撤力后不同时期大鼠三叉神经节CGRP mRNA水平的变化。结果：加力后2h CGRP mRNA的表达量没有明显增加,至加力后8h开始增加,加力1d-1W达到最高峰,至撤力后2～4WCGRP mRNA的表达量开始下降,但CGRP mRNA水平仍然明显高于对照组（P〈0．05）。结论：CGRP可能不仅参与早期正畸牙周组织的炎症损伤过程,而且可能参与了后期的组织修复重建过程。