嵌合荧光PCR法在调查成都市正常人群脑膜炎奈瑟氏菌携带率中的应用及评价

[目的]调查正常人群中脑膜炎奈瑟氏菌携带率,并进行方法评价. [方法]采用实时荧光PCR法检测不同地区不同年龄组人群鼻咽拭子中Nm DNA,并与传统的培养方法进行比较评价. [结果]正常人群999份鼻咽拭子中Nm DNA检出率为8.41%,嵌合荧光PCR法方法的灵敏度、特异性分别为:100%,100%,阳性预测值(PPV)为13.09%,阴性预测值(NPV)为100%,检出限为250 cfu/m,荧光PCR方法检出的时间为0.5 d.而培养法,阳性结果需要3～4 d,阴性结果2 d. [结论]嵌合荧光定量PCR法具有灵敏、特异的特点,特别适合正常人群的带菌率调查,也可用于疾病的快速诊断.     

实时荧光PCR检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的研究

目的建立一种快速、准确检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的实时荧光聚合酶链反应（PCR）方法。方法收集临床诊断或疑似为败血症患者的血标本，直接提取细菌基因组DNA，确定其敏感性；以金黄色葡萄球菌nuc基因和MRSA的mecA基因为靶序列，合成引物，采用实时荧光PCR技术对上述基因进行检测，并将其结果与细菌常规培养结果对比，分析该方法检测MRSA的特异性、灵敏度、阳性预测值和阴性预测值。结果直接从血标本中提取细菌基因组DNA的灵敏度为10’CFU／mL。MRSA阳性血标本实时荧光PCR灵敏度为46．15％，特异性为100．00％，阳性预测值为100．00％，阴性预测值为56．25％。结论使用该方法快速检测临床血标本中MRSA的灵敏度不高，欲应用于临床快速诊断尚有若干问题需解决。     

实时荧光PCR快速同时检测从业人员沙门菌和志贺菌结果分析

目的 了解双重实时荧光PCR快速同时检测从业人员沙门菌和志贺菌的效果.方法 采集从业人员肛拭子样本,用双重实时荧光PCR法检测沙门菌和志贺菌,检出的疑似阳性样本按国标法进行培养鉴定.结果 采用双重实时荧光PCR反应体系共检测从业人员39 974人次,荧光PCR检测出沙门菌阳性41份,阳性率1.22‰,培养法检测出31份,阳性率为0.78‰,沙门菌荧光PCR检测法的灵敏度为100％,特异性为99.95％.荧光PCR检测出志贺菌10份,阳性率为0.25‰,培养法检测出3份,阳性率为0.08‰,志贺菌荧光PCR法的灵敏度为100％,特异性为99.98％.从样品处理到检测结果仅需要时间2h～ld.结论 双重实时荧光PCR检测体系快速、灵敏度高、特异性强,可用于从业人员体检的快速诊断和肠道传染病的初筛,为肠道传染病的分子流行病学调查提供新的检测手段.     

深圳市龙岗区群体性发热流感样病例检测结果分析

目的：对2005年1月至12月深圳市龙岗区流感样疫情进行病原学分析和流行病学调查并进行检测方法比较。方法：对群体性发热的14起病例107份鼻咽拭子和85份血清标本，采用荧光定量RT—PCR方法、Influenza A／B IgM ELISA、胶体金法、鸡胚分离培养方法和血凝抑制试验进行病原学和血清学检测。结果：14起107份标本中荧光定量RT—PCR检测10起45份阳性，阳性率为42％（45／107）；10起85份血清标本中，A型流感IgM7起17份阳性，阳性率20％（17／85）；对2起30份标本采用胶体金法检测1起3份阳性，阳性率10％（3／30）。鸡胚培养12起77份标本中，3起3份阳性，阳性率3．9％（3／77），其中，2起分离出H1N1流感病毒株，1起分离出流感病毒H3N2亚型病毒株。暴发时间分布情况集中在3～5月份，其中5月份的4起疫情中，3宗分离出流感病毒株。结论：3～5月份是深圳市龙岗区流感暴发流行的高峰期，以A型流感为主，其次为B型流感。采用荧光定量RT—PCR方法检测流感病毒，特异性强，灵敏度高，能在3～4h内得结果，可作为快速的流感病毒检测诊断方法，有效控制疫情。     

实时荧光定量PCR法检测NG、CT和UU的临床意义

目的应用实时荧光定量PCR（real-time fluorescent quantitativePCR，FQ—PCR）法检测淋病奈瑟菌（NG）、沙眼衣原体（CT）和解脲支原体（UU），探讨该法的阳性检出率、敏感性和特异性。方法对临床疑似性病患者，取尿道或宫颈分泌物，同时用分离培养法和FQ—PCR法检测NG、CT、UU。结果168例患者中，培养法阳性检出数46例，阳性率27．38％，FQ—PCR法阳性检出数72例，阳性率42．86％。FQ—PCR法特异性为76．61％，灵敏度为97．83％。分别用FQ—PCR法和培养法检测NG、CT和UU，前者阳性率均高于后者。结论用实时荧光定量PCR法检测NG、CT以及UU，具有快速、敏感、特异、检出率高等优点，对临床诊断治疗及流行病学调查有重要意义。     

间接酶联免疫吸附试验检测北京市昌平地区体检人群中汉赛巴尔通体抗体

目的调查北京市昌平地区健康体检人群血清汉赛巴尔通体抗体阳性情况。方法用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫荧光抗体（IFA）试剂盒检测体检人群血清汉赛巴尔通体抗体情况。结果以IFA为参考标准，间接ELISA方法的灵敏度为70．6％，特异度为91．6％；阳性预测值为82．2％（60／73），阴性预测值为84．9％。ELISA共检测了357份健康体检人群血清，汉赛巴尔通体抗体阳性率为34．5％，IFA共检测了239份体检血清，其汉赛巴尔通体抗体阳性率为35．6％。结论间接ELISA方法对于检测汉赛巴尔通体感染是一种快速、敏感、特异的方法，昌平地区健康体检人群中存在汉赛巴尔通体抗体阳性的情况。     

免疫渗滤法在甲型流感病毒筛查中的应用

目的评价免疫渗滤法在筛查临床甲型H1N1流感病毒感染中的诊断效率。方法收集2009年6月-10月医院发热门诊流感样病例咽拭子标本297例,分别用免疫渗滤法和实时荧光定量PCR检测,以评价免疫渗滤法的诊断效率。结果在297份咽拭子标本中,实时荧光定量PCR法检测为甲型H1N1流感166份,免疫渗滤法检出115份,两种方法检测均为阳性91份,均为阴性107份,灵敏度为54.82%,特异度为81.86%,阳性预测值为79.1%,阴性预测值为58.8%,总符合率66.67%,两种方法在甲型流感病毒检测中差异无统计学意义。结论免疫渗滤法可用于甲型流感病毒筛查,显示出良好的临床应用前景。     

吴起县学生群体性发热疫情的快速检测诊断

目的 搞清2006年吴起县学生群体性发热疫情的病原。方法采集了20例发热学生的鼻咽拭子和血液标本，使用美国QUICKVUE流感A＋B快检试剂进行现场检测；在国家级流感监测网络实验室（陕西省疾病预防控制中心），使用美国DHI公司呼吸道病毒抗原七项（甲、乙型流感病毒，副流感病毒1、2、3型，腺病毒，呼吸道合胞病毒）荧光检测试剂盒进行直接荧光抗原检测，用RT—PCR方法进行乙型流感病毒核酸检测。结果对13份鼻拭子标本进行了现场快速抗原检测，其中7份小学生标本显示乙型流感病毒抗原阳性，阳性率为53．85％；对12份鼻咽拭子进行了免疫荧光抗原检测，其中3份呈乙型流感病毒抗原阳性，阳性率为25．00％；对17份鼻咽拭子标本进行了RT—PCR检测，12份显示乙型流感病毒核酸阳性，阳性率为70．59％。结论根据以上实验室快速检测结果，引起此次学生群体发热的病原为乙型流感病毒。     

快速检测试剂条、镜检和PCR在疟疾诊断中的应用研究

目的采用快速检测试剂条（rapiddiagnostictest,RDT）、镜检及聚合酶链反应（polymerasechainreac-tion,PCR）,3种检测方法进行疟原虫检测,比较3种方法在疟疾诊断中的敏感性、特异性,为科学分析检测结果和探究RDT能否在基层替代疟原虫镜检提供依据。方法收集安徽省2012年1月～2013年3月确诊以及疑似病例抗凝血148份,血片148张,采用RDT进行检测,并与镜检法和PCR的结果对比分析其敏感性与特异性。结果148份血样采用RDT、镜检和PCR3种方法检测结果阳性率分别为43．24％、36．49％、37．84％,经配对x2检验RDT阳性率高于镜检和PCR;镜检和PCR均检出2例卵形疟,而RDT结果为阴性;以镜检为标准,对间日疟和恶性疟进行分析得出,RDT的敏感度为100％,特异度87％,阳性预测值81％,阴性预测值100％;以PCR为标准,对间日疟和恶性疟进行分析得出,RDT的灵敏度为100％,特异度89％,阳性预测值84％,阴性预测值100％。3种方法均检出间日疟16例,而对恶性疟分别为RDT检出48例,镜检检出36例,PCR检出38例。结论RDT对间日疟和恶性疟敏感性较高,可以覆盖全部阳性病例,在今后疟疾低流行时期RDT有望取代基层镜检对疟疾进行诊断。     

TaqMan-MGB探针法快速检测脑膜炎奈瑟菌的研究

目的建立TaqMan-MGB探针荧光定量PCR快速检测脑膜炎奈瑟菌（Nm）方法,为流脑的诊断提供更加灵敏、特异、可标准化、自动化的检测方法;评价TaqMan-MGB探针荧光定量PCR法在健康人群带菌调查中的应用价值。方法根据Nm ctrA基因的3端保守序列设计合成引物和TaqMan-MGB探针,建立快速检测脑膜炎奈瑟菌的荧光定量PCR方法,并对反应条件进行优化。结果TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测脑膜炎奈瑟菌的灵敏度为102cfu/ml,TaqMan-MGB探针法检测900份健康人群咽拭子标本,阳性34例,检出率3.8%,高于培养法（1.2%）。结论该方法特异性强、灵敏度高,能实现脑膜炎奈瑟菌的快速检测,适用于健康带菌检查并可作为临床常规诊断方法的补充,有利于流脑的早诊断、早治疗。     

Evaluation of three methods for detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus

AIM: To evaluate GenoType methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) Direct assay and cultivation for the identification of MRSA by using mecA polymerase chain reaction (PCR) as the “gold standard” assay. METHODS: In total of 61 nasal specimens from patients at the intensive care unit were studied by GenoType MRSA Direct test, conventional culture method and automated bacterial identification system. The results of GenoType MRSA Direct assay were compared to conventional culture method the identification of MRSA and mecA gene PCR as the “gold standard” method. The sensitivity, specificity, positive predictive value and negative predictive value were calculated. RESULTS: In total, 61 specimens were studied. Fifty-four specimens (88.5%) were negative by all three methods. Six swabs (9.8%) were found positive by GenoType MRSA Direct test, conventional culture method and automated bacterial identification system. The presence of mecA in these strains was confirmed by PCR. One swab sample was negative for culture methods but MRSA and mecA gene were detected by GenoType MRSA Direct test and mecA PCR respectively. GenoType MRSA Direct test had a sensitivity of 100% (6/6) and a specificity of 100% (55/55), with a positive predictive value of 100% and a negative predictive value of 98%. Culture method of MRSA had a sensitivity of 83.3% (5/6) and a specificity of 98.2% (55/56). CONCLUSION: It was found that the GenoType MRSA Direct assay, which is a rapid and accurate test, is of the same sensitivity and specificity with mecA PCR. The GenoType MRSA Direct assay can be a better tool for rapid and accurate detection of MRSA in diagnostic laboratories.     

广州市萝岗区C群流行性脑脊髓膜炎抗体水平调查分析

目的 了解广州市萝岗区C群流行性脑脊髓膜炎抗体水平。 方法 2013年采取分层随机抽样的方法采集萝岗区8个不同龄组健康人群血清学进行抗体检测。 结果 萝岗区C群流行性脑脊髓膜炎血清杀菌抗体阳性率为60.30%(161/267),保护率为55.43%(148/267)。7~14岁最高,抗体阳性率和保护率高达94.59%和89.19%,其次是3~6岁,抗体阳性率和保护率均为75.32%,3岁以下儿童抗体阳性率和保护率最低,仅有26.23%和22.95%。 结论 萝岗区C群流行性脑脊髓膜炎抗体水平仍达不到防控要求;3岁以下散居儿童是C群流行性脑脊髓膜炎防控的重点人群。     

2007年成都市健康人群流行性脑脊髓膜炎免疫水平调查

目的了解成都市健康人群流脑免疫水平,预测流脑发病的趋势,为流脑的防控提供科学依据。方法选择成都市青羊区、成华区、青白江区和邛崃市作为流脑监测点。各监测点采取分层随机抽样方法采集1～5、6～10、11～15、16～20、21～岁共5个年龄组人群静脉血,进行健康人群流脑抗体水平检测,每组50人,共调查1019人。结果成都市健康人群A群流脑IgG抗体阳性率为94.60%（964/1019）,平均滴度为1∶25.36;C群流脑IgG抗体阳性率为78.21%（797/1019）,平均滴度为1∶7.34。结论成都市不同年龄组健康人群A群和C群流脑IgG抗体的阳性率维持在较高水平,提示大部分人对A群和C群流脑有免疫作用,但是可能存在C群脑膜炎球菌的自然感染危险,应加强流脑疫情监测,并做好15岁以下人群的流脑疫苗免疫接种,防止流脑疫情局部暴发。     

三种方法组成的结核病快速诊断技术的评价

目的评价浓缩涂片法、实时荧光定量PCR法、BACTEC MGIT-960培养法3种方法组合模式对结核病快速诊断的应用价值。方法应用浓缩涂片法、实时荧光定量PCR法、BACTEC MGIT-960培养法3种方法组合测定1 628份临床标本,并与直接涂片法、改良罗氏培养法结果进行比较。结果组合法的阳性检出率36.30%,显著高于直接涂片法的20.15%,差异有显著性(2=52.4,p<0.01);组合法的阳性检出率高于改良罗氏培养法30.71%,差异有显著性(2=5.7,p<0.05),而且检测时间明显缩短;同时组合法的阳性检出率均高于其中单一方法的检测结果,检测结核分枝杆菌的敏感度为99.66%,特异性为99.81%,准确性为99.88%。结论浓缩涂片法、实时荧光定量PCR法、BACTEC MGIT-960培养法3种方法组合具有很高的敏感性和特异性,用于结核病早期快速诊断有重要的临床价值。     

泰泽氏菌TaqManMGB探针荧光定量PCR方法的—立及应用

目的 建立泰泽氏菌的TaqMan小沟结合物(MGB)探针荧光定量PCR检测方法.方法 针对泰泽氏菌16S rRNA基因的保守区设计特异性引物和探针,建立MGB探针荧光定量PCR方法,并验证该方法的特异性、敏感性和稳定性.对2008-2011年采集的1156份临床样本进行检测,同时进行普通PCR检测作为对照.结果 泰泽氏菌TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有高度特异性,与肝螺杆菌、幽门螺杆菌、空肠弯曲菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌之间无交叉反应,检测灵敏度达2.2 copy/μl.标准曲线显示各浓度范围内具有良好线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.204,PCR效率为100％.对1156份临床样本进行检测,荧光定量PCR检出101份泰泽氏菌阳性样本,而普通PCR则仅检出44份.荧光定量PCR方法从临床样本中检出泰泽氏菌DNA仅需2h.结论 TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有特异、灵敏和稳定性,适于泰泽氏菌的快速检测.     

昆明市ACYW135流脑疫苗免疫学效果分析

目的:了解昆明市健康人群脑膜炎奈瑟氏菌(Nm)Y、W135群流脑抗体水平以及ACYW135群流脑疫苗的免疫学效果,为ACYW135流脑疫苗在昆明市的科学使用提供依据。方法:随机抽样昆明市城镇、农村地区三年内未接种ACYW135流脑疫苗的人群,共654人(男性313人,女性341人)做为研究对象。于接种ACYW135流脑疫苗前三天、接种后一个月、一年分三次采集血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、流脑杀菌抗体测定(TTC)法检测血清中流脑Y群、W135群流脑抗体水平。结果:调查654人,接种疫苗前,Y群流脑抗体阳性率18.04%,GMT为6.14,W135群流脑抗体阳性率23.09%,GMT为3.62;Y、W135群流脑抗体阴性者接种疫苗一个月后,Y群流脑抗体阳转率88.25%,总体GMT为72.74;W135群流脑抗体阳转率87.05%,总体GMT为45.95。接种一年后进行免疫持久性观察,Y群抗体阳性者转阴率为3.17%、GMT为27.94;W135群抗体阳性者转阴率为5.30%,GMT17.72。与免疫后一个月抗体阳性率比较,无统计学差异。结论:昆明市健康人群流脑Y群和W135群抗体水平均较低,ACYW135流脑疫苗具有良好的流行病学保护效果,免疫持久性好,保护期在一年以上,在人群中有计划的接种含有W135群和Y群的ACYW135流脑疫苗是必要的。     

2007年成都地区健康人群流行性脑脊髓膜炎带菌状况分析

[目的]了解成都地区健康人群流行性脑脊髓膜炎（流脑）带菌状况,为分析发病趋势提供依据。[方法]2007年5月监测4个区（市）县,用随机抽样法抽取5个不同年龄组健康人群咽拭子于卵黄双抗琼脂培养基进行脑膜炎奈瑟氏菌分离培养及实时荧光PCR分离。[结果]共采集标本999份,培养法阳性率1．1％（11／999）;菌株分别为A群2株（19％）,B群4株（36％）,C群5株（45％）,人群带菌以C群和B群为主;4个地区中青羊区带菌率最高（2．8％）。男性带菌率1．3％,女性0．9％,男女类似;不同年龄组菌群阳性率类似。PCR法检出率8．4％（84／999）,高于培养法（Х^2=58．90,P〈0．01）。[结论]成都市健康人群流脑带菌率较低,但要警惕C群和B群流脑菌群引起的流行。     

2005年山西省健康人群流行性脑脊髓膜炎免疫水平和带菌状况调查

[目的]了解健康人群流行性脑脊髓膜炎(流脑)带菌状况和免疫水平,为流脑的防控提供依据.[方法]2005年3月,在山西省选择方山县、襄汾县、寿阳县、晋城市城区、大同市南郊区,采集7个年龄组健康人群咽拭子及静脉血,分别进行培养及血清抗体检测.[结果]检测919人,咽拭子脑膜炎奈瑟菌阳性的11份,带菌率为1.20%.其中,A群菌阳性带菌率为0.65%,B群菌带菌率为0.54%;血清抗体阳性率,A群为23.39%,C群为10.34%.[结论]山西省健康人群流脑带菌率不高,A群、C群流脑抗体阳性率较低.