葛根素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖及凝血酶受体mRNA表达的影响

目的通过建立凝血酶诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖模型,观察葛根素对凝血酶诱导的VSMC增殖的影响,并进一步观察其对凝血酶受体(TR)mRNA的表达有何作用,旨在认识葛根素的作用的分子机制。方法以细胞计数法和流式细胞仪DNA含量测定法观察凝血酶及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。凝血酶及葛根素等各处理因素作用24h后,以半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TRmRNA的表达。结果凝血酶对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在24h末达峰,且凝血酶浓度在0.1U/L~1.0U/L之间有剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制凝血酶诱导的细胞增殖、DNA合成;高浓度(1.5×10-3mol/L)的葛根素可显著抑制凝血酶诱导的TRmRNA上调。结论葛根素抑制凝血酶诱导的VSMC增殖,这可能部分与其抑制TRmRNA表达有关。     

葛根素对血管平滑肌细胞增殖及对c-fos蛋白和凝血酶受体mRNA表达的影响

目的:通过建立凝血酶(T)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖模型,观察葛根素对T诱导的VSMC增殖的影响,并进一步观察其对c- fos蛋白以及凝血酶受体(TR)mRNA表达的作用,旨在认识葛根素作用的分子机制。方法:以细胞计数法和流式细胞仪测定DNA含量,细胞周期分析观察T及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。T及葛根素等各处理因素作用2 4h后,免疫印迹法(Westernblot)检测c -fos蛋白表达,半定量逆转录聚合酶链式反应(RT- PCR)检测TRmRNA的表达。结果:T对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在2 4h末达到峰值,且T浓度在0 .1～1.0U·L- 1有剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制T诱导的细胞增殖、DNA合成以及VSMCc fos蛋白的表达;高浓度(1.5×10 - 3mol·L- 1)的葛根素可显著抑制T诱导的TRmRNA上调。结论:葛根素能抑制T诱导的VSMC增殖,这可能与其抑制c- fos蛋白有关,并部分与其抑制TRmRNA表达有关。     

三七总皂甙对凝血酶诱血管平滑肌细胞增殖活性的影响

目的探讨三七总皂甙（totalspaoninsofpanaxnotoginseng,tPNS）对凝血酶诱大鼠血管平滑肌细胞（VascularsmoothmUSClecells．vsMcs）的促增殖作用的量效和时效关系。方法采用4～10代的vsMcs的单细胞悬液用于实验。通过MTS法和B—N-乙酰氨基己糖苷酶测定VSMCs细胞增殖率,观察tPNS对凝血酶诱大鼠VSMCs增殖的影响。结果（1）0．5u／ml和1．0u／ml两种浓度的凝血酶均有促VSMCs增殖作用（P〈0．05）。增殖曲线呈双峰样改变（峰值在1h和24h）;（2）不同tPNS浓度（300．0。600．0μg／m1）在24h时对0．5u／ml凝血酶刺激VSMCs都有明显抑制作用,且各浓度之间有显著性差异（P〈0．05）;（3）相对凝血酶组,tPNS（450．0μg／ml）有效地降低了凝血酶（0．5u／m1）诱导VSMCs增殖的1h峰值及24h峰值俨〈0．05）。结论（1）凝血酶促VSMCs的增殖在时间上呈双峰样改变;（2）不同浓度的tPNS对凝血酶诱大鼠血管平滑肌细胞增殖均有抑制作用：（3）tPNS不仅能抑制凝血酶早期快速促VSMCs增殖作用,而且能抑制凝血酶后期促VSMCs增殖作用。     

3,3’双吲哚甲烷对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的研究3,3’双吲哚甲烷(3,3’Diindolylmethane,DIM)在体外对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖作用的影响及可能的分子机制。方法 WST-1方法检测VSMC增殖,5-溴-2’-脱氧尿苷(Brdu)掺入法检测细胞DNA合成,western blot检测p-Akt,p-GSK(糖原合酶激酶)-3β表达。结果凝血酶显著促进VSMC增殖和细胞DNA合成,而DIM呈剂量依赖性地抑制凝血酶诱导的VSMC增殖和DNA合成。对分子机制的研究发现DIM抑制Akt/GSK-3β磷酸化。结论 DIM抑制凝血酶诱导的VSMC增殖,这个作用可能与其抑制Akt/GSK-3β信号通路有关。     

葛根素对血管平滑肌细胞凋亡的影响

葛根素是中药葛根的有效成分 ,对心脑血管疾病具有广泛的药理作用[1] 。研究表明 ,经皮腔内冠状动脉成型术(ＰＴＣＡ)后最主要的并发症为再狭窄 ,其主要表现为血管平滑肌细胞 (ＶＳＭＣ)的增殖和迁移以及细胞外基质的增多 ,而ＶＳＭＣ和巨噬细胞的凋亡功能失调和 (或 )凋亡小体的清除不足是促进动脉粥样硬化发生、发展的重要因素[2 ] 。因而寻找能够促进动脉粥样硬化中ＶＳＭＣ凋亡的手段具有重要的临床意义。本实验利用体外细胞培养技术、流式细胞术、荧光显微镜观察了葛根素对ＶＳＭＣ凋亡的影响。1　材料和方法1.1　血管平滑肌原代细胞的…     

Losartan和CGRP对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖作用的影响

目的比较非肽类血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ型阻断剂氯沙坦(Losartan)和血管活性肽降钙素基因相关肽(CGRP)对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖作用的影响,为探讨此两类物质的降压机制提供实验依据。方法采用MTT,3H-参入法和流式细胞仪分别测定血管紧张素Ⅱ刺激下,Losartan或CGRP干预下血管平滑肌细胞的增殖变化,W est-ern b loting法测定不同状态下血管平滑肌细胞内ERK1/2的活性变化。结果Losartan或CGRP能抑制血管紧张素Ⅱ刺激下血管平滑肌细胞的生存率、DNA合成、细胞周期增殖指数,以及细胞内ERK1/2的活性,并呈剂量依赖性。而且,CGRP抑制作用强于Losartan。结论Losartan或CGRP能抑制血管紧张素Ⅱ刺激下血管平滑肌细胞增殖,其细胞内的信号传导途径与ERK1/2有关。     

拉马克啉对内皮素-1诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及蛋白激酶C表达的作用

目的：探讨拉马克啉（levcromakalim）对内皮素-1（ET-1）诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）表达的影响。方法：体外培养Wistar大鼠主动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell，VSMCs），用ET-1诱导其增殖，用不同浓度拉马克啉共培养，MTT法评价VSMCs增殖情况，3H—TdR检测DNA合成，流式细胞术检测VSMCs凋亡，逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR），Western blot检测PKCamRNA及蛋白表达。结果：拉马克啉对ET-1所致VSMCs增殖有显著抑制作用，随浓度增加，其MTT活性细胞含量和3H—TdR掺入量都明显减少（P〈0．05）；拉马克啉呈剂量依赖性地增加G0／G1期VSMCs（P〈0．05），促使VSMCs凋亡增多（P〈0．05）；拉马克啉抑制VSMCs内PKCamRNA及蛋白表达。结论：拉马克啉抑制ET-1诱导的VSMCs增殖作用，可能的机制是通过下调VSMCs内PKCa表达水平而影响vSMCs增殖和凋亡。     

丹皮酚对动脉粥样硬化家兔血管平滑肌细胞增殖的影响

目的研究丹皮酚对动脉粥样硬化家兔血管平滑肌细胞增殖的影响。方法高脂饮食法复制家兔动脉粥样硬化病理模型;HE染色并光镜观察主动脉病理学改变;MTT法分析体外培养的兔血管平滑肌细胞增殖水平;全自动生化分析仪测定主动脉组织中脂质含量;酶法测定SOD、MDA含量;放射免疫分析法测定IL-1β、TNF-α的含量;免疫组织化学法检测主动脉组织中PCNA的蛋白表达。结果丹皮酚(75、150 mg.kg-1)治疗给药(ig,6 wk)能减轻模型动物主动脉内膜增厚及泡沫细胞数量;使主动脉组织中脂质、脂质过氧化反应以及炎性细胞因子含量等方面得到显著改善;并能显著抑制主动脉组织中PCNA蛋白的表达强度;丹皮酚(100~300 mg.L-1)可明显抑制体外培养的血管平滑肌细胞增殖反应。结论丹皮酚对血管平滑肌细胞增殖有明显抑制作用,可能是其降脂、减轻脂质过氧化反应以及炎性细胞因子含量等协同作用结果,并可能通过抑制PCNA的表达而调控动脉粥样硬化病变中的血管平滑肌细胞增殖周期。     

葛根素对猫离体血管平滑肌的作用

本文研究葛根素对离体血管的作用，异丙肾上腺素使猫的股静脉及肾动脉对甲氧明引发的收缩产生的作用呈剂量依赖式，葛根素能阻滞此种舒张反应，并呈剂量依赖式，普萘洛尔也能阻滞异丙肾上腺素引起的这种舒张，葛根素不能阻滞硝酸甘油引起的舒张反应，这些结果表明葛根素对猫的离体静脉及动脉具有β－受体阻断作用。     

下调血管生成素样蛋白7表达对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨下调血管生成素样蛋白7(Angptl7)表达对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 采用CCK-8法检测AngⅡ诱导的VSMC生长,流式细胞术检测下调Angptl7蛋白表达对细胞周期的影响。分别采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测转染后细胞中Angptl7 mRNA和Angptl7、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、细胞周期蛋白E1、p21、Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果 采用1μg/mL的AngⅡ处理24 h能提高VSMC活力(0.63±0.06 vs.0.37±0.06)(P<0.01),促进Angptl7 mRNA和蛋白的表达(3.05±0.21 vs.0.97±0.06和1.61±0.14 vs.1.01±0.12)(P<0.01)。下调Angptl7蛋白表达可抑制CDK2、细胞周期蛋白E1和Bcl-2蛋白的表达,促进p21和Bax蛋白的表达(P<0.05)。结论 AngⅡ能促进VSMC增殖,上调Angptl7 mRNA和蛋白表达。下调Angptl7表达可抑制AngⅡ诱导的V...     

中药调控血管平滑肌细胞增殖的研究进展

通过查阅国内近几年中医药对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的文献,综述了从中药复方、单味中药、中药有效组分等调控VSMC增殖的研究成果,探讨了中医药调控VSMC增殖及其机制,阐明了中医药通过调控血管平滑肌增殖治疗心血管病的机制。     

香青兰总黄酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖与迁移的影响

目的:研究香青兰总黄酮对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖与迁移的作用。方法:采用贴壁法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,以Ang Ⅱ为诱导剂,建立VSMC细胞增殖的模型,分别应用质量浓度为10^-7 mol·L^-1 Ang Ⅱ以及Ang Ⅱ+不同浓度香青兰总黄酮组(25,50,100 mg·L^-1)作用24 h,并设空白对照组进行比较。采用MTT法检测细胞的增殖;transwell法检测细胞的迁移;免疫组化法检测细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平。结果:与对照组比较,Ang Ⅱ组能显著刺激大鼠VSMC的增殖和迁移,香青兰总黄酮不同剂量组联合Ang Ⅱ可在一定程度上抑制Ang Ⅱ诱导的VSMC增殖,迁移以及细胞内PCNA的表达,且呈现一定的剂量依赖关系趋势。结论:香青兰总黄酮具有抑制Ang Ⅱ诱导VSMC增殖与迁移的作用。     

油酰乙醇胺对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的研究油酰乙醇胺(OEA)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制作用以及对p38信号通路的影响。方法分离大鼠胸主动脉,组织贴块法培养VSMCs,AngⅡ刺激VSMCs建立细胞增殖模型,不同浓度OEA(5,10,20μmol/L)作用后,用溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)掺入的方法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞周期变化;Western-bolt法检测对P-p38和p38蛋白表达的影响。结果与AngⅡ组比较,随着OEA浓度升高,VSMCs的增殖受到抑制、G0/G1比例显著升高,G2/M比例显著降低,且P-p38和p38蛋白的表达量降低并呈浓度依赖关系。结论 OEA对VSMCs的增殖有抑制作用,其机制可能是抑制了p38MAPK信号通路。     

卡托普利对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖及癌基因和 …

目的：观察卡托普利（Ｃａｐ）的自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的作用及对原癌基因及抑癌基因的影响。方法：氚－胸腺嘧啶核苷（＾３Ｈ－ＴｄＲ）参入，电镜，原位杂交及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ杂交。结果：Ｃａｐ在降低ＳＨＲ血压同时，能减少ＶＳＭＣ的线粒体，粗面内质网及＾３Ｈ－Ｔｄ参入量（Ｐ〈０．０１），并有逆转ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｓｉｓ原癌基因ｍＲＮＡ表达增强（Ｐ〈０．０     

葛根素对血管平滑肌细胞凋亡及其相关基因表达的影响

目的：观察中药黄酮葛根素对血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡的影响，并进一步探讨其作用的分子机制，探讨葛根素对何种VSMC凋亡相关基因的表达有影响。方法：应用流式细胞仪、荧光显微镜及电镜观察药物作用后细胞凋亡情况；采用cDNA差式分析法观察药物对细胞凋亡相关基因表达的影响。结果：（1）葛根素可促进VSMC凋亡，药物作用48h后凋亡率为15．5％，对照组为1．0％，荧光显微镜及电镜观察均可见明显的细胞凋亡特征；（2）cDNA差式分析筛选出两条长752bp和761bp的片断。同源检索显示与葡萄糖调节蛋白GRP94基因高度同源。结论：葛根素可促进VSMC凋亡，可能与促进VSMC的GRP94的片断，同源检索显示与葡萄糖调节蛋白GRP94基因高度同源。结论：葛根素可促进VSMC凋亡，可能与促进VSMC的GRP94的基因表达有关。     

甘草次酸对血管平滑肌细胞c-fos mRNA表达及细胞增殖的影响

目的　研究甘草次酸 (GA)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)原癌基因c fosmRNA表达及细胞增殖的影响 ,探讨GA与血管紧张素Ⅱ (AⅡ )受体结合的可能机制。方法　原代培养大鼠血管平滑肌细胞 ,[3H]TdR参入DNA、MTT分析法、Northernblot。结果　①低浓度GA( 1× 10 -9mol·L-1)及高浓度GA( 1× 10 -5mol·L-1)均能导致c fosmRNA迅速表达 ;1× 10 -5mol·L-1Sar AⅡ能够阻断AⅡ、GA诱导的VSMCc fos表达 ;低浓度和高浓度GA都能促进AⅡ ( 1× 10 -5mol·L-1)诱导的VSMCc fos表达 ;②低浓度GA对细胞的增殖有促进作用 ;随着浓度的升高 ,促增殖作用减弱 ;高浓度GA抑制细胞的增殖。Sar AⅡ单独作用于VSMC ,不影响细胞增殖 ;Sar AⅡ能够阻断AⅡ对细胞增殖的促进作用 ;Sar AⅡ既抑制低浓度GA促细胞增殖作用 ,也消除高浓度GA抑制细胞增殖作用 ;低浓度GA与AⅡ联合作用 ,对细胞增殖的促进作用更加显著 ;高浓度GA与AⅡ联合作用于VSMC ,则可减轻高浓度GA对细胞增殖的抑制作用。结论　GA能激活c fos转录因子 ,从而产生对VSMC的增殖作用 ,因此 ,GA具有AT1受体的激动剂2 0 0 2 0 4 0 3收稿 ,2 0 0 2 0 7 2 3修回作者简介 :张凤云 ,女 ,33岁 ,硕士 ;贺师鹏 ,男 ,67岁 ,教授。研究方向 :酶和受体的拮抗剂样作用     

灯盏花素与反义凝血酶受体寡核苷酸对凝血酶诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的:研究灯盏花素与反义凝血酶受体寡核苷酸(thrombin receptor oligo-deoxy-nucleotides,TR ODNs)对凝血酶(thrombin,IIα)诱导的SD大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制。方法:选用贴块法培养的第4~6代SD大鼠主动脉中层平滑肌细胞,分别给予反义TR ODNs和不同浓度的灯盏花素(0.5、5.0和50.0μg/ml)处理后,采用3H-TdR掺入法观察灯盏花素和反义TR ODNs对凝血酶(10 U/ml)诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响效应;通过RT-PCR检测凝血酶受体基因表达强度来观察灯盏花素和反义TR ODNs从凝血酶受体基因水平对大鼠主动脉平滑肌细胞凝血酶受体DNA转录的影响。结果:与对照组相比,灯盏花素和反义TR ODNs抑制了凝血酶诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞的增殖,且两者对平滑肌细胞增殖的抑制效应没有明显差异。灯盏花素和反义TR ODNs显著抑制了大鼠主动脉平滑肌细胞凝血酶受体mRNA的表达,且两者对大鼠主动脉平滑肌细胞凝血酶受体基因阻断作用无明显差别。结论:灯盏花素和反义TR ODNs显著抑制了凝血酶诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖。其作用机制可能为阻断了大鼠主动脉平滑肌细胞凝血酶受体基因的表达。     

类肝素对血管平滑肌细胞增殖的影响

以细胞培养法并用肝素等作对照,观察类肝素对兔主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)增生的影响。结果表明,类肝素在1.6～0.05mg·ml^-1浓度下,对FCS,bFGF,IL-1刺激细胞增殖均有明显的抑制作用。将VSMCs在类肝素0.2～0.05mg·ml^-1中预孵24h后弃去药液,再在含FCS培养液中继续培养,也能明显抑制细胞增殖。类肝素对FCS及IL-1诱导VSMCs增殖的抑制作用比同浓度的肝素弱,但对bFGF诱导VSMCs增殖的抑制作用比肝素强。右旋糖酐对VSMCs增殖无抑制作用,提示抑制作用与分子中含硫酸基有关。     

萝卜硫素对内皮素-1诱导大鼠平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究萝卜硫素(SFN)对内皮素-1(ET-1)诱导大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及其机制。方法 将组织贴块法原代培养的VSMC随机分为对照组(正常培养)、模型组(给予0.1μmol·L^-1 ET-1处理)和低、中、高剂量实验组(分别给予5、10、20μmol·L^-1 SFN+0.1μmol·L^-1 ET-1处理)。用噻唑蓝法检测细胞增殖活力,用实时荧光定量聚合酶链反应法测定增殖及凋亡相关基因mRNA表达水平,用荧光探针2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯法检测活性氧(ROS)相对荧光强度,用蛋白质印迹法测定B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)及p53蛋白的表达水平。结果 对照组、模型组和低、中、高剂量实验组的细胞增殖活力分别为0.27±0.02、0.50±0.04、0.40±0.03、0.38±0.03和0.34±0.03,Bcl-2 mRNA表达水平分别为1...