人IFN-β基因脂质体转染胶质瘤细胞及对其增殖的抑制作用

目的观察β-干扰素(IFN-β)基因脂质体pSV2IFN-β转染人胶质瘤细胞系SHG44及其对SHG44细胞增殖的影响.方法应用流式细胞仪、酶联免疫吸附试验(ELASA)及细胞免疫组织化学染色法检测脂质体pSV2IFN-β转染后,SHG44细胞IFN-β的表达情况;应用四唑盐比色试验(MTT)检测脂质体pSV2IFN-β转染后转染组与对照组SHG44细胞增殖的差异.结果 IFN-β基因脂质体pSV2IFN-β转染SHG44胶质瘤细胞系后4 d和6 d,对肿瘤细胞具有明显的增殖抑制作用,抑制率分别为16.7%和32.7%.ELASA及流式细胞仪蛋白检测均表明转染后胶质瘤细胞具有显著的IFN-β表达(P<0.01),其中在转染后72 h和96 h,IFN-β表达量分别为(35.4±2.7)U/ml和(40.3±3.2)U/ml.免疫组织细胞化学实验也表明转染后的细胞有明显的IFN-β的表达.结论 IFN-β基因脂质体pSV2IFN-β可转染SHG44胶质瘤细胞系,并对胶质瘤细胞的增殖具有显著的抑制作用.     

脂质体介导的huIFN—β基因转染对胶质瘤细胞侵袭力抑制作用研究

目的探讨人β-干扰素（huIFN—β）基因脂质体pSV2IFN—β对人脑胶质瘤细胞体外侵袭力的抑制作用。方法用含huIFN—β基因的脂质体体外转染人脑胶质瘤细胞系SHG44，用Westernblot和细胞免疫荧光染色法检测目的基因的蛋白表达。通过Boyden小室法检测SHG44转染前后细胞体外侵袭力的变化，同时采用明胶酶谱法分析基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）的比活性。结果转染pSV2IFN—β后，SHG44细胞中的目的基因蛋白有显著表达；磷酸盐缓冲液（PBS）对照组、空载体转染组、pSV2IFN—β脂质体转染组的侵袭性细胞数分别为49．26±14．67、54．63±12．27和18．17±5．42，转染靶基因后SHG44细胞的体外侵袭力受到明显抑制，这与MMPs活性下降的改变相一致。结论转染huIFN—β基因脂质体pSV2IFN—β使脑胶质瘤细胞系SHG44的侵袭力受到明显抑制，提示脂质体介导的huIFN—β基因治疗可能是抗神经胶质瘤侵袭的一个有效的方法。     

阻断转化生长因子-β信号通路对胶质瘤血管生成拟态的抑制作用

目的 探讨阻断转化生长因子-β(TGF-β)信号通路对胶质瘤血管生成拟态(VM)的影响及其可能机制. 方法 三维培养人脑胶质瘤细胞系U251、SHG44,观察U251培养上清、TGF-β因子对SHG44细胞形成VM的影响;比较0μg/mL(PBS组)、15 μg/mL(Ab15组)、30 μg/mL (Ab30组)TGF-β中和抗体对U251、SHG44细胞形成VM的影响;酶联免疫吸附法(ELISA)检测空白组、PBS组、Ab15组,Ab30组U251培养上清中血管内皮生长因子(VEGF)及血小板衍生生长因子(PDGF)的表达以及空白组、TGF-β组、PBS组、Ab15组,Ab30组SHG44细胞上清VEGF、PDGF的表达. 结果 三维培养时,U251细胞排列形成VM,SHG44细胞并不形成VM,而仅仅相互聚集成大小不等的细胞集落;U251培养上清可以诱导SHG44细胞形成VM,且在培养24～48 h最为明显,TGF-β因子不能诱导SHG44细胞形成VM;PBS组、Ab15组、Ab30组U251细胞环状结构数量依次降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与U251上清共培养的SHG44细胞在加入TGF-β中和抗体后,3组细胞形成环状结构数量也依次降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与空白组和PBS组比较,Ab15组、Ab30组U251细胞上清中VEGF、PDGF浓度下降,差异有统计学意义(P＜0.05),与空白组和TGF-β组相比,PBS组、Ab15组、Ab30组SHG44细胞上清中两种因子浓度均增高,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 抑制TGF-β信号通路可以使胶质瘤VM形成能力下降,这可能与VEGF及PDGF表达减少有关.     

脂质体转染人IFN-β基因诱导胶质瘤细胞SHG44凋亡的实验研究

目的探讨人β干扰素(IFN-β)与胶质瘤细胞凋亡的关系及意义.方法利用脂质体转染方法将IFN-β真核表达载体pSV2IFN-β导入SHG44胶质瘤细胞.细胞免疫荧光和免疫组化检测IFN-β基因的稳定转染及表达,利用流式细胞仪、透射电镜观察细胞凋亡情况.结果IFN-β基因成功转染SHG44胶质瘤细胞并得以表达.转染细胞的凋亡细胞数与未转染细胞相比有显著性差异.结论IFN-β能够诱导人SHG44胶质瘤细胞凋亡.     

人脑胶质瘤裸鼠皮下移植瘤模型中血管生成拟态现象的观察

目的 观察胶质瘤裸鼠移植瘤生长过程中的血管生成拟态现象(VM)以及与血管内皮依赖性血管之间的关系.方法 采用人脑胶质瘤细胞株U87单细胞悬液(2×106个/0.1 ml)于4周龄裸鼠皮下注射建立移植瘤模型.应用血管内皮细胞标志物CD34和高碘酸雪夫(PAS)试剂双染的方法检测40例不同大小的皮下移植瘤中的VM和血管内皮依赖性血管.结果 VM和血管内皮依赖性血管在不同大小的裸鼠皮下U87移植瘤中均存在.微血管密度(MVD)和肿瘤的直径呈正相关(r=0.393,P=0.012),血管生成拟态密度(VMD)与MVD负相关(r=-0.404,P=0.010),而与肿瘤的直径没有显著的相关性(P =0.575).结论 血管生成拟态与内皮依赖性血管是两种不同的肿瘤循环形式,在U87裸鼠皮下移植瘤的生长过程中持续存在并具有互补性,共同为肿瘤的生长提供营养支持.     

IFN-β裸DNA对人脑胶质瘤生长的抑制作用

目的探讨β干扰素(IFN-β)基因对人脑胶质瘤生长的抑制作用,以及人IFN-β裸DNA治疗人脑胶质瘤的可行性.方法建立裸鼠SHG44胶质瘤模型,用脂质体包埋法将含IFN-β基因的真核表达载体(pSV2IFN β)注入裸鼠皮下SHG44脑胶质瘤,观察肿瘤生长情况并计算肿瘤体积,通过免疫组化、原位末端转移酶标记(TUNEL)染色以及瘤体坏死区计数检测,了解IFN-β基因对人脑胶质瘤生长的抑制作用.结果 IFN-β在荷瘤裸鼠瘤体内获得表达,裸鼠皮下胶质瘤生长受到抑制,并诱导SHG44胶质瘤细胞凋亡.结论 IFN-β裸DNA能够抑制人脑胶质瘤生长,该实验为IFN-β基因治疗人脑胶质瘤的应用奠定了初步基础.     

重组VEGF165-PE38融合基因对裸鼠移植性人胶质瘤血管生成的抑制作用

目的 研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)和铜绿假单胞菌外毒素A(PE)融合基因的真核表达载体对裸鼠移植性人脑恶性胶质瘤血管生成的影响,探索抗肿瘤血管生成的新方法.方法 采用裸鼠背部皮下注射U251细胞建立移植性恶性胶质瘤模型,9 d后按随机数字表法将裸鼠分为未治疗组、PBS组、空质粒组、重组质粒组,采用HE染色观察肿瘤组织的形态学变化.免疫组织化学SP法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAF)、CD31、PE的表达.分析肿瘤组织的微血管密度(MVD). 结果 注射后第16天重组质粒组裸鼠移植瘤体积明显小于其他3组,差异有统计学意义(P<0.05);重组质粒组裸鼠移植瘤MVD低于其他3组,差异均有统计学意义(P<0.05);重组质粒组裸鼠肿瘤组织PE呈阳性表达,而在空质粒组、PBS组及未治疗组均为阴性表达. 结论 VEGF165-PE38融合基因的表达产物对人脑恶性胶质瘤有明显的抑制作用,并能抑制肿瘤新生血管生成,可能为一种有效抗肿瘤血管治疗的新策略.     

胶质瘤的抗血管生成治疗现状

胶质瘤是最常见的恶性肿瘤之一。血管的生成及其生长速度对肿瘤生长、侵袭和转移起着关键性的作用,近年的研究证实,胶质瘤组织内的血管生成与血管内皮生长因子(VEGF)与其恶性程度及预后等具有密切联系;因此,抗血管生成治疗目前已成为传统化疗方法之外的胶质瘤治疗新策略。现就脑胶质瘤的抗血管生成治疗进展进行综述。     

白藜芦醇对裸鼠胶质瘤模型肿瘤生长的抑制作用

目的 探讨白藜芦醇（RES）不同途径给药对裸鼠胶质瘤模型肿瘤生长的抑制效果。方法 取80只雄性无胸腺裸鼠（BALB/c-nu;21~27日龄,体重10~12 g）,采用U87细胞建立人裸鼠脑胶质瘤原位移植模型,采用随机数字表法分为RES干预组（造模后10 d,开始给药,1次/d,40 mg/kg）和溶剂对照组（造模后10 d,开始给药,1次/d,10 mg/kg;溶剂为0.5%羧甲基纤维素钠）,根据给药途径,RES干预组又分为RES灌胃组和RES经鼻组,溶剂对照组又分为溶剂灌胃组和溶剂经鼻组,每组20只。经鼻给药采用经鼻滴入法。采用Kaplan-Meier法分析生存曲线;造模后14、21、28、35 d测定肿瘤体积;采用CD31标记胶质瘤血管内皮细胞并计算微血管密度（MVD）,采用免疫组化方法检测胶质瘤血管内皮生长因子（VEGF）以及Ki-67表达,采用TUNEL法检测胶质瘤细胞凋亡。结果 与溶剂对照组相比,RES干预组裸鼠生存时间明显延长（P<0.05）,造模后28、35 d肿瘤体积明显缩小（P<0.05）,肿瘤组织MVD明显减小（P<0.05）,肿瘤组织VEGF和Ki-67表达水平明显降低（P<0.05）,肿瘤细胞凋亡率明显增加（P<0.05）,而且,RES经鼻给药较灌胃给药作用更明显（P<0.05）。结论 RES可有效抑制裸鼠胶质瘤模型肿瘤生长,机制可能与抑制肿瘤血管生成和促进肿瘤细胞凋亡有关。与灌胃给药相比,经鼻给药肿瘤抑制效果更好。     

CXCR4在胶质瘤诱导血管生成中的作用

目的 研究CXCR4在人脑胶质瘤中的表达及其与肿瘤恶性程度、微血管密度(MVD)之间的关系,进一步探讨CXCR4在胶质瘤血管生成中的作用及CXCR4作为抗肿瘤靶点的可能性.方法 收集河南省人民医院神经外科自2009年9月至2011年9月手术切除的人脑胶质瘤标本41例,其中低度恶性胶质瘤(Ⅰ～Ⅱ级)18例,高度恶性胶质瘤(Ⅲ～IV级)23例.另外取行内减压术的脑外伤患者的新鲜脑组织10例作为对照.免疫组织化学染色检测标本CXCR4和CD34的表达,实时荧光定量PCR检测标本CXCR4mRNA的表达.结果 免疫组化染色结果显示对照组CXCR4表达阴性,脑胶质瘤组织CXCR4表达阳性28例(68.29％),脑胶质瘤组织MVD的表达高于对照组,且高度恶性胶质瘤组CXCR4表达阳性率、MVD的表达均高于低度恶性胶质瘤组,差异有统计学意义(P＜0.05);CXCR4表达阳性组MVD(42.51±6.99)明显高于CXCR4表达阴性组(25.98±4.99),差异有统计学意义(P＜0.05);高度恶性胶质瘤组CXCR4mRNA的表达量(5.19±1.43)高于低度恶性胶质瘤组(2.28±0.71),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CXCR4在胶质瘤血管生成中发挥重要的作用,有可能成为胶质瘤抗血管生成治疗的新靶点.     

粘附分子与胶质瘤血管生成

在肿瘤的血管生成过程中,粘附分子起着极其重要的作用。其作用大体可以概括为:诱导内皮细胞迁移至血管生成部位;引起内皮细胞的增殖;介导内皮细胞以及内皮细胞和周细胞(Pericyte)之间的粘附连接;形成毛细血管;细胞之间信号的传导等等。胶质瘤具有丰富的血管,在胶质瘤的血管生成过程中粘附分子同样起重要作用。通过作用于粘附分子可以抑制肿瘤的血管生成,达到治疗胶质瘤的目的。     

肿瘤血管生成抑制剂治疗胶质瘤的进展

血管生成对肿瘤的生长、转移起着关键性的作用。肿瘤血管生成抑制剂与化疗药物相比有明显的优点。胶质瘤是颅内最常见的恶性实体肿瘤,具有丰富的血管,是一种理想的抗血管生成治疗的对象。目前已用于治疗胶质瘤的肿瘤血管生成抑制剂有20余种,按其作用机制的不同可分为五类,各自有优缺点及副作用。     

DNM3对脑胶质瘤细胞生长和血管生成的影响

目的 探讨DNM3对脑胶质瘤细胞发生发展和血管生成能力的影响.方法 采用qRT-PCR和Western blot检测DNM3在脑胶质瘤组织和脑胶质瘤细胞系的表达.EdU实验检测过表达DNM3对U87细胞增殖能力的影响.Transwell细胞迁移与侵袭实验检测过表达DNM3对U87细胞迁移和侵袭能力的影响.血管形成实验与...     

雷公藤红素对荷瘤裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响

目的：探讨雷公藤红素对荷SHG44胶质瘤裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响。方法34只SHG －44胶质瘤裸鼠随机分为空白对照组、顺铂组、4 mg／kg雷公藤红素组、2 mg／kg雷公藤红素组和1 mg／kg雷公藤红素组,每周两次,共给药4周。定期观察肿瘤生长情况测量肿瘤体积,计算抑瘤率。免疫组化染色检测移植瘤组织中的MVD、bFGF、VEGF、VEG‐FR1、VEGFR2的蛋白表达。结果4 mg／kg和2 mg／kg的雷公藤红素能抑制肿瘤生长,下调移植瘤组织中VEGFR1、VEG‐FR2的蛋白表达和降低微血管计数（MVD）,4 mg／kg的雷公藤红素还能下调荷瘤裸鼠移植瘤组织中bFGF的蛋白表达。结论雷公藤红素能明显抑制荷SHG44胶质瘤裸鼠的移植瘤生长和血管生成,其机制可能与雷公藤红素下调肿瘤组织中bF‐GF、VEGFR1、VEGFR2的蛋白表达有关。     

腺病毒介导的TIMP-2基因对恶性胶质瘤血管生成能力的影响

目的探讨基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-2)参于恶性脑胶质瘤发生发展,及对脑胶质细胞瘤血管生成的抑制作用.方法选用含TIMP-2基因的重组腺病毒载体,体外转染人胶质瘤细胞系U87,用逆转录酶-多聚酶链反应法(RT-PCR)检测其mRNA的表达,并用酶联免疫分析法(ELISA)检测其蛋白表达.用四唑蓝比色法(MTT)法检测含TIMP-2上清对人脐静脉内皮细胞生长(ECV-304)的影响,并检测它对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的作用.结果 RT-PCR 、Western结果表明转染AdTIMP-2病毒后的U87细胞TIMP-2表达上调.MTT 示蛋白含量为100 ng/ml 的TIMP-2对人脐静脉内皮细胞生长表现出明显的抑制作用.CAM 结果显示AdTIMP-2组可见血管稀疏区,并出现血管结构紊乱.血管指数:U87组为(91.1± 8.2)%、AdX-gal组为(62.4±3.3)%,AdTIMP-2组为(45.7±6.1)%.VIII因子相关抗原的表达病理指数U87组为17.27±7.48, AdX-gal组为16.98±7.54,AdTIMP-2组为 6.78±3.37. 结论 TIMP-2基因是为胶质瘤的抗血管生成治疗的临床应用提供了实验依据.     

血管内皮细胞特异性生长因子与胶质瘤血管生成

实体性肿瘤是血管依赖性的,肿瘤细胞需要新生血管带来氧和养料及带走代谢产物维持其较高的代谢率,如果肿瘤血管生成不能满足肿瘤生长的需要,肿瘤细胞会发生坏死或凋亡.肿瘤血管生成包括内皮细胞的增殖、迁移、细胞外基质溶解及募集周围细胞形成成熟血管,涉及多种生长因子及细胞因子参与.     

环氧化酶-2抑制剂对裸鼠胶质瘤移植瘤Ang基因表达的影响

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)抑制剂尼米舒利(NIM)对裸鼠胶质瘤移植瘤血管生成素(Ang)基因表达的影响及意义.方法 人胶质瘤SHG44细胞接种于裸鼠皮下,建立裸鼠胶质瘤移植瘤模型,并按随机数字表法分为对照组(灌注等量生理盐水)和NIM治疗组[6 mg/(kg·d)],逆转录PCR技术检测移植瘤组织Ang-1、Ang-2mRNA表达,免疫组织化学染色测定肿瘤组织微血管密度(MVD),并绘制肿瘤生长曲线和计算肿瘤抑制率.结果 NIM可有效抑制移植瘤的生长,其抑瘤率为42.03%.NIM治疗组肿瘤组织Ang-2 mRNA表达水平(0.2032±0.0185)较对照组(0.6024±0.0289)明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);Ang-1 mRNA表达水平无明显改变,差异无统计学意义(P＞0.05);Ang-2/Ang-1 mRNA比值下降(0.5825±0.0621vs 1.5847±0.1948),差异有统计学意义(P＜0.05).NIM治疗组肿瘤组织MVD较对照组明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 COX-2抑制剂NIM可下调Ang-2基因表达,改变Ang-2/Ang-1 mRNA比值,抑制肿瘤生长.

Abstract：

Objective To investigate the effect of nimesulide (NIM), a selective cyclooxygenase-2 (COX-2) inhibitor, on angiopoietins (Ang) gene expression of human glioma xenografts in nude mice and its significance. Methods Human SHG44 glioma cells were inoculated subcutaneously in 16 nude mice to establish xenograft models, and then these mouse models were randomly divided into NIM treatment group and control group. NIM (6 mg/kg) and saline were poured into the stomachs of the mice in each group, respectively, once daily for 35 d. The mRNA expressions of Ang-1 gene and Ang-2 gene in the xenografts were determined by RT-PCR. Microvessel density (MVD) in the xenografts was assessed by immunohistochemical technique. The tumor growth curve was drawn and the inhibition ratio of tumor growth was calculated. Results NIM could significantly inhibit the glioma xenografts growth with its inhibition rate reaching 42.03%. The mRNA expression of Ang-2 gene in NIM treatment group (0.2032±0.0185) was significantly lower than that in control group (0.6024±0.0289, P＜0.05), but that of Ang-1 gene showed no significant changes; therefore, the mRNA ratio of Ang-2/Ang-1 genes was decreased (0.5825±0.0621 vs. 1.5847±0.1948, P＜0.05). MVD in the xenografts of the NIM treatment group was significantly lower than that in the control group (P＜0.05). Conclusion NIM, by down-regulating the mRNA expression ofA ng-2 gene and changing the mRNA ratio of Ang-2/Ang-1 genes, can inhibit the tumor growth     

血管生成因子2在胶质瘤模型中的表达与shRNAs靶向治疗

目的 检验血管生成因子2(angiopoietin-2,Ang-2)在胶质瘤模型中的表达,应用RNA干扰技术靶向Ang-2,观察胶质瘤治疗效果.方法 建立荷瘤小鼠颅内U87胶质瘤模型,检测Ang-2和PCNA的表达;转染shRNAs表达质粒进入U87细胞,比较受试动物生存期,MRI观察肿瘤体积;脑组织行HE染色及免疫组化检测.结果 颅内模型中Ang-2在胶质瘤边缘的表达强于肿瘤内部(P<0.05),围绕于新生血管周围;靶向Ang-2的shRNAs基因治疗可延长受试动物生存期,降低新牟血管数量,但PCNA表达无统计学意义(P>0.05).结论 Ang-2主要表达于胶质瘤侵袭边缘,与肿瘤新生血管形成密切相关;靶向Ang-2的shRNAs技术可有效降低胶质瘤的侵袭能力.     

三氧化二砷脂质体的制备及其对鼠脑胶质瘤的影响

目的研究三氧化二砷（As2o3）脂质体注射液对大鼠体内C6胶质瘤细胞凋亡的影响。方法采用超声薄膜分散法制备As籼脂质体，将126只成瘤大鼠分为As2O3脂质体组、As2O3组、生理盐水组。原子荧光法检测注射As2O3脂质体和As2O3后大鼠脑组织中As2O3浓度。从电镜、TUNNEL和大鼠生存时间等方面研究As2O3脂质体对C6胶质瘤的影响。结果As203，脂质体提高了As2O3的血-脑屏障通过。电镜和TUNEL检测显示：As203脂质体组细胞凋亡率给药后3d为（13．53±1．68）％，7d为（20．03±0．79）％，多于As2O3组和盐水组。动物生存时间亦优于其他两组。结论超声薄膜分散法是制备As2O3脂质体的较好方法。As203脂质体可较As203更明显地诱导鼠脑胶质瘤细胞凋亡，延长载瘤鼠的生存期。     

胶质瘤中促血管生成素2和血管内皮生长因子基因表达的意义

目的 探讨胶质瘤促血管生成素（Ang2）和血管内皮细胞生长因子（VEGF）基因表达的意义。方法 采用逆转录-酶促链反应（RT-PCR）检测52例人脑胶质瘤中Ang2、VEGF基因的表达，同时采用SABC免疫组化方法检测Ang2蛋白的表达。结果 50例脑胶质瘤表达Ang2 mRNA片段．52例脑胶质瘤表达VEGF mRNA片段。Ang2 mRNA与VEGF mRNA表达呈显著性正相关（r=0，816，P〈0．01）；高度恶性胶质瘤Ang2mRNA、VEGF mRNA表达均显著性高于低度恶性者（P〈0．01）。免疫组化染色显示Ang2蛋白主要分布在高度恶性胶质瘤组织的瘤细胞和内皮细胞．而在低度恶性胶质瘤中呈低水平表达。结论 Ang2与VEGF可能在胶质瘤血管生成中起协同性促进作用。