血小板衍化生长因子-BB和碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞增殖的影响

目的探讨重组人血小板衍生生长因子（rhPDGF）-BB和重组人碱性成纤维细胞生长因子（rh—bFGF）对人牙周膜细胞（PDLC）增殖的影响。方法原代培养人PDLC,应用甲噻唑四唑氮（MTT）比色和流式细胞仪检测rh-PDGF-BB和rh-bFGF单独及联合作用下细胞的增殖能力和增殖指数。结果rhPDGF-BB和rh-bFGF联合作用后,PDLC增殖能力提高,活性增强。其中,10μg·L^-1的rhPDGF—BB加10μg·L^-1的bFGF为最佳显效质量浓度,第3天为最佳显效时间。结论PDGF—BB和bFGF联合能更显著促进人PDLC的增殖并且具有明显的协同效应。     

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目的 探讨双氯芬酸钠对脂多糖（LPS）诱导的人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响。方法 本研究于2013年3—5月在山西医科大学口腔实验室进行。将复苏培养冻存的HPDLFs进行形态学鉴别后,用10 μg/mL的LPS进行诱导,分别以0.1、1、10、50、100 mg/L的双氯芬酸钠进行干预,酶联免疫吸附试验法（ELISA法）检测HPDLFs表达IL-1β和TNF-α水平的变化。结果 对同一质量浓度LPS诱导的HPDLFs而言,双氯芬酸钠能下调HPDLFs表达IL-1β和TNF-α的水平,并且随着双氯芬酸钠质量浓度的增加,IL-1β和TNF-α的表达量呈逐渐减弱的趋势（P＜0.05）。结论 双氯芬酸钠可能对于LPS诱导的HPDLFs IL-1β和TNF-α的表达有重要的抑制作用,这为牙周病的临床治疗提供了新的思路。     

牙周膜肌成纤维细胞的体外培养及其标志物的表达时效

目的：探讨人牙周膜肌成纤维细胞（MFB）体外培养及其标志物表达的时效性。方法???体外培养人牙周膜成纤维细胞（hPDLF）,72?h内以5μg?L-1终质量浓度的转化生长因子（TGF）-β1诱导hPDLF向MFB转化,免疫细胞化学和免疫组织化学染色检测MFB标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达情况。分别进行12、24、48、72、96和120?h的MFB观察,采用流式细胞术观察MFB长时间培养的细胞活性,采用免疫细胞化学观察MFB长时间培养后的α-SMA表达情况。结果??经TGF-β1诱导后α-SMA呈阳性;诱导至120?h,α-SMA仍呈阳性,72?h内其表达稳定。结论5μg?L-1终质量浓度的TGF-β1成功诱导人牙周膜细胞向MFB转化。MFB体外培养具有时效性,培养0~72?h,其状态稳定。     

转化生长因子-β_1和血管内皮生长因子在兔下颌骨缺损修复中的表达

目的观察转化生长因子（TGF）-β1和血管内皮生长因子（VEGF）在兔下颌骨缺损修复中的表达。方法将48只大白兔分为Ⅰ-Ⅳ组,每组兔12只。在Ⅰ、Ⅱ组兔的双侧下颌骨缺损区,分别植入梯度质量浓度为1mg·L^-1和10mg·L^-1的骨形态发生蛋白（BMP）和部分脱钙异种骨（PDXB）混合充填材料;在Ⅲ组兔的双侧下颌骨缺损区,植入同种异体骨;在Ⅳ组兔的双侧下颌骨缺损区,植入PDXB。分别于术后2、4、8周各处死每组动物4只,取材行免疫组化染色并观察TGF-β1和VEGF的表达情况,对比其相关性。结果TGF-β1和VEGF在Ⅲ组中表达最强,在10mg·L^-1的PDXB-BMP复合组的表达与Ⅲ组相近,TGF-β1与VEGF表达之间存在着明显的正相关关系。结论PDXB和BMP混合后可显著地上调骨移植区TGF-β1和VEGF的表达,TGF-β1的表达与VEGF的表达有明显的相关性。     

中药黄芩苷对脂多糖刺激人牙周膜成纤维细胞分泌肿瘤坏死因子-α的影响

目的研究中药黄芩苷对脂多糖（LPS）刺激人牙周膜成纤维细胞（HPLFs）分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响。方法采用原代培养HPLFs技术和酶联免疫检测方法（ELISA），检测培养上清液中TNF-α的水平。结果0．001～10μg／ml黄芩苷和2μg／ml地塞米松均可显著抑制LPS刺激HPLFs分泌TNF-α的活性（P〈0．01），而不同浓度组之间比较，抑制作用无显著性差异（P〉0．05）。结论黄芩苷对LPS刺激HPLFs合成和分泌TNF-α有显著抑制作用，与地塞米松抗炎效果相近，作用机制与抑制TNF-α等炎性细胞因子过度产生有关，揭示了黄芩苷可能的抗炎作用机制。     

IL-lβ和TNF-α对人牙周膜细胞内LIF表达的影响

目的：探讨白细胞介素-lβ（IL-lβ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对牙周膜细胞内白血病抑制因子（LIF）表达的影响。方法：体外分离培养鉴定人牙周韧带细胞（HPDLC）,取第3代细胞用于实验,利用牙周改建中高表达因子TNF-α和IL-1β刺激HPDLC后,实时定量反转录-聚合酶链反应检测LIF mRNA的表达。结果：IL-1β在浓度为0．1 ng/mL和5 ng/mL时,均显著促进LIF的分泌（P ＜0．01）。TNF-α在浓度为10 ng/mL时,明显促进LIF的分泌（P ＜0．05）。结论：牙周改建中高表达细胞因子IL-1β和TNF-α可促进牙周膜细胞中LIF的表达。     

糖尿病牙周病大鼠牙周龈沟液中TNF-α,IL-1β和LPS水平的研究

目的：本文主要研究了糖尿病牙周病大鼠模型龈沟液中TNF-α,IL-1β和LPS水平的改变。方法：15只大鼠通过注射链脲佐菌素建成糖尿病模型并使用丝线诱导成牙周病模型（组1）,15只大鼠丝线诱导成牙周病模型（组2）,15只大鼠链脲佐菌素注射建成糖尿病模型（组3）,15只系统健康大鼠作为正常对照组（组4）。用ELISA方法检测龈沟液中TNF-α,IL-1β和LPS水平。结果：组1与组2、3、4相比TNF-α,IL-1β和LPS水平较高（P〈0.05）,组2中的水平比组3、4高（P〈0.05）,组3的比组4的水平高（P〈0.05）。组间数据有统计学意义。结论：数据表明糖尿病可以提高牙周龈沟液中TNF-α,IL-1β和LPS的水平。     

茶多酚对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡及炎症因子的影响

目的:探讨茶多酚对脂多糖(LPS)诱导人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)凋亡及肿瘤坏死因子-α-(TNF-α)、白介素6(IL-6)分泌的影响。方法:体外培养HPDLFs,MTT法筛选茶多酚浓度梯度,再分别用LPS(1μg/ml)和LPS(1μg/m1)+茶多酚(10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)刺激HPDLFs,流式细胞仪检测细胞凋亡,Elisa法检测TNF一α、IL-6分泌。结果:LPS可显著诱导HPDLFs凋亡,上调TNF一α、IL-6表达。茶多酚可显著降低LPS诱导的细胞凋亡和TNF-α、IL-6表达,且呈量效依赖性。结论:茶多酚可通过有效降低LPS诱导的细胞凋亡和TNF一α、IL-6表达。     

内毒素耐受对共培养的中性粒细胞和单核细胞分泌TNF-α和IL-8的影响

目的 观察脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导的耐受对共培养的中性粒细胞和人单核细胞株THP-1细胞表达抗炎因子肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和趋化因子白介素-8（Inter leukin-8, IL-8)水平的影响。 方法 采用1 μg/mL牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis, P. gingivalis）LPS 或1 μg /mL大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）LPS分别刺激共培养的中性粒细胞和THP-1细胞24 h,洗脱后,再次刺激24 h,诱导细胞产生耐受。采用ELISA技术检测细胞条件培养液中 TNF-α 和 IL-8 表达水平的变化。 结果 P.gingivalis LPS或E.coli LPS单次刺激后,共培养的中性粒细胞和THP-1细胞分泌TNF-α和IL-8的水平均较刺激前明显增高（P＜0.05）;P.gingivalis LPS和E.coli LPS重复刺激后,共培养的中性粒细胞和THP-1细胞分泌的TNF-α水平较单次刺激后明显降低（P＜0.05）,但IL-8水平较单次刺激后明显增高（P＜0.05）。 结论 共培养的中性粒细胞和单核细胞产生的内毒素耐受可能抑制TNF-α表达,促进IL-8表达,进而可能影响牙周组织的炎症和免疫反应。     

脂多糖和白细胞介素-1β对人牙周膜细胞中诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的观察脂多糖(LPS)和白细胞介素-1β(IL-1β)对人牙周膜细胞(hPDLCs)表达诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和一氧化氮(NO)的影响。方法应用LPS和IL-1β刺激hPDLCs后,通过实时定量PCR检测iNOS基因的表达情况,收集细胞上清液,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定诱导后细胞中iNOS的含量变化,采用硝酸还原酶法检测NO的表达水平。结果未受刺激的hPDLCs仅能产生微量的iNOS和NO;LPS和IL-1β刺激hPDLCs后,检测到iNOS、iNOS mRNA及NO的含量随着时间和质量浓度的增加而显著增加(P<0.05),在相同时间或相同质量浓度的条件下,IL-1β单独刺激或与LPS联合刺激hPDLCs产生iNOS及NO的能力强于LPS单独刺激(P<0.05)。结论 LPS和IL-1β刺激hPDLCs可以增加iNOS和NO的表达,为动物实验中牙周局部注射LPS和IL-1β诱导iNOS和NO表达奠定实验基础。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人牙周膜成纤维细胞胶原吞噬作用的影响

目的研究牙周病致病菌牙龈卟啉单胞菌脂多糖（LPS）对体外培养的人牙周膜成纤维细胞（hPDLF）胶原吞噬作用的影响。方法将不同质量浓度的LPS加入体外培养的hPDLF 48 h后,采用荧光定位术和流式细胞技术检测hPDLF胶原吞噬率的变化。结果LPS导致hPDLF胶原吞噬率显著增加（P<0.05）。结论牙龈卟啉单胞菌脂多糖具有促进hPDLF吞噬胶原的作用,可能是牙周组织破坏机制之一。     

内皮素-1对牙周膜细胞肿瘤坏死因子及白介素-1β表达的影响

目的:研究内皮素-1(endothelin-1,ET-1)对牙周膜细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF-α)和白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)表达的影响。方法:不同浓度(1,10,100 n M)的ET-1处理牙周膜细胞12,24,48h后提取细胞培养上清液和细胞裂解物,采用ELISA及实时定量PCR检测ET-1作用下牙周膜细胞TNF-α和IL-1β基因及蛋白表达的改变。结果:ET-1剂量依赖性及时间依赖性促进牙周膜细胞TNF-α和IL-1βm RNA表达及蛋白分泌。但内皮素受体拮抗剂抑制了该促进效应。结论:内皮素-1可以诱导牙周膜细胞分泌TNF-α和IL-1β,而且这种促进作用呈浓度依赖性及时间依赖性。但内皮素受体拮抗剂抑制了该促进效应。     

红景天苷对LPS刺激人牙周膜细胞增殖和分泌表达的影响

目的研究红景天苷(salidroside,SAL)对大肠杆菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激后体外培养人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,h PDLCs)的增殖及对分泌表达Toll样受体(Toll-like receptor 4,TLR 4)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)及核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)的影响,为红景天苷在牙周炎治疗方面提供初步的实验依据。方法组织块法原代培养正常h PDLCs;以2 mg/L LPS刺激第4代细胞,加入不同浓度的红景天苷作用12、24、48 h;采用MTT方法检测细胞的增殖;采用Western blot、ELISA、qRT-PCR等方法检侧TLR-4、TNF-α、IL-1β、IL-6、OPG及RANKL的表达水平,并进行统计学分析。结果 MTT结果显示低浓度的红景天苷(≤10μmol/L)均能促进细胞增殖,并存在浓度依赖性,其中0.5μmol/L对h PDLCs增殖作用最明显(P<0.05),高浓度的红景天苷(>10μmol/L)不能促进牙周膜细胞增殖;Western blot、ELISA及qRT-PCR结果显示:0.5μmol/L红景天苷可使LPS刺激的h PDLCs的TLR4、TNF-α、IL-1β、IL-6及RANK表达水平随时间延长而逐渐降低,其中48 h降低的最为明显,存在显著性差异(P<0.05);另外,LPS刺激对OPG的表达几乎没有影响,而0.5μmol/L红景天苷作用可以显著上调OPG的表达水平。结论红景天苷可减轻LPS刺激后h PDLCs的细胞损伤,其机制可能通过调节与TLR4相关信号通路,降低炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6及与骨吸收相关因子RANKL、OPG的表达,从而抑制炎症反应和骨吸收。     

microRNA-223在牙龈卟啉单胞菌诱导牙龈成纤维细胞炎症调控的研究

目的 探讨microRNA-223在牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharides, P.g-LPS)诱导牙龈成纤维细胞(gingival fibroblasts,GFs)炎症过程中对相关炎症因子表达水平的调控作用。 方法 采用慢病毒转染、干扰GFs中的microRNA-223的表达,在最适P.g-LPS刺激浓度(800 μg/L)分别刺激过表达、抑制以及正常表达microRNA-223的GFs,采用实时聚合酶联反应（Real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR）检测TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表达水平变化,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测其蛋白水平的变化。 结果 LPS刺激GFs产生炎症反应时,细胞内microRNA-223以及相关促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA和蛋白表达水平较正常细胞中的表达量明显上调。当细胞内microRNA-223上调时,促炎因子的mRNA和蛋白表达水平也会上调(P<0.001);当细胞内microRNA-223下调时,促炎因子TNF-α、IL-1β的蛋白水平会显著下降(P<0.001)。 结论 当GFs受P.gingivalis-LPS刺激发生炎症时,microRNA-223的表达量增多,上调促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6,进一步加重组织细胞的炎症。     

TNF-α刺激髁突软骨细胞产生白细胞介素-34的研究

目的通过观察TNF-α对髁突软骨细胞分泌白细胞介素-34(IL-34)及表达IL-34 mRNA基因的影响,探讨IL-34在颞下颌关节紊乱病中的致病机制。方法取第三代髁突软骨细胞,培养过程于培养液中加入不同浓度(0、1、10、20、50 ng/m L)的TNF-α培养24 h以及同一浓度(10 ng/m L)TNF-α分别培养1、3、6、10、24 h后,收集培养上清液及细胞,分别用ELISA和RT-PCR方法测定IL-34浓度以及IL-34 mRNA的表达情况。结果 1实验组和对照组髁突软骨细胞上清液中均能检测到IL-34。2TNF-α刺激髁突软骨细胞IL-34mRNA基因表达,并呈正相关关系。结论 TNF-α能刺激髁突软骨细胞产生IL-34。     

IFN-γ对牙龈卟啉单胞菌内毒素诱导的细胞耐受的影响

目的：观察IFN-γ对牙龈卟啉单胞菌（porphyromonasgin givalis,P．gingivalis）脂多糖（1ipopolysaccharides,LPS）诱导人单核细胞株THP-1细胞耐受后,炎症因子IL-1β和趋化因子IL-8分泌水平的影响。方法：将THP-1细胞用1mg／LIFN-γ预先处理24h,同时采用1mg／L P．gingivalisLPS刺激该细胞24h,洗脱后,采用P．gingivalis LPS再刺激24h,构建内毒素耐受模型。采用大肠杆菌（escherichiacoli,E．coli）LPS作为阳性对照。运用ELISA技术检测细胞条件培养液中IL-1β和IL-8分泌水平的变化。结果：P．gingivalis LPS重复刺激THP-1细胞后,IL-1β分泌水平较第-次刺激后明显降低（P〈0．05）,IL-8分泌水平与第-次刺激后差别不大。经过IFN-γ预先处理的细胞,P．gingivalis LPS重复刺激诱导细胞耐受后,IL-1β分泌水平较无预处理的细胞明显增高（P〈0．05）,IL-8分泌水平无明显变化。结论：IFN-丫能够促进P．gingivalisLPS诱导的耐受细胞分泌IL-1β,进而可能影响牙周组织的炎症和免疫反应。     

IL-1β对体外培养人牙髓成纤维细胞中基质金属蛋白酶-2的影响

目的:探讨白细胞介素-1β(interleukin-β,IL-1β)对体外培养的人牙髓成纤维细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metallproteinase-I,MMP-2)的影响。方法:利用免疫组化和明胶酶谱法,检测正常和经IL-1β刺激后的牙髓成纤维细胞中MMP-2的表达、分泌和活性。结果:MMP-2在正常和经IL-1β刺激后的牙髓成纤维细胞中均有表达,后者表达明显强于前者。明胶酶谱分析显示,与对照组相比,经IL-1β刺激的牙髓成纤维细胞中MMP-2的水平在48 h后持续显著升高。结论:IL-1β可能参与调节牙髓成纤维细胞合成和分泌MMP-2,从而促进牙髓炎症的发生。     

内毒素耐受对人牙龈上皮细胞分泌IL-1β、IL-6和IL-8的影响

目的:观察脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)反复刺激细胞,诱导产生的内毒素耐受对人牙龈上皮细胞(human gingival epithelial cells,HGECs)分泌细胞因子IL-1β、IL-6和IL-8的影响。方法:采用1mg/L牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)LPS或1mg/L大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)LPS刺激HGECs 24h,洗涤细胞后,分别采用相同的LPS再次刺激24h,构建内毒素耐受模型。采用ELISA技术检测细胞条件培养液中IL-1β、IL-6和IL-8分泌水平的变化。结果:P.gingivalis LPS或E.coli LPS刺激HGECs 24h后,3种细胞因子的分泌水平均较刺激前明显增高(P<0.05)。2种LPS重复刺激,诱导细胞耐受后,IL-6和IL-8的分泌水平较第1次刺激后明显降低(P<0.05),但P.gingivalis LPS重复刺激后,IL-1β的分泌水平与第1次刺激后无明显差别。结论:内毒素耐受能抑制HGECs分泌细胞因子IL-6和IL-8,进而可能影响牙周组织的炎症和免疫反应。     

白细胞介素-1β（IL-1β）和地塞米松对成纤维细胞增殖的影响

目的：检测白细胞介素-1β（IL-1β）和地塞米松（DEX）对体外培养的口腔正常黏膜与口腔扁平苔藓（OLP）黏膜成纤维细胞增殖的影响。方法：应用MTT法检测3种浓度梯度的IL-1β和DEX对体外培养的14例OLP黏膜成纤维细胞和11例正常口腔黏膜成纤维细胞增殖活性的影响。结果：MTT测定结果显示,IL-1β对OLP黏膜成纤维细胞和正常口腔黏膜成纤维细胞的增殖均有促进作用,且随浓度增加促进作用增强;相反,DEX却抑制两种成纤维细胞的增殖,浓度越高抑制作用越强。结论：白细胞介素-1β可促进成纤维细胞的增殖,地塞米松则抑制成纤维细胞的增殖。     

IL-1α对体外培养人牙囊细胞TNF-α表达的影响

目的：研究白细胞介素-α（interleukin—1α,IL—1α）对体外培养的人牙囊细胞（dental follicle cells,DFC）分泌肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF—α）的影响,探讨TNF-α在牙齿萌出过程中的作用。方法：原代培养人牙囊细胞;取3-6代细胞,培养基中加入IL-1α,在不同浓度和时间点,MTT检测细胞增殖,免疫组化法检测细胞中TNF—α的表达,Sandwich ELISA测定培养上清中TNF-α的含量。结果：IL-1α在25ng／ml,促进人牙囊细胞的增殖,IL-1α与牙囊细胞共孵育,可使TNF-α表达和分泌增强。结论：IL-1α有增强人牙囊细胞TNF-α表达的作用。