灵芝孢子粉对癫痫大鼠海马区TNF-α、ET-1影响的研究

目的：观察和探讨灵芝孢子粉对戊四氮（PTZ）致痫大鼠海马区肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、内皮素-1（ET-1）含量变化的影响。方法：用亚惊厥刑量的戊四氮（PTZ）复制慢性癫痫模型,用药组以灵芝孢子粉灌胃,记录癫痫发作的级别及潜伏期,并采用放射免疫法检测各组海马区TNF—α、ET-1的含量。结果：癫痫模型组与正常对照组相比,TNF—α、ET-1的含量明显增高（P〈0．01）;灵芝孢子粉组与癫痫模型组相比,造模第17、21、25天时癫痫发作的潜伏期二者差异有显著性（分别为P〈0．05;P〈0．05;P〈0．01）,TNF—α、ET-1的含量明显降低（P〈0．05）。结论：TNF—α、ET-1可能参与了PTZ致痫的发生发展过程,灵芝孢子粉能明显减弱TNF—α、ET-1过度表达对癫痫大鼠中枢神经系统的毒性损害,可能是通过调节神经系统免疫炎症反应而实现的,对癫痫发作导致的神经细胞损伤具有保护作用。     

灵芝孢子粉对戊四氮致痫大鼠大脑皮质及海马区PCNA变化的影响

目的：探讨灵芝孢子粉对戊四氮（PTZ）致痫大鼠大脑皮质及海马区增殖细胞核抗原（PCNA）变化的影响,进一步研究癫痫的发病机制及灵芝孢子粉的干预机制。方法：免疫组织化学法（SABC法）检测皮质和海马区PCNA的免疫反应性;Western-blot检测海马区PCNA蛋白含量的变化。结果：癫痫模型组PCNA阳性细胞数目明显增多与对照组比较差异有显著性（P〈0.01）,灵芝孢子粉干预组与癫痫模型组比较PCNA阳性细胞数明显减少差异有显著性（P〈0.01）;PCNA在戊四氮致痫组的大脑海马区的蛋白含量与对照组比较差异有显著性（P〈0.01）,灵芝孢子粉干预组与癫痫模型组比较差异有显著性（P〈0.01）。结论：灵芝孢子粉可以通过调节PCNA含量抑制星形胶质细胞（AS）增生,从而影响戊四氮致痫大鼠癫痫发作的发生与发展。     

灵芝孢子粉对无镁活化海马神经元NGF的影响

目的：本实验研究灵芝孢子粉对体外无镁活化海马神经元NGF（nerve growth factor神经生长因子的影响,进一步研究癫痫的发病机制及灵芝孢子粉的作用机制。方法：采用新生Wistar大鼠（出生后24h之内）,分离海马神经元,进行体外原代培养。运用Western-blot检测不同时间点各组细胞NGF的表达水平。结果：NGF五个时间点表达强度与模型组中相应的时间点比较增强明显减弱（均P〈0.05）。结论：NGF的阳性表达被完全抑制,灵芝孢子粉能有效减少癫痫对海马神经元细胞所造成的损害。     

灵芝孢子对雄性糖尿病大鼠睾丸AGEs的影响

目的：观察灵芝孢子对雄性糖尿病大鼠睾丸AGEs的影响。方法：Wistar雄性大鼠50只,随机分成3组,应用链尿佐菌素（STZ）加高脂高糖饮食制备Ⅱ型糖尿病模型．灵芝组同时给予灵芝孢子粉,12周后检测睾丸组织AGEs变化。结果：Ⅱ型糖尿病模型制备成功,模型组睾丸组织AGEs显著高于正常组和灵芝组（P〈0．05）。结论：在糖尿病睾丸组织损伤中AGEs也是其中的因素。灵芝孢子粉对糖尿病大鼠睾丸组织具有保护作用。     

灵芝孢子粉对癫痫大鼠脑组织BDNF与livin的影响

目的研究灵芝孢子粉对癫痫大鼠脑组织BDNF与livin的影响,探讨灵芝孢子粉保护癫痫大鼠脑细胞的可能机制。方法对健康雄性Wistar大鼠36只进行建模,随机分成对照组(生理盐水腹腔注射+生理盐水灌胃),模型组(PTZ腹腔注射+生理盐水灌胃),灵芝孢子粉组(PTZ腹腔注射+灵芝孢子粉灌胃),每组各12只,采用免疫组织化学方法检测3组脑组织BDNF与livin水平。结果 BDNF与livin在大鼠皮质区、海马区均可见表达。与对照组和模型组比较,灵芝孢子粉组的BDNF、livin表达水平明显增加(P<0.05)。结论BDNF与livin的表达可能在癫痫发病过程中扮演着重要的角色,推测灵芝孢子粉通过调控BDNF与livin表达来减少脑细胞损伤及凋亡,进而对癫痫脑组织起到保护作用。     

灵芝孢子粉对杏仁核点燃模型大鼠神经元凋亡的影响

目的观察灵芝孢子粉治疗后杏仁核点燃模型大鼠神经元凋亡状况。方法雄性大鼠24只,制备杏仁核点燃模型后,分为灵芝孢子粉组、生理盐水(阴性对照)组、苯巴比妥(阳性对照)组,灌胃给药2周后,采用原位杂交末端标记(TUNEL)法检测大鼠脑海马组织细胞凋亡状况。结果灵芝孢子粉组、阴性对照组及阳性对照组的凋亡细胞数分别为(21.25±4.03),(42.08±4.29)和(23.17±3.73)个/mm2,灵芝孢子粉组和阳性对照组凋亡指数均明显低于阴性对照组(P<0.05),给药组与阳性对照组之间无明显差异(P>0.05)。结论灵芝孢子粉能够明显减少癫痫引起的神经元凋亡,对神经系统具有保护功能。     

灵芝孢子粉对急性肝衰竭模型大鼠血清TNF—α及HGF的影响

目的：通过观察灵芝孢子粉对急性肝衰竭模型大鼠肿瘤坏死因子（TNF—α）、肝细胞生长因子（HGF）、及肠道双歧杆菌的调整作用,从微生态学的角度来评价灵芝孢子粉对肝衰竭造成损伤的肝细胞再生过程中细胞因子的影响。方法：本实验采用D-氨基半乳糖（D—Gal）制备急性肝衰竭大鼠模型．分3组：健康对照组,自然恢复组,灵芝孢子粉组。实验第14天处死实验动物,检测肠道菌群、血清ALT、血清TNF—α、HGF的变化。结果：灵芝孢子粉能调整肠道菌群失调,降低THF—α含量．提高血清HGF含量。从而有效地改善肝功能。各项指标与对照组相比差异显著（P〈0．01）。结论：灵芝孢子粉具有扶植双歧杆菌及抑制肝大肠杆菌过度生长的作用,同时具有保护肝脏细胞的功能,促进HGF的分泌,降低THF—α、促进肝细胞再生。     

糖尿病大鼠甲状腺组织钠／碘转运体与促甲状腺激素受体mRNA及蛋白表达的变化

目的观察糖尿病大鼠甲状腺组织钠／碘转运体（NIS）、促甲状腺激素受体（TSHR）mRNA和蛋白表达的变化及氨基胍、胰岛素的干预作用,探讨高糖毒性致甲状腺组织损伤及其可能机制。方法高脂饲料喂养联合链脲佐菌素制备糖尿病大鼠49只,完全随机分为糖尿病组17只、氨基胍组16只,胰岛素组16只,设对照组9只,成模12周末称重并测血糖后处死,取甲状腺组织,以RT-PCR方法测定NIS、TSHRmRNA表达,Westem印迹方法检测NIS、TSHR蛋白表达。结果糖尿病组大鼠甲状腺组织NISmRNA和蛋白表达显著低于对照组（0．17±0．09VS0．47±0．16;0．42±0．28vs1．44±0．46;P〈0．05）,TSHRmRNA和蛋白表达显著高于对照组（0．49±0．25vs0．17±0．18;1．48±0．65VS0．51±0．35;P〈0．05）;氨基胍组与胰岛素组糖尿病大鼠甲状腺组织TSHRmRNA和蛋白表达显著低于糖尿病组（0．29±0．28与0．30±0．15vs0．49±0．25;0．63±0．27与0．96±0．29vs1．48±0．65;P〈0．05）,NISmRNA和蛋白表达显著高于糖尿病组（0．40±0．17与0．45±0．20vs0．17±0．09;0．76±0．36与0．75±0．28vs0．42±0．28;P〈0．05）。结论高糖毒性可能通过蛋白非酶糖基化途径致糖尿病大鼠甲状腺组织NIS表达下降、TSHR表达增高。     

哮喘大鼠硫化氢含量与胱硫醚-γ-裂解酶mRNA表达的实验性研究

目的：观察哮喘大鼠硫化氢（H2S）含量与胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）mRNA的表达,探讨HS和CSE在哮喘发病机制中的作用。方法：采用哮喘大鼠模型,将30只SD大鼠随机分成哮喘组、正常对照组、地塞米松治疗组,分光光度法测定血浆HS的含量,RT-PCR法测定肺组织CSEmRNA的表达水平。结果：哮喘组血浆H2S的含量显著低于正常对照组[（61±16vs84±15）μmol／L,P〈0．01],地塞米松治疗组[（73±16）μmol／L]与哮喘组和正常对照组相比无统计学差异（均P〉0．05）。哮喘组肺组织CSE mRNA的表达水平显著低于正常对照组（0．14±0．02vs0．46±0．05,P〈0．01）,地塞米松治疗组（0．33±0．04）显著性低于正常对照组但高于哮喘组（P均〈0．01）。血浆H2S的含量和肺组织CSE mRNA的表达水平呈显著正相关（n=30,r=0．504,P〈0．01）。结论：哮喘大鼠血浆HS含量与肺组织CSE mRNA的表达水平均下降,它们可能参与了哮喘的炎症过程。地塞米松改善哮喘炎症的机制可能部分通过H1S／CSE体系。     

针刺对脑出血大鼠细胞外信号调节蛋白激酶通路影响的研究

目的：探讨针刺百会透曲鬓穴对脑出血大鼠细胞外信号调节蛋白激酶（ ERK）信号转导通路的影响。方法选取健康雄性Wistar大鼠192只,随机分为空白组、模型组、模型＋针刺组（简称针刺组）、激动剂组四组。空白组12只大鼠,模型组、针刺组、激动剂组各60只大鼠,制备脑出血模型。针刺组针刺患侧百会透曲鬓穴,运用Western blot的检测方法,观察不同时相点针刺百会透曲鬓穴对脑出血大鼠血肿周围脑组织p-ERK蛋白表达的影响。结果各造模组大鼠血肿周围脑组织的p-ERK阳性细胞表达至7 d时达高峰。在1d、2d、3d、7d,针刺组大鼠p-ERK表达[（0．19±0．04）、（0．23±0．07）、（0．24±0．05）、（0．25±0．06）]均明显高于模型组[（0．10±0．04）、（0．17±0．02）、（0．09±0．05）、（0．10±0．06）,q＝11．45,均P＜0．01];激动剂组p-ERK表达[（0.20±0．05）、（0．24±0．06）、（0．25±0．09）、（0．26±0．09）]也均明显高于模型组[（0．10±0．04）、（0．17±0．02）、（0.09±0．05）、（0．10±0．06）,q＝10．07,均P＜0．01];针刺组与激动剂组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论针刺百会透曲鬓穴能够激活ERK通路,增加p-ERK蛋白的表达,起到保护神经元细胞的作用。     

氟桂利嗪对杏仁核点燃鼠模型脑内谷氨酸及海马细胞单位放电的影响

目的观察氟桂利嗪对杏仁核电点燃癫痫鼠模型脑内谷氨酸（Glutamate,Glu）表达及海马细胞单位放电（Unit discharge）的影响。方法选择健康雄性Wistar大鼠30只制作动物模型,造模成功后随机分为单纯对照组、癫痫模型组和氟桂利嗪组,各组大鼠均进行单位细胞放电的记录,然后分别取脑组织,采用免疫组化的方法检测大鼠脑内谷氨酸的表达并进行方差检验分析。结果（1）癫痫模型组谷氨酸灰度值在杏仁核、海马、颞叶分别（92．5582±13．9345）、（94．0579±12．8117）、（100．5922±16．1048）,与对照组[（113．1562±36．7147）、（124．4130±29．6738）、（126．5704±35．8527）]比较有明显升高,灰度值越高Glu的表达越少;灰度值越低Glu的表达越多（P〈0．05）;氟桂利嗪组中,谷氨酸灰度值为[（108．1468±36．8048）、（120．4177±28．9721）和（125．3501±34．8795）2,与模型组比较差异有显著性（P〈0．05）;（2）海马细胞单位细胞放电频率模型对照组（164．55±74．708）较单纯对照组（70．925±44．125）明显增快,氟桂利嗪组（82．175±35．046）与模型组比较差异有显著性（P〈0．05）。结论氟桂利嗪可明显抑制谷氨酸的表达及海马细胞单位放电频率。     

破壁灵芝孢子粉与雌二醇抗肝纤维化的比较研究

目的：通过破壁灵芝孢子粉和雌二醇对CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子β1（TGF-β1）影响的实验研究,比较破壁灵芝孢子粉和雌二醇的作用效果。方法：使用CCl4诱导大鼠肝纤维化动物模型,分别给予雌二醇和高低剂量的破壁灵芝孢子粉处理。通过免疫组化染色半定量分析TGF-β1的表达状况。结果：TGF-β1雌二醇组与破壁灵芝袍子粉高剂量组之间无统计学差异（P〉0.05）,均值小于低剂量组高于对照组,其他各组间两两比较均有统计学差异（P〈0.05）。结论：破壁灵芝袍子粉高剂量组与雌二醇在抗肝纤维化中的作用效果接近,低剂量组作用效果低于雌二醇组。     

灵芝孢子粉对癫痫大鼠脑组织细胞因子IL-6的影响

目的:观察和探讨灵芝孢子粉对癫痫大鼠脑组织细胞因子IL-6含量变化的影响。方法:10周龄Wistar雄性大鼠30只,体重(150±10)g,随机分成3组,每组10只,分别是灵芝孢子粉组、癫痫模型组和空白对照组。灵芝孢子粉组和癫痫模型组用戊四氮(PTZ)亚惊厥剂量(32mg/kg),每日1次,腹腔注射28d,停药1周,再用相同剂量的PTZ测试,凡显示连续5次2级以上惊厥的大鼠为达到点燃标准,空白对照组用同体积生理盐水腹腔注射。同时灵芝孢子粉组经灌胃给予灵芝孢子粉(灌胃前禁食6h),灌胃体积为1.0ml/次;癫痫模型组和空白对照组经灌胃给予同等体积的生理盐水。实验结束处死动物,在低温条件下迅速取出鼠脑,用放射免疫法测定脑组织细胞因子IL-6含量变化。结果:灵芝孢子粉组与癫痫模型组动物相比脑组织IL-6明显降低(P<0.05)。结论:灵芝孢子粉能够有效降低癫痫大鼠脑组织细胞因子IL-6水平,纠正免疫失调而起到抗癫痫作用。     

表皮生长因子对萎缩性胃炎大鼠胃黏膜上皮增生的影响

目的：探讨表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）对大鼠萎缩性胃炎（chronic atrophic gastritis,CAG）动物模型的治疗作用。方法：大鼠CAG模型建立后,分别给予EGF、硫糖铝及生理盐水处理,12周后取出全胃,观察各组大鼠胃黏膜病理变化、测定腺体增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）表达、测量胃黏膜腺体厚度（L1）和黏膜肌层（L2）之比及胃窦固有腺体总个数。结果：EGF组、硫糖铝组大鼠胃黏膜腺体排列规则,未发现有恶性增殖现象。EGF组胃窦L1／L2值为8．6±1．2,较硫糖铝组、模型组（6．6±1．6,5．0±0．9）明显增加（P〈0．05,P〈0．01）。EGF组、硫糖铝组的胃窦腺体个数值分别为（52．0±5．8）和（34．8±4．3）,较模型组（27．1±2．2）明显增加（P〈0．01）;EGF组、硫糖铝组PCNA表达阳性的高度分别为（84．5±2．9）um和（76．8±1．7）um,较模型组[（63．3±9．2）um]明显增加（P〈0．01,P〈0．05）,但EGF组的效果要优于硫糖铝组（P〈0．01）。结论：EGF对于大鼠CAG动物模型具有恢复治疗作用,且在促进胃腺体增殖作用方面的效果优于硫糖铝。     

微囊蛋白-1蛋白参与哮喘气道平滑肌细胞增殖中ERK1／2调控以及罗红霉素的干预

目的：在细胞水平研究微囊蛋白-1（caveo-1in-1）对气道平滑肌细胞（ASMCs）的增殖作用以及对ERK1／2的通路调控,探讨caveolin-1抑制ASMCs增殖的可能机制。方法：复制哮喘大鼠模型,光镜观察肺组织病理变化,透射电镜观察ASMCs上微囊（caveolae）的结构及变化,用组织贴壁法体外培养气道平滑肌细胞,实验设正常对照组（A组）、哮喘组（B组）、ERKl／2信号通路阻断剂PD98059（C组）、罗红霉素组（D组）、caveo—lae结构破坏药物8-甲基环糊精组（E组）;用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况,逆转录-聚合酶链测定（RT-PCR）和蛋白质印迹法（WesternBlot）检测ERKmRNA和p-ERK1／2蛋白的表达;WesternBlot法检测各组caveolin-1蛋白细胞表达。结果：CCK-8检测结果显示D组及C组ASMCs增殖反应低于B组,D组（0．59±0．15） vs B组（0．96±0．14）,P〈0．05,C组（0．63±0．11） vs （0．96±0．14）,P〈0．05;E组ASMCs增殖反应较B组进一步活跃（1．26±0．21） vs （0．96±0．14）,P〈0．05。D组及C组ASMCs上caveolin-1的表达较B组明显升高,P〈0．01,pERKl／2蛋白以及ERKInRNA表达较B组降低,E组相反。D组ASMCs的ERK mR-NA和p-ERK1／2蛋白表达水平均显著低于B组及E组（P〈0．01）。结论：caveolin-1可能是ASMCs内信号转导的负调控蛋白,这-作用可能是通过抑制ERK信号通路实现。罗红霉素可能上调caweolin-1蛋白的表达量,抑制ERK mR-NA表达和翻译,从而抑制哮喘大鼠ASMCs的增殖。     

C—Jun氨基末端激酶信号通路在大鼠杏仁核电点燃癫痫模型的发病机制中的作用

目的观察大鼠杏仁核电点燃癫痫模型海马区的JNK水平及病理变化。方法将健康雄性wistar大鼠,随机分为空白对照组、手术对照组和点燃组。10次癫痫发作后灌注取脑,Western blot法检测JNK的表达,进行胶原纤维酸性蛋白（GFAP）和尼氏染色,各组间进行比较。结果Westernblot显示点燃组海马区的JNK磷酸化水平（0．537±0．050）较空白组（0．379±0．050）和手术对照组（0．387±0．043）显著增高（P〈0．05）,总JNK水平各组之间差异无统计学意义（P〉0．05）;点燃组GFAP阳性细胞计数（68．12±5．36）较空白组（39．83±3．90）和手术对照组（40．26±4．51）显著增加（P〈0．05）;尼氏染色阳性细胞计数点燃组（19．14±3．87）较空白对照组（43．15±5．62）手术对照组（42．91±4．25）显著减少（P〈0．05）。结论JNK信号通路可能参与颞叶癫痫海马硬化形成,表现为磷酸化JNK水平的升高。     

灵芝孢子粉对戊四氮致痫大鼠脑组织BDNF表达的影响

目的:观察使用灵芝孢子粉后,癫痫点燃大鼠模型皮质和海马区脑源性神经营养因子(BDNF)的含量及神经元形态学的改变,探索癫痫发病机制以及灵芝孢子粉对癫痫的干预作用.方法:采用戊四氮(PTZ)腹腔注射制作Wistar大鼠慢性点燃模型,并将其分为空白对照组、癫痫模型组和灵芝孢子粉组,点燃后断头取脑,免疫组化染色观察BDNF含量的变化及神经元形态学的改变.结果:所有大鼠均达到癫痫模型点燃标准.使用灵芝孢子粉的中药干预组与癫痫模型组相比,脑内BDNF含量明显升高,同时神经元形态学改变明显好转.结论:灵芝孢子粉能够增强脑源性神经营养因子的表达,从而减轻癫痫发作给神经系统带来的损伤,所以灵芝孢子粉可能具有减轻痫性发作、保护神经元的作用.     

四妙勇安汤对糖尿病大鼠肢体缺血治疗作用及其分子机制

目的研究四妙勇安汤对糖尿病后肢缺血大鼠的治疗作用及对丝苏氨酸蛋白激酶（Akt）、p38丝裂原活化蛋白激酶（P38）蛋白水平的影响。方法40只Wistar大鼠完全随机分为4组：对照组、对照治疗组建立单纯缺血模型;模型组、模型治疗组建立糖尿病肢体缺血模型,对照治疗组、模型治疗组给予四妙勇安汤治疗。分别于术前、术后即刻、术后第3、7、14天测下肢血流变化,术后15d取腓肠肌组织免疫组织化学CD31染色血管内皮细胞观察新生血管密度,及蛋白印迹法检测内皮细胞Akt、P38蛋白变化情况。结果模型组血管损伤严重,血管重建能力明显降低,第7天对照组、对照治疗组、模型组、模型治疗组血流比值为（45±4）、（49±3）、（364-3）、（48±6）％,第14天血流比值为（63±6）、（66±4）、（45±4）、（61±4）％,与模型组比较,其余3组差异均有统计学意义（P〈0．05）。模型组术后15d新生血管密度明显减低,Akt蛋白表达明显降低,P38表达明显升高,其他3组与其差异均有统计学意义（P〈0．05）;四妙勇安汤能够明显增加新生血管数量[模型组、模型治疗组分别为（9．1±2．0）、（16．4±2．9）个,P〈0．05,模型组、模型治疗组比值分别为（0．62±0．15）、（0．86±0．18）％,P〈0．05],增加Akt蛋白表达,降低P38表达,差异均有统计学意义[模型组与模型治疗组蛋白相对光密度比值：Akt：（0．20±0．07）、（0．28±0．56）％;P38：（1．18±0．23）、（0．99±0．04）％,P〈0．05],对照治疗组未发现中药治疗后副作用。结论四妙勇安汤能够改善糖尿病下肢缺血血运重建过程,加快血管新生速度,其作用机制可能是通过促进Akt表达,抑制P38表达实现的。     

抑肽酶对脑缺血再灌注大鼠c-Jun氨基末端激酶信号转导通路的影响

目的探讨抑肽酶对脑缺血再灌注大鼠c—Jun氨基末端激酶（c-Jun NH2 terminal kinases,JNK）信号转导通路的影响。方法将30只健康雄性SD大鼠完全随机分为假手术组、模型组、抑肽酶组,每组10只。采用4-VO法建立大鼠全脑缺血模型,在预定时间行灌注、固定、取脑、石蜡包埋切片;免疫组化法检测p-JNK的表达,DNA断端末端标记法检测CA1区凋亡细胞。结果p-JNK在模型组大鼠海马CA1区大量表达（239．17±2．74）,抑肽酶组p-JNK则无明显表达（176．53±O．36）,2组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;抑肽酶组细胞凋亡指数（27．06±3．16）明显低于模型组（62．13±1．04）,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论JNK信号通路在大鼠脑缺血再灌注损伤中发挥重要作用,抑肽酶能够抑制JNK信号转导通路的激活,对脑缺血再灌注损伤导致的细胞损伤起到保护作用。     

维A酸对实验性大鼠慢性阻塞性肺疾病MMP-9的影响

目的：利用维A酸对实验性大鼠慢性阻塞性肺疾病的干预,检测其MMP-9的变化并对其机制的探讨。方法：Wistar雄性大鼠36只,随机分为3组：正常对照组、模型组和用药组,每组12只。模型组大鼠用药后观察各组大鼠肺组织的病理改变,免疫组化方法及酶联免疫试验观察肺组织MMP-9表达情况。结果：模型MMP-9的活性和表达与正常对照组比较,差异有显著性（P〈0．01）。用药组MMP-9的活性和表达与模型组比较,差异有显著性（P〈0．01）。结论：维A酸对慢性阻塞性肺疾病防治及治疗有很好的指导意义。