玉屏风散对小鼠白细胞活化作用的血清药理学研究

目的　应用中药血清药理学方法 ,观察玉屏风散对小鼠白细胞活化功能的影响。方法　 9组小鼠按0 .1ml/ 10g体重用玉屏风散水煎液灌胃 ,剂量相当于 48.0g饮片 /kg体重 ,于给药后 15min、30min、1h、1.5h、2h、2 .5h、3h、4h分别在无菌条件下取血 ,分离血清进行白细胞活化作用检测。另设蒸馏水灌胃后的空白血清作对照组。结果　 30～ 12 0min的含药血清对小鼠白细胞均具有活化作用 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ,尤以 1h作用最强。结论　时 效关系研究表明 ,玉屏风散煎剂 48.0 g /kg体重灌胃后 30～ 12 0min时相的含药血清 ,对白细胞具有不同程度的活化作用。     

大补阴丸含药血清对自身免疫病模型小鼠T、B淋巴细胞活性影响的时效关系

目的应用中药血清药理学的方法,通过时间-效应关系研究,探讨大补阴丸(汤)含药血清对CJ(Campy-lobacter jejuni,空肠弯曲菌)致敏的自身免疫病模型小鼠(CJ小鼠)T、B淋巴细胞活性的影响及其时间-效应关系。方法将健康雌性ICR小鼠随机分为正常对照组(normal control group,N)、模型组(model group,M)、模型对照组(model control group,MC)以及5个时相给药组(30 min、1 h1、.5 h、2 h、3 h),共8组。除正常对照组外,其他各组均用空肠弯曲菌免疫小鼠制备自身免疫病模型。从造模第15 d起,开始以大补阴丸(汤)(0.4g生药饮片/ml)给不同时相用药组小鼠灌胃,连续用药10 d。并分别于第10次给药后30 min1、h、1.5 h、2 h3、h取血,分离血清;同时也分别取N组、MC组血,分离血清。继之处死小鼠,称量脾,计算脾指数。将上述血清与M组小鼠的脾细胞体外培养,检测DBYW含药血清对T、B淋巴细胞活性的影响,并绘出时-效关系变化曲线。结果大补阴丸(汤)在1~1.5 h时相含药血清,可明显抑制CJ小鼠的T、B淋巴细胞增殖活性,降低CJ小鼠体内异常升高的ds-DNA、ss-DNA抗体水平和脾指数,改善其因自身免疫反应所致的肝肾病理损害。结论大补阴丸(汤)含药血清对异常免疫机能状态下的T、B淋巴细胞活性具有明显的免疫抑制作用,且在1~1.5 h时作用最明显。     

地塞米松对小鼠免疫系统的抑制作用

目的研究地塞米松对小鼠免疫系统的抑制作用。方法取7—8周龄昆明种小鼠,腹腔注射地塞米松,分别于注射后5、10、15、24和36h时间点取胸腺、脾脏和肠系膜淋巴结;对照组小鼠腹腔注射生理盐水（即0h组）,HE染色。结果地塞米松组胸腺中凋亡细胞和凋亡小体数量多于对照组;脾脏和淋巴结内亦见凋亡细胞,但较胸腺内少;15h时间点凋亡细胞最多。结论地塞米松可引起胸腺、脾脏和淋巴结细胞的凋亡,对免疫系统有明显的抑制作用。     

藤梨根含药血清对肺腺癌A549细胞的抑制作用

目的 研究藤梨根含药血清对人肺癌A549细胞株的增殖抑制作用及其机制.方法 将9只无特定病原体(SPF)级SD大鼠随机分为藤梨根含药血清高、低剂量组和对照组,每组3只,含药血清组分别以12.5、6.25 g/(kg·d)的藤梨根灌胃,对照组予生理盐水灌胃,3 d后取腹主动脉血制备含药血清及对照组血清,3 组血清分别干预体外培养的人肺癌A549细胞24 h,应用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂测定藤梨根含药血清对人肺癌A549细胞的抑制作用,应用DNA断裂的原位末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡,应用蛋白免疫印迹法检测藤梨根含药血清对人肺癌A549细胞表皮生长因子受体(EGFR)、B淋巴细胞瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响.结果 CCK-8法检测结果示,藤梨根含药血清对人肺癌A549 细胞有增殖抑制作用.与对照组比较,含药血清组增殖抑制率明显增高(P<0.01).藤梨根含药血清对A549细胞有诱导细胞凋亡的作用,与对照组比较,低、高剂量组凋亡率增高(P<0.01).蛋白免疫印迹法检测结果显示,与对照组比较,藤梨根含药血清作用人肺癌A549细胞24 h后,肺癌细胞EGFR和Bcl-2蛋白表达水平下降,而Bax蛋白表达水平增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 藤梨根含药血清可抑制人肺癌A549细胞的增殖,诱导A549细胞凋亡,其机制可能与下调EGFR和Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达相关.     

玉屏风散传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂对免疫抑制小鼠免疫功能影响的比较

目的:观察玉屏风散传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂对免疫抑制小鼠免疫功能的影响,比较两者的疗效。方法:将小鼠随机分为正常对照组、环磷酰胺组(模型组)、玉屏风散饮片低、高剂量组、玉屏风散配方颗粒低、高剂量组6组。各组均每日给药1次,连续10 d,眼球取血,取脾脏、胸腺称重,计算脾指数和胸腺指数,Giemsa-wright染色观察腹腔液吞噬细胞计算吞噬率,分光光度计法检测小鼠脾脏抗体生成细胞和血清溶血素水平。结果:与环磷酰胺组比,玉屏风散饮片高剂量组和配方颗粒高剂量组脾指数、胸腺指数均显著升高,腹腔吞噬细胞吞噬率显著升高,脾脏抗体生成细胞功能明显增强,血清溶血素水平明显升高,且两组比较差异无统计学意义。结论:玉屏风散配方颗粒汤剂与传统饮片汤剂均能增强免疫抑制小鼠免疫功能,两种剂型效果基本相当。     

玉屏风散发酵液对免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用

目的探讨玉屏风散发酵液对免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用。方法用环磷酰胺制备免疫抑制小鼠模型,分别用玉屏风散煎剂和玉屏风散发酵液灌胃,剂量为9.375g/kg,连续给药10天。空白对照组和模型组用蒸馏水灌胃。测定小鼠脾指数、胸腺指数、脾抗体细胞形成数。结果同玉屏风散煎剂相比,玉屏风散发酵液能明显改善由环磷酰胺所导致的小鼠脾和胸腺萎缩,以及脾抗体细胞形成数的减少。结论玉屏风散发酵液能明显改善免疫抑制小鼠的免疫功能低下状态。     

半夏泻心汤通过介导MAPK信号通路抑制巨噬细胞炎症因子的分泌

目的:观察半夏泻心汤体外抑制巨噬细胞分泌炎症因子的作用及对MAPK炎症信号通路的影响,以探讨其治疗胃炎的可能机制。方法:取小鼠8只,提取小鼠腹腔巨噬细胞,原代培养;用家兔制备半夏泻心汤含药血清和对照血清。小鼠腹腔巨噬细胞分为空白对照组、脂多糖(LPS)组、地塞米松组及半夏泻心汤5%含药血清组、10%含药血清组和20%含药血清组,各组分别给予对照血清、LPS、地塞米松和各浓度含药血清。作用6 h后收集细胞,用qRT-PCR方法检测细胞内IL-1β、IL-8和TNF-α的mRNA相对表达量;作用24 h后,用ELISA方法检测细胞培养上清中炎症因子IL-1β、IL-8和TNF-α的蛋白含量。收集20%含药血清作用30 min、60 min和2 h后的细胞,用Western blot方法检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)和P38的磷酸化水平。结果:qRTPCR结果显示,与不含药血清对照组比较,LPS能明显促进小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β、IL-8和TNF-α的mRNA表达(P0.01);与LPS组比较,地塞米松能明显抑制小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β、IL-8和TNF-α的mRNA表达(P0.01);5%含药血清能明显抑制巨噬细胞TNF-α的mRNA表达(P0.01),10%和20%含药血清均能明显抑制IL-1β、IL-8和TNF-α的mRNA表达(P0.01)。ELISA结果显示,5%含药血清能明显抑制小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β的分泌(P0.01),10%、20%含药血清能明显抑制小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β、IL-8和TNF-α的分泌(P0.05,P0.01)。Western blot结果显示,半夏泻心汤含药血清作用30 min、60 min均能抑制小鼠腹腔巨噬细胞MAPK信号通路中P38磷酸化水平(P0.05、P0.01);含药血清作用2 h能抑制巨噬细胞的ERK和P38的磷酸化水平(P0.01)。结论:半夏泻心汤可能通过调节巨噬细胞内MAPK炎症信号通路中ERK、P38的磷酸化水平,抑制巨噬细胞分泌炎症因子IL-1β、IL-8和TNF-α而起到治疗胃炎的作用。     

温阳利水方含药血清对脾肾阳虚IMN患者血清致小鼠足细胞凋亡的作用

目的 探讨温阳利水方含药血清对特发性膜性肾病(IMN)脾肾阳虚证足细胞凋亡的作用.方法 CCK-8检测不同浓度脾肾阳虚型IMN患者血清对体外培养小鼠永生化足细胞增殖能力的影响,构建脾肾阳虚型IMN血清损伤足细胞体外模型.SPF级大鼠予不同浓度温阳利水方水提物灌胃,腹主动脉取血,分离血清并灭菌后备用.设正常对照组、模型组、低、中、高浓度含药血清组,温阳利水方含药血清与脾肾阳虚型IMN血清损伤足细胞共孵育48 h,qRT-PCR检测凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2 mRNA相对表达量.结果 10%脾肾阳虚型IMN患者血清造成足细胞损伤模型,加入不同浓度温阳利水方含药血清共孵育48 h后,Caspase-3 mRNA相对表达量,与正常对照组比较,模型组增多,但差异无统计学意义;含药血清组Caspase-3 mRNA相对表达量无明显增减.Bcl-2 mRNA相对表达量,与模型组比较,低、中、高浓度含药血清组Bcl-2 mRNA相对表达量均增加,组间比较,模型组与中、高浓度含药血清组差异均有统计学意义(P<0.01);含药血清组间比较,中、高浓度组Bcl-2 mRNA相对表达量均较低浓度组增加,且差异均有统计学意义(P<0.01);中、高浓度组间,Bcl-2 mRNA相对表达量差异有统计学意义(P<0.01).结论 对脾肾阳虚型IMN患者血清损伤足细胞,温阳利水方含药血清共孵育48 h,可能通过上调Bcl-2的水平,发挥抗凋亡效应.     

宁夏中宁盛果期枸杞叶对小鼠免疫功能影响

目的:探讨宁夏中宁盛果期枸杞叶对小鼠免疫功能的影响。方法 :枸杞叶水煎剂低剂量组5 g·kg-1·d-1灌胃给药,枸杞叶水煎剂高剂量组10 g·kg-1·d-1灌胃给药,模型对照组以生理盐水25 mg·kg-1·d-1灌胃,连续灌胃9 d,在灌胃后第2天及第5天,分别给3组小鼠腹腔内注射抗原——10%绵羊红细胞(SRBC)混悬液0.5 mL,约1×108个红细胞;于第10天自股A采血,取血清测定T淋巴细胞转化试验;并处死解剖取其免疫器官(胸腺及脾脏)称其重量;进行ANAE染色,计算T淋巴细胞ANAE细胞百分率和T淋巴细胞的转化率。结果 :枸杞叶水煎剂可使小鼠胸腺和脾脏的重量显著增加,小鼠T淋巴细胞ANAE活性显著增强,小鼠T淋巴细胞转化率也有明显提高。结论:宁夏中宁盛果期枸杞叶具有增强小鼠体液免疫及细胞免疫的能力。     

褪黑素对离体培养的小鼠胸腺细胞凋亡及细胞周期进程的影响

目的:研究褪黑素对体外培养的小鼠胸腺细胞凋亡及细胞周期进程的影响. 方法:小鼠胸腺细胞体外培养前预先加入不同浓度褪黑素,培养4 h后,应用流式细胞术检测其凋亡小体百分率和细胞周期各时相细胞百分率的变化. 结果:小鼠胸腺细胞培养后其凋亡小体百分率明显升高,为培养前的6.9倍(P<0.001);G0/G1和S期细胞百分率与培养前相比未见明显变化,G2+M期细胞百分率呈增高趋势.预先加入2.0 mmol*L-1 褪黑素可使凋亡小体百分率明显降低(P<0.01),G2+M期细胞百分率明显增高(P<0.05). 结论:褪黑素可以减轻体外培养的小鼠胸腺细胞凋亡,并可诱导细胞发生G2阻滞.     

金葡菌及其L型对小鼠胸腺细胞凋亡的影响

目的:研究金黄色葡萄球菌(金葡菌)及其L型(金葡菌L型)对小鼠胸腺细胞凋亡的影响.方法:用金葡菌、金葡菌L型、肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)分别作用于小鼠胸腺细胞,同时设立正常对照,于作用后2 h、4 h、6 h、8 h、10 h终止培养.Anninix V和PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:SEB作用2 h、金葡菌作用4 h、金葡菌L型作用6 h后各时间段小鼠胸腺细胞的凋亡率与对照组比较均明显增高(P<0.01),随着诱导时间的延长,胸腺细胞的凋亡率逐渐增加(P<0.01);SEB诱导胸腺细胞凋亡率在6 h、8 h和10 h时均明显弱于原菌(P<0.01). 结论:金葡菌L型和原菌以及SEB均能促进胸腺细胞凋亡,除SEB外,产SEB金葡菌株及其L型诱导胸腺细胞凋亡还可能有其他因素参与.     

玉屏风散治疗实验性小鼠单纯疱疹病毒性角膜炎的观察

目的观察玉屏风散对实验性小鼠单纯疱疹病毒角膜炎（HSK）的治疗效果,探讨其对机体免疫功能的调节作用。方法将90只小鼠随机分为实验组、模型对照组及空白组各30只。通过单纯疱疹病毒1型（HSV-1）感染60只小鼠60眼（实验组、模型对照组各30只）的角膜建立HSK小鼠,实验组小鼠灌服玉屏风散水煎剂,模型对照组和空白组灌服等量的生理盐水,每日一次在裂隙灯下角膜荧光素染色检查小鼠角膜上皮炎的愈合情况及角膜的混浊度;并分别在给药后第7天、第14天及第28天随机取3组小鼠眼眶静脉血,离心取血清,ELISA法测定小鼠血清白细胞介素-2（IL-2）的水平,同时行眼球组织病理学检查。结果实验组小鼠角膜混浊度明显低于模型对照组;实验组小鼠单纯疱疹病毒角膜炎治愈率75%,对照组治愈率30%,两组比较差异有显著性（P〈0.05）;实验组小鼠第14天、第28天血清IL-2含量高于模型对照组及空白组,差异有显著性（P〈0.05）;小鼠角膜组织病理检查示实验组第7天、第14天、第28天角膜炎症反应程度较模型对照组轻。结论玉屏风散能调节小鼠免疫功能,对单纯疱疹病毒角膜炎有明显疗效。     

Adaptive response of thymocyte apoptosis induced by X-irradiation with 75 mGy

目的：本研究观察胸腺细胞凋亡小体（TAB）以评价低剂量辐射诱导的胸腺细胞凋亡的适应性反应。方法：实验用X射线全身照射Kunmin雄性小鼠，诱导剂量75mGy（D1），攻击剂量1．5或2．0Gy（D2），D1和D2间隔6h，D2照后20h检测TAB百分数。结果：D1+D2组TAB百分数明显低于D2组（P＜0．05）。此外，将75mGy照射的脾细胞外液加入2Gy照射的胸腺细胞悬液中，在培养72h明显低于2Gy照射组（P<0．05）。结论：低剂量辐射（75mGy）可改变免疫细胞的外环境，降低其凋亡，并且可诱导其后大剂量（1．5或2．Gy）照射的小鼠胸腺细胞凋亡的适应性反应。     

含活血通络方血清对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞增殖作用的研究

目的 探究含活血通络方血清调控IncRNA MEG3对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞（human retinal microvascular endothelialcells,hRMECs）增殖及凋亡的影响作用。方法 选取20只SD大鼠,采用随机数字表法对10只大鼠灌胃活血通络方,10只灌胃等量生理盐水。灌胃结束1h后制备相应血清。分别采用5mmol/L葡萄糖或30mmol/L的D-甘露醇、葡萄糖溶液对hRMECs细胞进行诱导24h。按照诱导情况将细胞分为正常对照组（5mmol/L葡萄糖,n=6）、等渗组（30mmol/LD-甘露醇,n=6）、高糖组（30mmol/L葡萄糖,n=6）、高糖+2.5%含药血清组（n=6）、高糖+7.5%含药血清组（n=6）、高糖+10%含药血清组（n=6）,相应血清干预24h。采用CCK-8法、酶联免疫吸附法检测细胞增殖情况及丙二醛（malondialdehyde,MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathioneperoxidase,GSH-Px）含量;采用实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time fluorescence...     

前凋亡因子Bim在地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡中的作用

目的 研究前凋亡因子Bim在地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡中的作用. 方法体外培养BALB/c小鼠胸腺细胞,终浓度1 μmol/L地塞米松诱导细胞,透射电镜、AnnexinV/PI双染流式细胞术、DNA凝胶电泳检测细胞凋亡;RT-PCR半定量法分析1 μmol/L地塞米松作用不同时间以及不同浓度地塞米松作用1 h小鼠胸腺细胞Bim mRNA表达. 结果①1 μmol/L地塞米松作用4 h小鼠胸腺细胞出现特征性DNA梯状条带和细胞凋亡典型形态特征,流式细胞术检测显示在不同时间点(2 h,4 h,8 h)实验组细胞凋亡率较对照高;②1 μmol/L地塞米松作用1/2 h后小鼠胸腺细胞Bim mRNA三个异构体表达即明显升高,以BimL最为明显,其中BimL、BimEL mRNA表达在1 h达高峰,较对照组高峰前移11 h,且各时间点(0 h、24 h除外)表达水平与同时点对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05);BimS mRNA表达高峰较对照组提前4 h,但各时间点表达水平与同时点对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05);③不同浓度(0,10-2,10-1,1,10 μmol/L)地塞米松作用胸腺细胞1 h时,其活细胞率和凋亡细胞百分率在不同浓度组间的差异无统计学意义,而Bim mRNA表达随地塞米松终浓度增加而升高,也以BimL mRNA表达增高最明显. 结论 Bim参与了地塞米松诱导的小鼠胸腺细胞凋亡过程,Bim三个异构体中以BimL作用为主;Bim mRNA表达发生在细胞凋亡早期,其表达水平随作用时间变化,并在一定地塞米松浓度范围内呈剂量依赖性.     

二苯胺法定量检测细胞凋亡

目的 :建立二苯胺定量检测细胞凋亡的实验方法。方法 :以地塞米松体外作用 5h的小鼠胸腺细胞作为凋亡阳性细胞 ,应用二苯胺法测定细胞片段化DNA和总DNA的含量 ,二者的比值定义为细胞凋亡率。结果 :地塞米松 (1× 10 - 5mol L)处理 5h后 ,细胞凋亡率为 30 .2 4 %。此与流式细胞仪分析结果 (2 7.10 % )基本一致。结论 :建立了一种简单、经济、快速的细胞凋亡定量检测方法     

Time-effect of adaptive response of mouse thymocyte apoptosis and cell cycle progression induced by low dose radiation

目的 :观察低剂量辐射 (LDR)诱导胸腺细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的基本规律。方法 :用 X射线照射昆明系雄性小鼠 ,其诱导剂量 (D1)及其后攻击剂量 (D2 )分别是 75m Gy和 1.5Gy。D1和 D2 间隔时间分别是 3、6、12、2 4和 6 0 h。D2 照射后 18h胸腺细胞培养 4、2 0和 4 4 h用流式细胞仪检测胸腺细胞凋亡小体 (TAB)和细胞周期进程的变化。结果 :当 D1和 D2 间隔 3、6和 12 h,在 D2 照射后胸腺细胞培养 4和 2 0 h,D1+ D2 组 TAB百分数明显低于 D2 组 (P<0 .0 5) ,G0 / G1和 G2 + M期细胞百分数也不同程度地低于 D2 组 ,而 S期细胞百分数却明显高于 D2 组 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1)。结论 :D1和D2 分别是 75m Gy(剂量率 ,12 .5m Gy/ min)和 1.5Gy(剂量率 ,0 .2 87Gy/ min) ,D1和 D2 间隔 3～ 12 h,在小鼠全身照射后其胸腺细胞培养 4和 2 0 h可诱导细胞凋亡和细胞周期进程的适应性反应。     

不同剂量黄柏的大补阴丸(汤)对CJ小鼠胸腺细胞凋亡的影响

目的　比较不同剂量黄柏的大补阴丸 (汤 )诱导CJ小鼠胸腺细胞凋亡的差别。方法　用空肠弯曲菌免疫小鼠制备自身免疫病模型 ,造模第二周起 ,分别用小、中、大三个不同剂量黄柏的大补阴丸 (汤 )灌胃 ,连续用药两周后处死。取胸腺细胞 ,通过流式细胞仪计数 ,检测胸腺细胞凋亡率。结果　胸腺细胞凋亡率随方中黄柏剂量的加大而增高。结论　大剂量黄柏的大补阴丸 (汤 )效果最好 ,黄柏在全方大补阴丸 (汤 )诱导的CJ小鼠胸腺细胞凋亡过程中发挥重要作用。