应用前C区引物进行PCR扩增检测乙肝患者血清HBV-DNA

应用前C区引物对85例乙肝患者及31例乙肝病毒携带者血清中HBV-DNA进行PCR扩增,并将实验结果与斑点杂交、乙肝病毒标志(ELISA)结果相对比,发现前者敏感性高,特异性强。作者还发现采用HBV前C区引物所获得的PCR结果与C区引物的结果一致。     

468例地贫基因诊断结果分析

地中海贫血(简称地贫)是一组高度异质性的遗传性溶血性疾病.它是由于珠蛋白基因突变,使珠蛋白生物合成受阻、产量不足或缺如所致.我院从2005年6月开始对孕妇468 例进行基因分型,明确其地贫基因型,为临床进一步明确胎儿的地贫基因型,并实施优生优育提供医学依据.     

DNA体外PCR扩增鉴定胎儿性别方法的应用

本实验采集4例X连锁遗传病高危中孕胎儿羊水,从中抽提DNA,进行体外Y染色体特异片段扩增鉴定胎儿性别。结果其中2例胎儿为女性,2例为男性,均在引产或足月分娩后证实。     

HPLC与基因检测联合应用对地贫诊断的临床价值

目的探讨高效液相色谱法（HPLC）和基因检测诊断地中海贫血的临床价值。方法收集平均红细胞体积（M CV）〈80 fl,平均红细胞血红蛋白含量（M CH）〈26 pg的EDTA-K2抗凝的血常规标本共174例份,用HPLC方法测定血红蛋白亚型HbA2含量,对地贫进行非基因检测;提取全血DNA,经PCR方法扩增后,采用琼脂糖凝胶电泳对疑似α-地贫患者标本常见缺失类型--^S-EA、-α^3.7、-α^4.2进行检测,采用反向点杂交（RDB）法对疑似β-地贫患者标本常见突变类型CD 41-42M,-28M,IV S-II-654M,CD 71-72M等进行基因检测。结果174例中HbA2正常27例,异常147例,106例HbA2≤2.5%,疑似α-地贫,41例HbA2≥3.5%,疑似β-地贫,对疑似α-地贫和β-地贫的患者标本分别进行基因检测,其中α-地贫66例,34例正常（未见检测的三种缺失）,5例诊断不明未检出。结论采用HPLC和基因检测法对诊断α-地贫检出率差异具有显著性,对诊断β-地贫具有很高的符合率。HbA2的异常程度与是否地贫并无相关性。HPLC适用于β-地贫产前诊断和遗传病咨询,α-地贫则需进行基因检测提高诊断的准确率。     

地中海贫血羊水及脐血产前基因诊断的临床研究

目的:研究检测α-地中海贫血及β-地中海贫血在产前基因诊断中的临床应用价值.方法:对48例地中海贫血的风险胎儿的羊水(或脐血)应用单管多重PCR体系和反向点杂交法检测α-地中海贫血和β-地中海贫血基因诊断.结果:共有38例胎儿检测出携有地中海贫血.其中α-地贫14例,包括东南亚缺失型杂合子(--SEA/αα)2例,东南亚缺失型纯合子(--SEA--SEA)8例;左缺失型杂合子(-α4.2/αα)1例,右缺失型杂合子(-α3.7/αα)2例,非缺失型点突变(ααT/αα)1例;β-地中海贫血24例,包括CD 41～42杂合子16例,-28(A-G)杂合子3例,双重杂合子3例(ⅣS2nt654/CD41-42,-28(A-G)/CD71-72( A),-α3.7/CD41-42).其中10例重型地贫儿引产,1例重型地贫儿产后新生儿死亡.所有病例经引产或正常分娩后均留取脐带血作地贫基因诊断证实产前诊断.结论:应用单管多重PCR体系及反向点杂交法能快速、准确进行α和β-地中海贫血产前羊水基因检测,这对于有效预防重型地中海贫血胎儿出生具有重大临床意义.     

荧光多重PCR对α地中海贫血的基因诊断

目的：建立一种快速、灵敏的α地中海贫血诊断方法。方法：应用荧光引物对正常人和患者进行多重PCR，同时扩增α1和α2珠蛋白基因和内对照β肌动蛋白(α—actin)，用Perkin E1mer ABI PBISM^TM 377 DNA Sequencer自动分析结果，并对所得救据进行统计。用连锁分析的方法PCR扩增同一批模板α2珠蛋白基因上游的(CA)n，跑变性胶并将结果与前一种方法对照。结果：荧光多重PCR自动分析和扩增(CA)n连锁分析得出的结论与实际情况完全相符，结果判断容易。结论：荧光多重PCR法灵敏、简便，单管内就能完成，适合运用于α地中海贫血的快速诊断，并有可能运用于移植前诊断和母体外周血分离胎儿有核红细胞产前诊断。     

α和β地中海贫血的羊水产前基因诊断

目的研究单管多重PCR体系检测缺失型α-地中海贫血及反向点杂交法检测β-地中海贫血在产前诊断中的应用价值。方法应用单管多重PCR体系产前检测37例父母均为α-地中海贫血杂合子的风险胎儿的羊水地贫基因及应用反向点杂交法产前检测18例父母均为β-地中海贫血杂合子的风险胎儿的羊水地贫基因。结果37例α-地中海贫血风险胎儿中检出Hb Bart纯合子7例,左缺失型H病3例,右缺失型H病2例。18例β-地中海贫血的风险胎儿检出2例IVS-nt 654/CD41-42双重杂合子,1例IVS-nt 654纯合子。结论应用单管多重PCR体系及反向点杂交法进行α和β地中海贫血产前羊水基因检测,能快速、准确作出诊断,从而预防重症患儿的出生,达到优生目的。     

孕妇血浆胎儿DNA的父源性α地中海贫血产前基因诊断

目的检测孕妇血浆胎儿DNA的父源性东南亚缺失型α地中海贫血1（SEAα地贫1）基因突变,进行无创伤性产前基因诊断。方法应用荧光聚合酶链反应（PCR）和基因扫描方法分析10例孕妇血浆胎儿DNA的父源性SEAα地贫1基因突变及短串联重复序列（STR）;同时以常规的绒毛、羊水或脐血胎儿DNA的基因诊断结果作对照。结果10例孕妇血浆胎儿DNA均检测到父源性STR等位基因。有4例检出父源性SEAα地贫1基因突变;6例未检出父源性SEAα地贫1基因突变,与常规的绒毛、羊水或脐血胎儿DNA的产前基因诊断结果一致。结论应用荧光PCR和基因扫描方法检测孕妇血浆胎儿DNA的父源性SEAα地贫1基因突变,可排除血红蛋白H病胎儿。     

用等位基因特异性PCR进行β-地中海贫血产前基因诊断

目的:对两对有重型β-地中海贫血患儿家族史的夫妇进行产前基因诊断。方法:应用等位基因特异性聚合酶链反应(PCR)技术检测两对夫妇及其高风险胎儿的5种β-地中海贫血突变类型:CD41-42(-CTTT)缺失突变、IVSII654(C→T)突变、CD17(A→T)无义突变、TATA盒nt-28(A→G)突变和CD71-72(+A)移码突变。结果:家系1的父亲为TATA盒nt-28(A→G)/N杂合子,母亲为CD41-42(-CTTT)/N杂合子,胎儿正常;家系2的父亲为CD41-42(-CTTT)/N杂合子,母亲为CD71-72(+A)/N杂合子,胎儿为CD41-42(-CTTT)/CD71-72(+A)双重杂合子;上述2例胎儿出生及引产后的基因分析验证结果与产前基因诊断完全一致。结论:等位基因特异性PCR能准确地对β-地中海贫血高风险胎儿进行产前基因诊断,对预防重型β-地中海贫血患儿的出生具有重要意义。     

聚合酶链反应在胸部结核诊断中的应用

应用聚合酶链反反(Polgmerase chain reaction,PCR)技术检测胸部结核患者的痰液和胸水,并与抗酸染色方法进行对比。结果两种方法在47例患者中两种标本的阳性率分别为:77.4％、58.83％和11.43％、8.33％,两者差异具有非常显著性,P<0,01显示PCR具有较高的特异性和灵敏性,值得推广应用。     

聚合酶链式反应结合寡核苷酸探针产前基因诊断β-地中海贫血

用聚合酶链式反应体外选择性扩增β-珠蛋白基因的两个片段后,经与~(32)P中标记的寡核苷酸探针进行斑点印迹杂交及放射自显影检测,对3例具有β-地中海贫血(地贫)纯合子风险胎儿进行了产前基因诊断,查明1例为β-地贫杂合子β~(17(A—T))/β~A;另2例分别为β~(17(A—T))/β~(-28(A—G))和β_(71-72(+A))/β_(41-42(-4bp))的复合杂合子。     

恶性血液病降钙素基因高度甲基化PCR方法检测

最遑研究发现，大部分淋巴瘤及白血病降钙素基因５’端可发生高度甲基化。异常的ＤＮＡ片段经ＨＰａⅡ消化后可以测到。笔者建立了ＰＣＲ法可敏感地检测各种恶性血液病降钙素基因的高度甲基化，用以阐明ＰＣＲ半定量甲基化的量与存在的白血病细胞数之间的关系。     

地中海贫血高危妊娠胎儿产前绒毛,羊水中巨细胞病毒DNA的 …

目的 了解地中海贫血高危妊娠胎儿宫内人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染状况。方法 应用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）对４７例地中海贫血高危妊娠胎儿前绒毛组织、羊水细胞ＤＮＡ进行回顾性人巨细胞病毒ＤＮＡ（ＨＣＭＶ－ＤＮＡ）检测。结果 产前绒毛组织２９例,检出ＨＣＭＶ－ＤＮＡ２例,阳性率为６。９％;羊水细胞１８例,检出ＨＣＭＶ－ＤＮＡ１例,阳性率为５．６％。结论 地中海贫血高危妊娠胎儿与本地区的正常人群一样,产     

聚合酶链反应在诊断淋球菌感染中的应用价值

采用直接涂片法、细菌培养法和聚合酶链反应法检测临床标本２５７人份，其淋球菌检出率分别为２７．２３％、１３．６１％和３７．０４％。经统计学处理，ｘ＾２＝３７．８１，Ｐ〈０．０１，有高度显著性差异。聚合酶链反应法诊断淋病具有灵敏度高、特异性强、能自动化操作、简便快速、标本易贮存和运送等优点，为淋病的快速诊断提供了一种新的检测方法。本文还对三种检测淋球菌方法的优缺点进行了比较，并对聚合酶链反应方法的适应     

聚合酶链反应技术在淋病诊断及治愈判定中的价值

目的：探讨聚合酶链反应技术（PCR）在淋病诊断及治愈判定中的价值。方法：应用PCR和淋球菌培养法平行检测74例STD门诊疑诊为淋病患者的标本,并对34例确诊患者进行治疗后的随访检测。结果：74例疑诊患者中,两种方法均检出淋球菌的有54例,均阴性的6例,PCR阳性而培养法阴性的14例,PCR阴性而培养法阳性的0例。以PCR和培养法检测结果为“扩大金标准”,则PCR的敏感性为100％（68／68）,显著高于培养法的（79．41％）;两者的特异性均为100％（6／6）。对34例确诊患者进行治疗后随访检测结果显示：PCR检测的阴转时间平均33．4±8．7天,明显延迟于培养法（平均6．3±1．8天）。结论：PCR诊断淋病具有高敏、特异、快速的优点,但在治愈判定中的价值不如培养法。PCR阴转则表明病情已愈,有临床意义。     

聚合酶链反应技术早期诊断关节结核

目的：早期诊断关节结核。方法：应用聚合酶链反应技术对３３例共３８个关节的关节液行结核杆菌检测;同时将所取关节液抗酸染色涂片镜检,以病理诊断为金标准并比较基华 病理确诊的关节结核有１７个,其中ＰＣＲ法与涂片法出的阳怀数分别为１２个和３个,ＰＣＲ法的灵敏度为７０．６％,而涂片法仅为１７．６％,经统计学处理差异有显著性意义。３８个关节中,ＰＣＲ法与涂法检出的阳性数分别为１４个和５个,ＰＣＲ法和涂片法的     

用聚合酶链反应技术探测人载脂蛋白AI基因多态性

用聚合酶链反应(PCR)技术扩增载脂蛋白(Apo)AⅠ基因第3个内含子中包括MspⅠ多态位点在内的总长307bp DNA片段,观察中国汉族健康人、高脂血症和冠心病患者Apo AⅠ基因多态性。结果表明,中国汉族人种Apo AⅠ基因Msp Ⅰ多态性与白种人不同,M_2等位基因属常见等位基因,而白种人为罕见等位基因。高脂血症和冠心病患者M_2等位基因频率与健康人无差异。     

利用聚合酶链反应扩增红细胞生成素基因片段

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增红细胞生成素（ＥＰＯ）基因片段时，通过用３２Ｐ－ｄＣＴＰ取代反应体系中的ｄＣＴＰ，直接合成３２Ｐ标记的ＥＰＯ基因探针．以此为探针经斑点印迹杂交技术证实慢性肾功能衰竭贫血大鼠肾脏ＥＰＯ因表达活性增强。