HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因联合诱导人宫颈癌Ca Ski细胞的凋亡

目的：观察HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因体外共转染，联合诱导人宫颈癌CaSki细胞凋亡的效应。方法：HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因的质粒载体分别以单独或联合的方式转染入宫颈癌CaSki细胞，随后利用RT—PCR技术检测细胞中HPV-16E6癌基因的mRNA水平变化；Western blot分析细胞中抑癌蛋白p53水平的变化；流式细胞技术分析细胞凋亡情况。结果：经HPV-16 E6 siRNA和hIL-24转染后细胞后HPVE6癌基因的mRNA水平均下降，其中联合转染组显著下降（P〈0，05）；抑癌蛋白p53水平均增高，其中联合转染组显著增高，细胞凋亡率均升高，其中联合转染组显著升高（P〈0．05）。结论：HPV-16 E6siRNA与hIL-24基因分别转染宫颈癌CaSki细胞后，均能抑制CaSki细胞中HPV-16E6癌基因的表达，使抑癌蛋白p53恢复活性，诱导宫颈癌CaSki细胞凋亡；两者联合别具有协同效应，能显著提高肿瘤细胞凋亡率。     

VPA-BSANPs对胶质瘤细胞系放射生物效应

目的 研究纳米VPA-BSANPs复合物对C6、U87胶质瘤细胞系的体外放射生物效应。方法 C6、U87细胞分别经不同浓度VPA、VPA-BSANPs作用12、24 h后MTT法检测群体细胞存活率,经不同浓度VPA、VPA-BSANPs联合X线0、2、4、6、8 Gy照射后克隆形成实验检测PE值,经不同浓度VPA、VPA-BSANPs作用12 h后X线0、4、8 Gy照射应用Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡情况。应用蛋白免疫印迹方法检测VPA、VPA-BSANPs对射线诱导细胞凋亡蛋白表达影响。多组均数检验方差齐性后用单因素方差分析,两样本均数间进行t检验。结果 VPA、VPA-BSANPs对C6、U87胶质瘤细胞并无明显增殖抑制作用(P=0.328、0.920);VPA-BSANP联合照射的PE值明显低于VPA联合照射(P=0.000)。C6、U87细胞VPA-BSANPs联合照射的p53、Bax表达增加(C6细胞P=0.000、0.000和U87细胞P=0.010、0.002),Bcl-2表达降低(C6细胞P=0.008、U87细胞P=0.000)。Caspase-3激活片段仅见于VPA-BSANPs+照射、VPA+照射,且前者低于后者(P=0.004)。PPAR激活片段仅见于VPA-BSANPs+照射。结论 VPA-BSANPs可增加C6、U87胶质瘤细胞系放射生物效应,其机制与定向促进X线诱导的肿瘤细胞凋亡有关。     

放射线对鼻咽癌细胞周期阻滞、凋亡和抑癌基因p57^kip2表达的影响

目的：研究放射线对鼻咽癌细胞（CNE）周期阻滞、凋亡和抑癌基因p57^kip2蛋白表达的影响。方法：运用流式细胞术检测放射线诱导的细胞周期阻滞、凋亡；运用免疫组织化学法和Westernblot法检测抑癌基因p57^kip2蛋白的表达。结果：照射后，CNE细胞G1期无明显阻滞，S期出现短暂堆积，G2／M期阻滞强度具剂量和时间依赖性，随照射剂量增加，其阻滞程度增强，阻滞时间延长，G2／M期阻滞在12、24h与照射剂量呈正相关（P〈0．01），随照射后时间延长而增强，峰值出现于12Gy24h；凋亡发生率与照射剂量和照射后时间均呈正相关（P〈0．01）。p57^kip2蛋白表达在照射后随照射剂量的增加和照射后时间的延长均呈现上调（P〈0．01）。结论：放射线对鼻咽癌细胞G2／M期阻滞、凋亡率和抑癌基因p57^kip2蛋白表达均有明显的增强作用。     

全反式维甲酸对大鼠C6脑胶质瘤细胞分化的影响

目的：探讨全反式维甲酸对大鼠C6脑胶质瘤细胞分化的影响。方法：建立大鼠C6脑胶质瘤模型,腹腔注射全反式维甲酸后,流式细胞仪检测细胞增殖时相变化及免疫组化检测p27Kipl蛋白和GFAP蛋白的变化。结果：流式细胞仪检测显示治疗组较对照组G1期细胞比例增加（P〈0．05）,S期细胞比例减少（P〈0．05）,免疫组化检测显示p27Kipl蛋白和GFAP蛋白的表达增加（P〈0．05）。结论：反式维甲酸可诱导大鼠C6脑胶质瘤分化,降低肿瘤恶性程度。     

p16基因蛋白治疗胶质瘤的实验观察

[目的]探讨p16抑癌基因蛋白在体内对胶质瘤的治疗作用.[方法]将实验大鼠分成4组:对照组(接种C6胶质瘤细胞)、空载体组(接种C6胶质瘤细胞后再注射空载体cDNA)、治疗组(接种C6胶质瘤细胞后再注射p16混悬液)、转染组(接种已转染p16基因的C6胶质瘤细胞),每组大鼠各10只.对各组大鼠生态情况及生存期进行观察比较,并对各组大鼠进行动态MRI检测,标本进行免疫组化、原位杂交检测.[结果]转染组和治疗组大鼠生存时间较对照组明显延长.MRI检测显示与对照组比较,治疗组大鼠肿瘤生长缓慢,转染组大鼠肿瘤形成不良.免疫组化显示对照组大鼠肿瘤组织p16蛋白表达阴性,但治疗组和转染组大鼠肿瘤组织p16蛋白表达明显.[结论]动物实验表明p16蛋白具有抑制胶质瘤细胞生长作用.     

肿瘤转移抑制基因编码蛋白在癌患者外周血中的表达

目的　探讨肿瘤转移抑制基因编码蛋白在癌患者外周血细胞中的表达规律。方法　采用流式细胞术对 173例各种癌患者外周血nm2 3 +、DCC +、p16+和p5 3V +细胞检出率进行检测。结果　恶性肿瘤患者外周血nm2 3 +、DCC +和p16+细胞检出率均显著低于正常对照 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ,但分布各有不同 ;而p5 3V +细胞检出率显著高于正常对照组 (P <0 .0 5 )。癌转移者外周血nm2 3 +、DDC +和p16+的表达水平显著低于未转移者 (P <0 .0 1)或P <0 .0 5 ) ,而p5 3V则相反。结论　恶性肿瘤能使患者外周血细胞的肿瘤转移抑制基因抑编码蛋白表达水平出现明显异常 ,而这种异常表达与恶性肿瘤转移的关系十分密切 ;不同肿瘤患者异常表达的肿瘤转移抑制基因类型有一定的倾向性。     

苦参碱诱导胶质瘤C6细胞凋亡及其可能的基因机制

摘 要 目的: 探讨苦参碱诱导C6胶质瘤细胞凋亡的作用特点和可能的基因作用机制。 方法：MTT法测定不同浓度苦参碱对C6细胞增殖的抑制率，求出IC50值；倒置显微镜及透射电镜观察苦参碱诱导C6细胞凋亡的形态学改变；Annexin/FITC染色流式细胞术检测不同浓度苦参碱诱导C6细胞的凋亡率；实时定量PCR芯片（Realtime PCR Array）检测苦参碱作用后C6细胞凋亡相关基因的差异表达；免疫细胞化学及Western blotting方法检测苦参碱对C6细胞caspase3表达的影响。结果：苦参碱对C6细胞增殖的抑制率随着药物剂量的增加（0.1~1.0 mg/ml）而增加（P<005），其IC50为0.715 mg/ml。倒置显微镜观察显示苦参碱可诱导胶质瘤细胞出现凋亡改变，透射电镜观察显示苦参碱诱导胶质瘤细胞出现凋亡的超微形态改变，流式细胞术检测显示胶质瘤细胞的凋亡率随着药物剂量的增加（0.2~1.0 mg/ml）而增大[(3.56±0.73)%~(27.55±1.92)%](P<0.05)。胶质瘤细胞经苦参碱作用后出现显著表达差异基因共68个，其中57个基因表达明显上调、11个基因表达明显下调，其中有22个基因与诱导凋亡的死亡受体相关，15个基因与线粒体途径有关；ICC及Western blotting检测都显示苦参碱可诱导C6胶质瘤细胞caspase3表达的上调(P<0.05)。 结论：苦参碱能诱导C6胶质瘤细胞的凋亡，其机制与死亡受体途径和线粒体途径的众多基因有关。     

p16影响乙肝病毒相关性肝细胞肝癌的发生

目的　探讨乙肝病毒 (HBV)基因整合和p16基因表达改变及其与肝细胞肝癌发生发展的关系。方法　 35例肝癌及癌旁肝组织为标本 ,采用聚合酶链式反应 (PCR)及Southernblot检测HBVX基因整合 ,以单链构象多态性分析确定p16基因突变 ,以RT PCR检测p16mRNA ,以Westernblot检测p16蛋白。结果　肝癌中X基因整合与p16mRNA及蛋白表达相关 (P <0 .0 5 ) ,肝癌及癌旁肝组织中p16蛋白表达缺失率分别为 6 2 .9%和 4 0 .0 % ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;癌组织中p16蛋白表达缺失与肝癌分化程度、癌细胞浸润有相关性 (P <0 .0 5 )。结论　X基因整合与p16蛋白缺陷有关 ,p16改变在肝细胞癌变各阶段发挥重要作用 ,并与肝癌的演进和侵袭有关。     

内外源性p53诱导大鼠胶质瘤细胞C6 RGS16蛋白的表达

目的:探讨内外源性野生型p53是否可以诱导大鼠胶质瘤细胞C6 RGS16表达.方法:在大鼠胶质瘤细胞C6中,分别转染pEGFP-C3-wt p53或以400ng/ml表阿霉素诱导内源性野生型p53表达,于处理后0h.4h、8h、16h、26h、32h和52h收集细胞爬片、固定后免疫细胞化学检测p53蛋白与RGS16蛋白表达.结果:转染pEGFP-C3-wt p53后4h、8h、16h、26h和32h时均检测到p53蛋白表达,在8h和16h时检测到RGS16蛋白表达;在400ng/ml表阿霉素处理后,仅在26h时检测到p53表达而始终未见到RGS16蛋白表达.结论:内外源性野生型p53可以诱导大鼠胶质瘤细胞G6 RGS16蛋白的表达.     

125IUdR偶联c-myb反义寡核苷酸对大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖的影响及其相关机制

目的:探讨125IUdR偶联c-myb反义寡核苷酸对C6脑胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法:60只大鼠随机余数法分成对照组、c-myb-ASODN处理组和125IUdR-ASODN处理组。MTT和TUNEL法检测各组大鼠肿瘤细胞增殖抑制率和凋亡率;免疫组化法检测Bax和Bcl-xl蛋白表达;RT-PCR法检测BaxmRNA和Bcl-xlmRNA含量;Western-blot法检测c-myb蛋白表达。结果:125IUdR-ASODN处理组C6胶质瘤细胞的增殖抑制率和细胞凋亡率(69·81%和11·03%)增高均较c-myb-ASODN处理组(40·37%和6·48%)增高,P均<0·01;与对照组凋亡率(0·95%)比较,差异有统计学意义,P均<0·01。c-myb-ASODN处理组和125IUdR-ASODN处理组C6胶质瘤细胞的Bax蛋白194·6±6·25增高及Bcl-xl蛋白59·0±3·56下降较ASODN组Bax蛋白147·4±5·23增高及Bcl-xl蛋白83·9±3·93下降,P均<0·01;125IUdR-ASODN和ASODN处理组BaxmRNA表达随着时间延长而显著升高,Bcl-xlmRNA及c-myb蛋白表达随着时间延长而显著下降,P均<0·01;且125IUdR-ASODN的作用明显强于c-myb-ASODN,P<0·01。结论:c-myb-ASODN和125IUdR-ASODN均具有促进C6胶质瘤细胞凋亡和抑制其增殖的作用,且125IUdR-ASODN的作用更为显著;c-myb-ASODN和125IUdR-ASODN可能通过Bax/Bcl-xl途径诱导C6胶质瘤细胞凋亡,其对Bax和Bcl-xl的调节发生在转录水平前的某一环节。     

局部热化疗对鼠胶质瘤肿瘤细胞凋亡及其耐药的研究

 目的　探讨局部热化疗对大鼠胶质瘤凋亡、耐药和肿瘤微血管的作用。方法　将C6 细胞接种于大鼠背部皮下 ,肿瘤生长至 1 .5～ 2cm直径时 ,分组进行局部热疗、化疗和热化疗。观察皮下肿瘤生长情况 ;用S P免疫组化法检测bax、bcl 2和 p gp蛋白表达 ;用HE染色法、电镜、TUNWL法观察凋亡 ;电镜观察肿瘤微血管的变化。结果　热疗、化疗、热化疗组较对照组瘤体缩小 ,瘤重减轻 (P <0 .0 0 1 ) ;bax蛋白表达增强 (P <0 .0 0 1 ) ,且热化疗组较单纯热疗和化疗组均增强 (P <0 .0 0 1 ) ;bcl 2蛋白表达改变不明显 (P >0 .0 5 ) ;化疗组 p gp表达增强 (P <0 .0 0 1 ) ,热疗和热化疗组 p gp表达减弱 (P <0 .0 0 1 ) ;细胞凋亡指数增大 (P<0 .0 0 1 ) ;热化疗组出现核染色质凝聚 ,凋亡小体 ;肿瘤微血管外径变小 ,管壁变厚 ,血管减少 ,有的血管甚至只能发现完整的基膜而缺乏内皮细胞。结论　 (1 )热疗化疗、热化疗能抑制肿瘤增殖 ,促进bax蛋白表达 ,使bcl 2 /bax减小 ,诱导细胞凋亡 ,且热...     

Histone deacetylase inhibitor 4-phenylbutyrate suppresses GAPDH mRNA expression in glioma cells

The histone deacetylase (HDAC) inhibitor 4-phenylbutyrate (4-PB) is a non-toxic compound that can induce differentiation and promote maturation of various types of malignant cells. In the present study we show that 4-PB inhibit glioma cell proliferation, induce apoptosis and decrease mRNA expression of glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) in a concentration-dependent manner. Proliferation of established rat glioma cell lines (RG2 and C6) in culture was significantly decreased after treatment with 4-PB (2-40 mM). Low concentrations of 4-PB (2-20 mM) induced cell differentiation followed by apoptosis, whereas higher concentrations of 4-PB (40 mM) induced cell necrosis. Also, low concentrations of 4-PB significantly decreased GAPDH mRNA expression in C6 and RG2 rat glioma cells, suggesting a link between decreased cell proliferation, energy consumption, and down-regulation of GAPDH gene expression. We have found that GAPDH mRNA expression is markedly increased in human glioblastoma tissues. Therefore, the novel effect of 4-PB described here may offer means to suppress growth of glioma cells by diminishing the key reaction in glycolysis as a therapeutic approach for cancer.     

Hyperthermia Promotes Apoptosis and Suppresses Invasion in C6 Rat Glioma Cells

Gliomas are a group of heterogeneous primary central nervous system tumors. Hyperthermia has provento be a potential therapeutic tool for cancers in the clinic. However, the molecular mechanisms of hyperthermiaremain unclear. The objective of this study was to investigate the effects of hyperthermia on the invasivenessin C6 glioma cells and related molecular pathways. Here our data show hyperthermia stimulated the release oftumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and decreased C6 glioma cell migration and invasive capability at 30, 60,120 and 180 min; with increased spontaneous apoptosis in C6 glioma cells at 120 min. We also found mitogenactivatedprotein kinase (P38 MAPK) protein expression to be increased and nuclear factor-kappa B (NF-κB)protein expression decreased. Based on the results, we conclude that hyperthermia alone reduced invasion ofC6 glioma cells through stimulating TNF-α signaling to activate apoptosis, enhancing P38 MAPK expressionand inhibiting the NF-κB pathway, a first report in C6 rat glioma cells.     

土槿皮乙酸诱导大鼠神经胶质瘤C6细胞株凋亡

目的:研究土槿皮乙酸诱导大鼠神经胶质瘤C6细胞株凋亡及其机制.方法:采用MTT法检测0、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80 μmol/L不同终浓度PAB对C6细胞增殖能力的影响,激光扫描共聚焦显微镜观察AO/EB荧光染色后细胞的凋亡情况,流式细胞术检测碘化丙啶(PI)染色后细胞周期的变化,免疫组化法测定C6细胞的凋亡相关蛋白Bcl-2的表达.结果:MTT结果显示,PAB呈时间剂量依赖性抑制C6细胞的生长.PAB处理24、48和72 h后,对C6细胞的半效致死剂量(IC50)分别为39.811、23.306和7.360 μmol/L.5.0、10.0、20.0 μmol/L PAB作用C6细胞72 h后的凋亡率分别为(50.5±0.7)%、(63.5±2.3)%和(80.0±1.2)%,与对照组(12.0±1.6)%比较均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).流式细胞仪检测结果显示5.0、10.0、20.0 μmol/L不同浓度PAB作用C6细胞72小时后,随着浓度的增加,G2/M期细胞逐渐增多,分别为(29.84±6.215)%,(34.58±1.187)%和(70.23±6.325)%,与对照组(7.79±0.570)%相比,后两组差异有统计学意义(P<0.05).C6细胞中Bcl-2蛋白阳性表达率随药物剂量的增大而减小.结论:PAB可抑制大鼠神经胶质瘤C6细胞增殖,阻滞细胞周期于G2/M期、下调Bcl-2表达为其可能的作用机制.     

冷冻联合 5-氟尿嘧啶对 G422胶质瘤细胞凋亡的影响

背景与目的冷冻与 5-氟尿嘧啶( 5-FU)均能诱导胶质瘤细胞凋亡,二者联合应用能否产生协同效应尚未知.本实验旨在观察冷冻联合 5-FU对胶质瘤细胞凋亡的影响,并对其内在的分子机制进行探讨.方法( 1)建立 G422胶质瘤动物模型,随机分组,分别施以冷冻 (- 180℃, 90 s)、化疗( 5-FU 18 mg/kg)、冻化疗;( 2) TUNEL法观察不同时间点各组细胞凋亡的变化;( 3)免疫组化方法检测冷冻后 HSP90α及 p53蛋白的表达.结果冷冻与 5-FU均能引起肿瘤细胞凋亡,二者联合应用后细胞凋亡率明显增加;联合组于冻化疗后 6、 12 、 24、 48、 72 h细胞凋亡数(每 0.0625 mm2范围内的细胞个数)分别为 30.6± 11.7、 86.4± 21.5、 128.1± 4.1、 237.0± 30.1、 72.8± 23.0,均明显多于冷冻组和化疗组.冷冻中心区无 HSP90α和 p53的阳性表达,冷冻后周边区表达比对照组高,尤以冻后 48 h最为明显 [分别为( 73.1± 9.3)% vs( 60.6± 9.9)%、( 35.6± 6.6)% vs( 13.7± 6.5)%( P< 0.01) ].冻后 HSP90α与 p53 的表达呈正相关( r=0.3610,P< 0.01).结论冷冻联合 5-FU能够明显提高 G422胶质瘤的细胞凋亡率,其发生机制可能与冷冻后 HSP90α与 p53表达调节有关;冷冻与化疗的联合应用较单纯冷冻或化疗作用恶性胶质瘤效果更为明显.     

外源性RGS16基因稳定转染对胶质瘤C6细胞生长的影响

背景与目的:有研究表明野生型p53可以诱导RGS16表达,而RGS16可能与胶质瘤的发生有关。本研究旨在探讨RGS16基因转染对大鼠胶质瘤C6细胞生长的影响。方法:构建真核表达载体pIRES2-EGFP-RGS16,脂质体法转染C6细胞,经G418筛选后荧光显微镜观察细胞中增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorscentprotein,EGFP)的表达,RT-PCR证实RGS16的mRNA表达,免疫细胞化学方法检测细胞中RGS16蛋白表达。最后利用流式细胞仪、生长曲线、平板克隆形成等方法研究RGS16基因对胶质瘤细胞周期、生长及增殖的影响。结果:成功构建了稳定表达RGS16和表达空载体的细胞系C6-RGS16、C6-GFP。C6-RGS16、C6-GFP和C6经流式细胞仪检测S期的细胞比例分别为28.5%、18.9%和14.3%(P<0.05);生长曲线表明C6-RGS16生长的速度明显快于C6-GFP及C6,但其平板克隆形成率分别为12%、25%和25%(P<0.05)。结论:RGS16促进C6细胞周期从G1期向S期过渡,加快细胞生长速度,但是并不促进细胞克隆形成。     

冷冻诱导大鼠C6脑胶质瘤细胞发生凋亡的实验研究

目的:通过观察大鼠C6脑胶质瘤经冷冻后出现细胞凋亡,探讨冷冻对肿瘤的杀伤机制。方法:建立大鼠C6脑胶质瘤颅内接种模型,通过TUNEL法及流式细胞仪分别检测其冷冻后凋亡数目及凋亡率。结果:肿瘤经冷冻后,其中心出现坏死,而周边细胞呈现典型的凋亡形态学改变。TUNEL法检测冻后24、48和72h凋亡数目0.323、0.00167和0.037;流式细胞仪检测其冻后24、48和72h凋亡率与对照组相比,P值分别为0.0254、0.0064和0.031;冻后各时间点凋亡数目及凋亡率均显著高于对照组,P<0.05。其中冻后48h改变尤其明显,P<0.01,峰值时间出现在冷冻24～48h。结论:诱导细胞凋亡也是冷冻杀伤肿瘤细胞的重要机制之一,但其发生的分子机制有待于进一步深入研究。     

全反式维甲酸诱导大鼠C6脑胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的: 探讨全反式维甲酸对大鼠C6脑胶质瘤细胞的增殖抑制及其分子机制。 方法: MTT法检测全反式维甲酸作用于大鼠C6脑胶质瘤细胞后,观察其对细胞增殖抑制率的影响。流式细胞仪观察肿瘤细胞周期及凋亡率的变化。电镜观察C6细胞超微结构变化。Western blot法在不同时间点对凋亡相关基因caspase-3活性蛋白产物的表达进行了检测。 结果: MTT结果表明ATRA对C6细胞的抑制作用具有时间和浓度依赖性。流式细胞仪检测证明与对照组相比,处理组C6细胞发生G₁期阻滞;S、G₂期细胞比例下降;细胞出现亚二倍峰,凋亡比例明显增加。电镜下全反式维甲酸作用72h后处理组C6细胞呈凋亡改变:如核固缩、染色质趋边凝聚。Western blot检测发现,处理组出现了caspase-3蛋白活性裂解片段。 结论: 全反式维甲酸抑制C6脑胶质瘤细胞生长,全反式维甲酸抑制脑胶质瘤的作用机理可能至少通过改变细胞周期分布、诱导凋亡来实现。