经典名方桃红四物汤化学指纹图谱及9种成分含量测定研究

目的建立15批桃红四物汤汤剂化学指纹图谱及多指标成分含量测定方法,为桃红四物汤经典名方的质量控制及评价提供参考。方法采用Thermo Hypersil Gold C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0m L/min,柱温30℃,检测波长225nm;建立HPLC指纹图谱,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2012A版)进行相似度分析,结合聚类分析评价15批样品的化学信息差异。进一步通过HPLC多成分波长切换法,测定样品中9种指标成分的含量,采用SIMCA 14.1软件进行偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA),以寻找样品间的质量差异成分。结果建立了15个批次桃红四物汤汤剂HPLC指纹图谱,相似度均0.96,并确认35个共有锋,指认出没食子酸、绿原酸、苦杏仁苷、芍药内酯苷、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、苯甲酰芍药苷、藁本内酯10个色谱峰(分别对应2、8、9、13～16、25、31、32号色谱峰)。含量测定显示,没食子酸、5-羟甲基糠醛、绿原酸、芍药内酯苷、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、洋川芎内酯Ⅰ 9种成分线性关系良好(r≥0.999 6),含量测定结果分别为187.5～344.4、6.2～154.8、413.2～459.2、507.5～923.5、873.8～1 202.0、2 122.3～2 782.9、59.2～121.3、6.4～26.9、38.9～79.6μg/g,其中以芍药苷、羟基红花黄色素A、芍药内酯苷等成分含量较高;更进一步将15批不同产地的样品分为3类。通过PLS-DA分析含量测定结果,发现芍药苷、芍药内酯苷、羟基红花黄色素A和5-羟甲基糠醛是影响不同批次桃红四物汤汤剂质量贡献较大的4种成分。结论 HPLC指纹图谱结合多指标成分含量测定方法适用于桃红四物汤复方制剂的质量控制与评价。     

基于特征图谱与5种成分含量的经典名方桃红四物汤量值传递分析

目的 探索桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction,TSD)药材-饮片-水煎液-基准样品的全过程质量传递规律,为其经典名方制剂质量控制研究提供基础。方法 制备15批TSD水煎液、基准样品,建立水煎液、基准样品超高效液相色谱(ultraperformanceliquidchromatography,UPLC)特征图谱,并采用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法测定5种指标性成分的含量,计算各成分在药材-饮片-水煎液-基准样品传递过程中的转移率。结果 15批TSD水煎液和基准样品的特征图谱,相似度均>0.9,共归属20个共有峰,经与对照品比对指认出11个色谱峰,分别为没食子酸、地黄苷D、苦杏仁苷、绿原酸、芍药苷、羟基红花黄色素A、阿魏酸、毛蕊花糖苷、槲皮素、苯甲酰芍药苷、藁本内酯。5种成分在水煎液、基准样品中的质量分数分别为地黄苷D0.26~0.46、0.11~0.30mg/g,阿魏酸0.33~0.51、0.09~0.18mg/g,芍药苷1.07~2.43、0.48~1.49mg/g,苦杏仁苷1.66~2.31、0.60~1.58mg/g,羟基红花黄色素A0.98、0.26~0.44mg/g。药材至饮片、饮片至水煎液、水煎液至基准样品的平均转移率分别为地黄苷D101.50%、55.44%、64.11%;阿魏酸94.31%(当归药材至饮片)、93.91%(川芎药材至饮片)、37.24%、35.61%;芍药苷111.55%、72.80%、63.48%;苦杏仁苷117.34%、91.78%、64.60%;羟基红花黄色素A93.64%、60.23%、34.19%。结论 采用UPLC特征图谱结合5种成分的HPLC含量测定,分析TSD药材-饮片-水煎液-基准样品的量值传递规律,为TSD经典名方制剂开发和质量控制提供科学基础。     

基于Box-Behnken设计-响应面法与质量综合评价优化经典名方桃红四物汤煎煮工艺

目的 遵古优化和科学评价桃红四物汤（Taohong Siwu Decoction,TSD）的煎煮工艺,为其经典名方中药复方制剂研究奠定基础。方法 以指纹图谱概貌结合多指标定量为综合评价,采用Box-Behnken设计-响应面设计对加水量、浸泡时间、煎煮时间、煎煮次数进行优化。指纹图谱研究采用SunFire-C₁₈色谱柱（150 mm×3.0 mm,3.5 μm）,流动相为乙腈-0.5%磷酸水溶液,体积流量为0.2 mL/min,柱温为25℃,检测波长为230 nm;建立HPLC指纹图谱,对色谱信息进行主成分分析,进一步建立UPLC多波长检测方法测定6个关键质控成分含量,计算各样品综合得分,通过响应面法进行工艺优化。结果 建立了29个试验号TSD UPLC指纹图谱,选择16个共有峰,指认出地黄苷D、苦杏仁苷、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、藁本内酯共6个成分。主成分分析提取出4个主成分,综合得分结果显示15号工艺为最佳工艺。含量测定显示,地黄苷D、苦杏仁苷、芍药苷、阿魏酸、藁本内酯、羟基红花黄色素A 6种成分线性关系良好,综合得分结果显示,15号工艺为最佳工艺。进一步根据回归模型拟合,得到最优工艺为加水量9.90倍、浸泡时间0.58 h、煎煮时间1.19 h、煎煮次数1.60次,最终确定TSD煎煮工艺为加10倍量水,浸泡0.5 h,煎煮2次,每次1 h。结论 指纹图谱质量概貌结合关键质控成分可作为TSD制备工艺的质量评控方法,得出的最佳煎煮工艺稳定可行,可用于经典名方TSD复方制剂进一步研究开发。     

基于HPLC指纹图谱和多成分含量测定的辽藁本质量评价研究

目的 建立辽藁本的HPLC指纹图谱及多成分含量测定方法.方法采用Thermo AcclaimTM 120 C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);以乙腈(A)-0.1％甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0mL/min;检测波长280 nm;柱温为30℃,同时测定15批辽藁本指纹图谱及相关成分...     

基于质量源于设计(QbD)理念的经典名方桃红四物汤的提取工艺研究

目的 基于质量源于设计理念,优化经典名方桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction,TSD)的提取工艺.方法 以出膏率及芍药苷、阿魏酸、羟基红花黄色素A的提取率作为TSD提取工艺的关键质量属性(critical quality attributes,CQAs),筛选关键工艺参数(critical proc...     

基于HPLC多指标成分测定及指纹图谱多模式识别的不同产地不同品种当归质量差异分析

目的 建立当归Angelicae sinensis的HPLC指纹图谱并测定其主要有效成分的含量,结合多种化学计量学分析,确定不同产地不同品种(岷归1号、岷归2号)当归差异成分,为当归药材质量控制提供参考。方法 采用HPLC法建立不同品种当归的指纹图谱,并对指标成分进行含量测定。采用相似度评价、聚类分析(cluster analysis,CA)、因子分析、主成分分析(principal component analysis,PCA)、正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)、Fisher线性判别分析进行数据分析。结果 HPLC指纹图谱共标定了不同品种当归中的16个共有峰,指认出绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯、藁本内酯、丁烯基苯酞8个色谱峰。岷县产区当归的2个品种当归间存在差异的成分是绿原酸(P<0.01)、洋川芎内酯I(P<0.01)、洋川芎内酯H(P<0.01)、藁本内酯(P<0.01)和丁烯基苯酞(P<0.05),渭源产区的是洋川芎内酯I(P<0.01)、洋川芎内酯H(P<0.01)、洋川芎内酯A(P<0.01)、藁本内酯(P<0.01);临洮产区的是绿原酸(P<0.01)、阿魏酸(P<0.01)、阿魏酸松柏酯(P<0.01)、丁烯基苯酞(P<0.05);通渭产区的是阿魏酸(P<0.01)、洋川芎内酯H(P<0.05)、洋川芎内酯A(P<0.05)、藁本内酯(P<0.01)。结论 建立的HPLC指纹图谱结合含量测定、CA、因子分析、PCA、OPLS-DA分析可以客观、全面、有效地确定不同产地不同品种当归中主要有效成分的差异,可为当归品种鉴别及质量控制提供有力支撑。     

基于网络药理学和分子对接探究经典名方桃红四物汤异病同治作用机制

目的以经典名方桃红四物汤养血、活血、逐瘀功效为核心,通过构建"成分-靶点-通路-疾病"作用网络探讨其临床异病同治的作用机制。方法利用生物科学与网络药理学平台、蛋白数据库和String数据库收集桃红四物汤化学成分及其相关靶点数据,建立"成分-靶点"作用网络;基于筛选得到的靶点,对桃红四物汤治疗的疾病进行关联分析,建立"靶点-疾病"网络;进而开展基因本体论(gene ontology,GO)和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析桃红四物汤治疗疾病的关键通路;同时将筛选得到的关键有效成分和核心靶点进行分子对接验证,综合探讨桃红四物汤在临床上异病同治的复杂作用网络。结果从桃红四物汤中筛选出40个活性化合物,其中32个成分涉及221个相关靶点、286种相关疾病。其中阿魏酸、山柰酚、槲皮素、丹皮酚、芍药苷、藁本内酯、咖啡酸能匹配到较多靶点。预测到桃红四物汤可治疗疾病主要包括3大类,分别为癌症相关疾病(乳腺癌、前列腺癌等)、心血管疾病(高血压、心肌梗死、心脏衰竭)、神经系统疾病;核心靶点蛋白涉及RAC-α丝氨酸/苏氨酸...     

基于组方药味古今炮制工艺的经典名方桃红四物汤质量差异性研究

目的对比研究桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction,TSD)组方药味分别为生品、药典"酒炙"和尊古"酒洗"时的质量差异性,辨识差异标志物。方法使用Eclipse Plus C18色谱柱(150 mm×3.0 mm,1.8μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,进行梯度洗脱,检测波长为230 nm,柱温30℃,体积流量0.3 mL/min,进样体积10μL,建立UPLC指纹图谱。采用中药指纹图谱相似度评价系统确定共有峰,进行相似度评价,运用层次聚类分析(hierarchical cluster analysis,HCA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)和偏最小二乘-判别分析(partial least square-discriminant analysis,PLS-DA)对不同组别的TSD进行质量评价,筛选出对TSD整体质量贡献较大的成分,并进行含量测定,评价组方药味不同炮制工艺对TSD质量的影响。结果选取了20个色谱峰作为指纹图谱共有峰,生品、药典"酒炙"和尊古"酒洗"组内相似度均大于0.996,组间相似度均小于0.980。通过与对照品比对,指认出5-羟甲基糠醛(3号峰)、没食子酸(4号峰)、绿原酸(7号峰)、羟基红花黄色素A(8号峰)、芍药内酯苷(9号峰)、芍药苷(10号峰)、阿魏酸(14号峰)、苯甲酸(17号峰)共8个成分。HCA、PCA和PLS-DA可明显将生品、药典"酒炙"和尊古"酒洗"分为3类,5-羟甲基糠醛、阿魏酸、羟基红黄色素A等成分可能是影响三者质量的差异标志物。含量测定显示,羟基红花黄色素A和阿魏酸在炮制后含量下降,5-羟甲基糠醛在炮制后升高,且相对于药典"酒炙",尊古"酒洗"后羟基红花黄色素A和阿魏酸含量增加,5-羟甲基糠醛含量降低。结论 TSD组方药味生品、药典"酒炙"以及尊古"酒洗"间存在质量差异,值得深入研究;为经典名方组方药味炮制研究提供依据。     

基于UPLC指纹图谱和网络药理学的当归炮制前后差异质量标志物研究

目的 筛选当归Angelicae Sinensis Radix炮制前后差异特征成分，建立当归炮制前后差异质量标志物（quality markers,Q-Marker）的定量分析方法，为当归和当归炭Angelicae Sinensis Radix Carbonisata的质量评价提供依据。方法 采用UPLC法分别构建当归和当归炭的指纹图谱，运用化学模式识别技术筛选当归炭炮制前后的主要差异成分，结合中药Q-Marker“五原则”和网络药理学分析筛选潜在的差异Q-Marker，并进行定量分析。结果 15批当归UPLC指纹图谱共标定19个共有峰，当归炭UPLC指纹图谱共标定10个共有峰，指认7个成分。采用主成分分析（principal component analysis,PCA）可明显区分当归和当归炭；偏最小二乘法-判别分析（partial least squares method-discriminant analysis,PLS-DA）辨识出影响当归与当归炭差异的10个主要色谱峰，按VIP值大小排序依次为峰23、22、10、16、7、3、2、1、4、11。结合中药Q-Marker“五原则...     

基于指纹图谱结合化学模式识别对狗脊药材的质量评价

目的 采用指纹图谱结合聚类分析（hierarchical clustering analysis,HCA）、主成分分析（principal component analysis,PCA）和偏最小二乘法-判别分析（partial least squares discriminant analysis,PLS-DA）等进行化学模式识别，对狗脊药材指纹图谱数据进行分析，筛选特征性指标成分并以此建立狗脊有效成分的定量分析，为狗脊质量控制提供科学依据。方法 采用Agilent Eclipse XDB-C18柱（250 mm×4.6mm,5.0μm），以甲醇-1%醋酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，体积流量为1.0 mL/min，柱温为30℃，检测波长为280 nm,HPLC法建立9个产地16批样品狗脊的指纹图谱，运用相似度分析、HCA、PCA和PLS-DA等化学模式识别技术筛选出不同产地狗脊化学成分的特征成分作为狗脊有效成分，并定量分析。结果 16批狗脊HPLC指纹图谱标定10个共有峰，相似度在0.695～0.954；通过HCA、PCA和PLS-DA较好的区分各产地狗脊，综合分析筛选5-羟甲基糠醛、...     

ISC-HPLC法同时测定桃红四物汤中酚类物质

目的 建立离子抑制高效液相色谱(ISC-HPLC)法测定桃红四物汤中酚类物质的方法.方法 采用ISC-HPLC法测定桃红四物汤中羟基红花黄色素A、阿魏酸、没食子酸、原儿茶酸和绿原酸的量,分光光度法测定桃红四物汤中总酚酸的量.结果 桃红四物汤中羟基红花黄色素A、阿魏酸、没食子酸、原儿茶酸和绿原酸分别在5.00～80.00、1.25～20.00、0.60～9.60、0.90～14.40、1.00～16.00 μg/mL与峰面积呈良好线性关系;平均回收率分别为98.50%、97.17%、97.17%、98.45%、97.16%(n=9).结论 ISC-HPLC方法简便、准确、快速、重复性好,可用于桃红四物汤中酚类物质的质量控制.     

基于HPLC指纹图谱结合化学模式识别及多成分定量的蒲公英质量评价研究

目的 建立蒲公英的HPLC指纹图谱及多成分含量测定方法,优化指纹图谱测定条件,结合化学模式识别法对不同产地蒲公英进行质量评价,为蒲公英质量控制提供参考。方法 采用Box-Behnken响应面分析法优化蒲公英主要有效成分的制备工艺。采用Mars ODS-AQ色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）;以甲醇-0.2%磷酸水溶液（35∶65）为流动相,等梯度洗脱;体积流量为1mL/min;检测波长323nm;进样量10μL;柱温30℃;检测时间为12min;对10个不同产地的30批蒲公英建立HPLC指纹图谱,并对5个成分含量进行测定,通过相似度评价、聚类分析及主成分分析对蒲公英质量进行评价。结果 蒲公英主要有效成分的最佳制备工艺为料液比1∶55、甲醇体积分数72%、超声温度80℃、超声时间79min,在此条件下OD值为0.93。建立了蒲公英HPLC指纹图谱,30批蒲公英的相似度在0.647～0.980,标定6个共有峰,指认出5个色谱峰。单咖啡酰酒石酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、菊苣酸质量分数分别为0.426%～1.856%、0.007%～0.117%、0.023%～0.101%、0.003%～0.025%、0.311%～1.412%。聚类分析将10个产地的蒲公英分为4类,主成分分析结果表明哈尔滨和沈阳产地的质量较优,并确定单咖啡酰酒石酸、绿原酸、咖啡酸和菊苣酸可作为蒲公英质量评价的主要指标。结论 确定了蒲公英主要有效成分最佳制备工艺,提取率远高于药典方法。建立的蒲公英指纹图谱结合多成分含量测定及化学模式识别法准确、高效、全面地评价蒲公英质量,为蒲公英的质量控制提供依据。     

BP神经网络结合熵权法多指标优化四物汤水提工艺

目的通过BP神经网络结合正交试验多指标优化四物汤水提工艺。方法以加水量、提取时间、提取次数为考察因素,在R语言环境下用熵权法计算5-羟甲基糠醛、绿原酸、咖啡酸、芍药苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、洋川芎内酯A、藁本内酯8种有效成分多指标综合得分作为评价指标,先采用正交试验设计,再建立BP神经网络模型,通过网络训练,预测四物汤最优水提工艺。结果优化得到的四物汤水提工艺条件为加8倍量水,提取3次,每次1 h,检验样本的网络预测值和实际测量值的相对误差小于1%。结论建立的数学模型可对四物汤水提工艺进行分析和预测,所得工艺稳定可行,可高效提取四物汤中的有效成分。