急性缺血性脑卒中的内源性保护蛋白

急性缺血性脑卒中是当今世界致死和致残最主要的原因之一,并发症多且发病率高[1]。目前研究发现,诸多内源性神经保护因子参与了其中的病理生理过程,其中包括内源性保护蛋白,通过内源性神经保护阻止神经元死亡或凋亡,限制缺血性脑组织损伤。现就近年来在急性脑缺血中研究较多的内源性保护蛋白及其作用机制做一综述。     

重组 GST-β-GT 融合蛋白的原核表达、纯化及活性鉴定

目的：构建噬菌体β‐GT蛋白的原核重组体系,诱导表达、纯化GST‐β‐GT 融合蛋白并对其进行酶活性测定。方法利用PCR技术从T4噬菌体中扩增β‐GT基因;经T‐A克隆,获得β‐GT基因片段,经酶切连接,构建原核表达载体pGEX‐6P‐1‐β‐GT ;经测序鉴定序列正确后,将所构建的载体转化进入大肠埃希菌BL21（DE3）中进行表达。利用IPTG诱导,经10％ SDS‐PAGE鉴定目的蛋白表达后,采用GST柱纯化目的蛋白;通过酶切和qPCR鉴定其活性。结果成功扩增了噬菌体β‐GT基因;重组质粒在大肠埃希菌BL21（DE3）中诱导表达出GST‐β‐GT融合蛋白;通过GST柱纯化后获得了GST‐β‐GT融合蛋白,纯度达95％;通过酶切和qPCR验证,此GST‐β‐GT融合蛋白具有T4‐β‐GT酶的活性。结论。原核表达GST‐β‐GT融合蛋白具有糖基转移酶活性。     

秦艽对脑缺血的保护作用及机制研究进展

秦艽含有多种活性成分,具有抗炎症反应、抗氧化应激、抗细胞凋亡等作用,是中医药治疗缺血性脑卒中的高频使用药物,本文综述了秦艽对缺血性脑卒中的保护作用及其机制,为秦艽及其制剂治疗缺血性脑卒中提供理论依据。     

pTAT-XIAP融合蛋白的原核表达及纯化

目的将X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)插入质粒pTAT-HA,构建pTAT-XIAP原核表达载体,以获得高产量、高纯度的pTAT-XIAP融合蛋白。方法将pTAT-XIAP融合蛋白表达载体转入大肠杆菌BL21plysS,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,产物经镍离子亲和层析柱(Ni-NTA)亲和层析纯化,并用Western blot方法鉴定。结果 pTAT-XIAP融合蛋白在大肠杆菌中获得表达,纯化后蛋白呈单一条带,表达产物经Western blot分析证实目的蛋白表达。结论构建重组融合表达载体,在大肠杆菌中成功表达并纯化pTAT-XIAP融合蛋白。     

GST-hS100A9融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定

目的制备GST-hS100A9融合蛋白。方法从pHAHA-hS100A9中PCR扩增获取hS100A9基因,亚克隆至原核表达载体pGST-moluc,构建pGST-hS100A9;后者转化BL21菌后,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组菌表达融合蛋白GST-hS100A9,经谷胱甘肽-琼脂糖4B球珠(GS4BB)分离纯化、SDS-PAGE及Western blot鉴定,BCA法蛋白定量,CCK-8测定GST-hS100A9对乳腺癌细胞MCF-7增殖的作用。结果经酶切、测序分析证实pGST-hS100A9质粒构建正确;重组菌株经IPTG诱导后,表达相对分子质量约36 000的蛋白;纯化后纯度达94%;该蛋白可被S100A9的抗体特异识别;该蛋白产量约为20 mg/L菌液;且其抑制MCF-7的增殖。结论成功构建GST-hS100A9融合蛋白的原核表达质粒pGST-hS100A9;该质粒可在BL21中诱导表达GST-hS100A9,产率高,且对MCF-7增殖有抑制作用。     

缺血性脑卒中神经保护药物及其潜在分子靶点的研究进展

缺血性脑卒中的急性期治疗目前以溶栓治疗为主,但单纯以溶栓为主的治疗,不能改善患者的缺血-再灌注损伤。血供恢复后如何提高神经元的存活率、改善神经功能是临床缺血性脑卒中的治疗重点。本文综述针对缺血性脑卒中患者神经功能恢复的药物以及潜在的分子靶点的研究进展。     

芦丁神经保护作用的研究现状

芦丁是广泛存在于植物中的黄酮醇配体,具有抗氧化、抗炎、降压、维持血管弹性和神经保护等多种药理活性,在心脑血管疾病的治疗与预防起到至关重要的作用,有望可以改善或预防脑血管病、神经退行性病变及其他神经系统疾病.本文根据近年来的体内、外实验研究结果,综述了芦丁在缺血性脑卒中、阿尔茨海默病、帕金森病、抗癫痫和抗抑郁发挥脑神经保...     

HCBP12融合蛋白的表达、纯化及多抗制备

目的：构建丙型肝炎病毒核心抗原结合蛋白12（HCVCore binding protein,HCBP12）原核表达载体,在大肠埃希菌中进行表达、纯化HCBP12融合蛋白并制备兔抗HCBP12多克隆抗体。方法：应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）,以提取的HepG2细胞mRNA为模板,扩增获得HCBP12基因片段,插入至原核表达载体pET-32a（＋）中,构建原核表达载体pET-32a（＋）-HCBP12,转化大肠埃希菌BL21,以异丙基硫代β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导,获得HCBP12融合蛋白的可诱导性表达,并通过SDS-PAGE电泳、Western Blot免疫印迹分析和证实融合蛋白表达的特异性。利用Ni＋亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性。纯化蛋白免疫新西兰兔,获得抗HCBP12多克隆抗体。以纯化HCBP12为抗原,利用Western blot和ELISA法对多克隆抗体进行特异性和效价检测。结果：HCBP12融合蛋白表达成功。SDS-PAGE分析表明其为包涵体表达。成功获得了融合蛋白纯品及兔抗HCBP12多克隆抗体。ELISA法表明多克隆抗体效价〉1512000,Western blot检测证明多克隆抗体的特异性良好。结论：成功表达、纯化HCBP12融合蛋白,并获得高特异性、高效价兔抗HCBP12多克隆抗体,为研究HCBP12蛋白的生物学功能及丙肝的临床治疗提供了重要的实验工具。     

人融合蛋白基因GST-hPBD的构建、表达与纯化

为构建和纯化融合蛋白基因GST-hPBD，采用RT-PCR方法克隆与活化Racl相结合的hPBD基因片段，构建pGEX-2T／hPBD原核表达载体，于大肠杆菌中诱导表达并纯化GST-hPBD融合蛋白。结果表明，经基因测序证实融合蛋白原核表达载体pGEX-2T／hPBD构建正确，在大肠杆菌中GST-hPBD融合蛋白表达纯度大于70％，其分子量为36 kD；Pull down分析检测到血管内皮ECV304细胞表达活化Racl蛋白。本研究结果为检测血管内皮细胞活化Racl表达奠定了实验基础。     

尼莫地平辅助治疗对急性缺血性脑卒中患者神经保护作用的影响

目的 探讨尼莫地平辅助常规治疗对急性缺血性脑卒中患者神经保护作用的影响.方法 将60例急性缺血性脑卒中患者随机分成观察组与对照组,对照组给予常规西药对症治疗,观察组在对照组基础上加用尼莫地平.观察两组患者临床疗效、CRP 、TNF-α及S100B蛋白的变化以及神经功能缺损评分（NDS）和生活质量评分（ADL）.结果 观察组总有效率、ADL评分明显高于对照组（P＜0.05）,治疗后CRP 、TNF-α 、S100B蛋白、NDS评分明显低对照组（P＜0.05）.结论 尼莫地平辅助常规治疗急性缺血性脑卒中可明显提高临床疗效,改善神经功能状态,提高患者生活质量.     

Design,preparation and activity evaluation of novel recombinant thrombolytic proteins

Recombinant tissue plasminogen activator (rPA) has been used as a thrombolytic agent. However, considerable improvements have been done to prolong its plasma half-life (t_1/2) and reduce its side effects, such as intracranial hemorrhage. Based on these improvements, a mutant of rPA, mrPA, was designed by mutating its PAI-1 binding site to extend its t_1/2. Furthermore, a fusion protein conjugating mrPA with NR3 was designed, which was a rAcAp5 mutant with a platelet GPIIb/IIIa-binding RGD motif, to enhance the ability of targeted-thrombus and thrombolysis. The synthesized DNA sequences coding the two proteins were amplified by PCR, cloned into pET30a to construct recombinant plasmids pET30a-mrPA and pET30a-mrPA-NR3, and transformed into E. coli BL21 (DE3). The two proteins were expressed in inclusion bodies induced by isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside. After purified to qualified purity using one-step Ni affinity chromatography, the denatured proteins were refolded by dialysis. Their thrombolytic effects in vitro and in vivo were evaluated. In vitro 3.5 and 7 μmol/L of mrPA significantly reduced thrombus weight; 1.75, 3.5 and 7 μmol/L of mrPA-NR3 also significantly reduced the thrombus weight, and mrPA-NR3 displayed stronger thrombolytic effects than mrPA at 7 μmol/L. In vivo both mrPA and mrPA-NR3 showed significantly thrombolytic effect at 60−240 μmol/kg in thrombolytic model of inferior vena cava. Importantly, mrPA-NR3 exhibited more potent thrombolytic effect than both mrPA and rhM-tPA (positive control) at 240 μmol/kg. In addition, these two novel proteins did not increase bleeding time while they exerted thrombolytic effect. In conclusion, we engineered two novel proteins and proved that fusion protein had better thrombolytic effect than non-fusion protein, and the results suggest that dual thrombolytic mechanism or thrombus-target potentiated the thrombolytic effect of rPA and alleviated hemorrhage side reaction. This study may shed light on the development of novel thrombolytic agents with targeted thrombolysis and reduced side effects.     

重组组织纤溶酶原激活剂静脉溶栓治疗80岁以上老年患者急性缺血性中风的安全性及有效性分析

目的研究重组组织纤溶酶原激活剂(rt-PA)静脉溶栓(IVT)治疗急性缺血性中风的安全性及有效性。方法选取2013年4月至2015年12月于我院收治的急性缺血性脑卒中患者188例为研究对象。根据是否接受IVT治疗,将年龄≥80岁接受rt-PA(0.9 mg/kg)静脉溶栓患者定义为老年IVT组,将年龄≥80岁未接受静脉溶栓患者定义为老年非IVT组;根据年龄大小将接受静脉溶栓患者分为老年IVT组(≥80岁)及年轻IVT组(<80岁)。记录患者的颅内出血情况及治疗后24 h、3个月、6个月的显效率及7 d病死率。结果治疗后1、90、180 d,老年IVT组患者的显效率均高于老年非IVT组(P<0.05)。老年IVT组患者的7 d病死率略低于老年非IVT组,但差异无统计学意义(P>0.05)。老年IVT组、年轻IVT组的颅内出血发生率及显效率比较差异无统计学意义(P>0.05),且均无死亡病例。结论重组组织纤溶酶原激活剂静脉溶栓能够有效治疗80岁以上老年患者急性缺血性中风,且不增加患者的颅内出血发生率及病死率。     

尼莫地平联合脑蛋白水解物治疗脑梗塞的疗效比较

目的 观察尼莫地平联合脑蛋白水解物治疗脑梗塞的临床疗效.方法 将96例脑梗塞患者随机分为尼莫地平组和联合用药组,各48例,两组在给予常规治疗上,尼莫地平组给予口服尼莫地平治疗;联合用药组给予尼莫地平＋脑蛋白水解物治疗,比较两组患者神经功能、日常生活能力恢复情况和临床疗效.结果 与尼莫地平组比较,联合用药组可以显著改善患者神经功能的恢复情况（P＜0.05）,提高日常生活能力（P＜0.05）和临床疗效（P＜0.05）.结论 尼莫地平联合脑蛋白水解物治疗脑梗塞,可以显著提高患者生存质量,临床疗效显著.     

针刺结合早期康复训练对缺血性脑卒中患者运动功能、日常生活能力的影响

目的评价针刺结合早期康复训练对缺血性脑卒中患者运动功能、日常生活能力的影响。方法选取2011年3月-2013年9月本院收治的缺血性脑卒中患者77例,将患者随机分为两组,其中观察组39例选用针刺结合早期康复训练进行治疗,对照组38例仅选用早期康复训练进行治疗,4周后观察并比较两组患者的神经功能缺损评分、运动功能以及日常生活能力。结果治疗后,观察组的神经功能缺损评分低于对照组,运动功能、日常生活能力评分高于对照组（P〈0.05）。结论针刺结合早期康复训练治疗缺血性脑卒中的临床效果好,能够显著提高患者的运动功能与日常生活能力,值得临床推广。     

颈部血管彩超对急性缺血性卒中患者的评价

目的颈部血管彩超对急性缺血性卒中患者前循环脑动脉粥样硬化进行评价,并讨论其临床意义。方法选择患急性前循环脑梗死（影像检查证实）患者在发病后2周内完成颈部血管彩超检查,记录侧颈总动脉/颅外段颈内动脉不同回声斑块出现情况、斑块大小以及不同程度动脉狭窄出现情况。结果CT/MRI阳性侧CCA/EICA和阴性侧比较,CCA/EICA不同回声斑块大小及出现率无统计学差异;50%以下和50%～70%CCA/EICA狭窄出现率两侧无明显差别,70%～90%和90%以上狭窄出现率CT/MRI阳性侧均大于CT/MRI阴性侧。结论颈部血管彩超提示CCA/EICA70%以上狭窄,可以帮助确定急性缺血性卒中＂罪犯动脉＂。     

缺血性脑卒中患者颈动脉粥样硬化相关因素分析

目的：探讨和分析缺血性脑卒中患者颈动脉粥样硬化的相关因素。方法：对缺血性脑卒中患者在发病后24小时内抽取血清测定C反应蛋白（C-reactiveprotein，CRP）水平，应用颈动脉彩色超声多普勒检查这些患者的颈动脉内膜-中层厚度（1MD，根据超声检查结果分为斑块组（IMT≥1．2mm）与无斑块组（1MT〈1．2mm）。结果：颈动脉斑块组患者血CRP水平增高例数多于无斑块组（P〈0.05）。该组患者的年龄明显高于正常组（P〈0．01），伴有高血压及糖尿病的例数也明显高于无斑块组（P〈0.01,P〈0.05）。两组血白细胞计数比较差异无显著性（P〉0.05）。结论：血清CRP水平增高对反映缺血性脑卒中患者颈动脉粥样硬化病变有显著临床意义。     

制剂新技术在多肽、蛋白质类药物给药系统研究中的应用

目的 介绍制剂新技术在多肽、蛋白质类药物给药系统研究中的应用。方法 综述了多肽、蛋白质类药物的性质特点和影响其稳定性的原因;制剂新技术在多肽、蛋白质类药物给药系统中的运用;对LHRH及其类似物和胰岛素两类药物的新型制剂研究进行了概述。结果 脂质体、微乳和复乳、微球、纳米粒、自控式释药技术等制剂新技术广泛应用于多肽、蛋白质类药物给药系统中,取得了较大进展;黄体激素释放激素(LHRH)及其类似物和胰岛素两类药物的新剂型研究具有代表性且引人注目。结论 将制剂新技术用于多肽、蛋白质类药物给药系统的研究,有着广阔的应用前景。     

两种具有双功能活性蝎毒蛋白融合体的构建

目的首次报道利用东亚钳蝎镇痛抗肿瘤缬精甘肽-BmKAGAP产生两种不同的融合蛋白,目的是获得镇痛和抗肿瘤的双功能活性。方法融合蛋白是以嵌合毒素的形式进行构建,由三部分组成,包括促性腺激素释放激素(luteinizing hormone-releasing hormoneL,HRH),两种不同类型的柔性连接物,以及BmKAGAP。克隆编码两种融合蛋白的基因并在大肠杆菌中实现可溶性表达。通过金属离子螯合亲和层析和阳离子交换层析方法对融合蛋白分离纯化,采用小鼠醋酸扭体法和MTT法测定融合蛋白的镇痛活性与细胞抑制活性。结果融合蛋白在小鼠模型中体现出镇痛活性(rLHRH-Tag(His)AGAP>rTag(His)-LHRH-L8-AGAP>rBmKAGAP),同时对肝癌细胞株Hep3B具有细胞毒活性(rLHRH-Tag(His)-AGAP>rBmKAGAP>rTag(His)-LHRH-L8-AGAP)。结论得到优化的双功能融合蛋白候选者为嵌合毒素rLHRH-Tag(His)-AGAP。     

Design, synthesis, and preliminary activity evaluation of novel peptidomimetics as aminopeptidase N/CD13 inhibitors

The synthesis of a series of novel N-α-galloylated isoglutamic acid γ-amide peptidomimetics is described. Their enzymatic inhibition against aminopeptidase N (APN/CD13) and matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) was tested. The preliminary activity assay revealed that most of the compounds displayed selective inhibition against APN as compared with MMP-2, with IC(50) values in a micromolar range. Within this series, compound 4 (IC(50) = 10.2 ± 0.9 μM) demonstrated comparable APN inhibition as compared with the positive control bestatin (IC(50) = 13.1 ± 0.7 μM), which might be a promising lead for further molecular optimizations.