PARP-1抑制剂与其他药物联用克服耐药性的研究进展

聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)在DNA修复和细胞凋亡中发挥着至关重要的作用,PARP-1抑制剂在肿瘤治疗领域取得了突破性的进展,但耐药性的出现限制了其在临床上的进一步应用。本文就PARP-1抑制剂与其他药物联用克服耐药性的研究进展进行了综述,重点介绍了临床上现有的药物组合方法及其疗效,并对药物联用策略进行了评价与展望,提出双靶点或多靶点药物的开发将成为克服PARP-1抑制剂耐药性、拓宽适应证的新思路。     

PJ34对卵巢癌C13~*细胞生长活性及耐药性的影响

目的探讨聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶-1[Poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1]抑制剂PJ34对卵巢癌耐药细胞株C13*细胞生长活性及耐药性的影响。方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)及流式细胞术检测PJ34对C13*细胞顺铂敏感性、凋亡和周期的影响;免疫荧光及蛋白印迹法(Western blot)检测PJ34处理前后PARP-1的表达情况。结果 C13*细胞增殖抑制率及对顺铂的敏感性随顺铂及PJ34浓度的增加而增强(P<0.05);细胞凋亡率随PJ34浓度的增加而增高(P<0.05);周期为PJ34浓度越高,G0/G1期细胞越多,S期细胞越少;PJ34可下调细胞中PARP-1的表达,顺铂与PJ34合用后,PARP-1蛋白表达量明显降低(P<0.01)。结论 PJ34能显著下调C13*细胞内PARP-1表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,增加细胞对顺铂的敏感性,有效逆转C13*细胞对顺铂的耐药性。     

PARP-1及其抑制剂在卵巢癌治疗中的研究进展

卵巢癌早期症状隐匿,临床发现时多属于疾病晚期,其死亡率在妇科恶性肿瘤中最高。聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1(PARP-1)在卵巢癌中高表达,它与卵巢癌的发展、侵袭和预后有密切联系。PARP-1抑制剂可与存在同源重组修复缺陷的肿瘤细胞发生协同致死作用,但不会杀伤正常细胞,若抑制PARP-1介导的单链DNA修复将导致DNA开始半保留复制,随后造成双链DNA损伤,从而导致细胞死亡。因此,PARP-1成为目前卵巢癌靶向治疗的热点。未来,应进一步研究PARP-1及其抑制剂的作用机制和它们的代表药物在卵巢癌中的靶向治疗。     

PARP-1抑制剂5-AIQ联合依托泊苷对PC3细胞增殖的影响

目的研究多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)抑制剂5-氨基异喹啉酮(5-AIQ)联合化疗药物依托泊苷(VP16)对雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞株增殖的影响。方法 MTS比色法观察不同浓度5-AIQ联合VP16对PC3细胞的增殖抑制作用,并应用WesternBlot法检测应用5-AIQ或VP16及二者联合应用对PC3细胞内PARP-1蛋白表达的影响。结果 MTS结果显示,与单独应用VP16(5μmol/L、25μmol/L或125μmol/L)比较,联合应用5-AIQ(125μmol/L或500μmol/L)可以明显增强VP16对PC3细胞的增殖抑制作用,组间差异均有统计学意义(P<0.05)。而且当5-AIQ与低剂量VP16(5μmol/L)联合应用时可以达到与高剂量VP16(25μmol/L或125μmol/L)类似甚至更强的增殖抑制作用。WesternBlot结果显示,与对照组比较,5-AIQ(250μmol/L)或VP16(50μmol/L或100μmol/L)均可以明显下调PC3细胞内源性PARP-1的表达(P<0.05)。与二者单一处理组(5-AIQ,250μmol/L)或(VP16,50μmol/L)相比,二者联合应用可进一步下调PARP-1的表达水平。结论 PARP-1抑制剂5-AIQ可以明显增强VP16对PC3细胞的增殖抑制作用,该作用可能与PARP-1蛋白的表达抑制有关。     

局部进展期直肠癌PARP-1表达与临床转归的关系

目的 探讨局部进展期直肠癌聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)表达与临床转归的关系.方法 选取2008年1月至2012年11月浙江大学医学院附属邵逸夫医院收治的中低位局部进展期直肠癌患者50例,所有患者接受术前新辅助放化疗+全直肠系膜切除术+术后辅助化疗.取患者治疗前肠镜活检肿瘤组织标本,采用免疫组化SP染色法检...     

PARP-1基因多态性与临夏回族自治州回族人群胃癌易感性的关联研究

目的探讨聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)Val762Ala的单核苷酸多态与临夏回族自治州回族人群胃癌易感性的关系。方法采用病例-对照研究设计,研究对象为临夏回族自治州居民(20岁以上,居住满20年以上,3代无族外通婚)。分两组:胃癌组200例,均经组织学确诊。对照组210例,按年龄、性别进行匹配的无肿瘤史的健康回族志愿者。抽提血液DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)进行基因分型。使用ELISA(enzyme-linkedimmunosorbent assay)法检测血浆中H.pylori的IgG抗体,以检测研究对象是否有H.pylori感染。用SPSS 13.0统计软件分析试验结果。结果 PARP-1 762Val/Ala+Ala/Ala在胃癌组显著增高(OR:2.158,95%CI:1.404～3.315,P=0.020)。交互作用分析显示:家族史阳性的Val/Ala+Ala/Ala基因型患胃癌的风险是家族史阴性的Val/Val基因型的4.125倍(OR:4.125,95%CI:2.117～8.038,P=0.000);食腌菜的Val/Ala+Ala/Ala基因型患胃癌的风险是不食腌菜的Val/Val基因型的3.814倍(OR:3.814,95%CI:2.150～6.766,P=0.000);H.pylori感染阳性的Val/Ala+Ala/Ala基因型患胃癌的风险是H.pylori感染阴性Val/Val基因型的4.085倍(OR:4.085,95%CI:2.197～7.597,P=0.000)。结论 PARP-1 Val762Ala单核苷酸多态与临夏回族自治州回族人群胃癌易感性增高相关。PARP-1 Val/Ala+Ala/Ala基因型分别与家族史、食腌菜、H.pylori感染在胃癌的发病风险中存在着加乘交互效应。     

低剂量氢醌对大鼠骨髓间充质干细胞生物学性状及PARP-1表达的影响

目的：探讨低剂量氢醌(HQ)对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）生物学性状及聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)基因表达的影响,阐明低剂量HQ对骨髓的毒效应。方法：磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以PBS处理组为对照组,分别以2.5、5.0和10.0 μmol•L^-1 HQ染毒大鼠BMSCs为处理组。应用Cell Counting Kit-8试剂盒检测细胞活力和细胞增殖能力,通过磷脂结合蛋白(Annexin V) /碘化丙啶(PI)标记的流式细胞技术检测细胞凋亡,用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PARP-1基因表达的改变。结果：与PBS对照组比较,各剂量组细胞增殖能力明显提高(P<0.05);染毒48 h后,5.0和10.0 μmol•L^-1 HQ组细胞的凋亡率均明显降低(P<0.05);染毒48 h后,2.5、5.0和10.0 μmol•L^-1 HQ组细胞PARP-1表达量分别为对照组0.92、0.56(P<0.05)和0.45倍(P<0.05)。结论：低剂量HQ能抑制大鼠BMSCs凋亡和PARP-1基因表达,促进细胞增殖。     

卵巢癌化疗前后肿瘤组织中PARP-1的表达及其与细胞上皮间质转化的相关性

目的:研究卵巢癌化疗前后肿瘤组织中PARP-1的表达及其与细胞上皮间质转化的相关性。方法:选择在本院接受紫杉醇联合卡铂方案(TC方案)化疗的晚期卵巢癌患者,化疗前和化疗后4个周期时分别采集肿瘤组织,测定PARP-1、上皮间质转化标志分子、血管新生分子的mRNA表达量。结果:化疗后,卵巢癌组织中PARP-1、Snail、ZEB1、N-cadherin、Vimentin、VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2、Ang-2、Tie-2的mRNA表达量显著低于化疗前,E-cadherin的mRNA表达量显著高于化疗前;化疗后PARP-1低表达卵巢癌组织中Snail、ZEB1、N-cadherin、Vimentin、VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2、Ang-2、Tie-2的mRNA表达量显著低于PARP-1高表达卵巢癌组织,E-cadherin的mRNA表达量显著高于PARP-1高表达卵巢癌组织。结论:TC方案化疗能够通过抑制卵巢癌病灶内PARP-1的表达来抑制上皮间质转化及血管新生过程。     

肠缺血再灌注损伤程度与PARP-1活性变化相关性的实验研究

目的研究大鼠肠缺血再灌注后肠损伤程度与聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1（PARP-1）激活程度的相关关系,探索肠缺血再灌注后PARP-1过度激活的水平。方法通过阻断腹腔干和肠系膜上动脉后恢复血运,制作鼠肠缺血再灌注模型,按不同缺血时间分组,再灌注2h后,处死动物取材,分别作HE染色、聚腺苷二磷酸核糖（PAR）的免疫组化染色,用TUNEL方法检测组织细胞凋亡情况,用Westernblot检测凋亡早期信号PARP-1片段p85和凋亡诱导因子（AIF）的表达情况。结果随着缺血时间的延长,肠损伤程度和PAR表达阳性率呈显著增高（P〈0.05）且二者呈正相关（r=0.924,P〈0.01）。PAR表达阳性率在20%左右时,凋亡早期信号PARP-1p85片段、AIF表达和TUNEL阳性率较假手术组显著升高（P〈0.05）;PAR表达阳性率在40%左右时,细胞坏死和组织损伤显著增加（P〈0.05）。结论在大鼠肠缺血再灌注损伤中,肠损伤程度与PARP-1激活程度呈正相关,PARP-1激活率在20%左右时,组织损伤以细胞凋亡为主;PARP-1激活率在40%左右时,组织损伤以细胞坏死为主。     

聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶-1在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的 检测聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)在子宫内膜异位症患者在位内膜和异位内膜组织中的表达,并探讨PARP-1与E-cadeherin、vimentin和Snail在子宫内膜异位症患者内膜中表达的相关性.方法 采用免疫组织化学SP法检测PARP-1、E-cadeherin、vimentin和Snail在子...     

Effects of poly （ADP-ribose） polymerase inhibitor on early peripheral neuropathy in streptozotocin-diabetic rat

Objective： To explore the effects and mechanisms of poly （ADP-ribose） polymerase （PARP） inhibitor 3-aminobenzamide on nerve lesions in streptozotocin-diabetic rats. Methods： Experimental rats were divided into normal control group（NC group）, diabetic control group （DC group ）and diabetic group treated with 3-aminobenzamide （DT group ）.Nerve conduction velocity （NCV）, serum superoxide dismutase （SOD） activity and serum malondialdehyde （MDA） concentration,phosphocreatine （Pcr） ,creatine （Cr） concentration in sciatic nerves were evaluated after 4 weeks. Results： SOD,Pcr activity,and NCV were higher （P 〈 0.05） and MDA concentration were significantly lower in DT group, compared with DC group （P 〈 0.01 ）. Meanwhile, ATP and Cr in sciatic nerves were similar in DT group, compared with DC group （P 〉 0.05）. Conclusion： 3-aminobenzamide could alleviate the established functional and metabolic abnormalities of early DPN in the streptozotocin-induced diabetic rat models,which pro- vided a novel approach for prevention and treatment of diabetic neuropathy.     

Effects of adenovirus delivered tissue inhibitor of metalloproteinases transfection on biological behaviors of cervical cancer cell lines

OBJECTIVE: To explore the effects of adenovirus delivered tissue inhibitor of metalloproteinases-3 (Ad-TIMP-3) on the biological behaviors of cervical cancer cell lines and to evaluate its potential application in cervical cancer gene therapy. METHODS: We transferred Ad-TIMP-3 into cervical cancer cells. The TIMP-3 mRNA expression was assessed by RT-PCR, and the TIMP-3 and p53 protein expressions were assessed with Western blot. The apoptotic changes of cells were illustrated with morphology and DAPI staining. The viability of cells was determined with MTT assay. The abilities of in vitro invasion and adhesion were evaluated by the invasion and adhesion assays respectively. RESULTS: After infection, the TIMP-3 mRNA and protein were significantly upregulated in a time-dependent manner. Overexpression of TIMP-3 markedly increased p53 protein level in spite of the backgrounds of p53 gene in cells. Ad-TIMP-3 infection induced massive apoptosis of cervical cancer cells with a marked bystander effect. The abilities of in vitro invasion and adhesion were inhibited significantly (P < 0.01). The cytotoxicity of Ad-TIMP-3 was significantly stronger than that of Ad-p53 (P < 0.05, P < 0.01). CONCLUSIONS: Ad-TIMP-3 infection has cytotoxic effects on cervical cancer cells and can inhibit the expressions of these malignant phenotypes. Ad-TIMP-3 may be a potentially useful agent for cervical cancer gene therapy.     

大肠癌细胞PARG、PARP 与AKT磷酸化状态的关系

目的:聚(腺苷二磷酸核糖)水解酶[Poly(ADP-ribose) glycohydrolase,PARG]可通过影响聚(腺苷二磷酸核糖)聚合酶[Poly(ADP-ribose) polymerase, PARP]和蛋白激酶B[protein kinase B,AKT]磷酸化在炎症中发挥重要作用,但在肿瘤中的作用却不清楚.本研究则对大肠癌细胞系LOVO中PARG、 PARP、NF-κB和AKT磷酸化的相互关系进行了初步探讨.方法:Western blot法检测LOVO细胞PARG、PARP、NF-κB、AKT和PI-AKT473的蛋白表达.以丹宁酸为PARG抑制剂. 结果:PARG抑制剂丹宁酸处理组LOVO 细胞PARG、PARP、NF-κB表达降低,而PI-AKT473表达则增强,较对照组(无丹宁酸处理组)比较差异均具有显著意义(P=0.006 8,P<0.000 1,P <0.05,P=0.000 8).且PARG和PARP蛋白的表达呈正相关(r=0.823 8,P<0.05),PARG和PI-AKT473的蛋白表达呈负相关(r=-0.819 0,P<0.05). 结论:在大肠癌细胞株中,抑制PARG可以下调PARP和NF-κB,并可增强AKT的磷酸化.其在肿瘤浸润转移中,可能具有重要作用.     

低氧对非小细胞肺癌细胞PDHA1表达及生物学行为的影响

目的:观察低氧对非小细胞肺癌细胞丙酮酸脱氢酶E1α亚单位(PDHA1)表达及生物学行为的影响。方法:肺鳞状细胞癌细胞株LC-42和肺腺癌细胞株SELS分别在常氧及低氧条件下培养6 d,每天计数细胞,绘制生长曲线,计算细胞倍增时间。两种细胞分别在低氧和常氧条件下培养72 h,采用Transwell侵袭实验测定细胞侵袭能力,采用克隆形成实验观察克隆形成能力,采用Western blot法检测细胞中PDHA1蛋白的表达水平。采用Pearson相关分析低氧条件下两种细胞PDHA1蛋白表达与穿膜细胞数及克隆形成率的相关性。结果:与常氧组相比,低氧组的两种细胞株均出现生长缓慢、细胞倍增时间延长,体外侵袭能力及克隆形成能力增强,PDHA1蛋白表达降低(P<0.05)。LC-42、SELS缺氧组细胞中PDHA1蛋白的表达与穿膜细胞数及克隆形成率均呈负相关(LC-42:r=-0.951、-0.758,SELS:r=-0.803、-0.791,P均<0.05)。结论:低氧导致肺鳞状细胞癌及腺癌细胞PDHA1蛋白表达下降,恶性生物学行为增强。     

ＰＡＲＰ-１抑制剂在游离脂肪酸诱导胰岛细胞凋亡中的作用

目的:探讨PARP-1抑制剂3-氨基苯酰胺(3-Aminobenzamide,3-AB)在游离脂肪酸棕榈酸诱发的胰岛细胞凋亡和坏死中的作用.方法:常规培养RIN-m5F细胞株,采用四甲基偶氮唑盐(MTY)比色法观察棕榈酸和PARP-1抑制剂3-AB作用后细胞的增殖情况,并用流式细胞术及TUNEL法分析细胞凋亡和坏死.结果:棕榈酸明显抑制RIN-m5F细胞的增殖(P<0.01);低浓度3-AB与棕榈酸共同孵育24 h后细胞的凋亡率和坏死率显著低于棕榈酸单独培养(P<0.01);高浓度3-AB与棕榈酸共同孵育后较棕榈酸单独培养时细胞凋亡率显著性增强(P<0.01).结论:低浓度3-AB能有效抑制棕榈酸所诱导的胰岛细胞株RIN-m5F细胞坏死,缓解细胞凋亡;而高浓度3-AB则促进细胞凋亡.进一步说明了3-AB在棕榈酸所诱导的胰岛细胞凋亡过程中具有双重作用,此可为2型糖尿病的治疗提供一个新的靶点.     

PARP抑制剂对小鼠结肠腺癌CT26细胞肝转移的影响

目的 探讨5-AIQ抑制小鼠结肠癌CT26细胞聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase, PARP]后对其肝转移的影响.方法 以小鼠脾脏接种小鼠结肠癌CT26细胞肝转移为模型,采用CT26细胞体外药物处理后脾脏接种和脾脏接种后直接腹腔给药两种方式,将36只BALB/c小鼠按随机区组设计分成6组,其中4组做实验组,2组做对照组,每组6只.观察脾脏原发肿瘤和肝脏转移肿瘤的变化.Western blot检测PARP在各组脾脏原发瘤组织中的蛋白表达量.结果 经过药物5-AIQ处理后,CT26细胞脾脏接种的小鼠和CT26细胞直接脾脏接种后腹腔给药处理的小鼠,脾脏肿瘤体积缩小和肝脏转移结节数目及分级减少,与对照组比较差别显著(P<0.05),但是不同剂量之间未见明显差异(P>0.05).各5-AIQ处理组小鼠脾脏组织PARP表达明显低于未给药处理小鼠脾脏原发瘤组织(P<0.05).结论 5-AIQ能抑制CT26细胞PARP表达,对结肠癌CT26细胞脾脏原发瘤的生长及肝转移具有一定的抑制作用.     

PARS抑制剂PJ34联合镁钾心停搏液对老年心肌的保护作用

[摘要] 目的 探讨多聚ADP腺苷合成酶 (Poly ADP-ribose synthetase,PARS) 抑制剂PJ34联合镁钾心停搏液对老年心肌的保护作用。方法 建立老年兔Lngendorff离体灌注模型,分4组进行实验：A组为全心缺血-再灌注组,B组为镁钾心停搏液诱导停跳组,C组为PJ34保护组,D组为J34联合镁钾心停搏液保护组。比较各组左心室舒展末期压（left ventricular end-diastolic pressure, LVEDP）、左心室峰发展压（left ventricular peak-developed pressure, LVPDP）、左室压力上升速率(the positive first derivative of pressure over time. +dp/dt)、 冠脉流量 (coronary flow CF)、心肌梗死量（Infarction volume,IV）、心肌组织湿重/干重比。结果 左心功能恢复以D组最佳,明显优于其他组（P<0.05）。 四组IV分别为：32.8%±1.6%（组①）、25.2%±1.3%（组②）、13.4%±0.7%（组③）、12.3%±0.5%（组④）,以D组最小,明显少于其他三组（P<0.05）。结论 PARS抑制剂PJ34联合镁钾心停搏液,能改善左心功能恢复,降低IV,减轻心肌损伤, 有可能为另一种有效的心肌保护方法。 [关键词] 老年心肌 兔 多聚ADP腺苷合成酶抑制剂 镁钾心停搏液 心肌保护     

ZIC5在前列腺癌中的表达及意义

目的研究ZIC5（Zic family member 5）在前列腺癌中的异常表达及其对前列腺癌生物学表型的影响。方法实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time PCR）检测ZIC5在前列腺癌组织标本和对应癌旁正常组织、PC3和LNCaP细胞株及正常前列腺上皮中的表达水平。siRNA干扰ZIC5后,CCK-8法和Transwell试验检测前列腺癌细胞PC3和LNCaP的增殖、迁移和侵袭。生物信息学分析可能调控ZIC5的miRNA并进行验证。结果ZIC5在前列腺癌组织中表达水平上升（t=4.2,P<0.001）,并且与Gleason评分分级具有相关性（P<0.05）,在前列腺癌细胞株中表达水平显著高于正常前列腺癌上皮（P<0.01）。前列腺癌细胞株PC3和LNCaP中siRNA干扰ZIC5 24h后,细胞增殖减慢,迁移和侵袭能力被抑制。生物信息学及双荧光素酶报告显示,ZIC5受miR-449家族调控,ZIC5与miR-449家族在前列腺癌标本中表达水平呈负相关（ZIC5 vs miR-449a： r=-0.64,P<0.05,ZIC5 vs miR-449b,r=-0.52,P<0.05）,双荧光素酶报告基因检测显示miR-449家族结合ZIC5 3’UTR。异常表达的ZIC5可激活EMT通路,干扰ZIC5和过表达miR-449可抑制ZIC5蛋白表达,并逆转前列腺癌细胞中EMT状态。结论ZIC5受miR-449家族调控,促进前列腺癌生长和侵袭。