Lnk对卵巢肿瘤细胞中胰岛素PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路的调节

目的:研究细胞连接蛋白Lnk对人上皮性卵巢肿瘤细胞中胰岛素PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路的影响及作用机制。方法:稳定转染Lnk WT质粒(空质粒EV作为对照)的TOV112D和OVCA420细胞株,加入人重组胰岛素处理后收获细胞,提取蛋白。Western blot法检测磷酸化和总Akt、ERK和4EBP1信号通路蛋白。并在293T细胞中共转染IR和Lnk WT或EV质粒,收获细胞裂解蛋白。免疫共沉淀(CoIP)检测体外Lnk和胰岛素受体(IR)是否结合。结果:过度表达了Lnk WT的TOV112D和OVCA420细胞中,Akt及其下游信号蛋白4-EBP1的磷酸化蛋白(p-Akt和p-4EBP1)、p-ERK1/2蛋白均较空质粒(EV)对照明显降低;胰岛素刺激下,Lnk WT过表达细胞Akt、4EBP1、ERK1/2磷酸化水平也较EV明显降低;总蛋白则无明显变化。免疫共沉淀实验显示,Lnk与IR在体外可结合。结论:Lnk可通过与IR结合,负性调节对胰岛素反应的PI3K-Akt和MAPK-ERK细胞信号传导;其作为胰岛素信号通路的一个新抑制因子,可能在上皮性卵巢肿瘤及其他胰岛素信号通路异常相关性疾病中起作用。     

子宫内膜腺癌组织中AdipoR1、AdipoR2及IRS-1的表达及临床意义

目的:探讨子宫内膜腺癌组织中脂联素受体(AdipoR1、AdipoR2)和胰岛素受体底物1(IRS-1)的表达及临床意义。方法:采用免疫组化(Max Vision)方法检测广西医科大学肿瘤医院2014年1月到2016年3月间首次接受治疗的80例子宫内膜腺癌、26例不典型增生以及23例正常子宫内膜组织中AdipoR1、AdipoR2、IRS-1蛋白的表达,分析其与子宫内膜腺癌临床病理参数的关系。结果:(1)子宫内膜腺癌组织中AdipoR1、AdipoR2阳性表达率明显低于正常子宫内膜组,差异有统计学意义(P均0.05);而子宫内膜腺癌组织与不典型增生组织中AdipoR1、AdipoR2的阳性表达率相比,差异均无统计学意义(P0.05);IRS-1在3组的阳性表达率,两两比较差异均无统计学意义(P0.05)。(2)AdipoR1的阳性表达率与子宫内膜癌腺癌患者的临床病理分期、病理分级、肌层浸润深度、淋巴结转移情况、淋巴脉管受累有关(P均0.05);而AdipoR2的阳性表达与患者病理分级有关(P0.05);IRS-1的阳性表达率与患者FIGO分期、病理分级以及淋巴结转移有关(P均0.05)。(3)在子宫内膜腺癌组织中,AdipoR1与IRS-1的表达呈负相关(r=-0.361,P0.05);AdipoR2与IRS-1的表达亦呈负相关(r=-0.368,P0.05)。结论:AdipoR尤其是AdipoR1及IRS-1的表达与子宫内膜腺癌的发生、发展及病理特征有一定关系。     

抑制PI3K/Akt信号通路拮抗胰岛素诱导的子宫内膜癌细胞增殖

目的:研究抑制磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt信号通路对胰岛素诱导的子宫内膜癌细胞增殖的拮抗作用。方法:将无血清饥饿的子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞分为空白对照组、10-6mol/L胰岛素单独刺激组以及不同剂量PI3K抑制剂-LY294002预处理后再用胰岛素刺激组。Western blot检测各组Akt磷酸化(p-Akt)水平,MTT试验观察细胞增殖情况。结果:胰岛素可引起内膜癌细胞Akt活化,刺激15min后p-Akt/Akt比值显著高于空白对照组(68.68%vs 26.21%,P<0.001)。LY294002以浓度依赖方式抑制胰岛素引起的Akt磷酸化。MTT试验显示,在药物处理24h,48h和72h 3个时间点,不同组别570nm吸光度值(OD570nm)均有显著差异(F=156.329,700.973,812.224,均P<0.001)。胰岛素组OD570nm值均高于同时间点的空白对照组(均P<0.001),胰岛素促内膜癌细胞增殖作用于48h时最为显著。LY294002可抑制胰岛素的增殖促进作用,此抑制作用具有浓度依赖性。不同剂量LY294002抑制作用的时间依赖性不同,48h时小剂量(0.1、1、10μmol/L)的抑制作用最为显著,72h时胰岛素重新呈现一定的促增殖作用;而50μmol/L LY294002可以持久抑制胰岛素的促增殖作用。结论:PI3K抑制剂LY294002可以通过抑制Akt磷酸化阻断胰岛素信号传导,拮抗后者促子宫内膜癌细胞增殖的作用。     

PI3K/Akt/mTOR和MAPK信号通路与子宫内膜异位症的研究进展

子宫内膜异位症(EMs)是常见的妇科良性疾病,却具有侵袭、转移等特性。PI3K/Akt/m TOR和MAPK信号通路是两条重要的细胞内信号转导通路,在多种细胞反应中发挥着重要作用。研究显示,在EMs中存在PI3K/Akt/m TOR和MAPK信号通路的过度激活,并通过调节细胞黏附分子(CAM)、基质金属蛋白酶(MMP)、血管内皮生长因子(VEGF)及凋亡因子等的表达,影响异位内膜的黏附、侵袭,血管生成及凋亡,并受激素水平的调控,促进了子宫内膜细胞的异位侵袭和转移,与EMs的发生、发展密切相关。     

PI3K/PKB信号传导通路与子宫内膜癌研究进展

磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB)信号通路是许多生长因子、细胞因子等的下游信号传导通路,通过抑制细胞凋亡,促进细胞生长、增殖、迁移、侵袭和肿瘤血管生成而与肿瘤发生发展密切相关。许多与子宫内膜癌相关的因素通过PI3K/PKB通路参与肿瘤发生发展,这为子宫内膜癌病因学研究及寻找新的治疗靶点提供了新思路。     

PI3K/PKB信号传导通路与子宫内膜癌研究进展

磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB)信号通路是许多生长因子、细胞因子等的下游信号传导通路,通过抑制细胞凋亡,促进细胞生长、增殖、迁移、侵袭和肿瘤血管生成而与肿瘤发生发展密切相关.许多与子宫内膜癌相关的因素通过PI3K/PKB通路参与肿瘤发生发展,这为子宫内膜癌病因学研究及寻找新的治疗靶点提供了新思路.     

多囊卵巢综合征患者子宫内膜组织中胰岛素PI3K/Akt信号通路的活化及其意义

目的 通过分析多囊卵巢综合征(PCOS)患者子宫内膜组织中胰岛素的磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路中Akt的表达及其活化程度,探讨PI3K/Akt信号通路活化在PCOS子宫内膜增生及癌变形成中的作用及意义,并分析影响该信号通路活化程度的因素.方法 选择2007年1月-2008年6月在天津医科大学总医院就诊的PCOS患者52例为PCOS组,非PCOS(输卵管因素不孕或卵巢良性肿瘤)患者32例为对照组;测定所有患者的血清生殖激素水平、空腹血糖及胰岛素水平,并取子宫内膜组织行病理检查;计算体质指数(BMI)、稳态模型评估法计算的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).对PCOS组患者根据病理检查结果分为正常子宫内膜、子宫内膜增生及癌变,根据是否存在胰岛素抵抗分为胰岛素抵抗和非胰岛素抵抗.蛋白印迹法检测子宫内膜组织中Akt、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白的表达水平.结果(1)PCOS组患者子宫内膜组织中p-Akt蛋白的表达水平[(46±18)％]高于对照组[(33±9)％],两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).(2)PCOS组子宫内膜增生及癌变患者子宫内膜组织中p-Akt蛋白的表达水平[(56±19)％]高于正常子宫内膜者[(31±12)％],两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05);胰岛素抵抗患者子宫内膜组织中p-Akt蛋白的表达水平[(50±19)％]高于非胰岛素抵抗者[(34±10)％],两者比较,差异有统计学意义(P＜0.01).(3)HOMA-IR、BMI与子宫内膜组织中p-Akt蛋白的表达水平呈正相关(r=0.400、0.326,P均＜0.05).结论 PCOS患者子宫内膜存在胰岛素PI3K/Akt信号通路的过度活化,该信号通路过度活化与PCOS子宫内膜增生及癌变有关.胰岛素抵抗、肥胖可能是影响子宫内膜组织中胰岛素PI3K/Akt信号通路过度活化的独立风险因素.     

硫氢化钠通过PI3K/AKT信号通路促进子宫内膜基质细胞增殖

目的:探究硫氢化钠对子宫内膜基质细胞系增殖的作用。方法:测定硫化氢合成酶胱硫醚-β-合成酶(CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)在子宫内膜异位症(内异症)异位灶组织和正常内膜组织中的表达,用硫化氢供体(硫氢化钠)及PI3K/AKT通路特异性抑制剂LY294002处理正常人子宫内膜基质细胞系(ESCL)后,检测硫氢化钠和LY294002对ESCL增殖的影响。结果:硫化氢合成酶CBS和CSE在子宫内膜异位症异位灶中的表达高于正常子宫内膜,内膜腺上皮细胞较内膜间质细胞表达高;在一定浓度范围内硫氢化钠促进ESCL增殖;应用LY294002后部分拮抗硫氢化钠的增殖作用,差异有统计学意义(P0.01)。结论:硫氢化钠可在体外促进子宫内膜间质细胞的增殖,这一效应可能部分通过PI3K/Akt信号通路得以实现。异位灶CBS和CSE的高表达可能通过产生高水平的硫化氢,进而促进子宫内膜间质细胞增殖来促进内异症进展。     

脂联素、胰岛素抵抗与子宫内膜癌的发生发展

脂联素(adiponectin)为脂肪组织特异性分泌的一种内源性细胞因子,通过与脂联素受体(AdipoR)结合发挥特异的生物学效应。血清脂联素水平降低与肥胖、胰岛素抵抗(IR)有关,且与IR程度呈正相关。临床研究显示脂联素水平降低与子宫内膜癌发生相关。AdipoR的表达随着临床分期及组织学分级的升高、肌层浸润加重、淋巴结转移而明显下降,且与无进展生存时间及生存率呈负相关。脂联素与AdipoR结合,激活多种信号传导通路的下游,并可与胰岛素信号通路相互作用,抑制细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡。因此,脂联素水平降低同时存在IR会促进子宫内膜癌发生,是其发病的危险因素。     

多囊卵巢综合征患者血清脂联素水平及与胰岛素抵抗相关性的研究

目的:检测多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清脂联素(APN)水平,探讨APN与胰岛素抵抗(IR)的相关性。方法:研究对象于月经周期第3~5天行75g糖耐量实验(OGTT实验),分别测定0h、1h、2h的血糖(FPG、PG1h、PG2h)、胰岛素(FINS、INS1h、INS2h)和脂联素(FAPN、APN1h、APN2h)。PCOS患者给予达英-353个周期联合二甲双胍治疗3个月后复查上述指标,比较治疗前后的变化。结果:(1)PCOS组与对照组均表现为肥胖组APN水平低于非肥胖组,且PCOS组中肥胖组与非肥胖组的APN水平均低于对照组(P<0.05);(2)PCOS组中肥胖组与非肥胖组的FINS、INS1h、INS2h、AUCins及HOMA-IR均高于对照组,且肥胖PCOS组高于非肥胖PCOS组(P<0.05);(3)PCOS组经二甲双胍联合达英-35治疗后FINS、INS1h、INS2h、AUCins、HOMA-IR均降低(P<0.05),而APN水平明显升高;(4)相关性分析表明,PCOS患者APN水平与FINS、INS1h、INS2h、FPG、AUCins、HOMA-IR和BMI均呈负相关。多元逐步回归分析显示,APN与FINS、HOMA-IR的相关性最显著。结论:PCOS患者APN水平显著降低与IR密切相关。     

子痫前期患者血清脂联素表达水平与血脂代谢及胰岛素抵抗的相关性

目的:探讨脂联素、血脂代谢及胰岛素抵抗与子痫前期发病的关系。方法:选择2007年9月—2008年7月住院分娩的妊娠妇女120例及妊娠前健康体检妇女30例,其中60例子痫前期妊娠妇女按发病时妊娠周不同分为早发型组(29例,发病时妊娠周≤34周)和晚发型组(31例,发病时妊娠周>34周)。60例正常晚期妊娠妇女分为妊娠≤34周组和妊娠>34周组,各30例;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组血清脂联素与胰岛素水平;应用全自动生化分析仪测定血脂、血糖水平。检测临床相关指标,包括血压、妊娠前体质量等,并进行相关性分析。结果:①早发型子痫前期组血清脂联素低于同期对照组,晚发型子痫前期组血清脂联素低于同期对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);且早发型组低于晚发型组,差异有统计学意义(P<0.05),校正红细胞压积(HCT)后,仍有统计学意义。②早发型、晚发型子痫前期组血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、载脂蛋白B(ApoB)、空腹胰岛素(FINS)水平及胰岛素抵抗指数(IRI)均高于同期对照组,而高密度脂蛋白(HDL)、载脂蛋白A1(ApoA1)低于同期对照组(均P<0.05)。③早发型、晚发型子痫前期组血清脂联素与TG、收缩压(SP)、舒张压(DP)、平均动脉压(MAP)及IRI均呈负相关;与HDL呈正相关。结论:子痫前期妊娠妇女血清脂联素表达降低可能与子痫前期发病有关;血脂代谢异常及胰岛素抵抗与子痫前期患者脂联素表达降低有关,可能参与低脂联素促发子痫前期的病理生理机制。     

Effects of the Insulin Sensitizer Pioglitazone on Menstrual Irregularity,Insulin Resistance and Hyperandrogenism in Young Women with Polycystic Ovary Syndrome

BackgroundPolycystic ovary syndrome (PCOS) is the most common endocrine cause of menstrual irregularities, hirsutism and acne. Women with PCOS present elevated plasma insulin levels, both fasting and after a glucose load, as an indirect evidence of insulin resistance. PCOS women may also present hypertension, low levels of HDL cholesterol, hypertriglyceridemia, visceral obesity and a higher level of CRP and fibrinogen that can predict an atherosclerotic risk.MethodsThis study was carried out on 15 young women with PCOS selected according to the 2003 diagnostic criteria of The Rotterdam Consensus Statement and 15 Control women. PCOS women were treated with pioglitazone 30 mg/day and at the beginning and after 6 months of treatment were evaluated: menstrual cycle trend, hirsutism and acne, total cholesterolemia and HDL, triglyceridemia, fibrinogenemia, C-reactive protein, oral glucose tolerance test, glycated hemoglobin, FSH, LH, 17OH-progesterone, 17β-estradiol, free and total testosterone, SHBG, DHEA-S, Δ4-androstenedione and adiponectin.Results and DiscussionTreatment with pioglitazone improves the irregularities of menses and hirsutism. Six months of treatment modify other parameters linked with a higher risk of type 2 diabetes mellitus and cardiovascular diseases: adiponectin increased with reduction of insulin resistance while fibrinogen and CRP levels decreased.     

抑制磷脂酰肌醇-3-羟基激酶/蛋白激酶B信号传导通路对宫颈癌放疗增敏的作用

目的:探讨抑制磷脂酰肌醇-3-羟基激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号传导通路对宫颈癌的放疗增敏作用。方法:选用LY294002为PI3K阻滞剂。培养PI3K功能活性和AKT磷酸化水平稳定的人宫颈癌HeLa细胞株,皮下注射于BALB/C裸鼠体内,建立裸鼠宫颈癌移植瘤模型。随机将荷瘤裸鼠分为空白对照组、单纯放疗组、单纯药物组(LY294002)和联合治疗组(放疗+LY294002)。应用Western blotting检测各组AKT磷酸化(phospho-Ser473AKT)水平。通过克隆形成实验检测LY294002在体内的放射增敏作用。长期观察肿瘤体积的变化并绘制肿瘤生长曲线。结果:Western blotting显示,联合治疗组的AKT去磷酸化现象最显著。克隆形成实验显示,LY294002与放射治疗对肿瘤细胞生长的抑制在各剂量水平均表现出协同作用(P0.05)。肿瘤生长曲线表明联合治疗组的肿瘤体积增长最缓慢。结论:PI3K阻滞剂显著增强宫颈癌对放射治疗的敏感性。     

PCOS患者外周血miR-21与PI3K/AKT通路的关系及其临床意义#br#

目的研究多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者外周血微小RNA-21(micro RNA-21,miR-21)与PI3K/AKT通路的关系及其临床意义。方法选择2018年6月至2020年12月在上海市浦东新区人民医院就诊的156例PCOS患者作为研究对象。按是否存在胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)分为86例IR PCOS组及70例非IR PCOS组。另取同期在本院体检的70例健康女性作为对照组。检测所有受试者空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)及胰岛素抵抗指数(HOMA insulin resistance index,HOMA-IR)、荧光定量PCR检测外周血miR-21 mRNA、PI3K mRNA、AKT mRNA表达水平,Western blot检测内膜组织的p-PI3K、p-AKT表达及miR-21下游靶基因的预测。结果与对照组比,非IR PCOS组和IR PCOS组外周血的mi R-21m RNA、PI3Km RNA、AKTm RNA、HOMA-IR、FBG及FINS,内膜p-PI3K、p-AKT表达均明显增高(P<0.05),与非IR PCOS组比,IR PCOS组外周血的mi R-21m RNA、PI3Km RNA、AKTm RNA、HOMA-IR、FBG及FINS,内膜p-PI3K、p-AKT表达均明显增高(P<0.05)。外周血mi R-21m RNA与HOMA-IR呈正相关关系(r=0.646,P<0.05),外周血PI3K mRNA、AKT mRNA、子宫内膜p-PI3K、p-AKT与HOMA-IR呈负相关关系(r=-0.546、-0.567、-0.578、-0.643,均P<0.05)。根据Targetscan检索,miR-21的靶基因为PI3K/AKT通路基因。结论PCOS患者miR-21表达增加可过度激活PI3K/AKT通路,导致IR。     

PI3K/AKT/mTOR信号通路在卵巢透明细胞癌中的研究进展

卵巢透明细胞癌(OCCC)是上皮性卵巢癌的一种特殊组织学类型,对传统的化疗方案耐药,预后不良,寻找新的靶向治疗方案迫在眉睫。磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶体蛋白(PI3K/AKT/m TOR)信号通路在卵巢癌的发生和发展中发挥重要作用,并且与化疗耐药密切相关。该通路的活化不但可以抑制细胞凋亡,促进细胞增殖,还参与肿瘤的侵袭与转移。在OCCC中,PI3K/AKT/m TOR信号通路中的多种蛋白表达异常,该通路中的受体及激酶可能成为治疗OCCC的潜在靶点。现有研究表明PI3K/AKT/m TOR通路抑制剂不仅能增加紫杉醇或顺铂的细胞毒性效应,还可影响OCCC细胞系的生长情况。特别是OCCC中最常见的AT丰富结合域1A(ARID1A)突变与PI3K/AKT/m TOR信号通路关系十分密切。因此,针对PI3K/AKT/m TOR信号通路开发新的靶向治疗药物可能对OCCC的治疗具有一定意义。综述该通路与OCCC的关系,以期为探索新的靶向治疗提供理论基础。     

Aberration of the PI3K/AKT/mTOR signaling in epithelial ovarian cancer and its implication in cisplatin-based chemotherapy

Objective

This study was to investigate the role of the PI3K/AKT/mTOR signaling in epithelial ovarian cancer development and its mechanism in cisplatin-based chemotherapy.

Study design

Western blot and RT-PCR were used to determine the expression of PI3K-p85 subunit at protein and mRNA levels in normal and cancerous ovarian epithelium. SKOV3/DDP cells and SKOV3/MCA (multicellular aggregates) were constructed as chemo-resistant models. The role and mechanism of AKT specific inhibitor or shRNA in different models before and after cisplatin treatment were determined by multiple cellular and molecular approaches such as cell growth assay, flow cytometry, and western blot.

Results

PI3K-p85 subunit was detected in 33 out of 39 epithelial ovarian cancer specimens at protein level, but not detected in normal ovarian epithelium. A significant over-expression of PI3K-p85 subunit at mRNA level was observed in tumor tissues, and an increasing trend in advanced stage was also observed. Elevated activation of the AKT/mTOR/Survivin signaling was detected in SKOV3/DDP cells and SKOV3/MCA. Down-regulation of AKT by triciribine or shRNA transfection could attenuate cisplatin resistance through mTOR/Survivin signaling.

Conclusions

The PI3K/AKT/mTOR signaling was involved in epithelial ovarian cancer development and cisplatin-based chemotherapy, and down-regulation of AKT could be an effective adjuvant antitumor therapy.