脂质体莪术醇联合顺铂抗人卵巢癌细胞作用和机制研究

目的 研究脂质体莪术醇(LC)联合顺铂抗人卵巢癌细胞的作用和机制.方法 实验以卵巢癌细胞株SKOV3和HO8910为研究对象,以10 μg/ml LC为基准,联合不同浓度的顺铂(0、2、4、8、16、32、64 μg/ml)进行分组,MTT、Transwell和流式法分别检测各组细胞增殖、侵袭、迁移能力和凋亡率的变化,Western blot检测各组AKT、p-AKT和cleaved-Caspase8、9、3蛋白表达的变化.结果 MTF结果显示,与单用顺铂或者LC组比较,联合用药组的肿瘤细胞增殖率降低(P＜0.05),联合用药中顺铂对SKOV3的IC50为(12.67±2.03)μg/ml[单用顺铂的IC50:(38.28±5.98)μg/ml];联合用药中顺铂对HO8910的IC50为(10.55±1.55)μg/ml[单用顺铂的IC50:(26.41 ±2.30) μg/ml].联合组(8μg/ml的顺铂+ 10 μg/ml的LC)的卵巢癌细胞侵袭和迁移率均降低(P＜0.05),凋亡率最高(P＜0.05).Western blot结果提示联合用药组卵巢癌细胞的p-AKT蛋白的表达水平降低(P＜0.05),cleaved-Caspase8、9、3蛋白水平上升(P＜0.05).结论 低剂量LC可以增强顺铂抑制人卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进肿瘤细胞凋亡,联合用药可能通过PI3K/AKT通路促进卵巢癌细胞凋亡.     

促卵泡激素抑制顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡

目的 探讨促卵泡激素(FSH)对顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡的影响及其机制。方法 应用DNA Fragmentation梯带电泳分析,TUNEL荧光原位凋亡检测法测定对FSH敏感的卵巢癌细胞系OVCAR3(OVCAR3-FSHR)细胞凋亡状态,应用Caspase-3活性分析法检测Caspase-3活性,RT-PCR检测凋亡相关基因survivin mRNA表达,Western blot检测其Survivin及bcl-2蛋白表达。结果 不论是DNA梯带电泳还是TUNEL荧光原位凋亡检测都表明促卵泡激素能抑制顺铂诱导的OVCAR3-FSHR细胞的凋亡。Caspase-3活性分析表明促卵泡激素能降低顾铂引起的Caspase-3活性增加。半定量RT-PCR结果表明FSH能增加survivin mRNA表达,Western blot结果表明FSH能增加Survivin蛋白表达而对bcl-2表达无影响。结论 促卵泡激素能够抑制顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡,其作用机剖可能与促进Survivin表达及降低Caspase-3活性有关。     

Survivin反义核酸与顺铂联合作用诱导人卵巢癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨特异性封闭Survivin的表达与顺铂联合作用对卵巢癌细胞的凋亡诱导作用,以期为卵巢癌的治疗提供实验依据.方法将已成功构建的Survivin反义核酸真核表达载体的重组体导入人卵巢癌细胞株中,用G418筛选得到表达反义Survivin的细胞,RT-PCR技术检测转染细胞Survivin表达的变化;采用Hoechest核染色分析与顺铂联合作用时人卵巢癌细胞的凋亡情况.结果构建的Survivin反义RNA真核表达载体能有效的抑制卵巢癌细胞中Survivin基因的表达;顺铂诱导转染Survivin反义核酸的卵巢癌细胞的凋亡作用显著强于未转染Survivin反义核酸的卵巢癌细胞株.结论Survivin反义核酸可明显增强顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡,为其联合应用卵巢癌治疗研究提供了实验依据.     

紫杉醇与顺铂诱导下的凋亡卵巢癌细胞对树突细胞提呈功能的研究

目的探讨紫杉醇与顺铂诱导下的凋亡卵巢癌细胞对树突细胞提呈功能的研究。方法联合应用巨噬细胞集落刺激因子及白介素24刺激人外周血单核细胞诱导分化为树突状细胞（DC）,然后将树突状细胞和经紫杉醇联合顺铂在体外诱导发生凋亡的人卵巢癌细胞株共同培养,并共培养DC组为治疗组,生理盐水组和单独DC组作对照,分别注射于人卵巢癌移植瘤裸鼠尾部,2周后剥取瘤组织,计算抑瘤率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,观察裸鼠人卵巢癌移植瘤的发生率及治疗效果。结果紫杉醇、顺铂诱导的凋亡卵巢癌细胞对DC提呈功能显著增强,其诱导的CTL对卵巢癌细胞具有显著的杀伤作用。DC激活的CTL具有抑制移植瘤生长,促进肿瘤细胞凋亡的作用（P〈0．05）。结论紫杉醇、顺铂诱导的凋亡卵巢癌细胞对树突细胞提呈功能具有较强的免疫原性,可以在免疫治疗卵巢癌中发挥重要作用。     

促卵泡激素对顺铂诱导卵巢癌细胞株凋亡的保护作用

目的 探讨促卵泡激素(FSH)对顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡的保护作用。方法 MTT比色法检测人卵巢上皮性癌细胞系OVCAR3转染FSH受体(OVCAR3-FSHR)细胞活性,流式细胞术分析细胞周期变化及细胞凋亡率。结果 促卵泡激素能降低顺铂对细胞生长的抑制作用,同时降低S期的比例和凋亡率。结论 促卵泡激素对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡有保护作用。     

Gleevec诱导顺铂耐药卵巢癌细胞COC1凋亡的形态学研究

目的探讨Gleevec对顺铂耐药卵巢癌细胞COC1的诱导凋亡作用。方法用Gleevec处理COC1细胞,采用MTT法检测Gleevec联合顺铂对细胞增殖的影响。HE染色显微镜下观察细胞,电镜下观察细胞形态学的变化。结果Gleevec显著提高了COC1／DDP对顺铂的敏感性（P〈0．05）;2．5～10μg／ml顺铂与1．0μmol／L Gleevec合用表现为协同作用,2．5～10μg／ml顺铂与2．5～10μmol／L Gleevec合用表现为相加作用。在Gleevec的作用下COC1细胞呈现明显的凋亡改变,形成凋亡小体。结论Gleevec能够诱导顺铂耐药卵巢癌细胞COC1的凋亡。     

凋亡相关基因及蛋白的表达与人卵巢癌细胞顺铂耐药的关系

目的探讨COC1/DDP和COC1中凋亡相关基因及凋亡相关蛋白的表达与人卵巢癌顺铂耐药的关系。方法采用流式细胞仪检测不同浓度顺铂作用于COC1及COC1/DDP细胞48h后细胞凋亡率;RT-PCR及Western blot法检测凋亡相关基因及蛋白Bcl-2、Caspase-3、Smac和Survivin在COC1和COC1/DDP中的表达。结果DDP作用于COC1和COC1/DDP细胞48h后细胞随着DDP浓度的升高,凋亡率也相应增高。COC1/DDP中抗凋亡基因及蛋白Bcl-2、Survivin的表达明显高于COC1。COC1/DDP中促进凋亡的基因及蛋白Smac、Caspase-3的表达明显低于COC1。结论在COC1/DDP中抗凋亡基因及蛋白Bcl-2、Survivin的高表达以及促进凋亡的基因及蛋白Smac和Caspase-3的低表达可能参与COC1/DDP对DDP耐药的发生机制。     

维生素C对顺铂诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡的影响

目的探讨维生素C是否能影响顺铂诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡,以及它对细胞内端粒酶活性的影响。方法MTT法和流式细胞术检测细胞生长和凋亡的情况,TRAP-ELISA法测定端粒酶活性变化。结果DDP联合AA作用组比单独用DDP组细胞凋亡率明显增高,端粒酶活性明显降低。单独10μmol/LDDP处理组细胞生长未受到明显抑制,但联合AA后其生长受到抑制。结论AA能增强DDP诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡,并增强DDP对细胞内端粒酶活性的抑制作用。     

糖原合酶激酶-3β磷酸化抑制顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的 探讨增加糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)的磷酸化状态对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的作用.方法 体外培养人卵巢癌细胞株OV2008细胞,运用GSK-3β特异性抑制剂LiCl增加磷酸化GSK-3β的表达,应用流式细胞仪检测不同浓度顺铂诱导的细胞凋亡,Western blot检测GSK-3β及磷酸化GSK-3β蛋白的表达.结果 流式细胞仪检测结果显示,梯度增加的顺铂(40、80、120 μmol/L)作用于OV2008细胞24 h,其凋亡率不断增加,分别为(4.55±1.64)%、(25.50±0.94)%和(53.80±1.62)%;而应用抑制剂预孵育的细胞,不同浓度顺铂作用24 h后凋亡率分别为(2.10±0.80)%、(15.75±0.97)%和(20.45±0.87)%;Western blot显示,抑制剂LiCl作用后,细胞的磷酸化GSK-3β表达明显增加,并且顺铂作用亦可引起磷酸化GSK-36表达上调;流式结果还显示,P13K的特异性抑制剂LY294002作用后使顺铂诱导的细胞凋亡率从(18.75±0.70)%增加至(28.40±1.50)%.结论 磷酸化GSK-3β表达增加可抑制顺铂诱导的卵巢癌细胞的凋亡.     

紫杉醇对人卵巢癌细胞凋亡的影响

目的 :探讨紫杉醇 (PTX)对人卵巢细胞凋亡的影响。方法 :应用细胞形态观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪、活细胞视频观察和蛋白印迹免疫法进行检测和观察。结果 :癌细胞在PTX作用下 ,首先表现为G2 /M期阻滞 ,一定时间后出现细胞凋亡。凋亡细胞表现为细胞固缩 ,核染色质凝聚或断裂。细胞DNA裂解片段呈现典型的“阶梯状”排列的条带。凋亡抑制基因Bcl- 2在细胞凋亡过程中呈低表达并发生修饰反应 ,而调亡诱发基因Bax先呈高表达后表达降低。结论 :PTX诱发人卵巢癌细胞的凋亡与细胞分裂阻滞密切相关 ,Bcl- 2和Bax在PTX引起人卵巢癌细胞凋亡中可能起着重要的调控作用。     

人参皂甙Rg3诱导卵巢癌HO8910细胞凋亡的形态学研究

目的：探讨人参皂甙Rg3对卵巢癌细胞株H08910的抑制作用。方法：用人参皂甙Rg3处理H08910细胞，通过倒置显微镜和电子显微镜观察细胞形态学改变。结果：在人参皂甙Rg3作用下，H08910细胞呈凋亡改变，形成凋亡小体。结论：人参皂甙Rg3能诱导卵巢癌细胞凋亡，抑制卵巢癌细胞增殖。     

短发夹RNA靶向抑制EGFR基因对人卵巢癌Skov-3细胞凋亡和细胞周期的影响

目的 探讨RNA干扰(RNAi)对卵巢癌细胞表皮生长因子受体(EFR)基因表达的影响及其效应.方法 体外合成EFR的DNA模板序列和pSilencer 2.1-U6neo质粒构建编码shRNA的表达载体,应用脂质体Lipofectamine 2000将其转染到人卵巢癌Sov-3细胞,采用半定量RT-PCR、免疫细胞化学技术检测转染前后Sov-3细胞EFR基因的变化;采用AnnexinV/PI双染色标记的流式细胞仪检测siRNA诱导的细胞凋亡,PI染色检测细胞周期阻滞.结果 成功构建pSilencer-EFR短发卡状siRNA真核表达载体;靶向EFR的序列特异性的siRNA可以有效抑制Sov-3细胞EFR基因的表达;流式细胞分析显示,Sov-3细胞凋亡率明显增加,细胞周期出现明显的0/1期阻滞.结论 RNAi沉默EFR表达可以诱导卵巢癌Sov-3细胞凋亡,并使卵巢癌Sov-3细胞停滞在0/1期,RNAi可作为研究卵巢癌发生发展机制和基因治疗的有效工具.     

紫杉醇诱导成骨肉瘤细胞凋亡

目的：探讨紫杉醇对成骨肉瘤细胞的杀伤作用及机制。方法：应用形态学观察，MTT分析法，DNA梯状电泳，流式细胞术检测术，研究紫杉醇对成骨肉瘤细胞系SOSP-9607的细胞毒效应。结果：紫杉醇作用后成骨肉瘤细胞形态改变明显，存活率明显下降。形态学观察，DNA梯状电泳，流式细胞术检测术证实紫杉醇可诱导成骨肉瘤凋亡。结论：紫杉醇在体外对成骨肉瘤细胞株SOSP-9607有较强的杀伤作用，并且这种作用主要是通过诱导凋亡实现的。     

高浓度雌激素对卵巢癌细胞株HO-8910体外生长的影响

目的:探导高浓度雌激素对卵巢癌细胞株HO-8910体外生长的作用.方法:用细胞凋亡检测试剂盒判定细胞凋亡,用光镜、电镜观察细胞变化.结果:凋亡程度,同对照组比较,各实验组均有显著差异.结论:高浓度雌激素对卵巢癌细胞株HO-8910的生长有抑制作用,呈剂量依赖效应;24h-48h是癌细胞发生凋亡高峰期.     

耐紫杉醇卵巢癌细胞株中凋亡途径相关基因的差异表达

目的：探讨耐紫杉醇卵巢癌细胞株SKOV3/TAXOL中凋亡途径相关基因的表达差异。方法：运用real-ti me-RT-PCR技术,检测耐紫杉醇卵巢癌细胞株SKOV3/TAXOL和敏感细胞株SKOV3中凋亡途径相关基因TRADD、DFFA、MADD和TGM2的表达量,并对结果进行对比分析。结果：4个基因在SKOV3/TAXOL中的表达量均高于SKOV3,其中TRADD、DF-FA、MADD、TGM2分别高2.25、3 333、3.5×10^5和2 865倍。结论：凋亡相关基因TRADD、DFFA、MADD和TGM2在SK-OV3/TAXOL细胞株中表达都升高,说明卵巢癌细胞对紫杉醇耐药可能在一定程度上与细胞凋亡功能异常相关。     

姜黄素对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP的增敏作用及其机制的研究

目的:探讨姜黄素对卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP的增敏作用并探讨其机制.方法:采用MTT法检测姜黄素对COC1/DDP细胞的增敏作用;用流式细胞仪检测单用顺铂、单用姜黄素、顺铂与姜黄素合用作用于COC1/DDP细胞48 h后的细胞凋亡率;Western blot法检测单用顺铂及顺铂与姜黄素合用后各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达.结果:姜黄素浓度在15～35 μmol/L以内时以一定的剂量-效应关系对COC1/DDP有明显的增殖抑制作用.顺铂的浓度在1.25～5 mg/L时加入20 μmol/L姜黄素后耐药细胞生存率下降明显(P＜0.05),尤以2.5 mg/L顺铂和20 μmol/L姜黄素联合作用时,耐药细胞生存率下降最明显;COC1/DDP中顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂及单用姜黄素相比,凋亡率明显增加(P＜0.05);顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比Bcl-2、Survivin蛋白的表达明显降低(P＜0.05),Caspase-3蛋白的表达明显增高(P＜0.05).结论:姜黄素能够显著抑制COC1/DDP增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,其机制可能与降低Bcl-2、Survivin蛋白的表达,增加Caspase-3蛋白的表达有关.     

顺铂、三氧化二砷对人卵巢癌细胞的作用研究

目的:探讨顺铂(DDP)、三氧化二砷(As2O3)对人卵巢癌细胞 HO-8910 的联合作用及其分子生物学机制.方法:采用形态学方法研究 DDP、As2O3 对细胞增殖的影响,免疫化学染色法检测基因表达.结果:1.联合作用时,As2O3 浓度在 1.5μmol/L 以上、DDP浓度在2μmol/L 以上时,有显著性差异;当三氧化二砷、顺铂浓度分别是12μmol/L、4μmol/L 时,72h 时癌细胞接近100%死亡.2.DDP、As2O3 引起HO-8910 细胞 p53 基因表达增强.结论:DDP、As2O3对人卵巢癌细胞 HO-8910的生长有协同抑制作用;DDP、As2O3 联合作用引起卵巢癌细胞凋亡的机制与 p53 基因表达增强有关.     

幽门螺杆菌与胃癌BGC-823细胞凋亡

目的研究幽门螺杆菌（Halicobacter pylori,Hp）在胃癌细胞BGC-823凋亡中的作用及作用机制。方法将BGC-823细胞与Hp以不同浓度培养,倒置显微镜观察细胞形态学变化;透射电镜观察细胞凋亡及超微结构变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果与对照组相比,低中浓度Hp作用BGC-823细胞后,倒置显微镜观察到细胞增殖旺盛,并出现明显的凋亡抑制现象;电镜观察到细胞凋亡形态特征及凋亡数目减少。流式细胞仪检测结果：与对照组相比,中低浓度组凋亡率下降,有显著性差异（P〈0.05）,高浓度组细胞的凋亡率上升,有显著性差异（P〈0.05）,以上作用均呈细菌浓度和作用时间依赖性。结论 Hp可抑制胃癌细胞BGC-823凋亡,这可能与凋亡抑制基因上调有关。     

吉西他滨联合顺铂治疗62例晚期非小细胞肺癌的临床观察

目的观察吉西他滨联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的疗效及毒副反应.方法62例晚期非小细胞肺癌患者给予吉西他滨与顺铂联合治疗,吉西他滨1250 mg/m^2,静脉滴注第1、8天,顺铂80 mg/m^2,分两天静点,21天为一周期,每例患者治疗2周期以上.结果全组完全缓解1例,部分缓解24例,稳定20例,进展17例,总有效率为40.3%.初治组有效率为42.6%,复治组为25%.全组中位生存期10月,1年生存率为36.1%.ECOG评分增加者占67.7%（42/62）.最常见的毒副反应为骨髓抑制,Ⅲ～Ⅳ度白细胞和血小板下降发生率分别为29.1%和25.8%,其余毒副反应均轻微,可耐受.结论吉西他滨联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌均有较好的疗效,毒性可以耐受并可以改善生活质量.