补肾活血通络法治疗慢性再生障碍性贫血的临床与实验研究现状

慢性再生障碍性贫血(chronic aplastic anemia,CAA)是一组由多种病因引起的骨髓造血功能衰竭,以造血干细胞损伤、外周血全血细胞减少为特征的疾病.临床上常表现为贫血、出血和感染.     

健脾补肾活血方药对再生障碍性贫血小鼠CTL介导的造血抑制因子影响

目的探讨细胞毒性T细胞介导的造血抑制因子对再生障碍性贫血的作用,分析健脾补肾活血方药的免疫调控机制。方法采用流式细胞仪检测不同拆方分组免疫介导再障小鼠脾淋巴细胞表面抗原CD8、γδTCR的表达,ELISA法检测各组小鼠培养细胞γ-IFN、α-TNF水平,观察其变化。结果再障组CD8+、γδTCR+T比例明显上升,γ-IFN、α-TNF水平亦升高,健脾补肾活血全方组CD8+、γδTCR+T下降,γ-IFN、α-TNF水平降低,与再障对照组比较有明显差异(P<0.001),健脾补肾组、温肾组、滋肾组、CSA组均有不同影响,健脾组、活血组作用不显。结论细胞毒性T细胞增加与造血负调控因子表达升高是导致再障的主要机制,两者具有相关性,健脾补肾活血方药可通过调节该免疫环节恢复骨髓造血,组方中以补肾中药为核心,健脾、活血中药起协同作用。     

补肾活血解毒法治疗再生障碍性贫血的临床研究

以补肾活血解毒法治疗再生障碍性贫血34例,与再障生血片对照组20例和单纯补肾组14例进行疗效对比研究。结果补肾活血解毒法治疗再障总有效率明显优于别两组（P均＜0．05）,且在症状、体征的改善及骨髓象和外周血象改善方面也优于另两组。提示补肾活血解毒法治疗再生障碍性贫血,治法新疑,方法可取。     

补肾活血通络法为主治疗慢性再生障碍性贫血的临床研究

目的　观察补肾活血通络法治疗慢性再生障碍性贫血 (简称CAA)的临床疗效 ,探讨其作用机制。方法　将 79例CAA患者随机分为治疗组 (4 0例 )和对照组 (39例 )。对照组单用西药治疗 ,治疗组用补肾活血通络方加西药治疗。并分别于治疗前后采用酶联免疫吸附双抗体夹心 (ELISA)法检测血浆sFas ,sFasL水平。结果　治疗组与对照组的基本治愈率、缓解率、总有效率分别为 37.5 0 % ,2 5 .0 0 % ,87.5 0 %和 2 0 .5 1% ,17.95 % ,6 1.5 4% ,两组疗效比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。治疗前两组患者血浆sFas水平比健康组明显减低 (P <0 .0 1) ,治疗后治疗组sFas水平较治疗前明显升高 (P <0 .0 5 ) ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论　补肾活血通络法治疗CAA疗效高 ,毒副作用少。其作用机制可能是通过调节机体免疫功能 ,从而阻抑了CAA患者造血细胞的过度凋亡     

补肾泻肝方药对再生障碍性贫血患者骨髓造血祖细胞的影响

为研究补肾泻肝方药治疗再生障碍性贫血的机理,将25例再障患（其中肾阴虚14例,肾阳虚11例）的骨髓进行体外培养,观察不同中药复方[滋肾阴（Ⅰ）、泻肝炎（Ⅱ）、温肾阳（Ⅲ）、补肾泻肝（Ⅳ）]和细胞因子（IL-2、IRN-γ）对其红系、粒-巨噬系造血祖细胞（CFU-E、BFE-U、CFU-GM）集落形成的影响。结果：Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ方对CFU-E、BFU-E、CFU-GM均有促进作用,Ⅳ方的作用尤其明显,而Ⅱ方无此作用;IL-2、IFN-γ对上述指标有抑制作用;加入Ⅱ、Ⅳ方后能减除这种抑制,但Ⅰ、Ⅲ方无此作用。提示：补肾泻肝方药是治疗再障的有效处方,减除IL-2、IRN-γ对造血祖细胞的抑制、促进CFU-E、BFU-E、CFU-GM的形成是其治疗再障的重要机理。     

补肾活血冲剂对再生障碍性贫血小鼠骨髓造血微环境及骨髓黏附分子表达的影响

目的观察补肾活血冲剂对再生障碍性贫血(从)小鼠骨髓造血微环境及骨髓细胞黏附分子表达的影响。方法给小鼠按15ms／kg体重剂量腹腔注射马利兰，每周1次，连续5周，诱发骨髓损伤、造血功能障碍后，予补肾活血冲剂灌胃3个月进行干预，观察其骨髓结构变化、体外成纤维细胞集落形成单位(CFU—F)、骨髓单个核细胞CD49d、CD49c的表达水平、骨髓基质细胞VCAM-1的表达。结果马利兰诱发的小鼠骨髓损伤符合从的病理变化。补肾活血冲剂能促进骨髓造血微环境结构恢复，提高造血组织容量百分率及骨髓单个核细胞CD49d、CD49c及骨髓基质细胞VCAM-1的表达水平。结论补肾活血冲剂能改善骨髓造血微环境及提高骨髓基质细胞黏附分子的表达水平。     

中西医结合治疗慢性再生障碍性贫血20例

目的：观察以中医补肾活血法结合西医治疗慢性再生障碍性贫血的疗效。方法：调查我院登记的20例慢性再生障碍性贫血患者，用回顾性方法进行资料分析。结果：中西医结合治疗20例慢性再生障碍性贫血的有效率为95％，治愈率为55％。结论：中西医结合治疗慢性再生障碍性贫血，疗效肯定。     

补肾方药对免疫介导再生障碍性贫血小鼠IL-3、IFN-γ的影响

为探讨不同补肾方药治疗再障的作用机理，用温肾方、滋肾方灌喂DBA／2大鼠，抽取、制备含中药血清：Ba1b／C小鼠经^60Co5．5Gyγ射线照射后由尾静脉输入取自DBA/2小鼠胸腺淋巴结混合细胞悬液形成免疫介导再障模型。在含补肾方药血清的液体培养体系中培养再障小鼠骨髓造血细胞，检测培养体系中IL-3、IFN-γ的浓度。结果：液体培养体系中滋肾血清使正常小鼠的IL-3浓度升高．而在再障小鼠IL-3浓度则表现降低，温肾血清仅使正常小鼠的IL-3浓度升高；两组中药血清对IFN-γ无影响。结论：滋肾方对IL-3的生成有影响，温肾方、滋肾方对培养体系中IFN-γ的生成均无影响。推测补肾方药临床治疗再障的作用是影响IL-3的生成。也可能影响造血组织局部IFN-γ的生成进而促进造血干／祖细胞增殖、分化有关。     

应用单克隆抗体-免疫磁珠分离系统分离纯化再生障碍性贫血骨髓CD_(34)~+细胞

目的　分离、纯化再生障碍性贫血 (简称AA)患者骨髓CD3 4+ 细胞 ,探讨其发病机制。方法　对4 2例AA患者 ,以常规方法进行骨髓液采集和有核细胞分离 ,用单克隆抗体 免疫磁珠分离系统 (MACS)分离、纯化骨髓CD3 4+ 细胞 ,用碱性磷酸酶 抗碱性磷酸酶 (APAAP)法作CD3 4+ 细胞的纯度检测。结果　骨髓CD3 4+ 细胞纯度达 95 %～ 99% ,AA患者骨髓CD3 4+ 细胞多呈单个、散在分布 ,着色较淡 ;而对照组骨髓CD3 4+ 细胞多呈均匀或丛簇状分布 ,着色较深。结论　应用MACS分离AA骨髓CD3 4+ 细胞 ,特异性强、纯度高 ,是研究AA骨髓CD3 4+ 细胞功能、形态的最直接、客观、准确的方法     

难治性贫血与慢性再生障碍性贫血骨髓铁染色的初步观察与比较

观察与比较难治性贫血（ＭＤＳ－ＲＡ）与慢性再生障碍性贫血（ＣＡＡ）骨髓铁染色细胞外铁和铁粒幼细胞的反应程度，探讨骨髓铁染色在两种疾病实验诊断中的意义。用铁染色法对２０例正常人、３１例ＲＡ患者，３２例ＣＡＡ的骨髓涂片进行细胞外铁阳性等级，铁粒幼细胞阳性百分率，铁粒幼细胞比率，环铁粒幼细胞的阳性百分率的检测。结果：正常人、ＲＡ和ＣＡＡ患者三组之间细胞外铁有极显著性差异（Ｐ〈０．００１），铁粒幼细胞百分     

再生障碍性贫血骨髓微环境与造血细胞的超微结构变化

为了探讨造血细胞的增殖分化与造血微环境的关系,本文对1)例再生障碍性贫血(CAA)和10例缓解后的CAA骨髓用透射电镜进行了比较观察,发现8例CAA患者骨髓间质呈萎缩性改变,缓解后则呈增殖状态,缓解越好的病例增生性变化越明显,因此推测骨髓间质的萎缩与增生和造血功能是一致的。     

DNA末端原位标记技术研究慢性再生障碍性贫血骨髓CD_(34)~+细胞凋亡

目的　观察慢性再生障碍性贫血 (CAA)患者骨髓CD3 4+ 细胞凋亡状况 ,探讨CAA可能的发病机制。方法　采用单克隆抗体 -免疫磁珠分离系统 (MACS)分离纯化 39例CAA患者的骨髓CD3 4+ 细胞 ,用DNA末端原位标 (TUNEL)技术分析骨髓CD3 4+ 细胞原位凋亡状况。结果　CAA患者骨髓细胞的凋亡率为 (39.2 4± 12 .70 ) % ,健康对照组为 (8.5 0± 2 .30 ) % ,组间比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。凋亡细胞可见核染色质皱缩、凝聚 ,但未见到核碎裂现象及典型的凋亡小体。结论　CAA患者骨髓CD3 4+ 细胞的过度凋亡是其质或 /和量缺陷的原因之一     

红景天苷对骨髓抑制贫血小鼠骨髓细胞周期和凋亡相关蛋白表达的影响

目的 观察红景天苷对骨髓抑制贫血小鼠骨髓细胞周期和凋亡相关蛋白表达的影响,并探讨其造血调控作用机制。方法 用全自动血细胞分析仪、白细胞计数法和流式细胞术（FCM）分别检测红景天苷对骨髓抑制贫血小鼠外周血、骨髓有核细胞以及骨髓细胞周期的影响,同时用免疫组织化学方法检测各组骨髓细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达情况。结果 低剂量和高剂量红景天苷能明显升高外周血白细胞（WBC）和骨髓有核细胞（BMC）数,低剂量红景天苷能明显升高外周血血小板（PLT）数,促进骨髓G0／G1期细胞向S期细胞以及S期细胞向G2／M期细胞的转化,而高剂量红景天苷具有明显促进S期细胞向G2／M期细胞转化的能力,从而导致高、低剂量组G2／M期细胞比例明显升高,增殖指数（PI）也明显升高。另外,高、低剂量红景天苷都能促进骨髓细胞中Bcl-2的表达。其中低剂量红景天苷的促进作用更为明显。同时,高、低剂量红景天苷也都能明显降低骨髓细胞中Bax的表达。结论 红景天苷可能通过促使骨髓抑制贫血小鼠骨髓细胞解除G0／G1期阻滞,加速骨髓G0／G1期细胞向S期细胞、S期细胞向G2／M期细胞的转化以及升高骨髓细胞Bcl-2的表达、降低Bax的表达来抑制骨髓细胞凋亡,促进骨髓造血功能的恢复。     

愈障汤对慢性再生障碍性贫血患者骨髓CD_(34)~+细胞bcl-2表达的影响

目的　探讨愈障汤治疗慢性再生障碍性盆血 (CAA)的作用机制。方法　对愈障汤治疗的 39例CAA患者分别于治疗前后采用磁式细胞分选器 (MACS)分离纯化骨髓CD3 4+ 细胞 ;采用SABC亲和细胞法和CMIAS系列多功能真彩图像分析仪检测骨髓CD3 4+ 细胞bcl 2的表达 ,并与 2 6例健康对照组比较。结果　CAA患者骨髓CD3 4+ 细胞bcl 2蛋白表达的阳性率和OD值治疗前均较健康组减低 (P <0 .0 1) ,治疗后显著升高 (P <0 .0 1) ,bcl 2蛋白表达与临床疗效呈正相关。结论　愈障汤治疗CAA的作用机制可能是通过上调凋亡抑制基因bcl 2的表达 ,从而阻抑了骨髓CD3 4+ 细胞的过度凋亡。     

再生障碍性贫血与难治性贫血骨髓长期培养比较及其意义

比较正常人、再生障碍性贫血（ＡＡ）、难治性贫血（ＲＡ）患者的骨髓长期培养（ＬＴＢＭＣ）结果。正常人骨髓培养后３～４周融合并出现脂肪细胞和“鹅卵石区”；ＡＡ骨髓于３～４周后呈融合、部分融合和完全不融合３种；ＲＡ细胞易于聚集呈局灶性生长，１～２周内出现形态大小不一的脂肪细胞，于２～３周融合。培养４周时，正常、ＡＡ、ＲＡ的“鹅卵石区”（２２ｍｍ×２２ｍｍ）、每高倍视野的巨噬细胞数量分别为１２８．６±１２．８．１７．５±６．５，４３．０±６．０；２５．４±２．１，１３．４±２．８，４３．０±３．３。表明不同造血状态的ＬＴＢＭＣ存在明显差异。ＬＴＢＭＣ对慢性ＡＡ与ＲＡ有鉴别诊断价值。     

补肾活血汤结合组织工程软骨修复兔膝关节软骨缺损

目的进一步验证补肾活血汤对骨髓基质干细胞(BMSCs)复合体修复兔关节软骨缺损的影响,评价修复效果。方法取兔骨髓基质干细胞进行密度离心法结合贴壁培养法体外增殖后,复合于改建后的脱细胞真皮基质(acellular dermal ma-trix,ADM)载体上,植入到兔膝关节软骨缺损,并以中药补肾活血汤灌胃为复合组,并设立单纯中药组、单纯干细胞复合体组、空白组为对照组。4、8、12周后分别对修复组织进行形态学观察及组织学检查。进行Wakitani评分,观察其体内修复关节缺损效果。结果术后12周,复合组的缺损由透明软骨样组织充填,软骨及软骨下骨组织基本修复,修复的软骨组织在组织形态学上优于其他各组。结论骨髓基质干细胞复合体能修复家兔膝关节软骨缺损,中药补肾活血汤能促进软骨的修复,且提高了修复质量。     

探索大鼠骨髓基质干细胞体外培养的方法

目的探讨体外培养大鼠骨髓基质干细胞的一些具体的方法、原则和技巧．方法通过具体的选材、取材、首次换液、换液、传代。获得大量的大鼠骨髓基质干细胞。从中探索培养的方法、原则和技巧．结果体外培养获得大量的大鼠骨髓基质干细胞．结论通过理论联系实际，遵循一定的方法、原则和技巧，在不同的环境可以快速准确的体外培养出大量的大鼠骨髓基质干细胞．