大肠杆菌表达重组人IL—8分离纯化工艺的建立

目的 建立重组人ＩＬ－８（ｒｈＩＬ－８）大肠杆菌表达后的高效分离纯化工艺,以便获得遍纯度的重组蛋白。方法 将已构建好的表达载体转化大肠杆菌ＨＢ１０１,经ＩＰＴＧ诱导进行高效表达。交墩心收集到的菌体用超离,再经离子交换柱和凝胶层析柱过滤,得到最终纯品。蛋白纯度用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定,ＥＬＩＳ理组ＩＬ－８含量。检测纯化后重组蛋白的生物活性和热源质。结果 用大肠杆菌ＨＢ１０－１表达重组人ＩＬ－８,具有罚     

弓形虫主要表面抗原基因克隆及在大肠杆菌中的表达

为在大肠杆菌中表达弓形虫主要表面抗原（ＳＡＧ１）,进一步研究其生物学功能。将ＳＡＧ１基因重组于ｐＧＥＭＥＸ－１融合型表达载体上,转化大肠杆菌ＪＭ１０９（ＤＥ３）,得到含重组表达质粒ｐＧＥＭＥＸ－１／ＳＡＧ１的工程菌。结果表明ＩＰＴＧ诱导表达后,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测证实含有ＳＡＧ１蛋白。提示ｐＧＥＭＥＸ－１大肠杆菌系统可以表达具有免疫活性的ＳＡＧ１蛋白。     

系统性红斑狼疮患者血清sICAM-1和IL-12的变化

目的 探讨活动期和稳定期系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者血清中的可溶性胞间粘连分子－１（ｓＩＣＡＭ－１）和白细胞介素１２（ＩＬ－１２）的变化及其意义。方法 应用ＥＬＩＳＡ法测定１６例活动期、１５例稳定期及２０例健康者血清中要和ＩＬ－１２水平,并与抗－ｄｓＤＮＡ,抗核抗体（ＡＮＡ）,血沉等进行相关分析。结果 与对照组比较,稳定期和活动期口才血清中ＩＬ－１２水平依次降低;ＳＬＥ患者血清中ｓＩＣＡＭ－１水平     

人乳头瘤病毒16型E6基因表达产物单克隆抗体的制备研究

将含有人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ_（１６））Ｅ_６基因的重组质粒ＰＡＳ１－ＨＰＶ_（１６）Ｅ_６转染大肠杆菌ＡＲ１２０，在萘啶酮酸诱导下进行表达，表达产物经分离、纯化和鉴定获得一种分子量为１９０００的Ｅ_６表达蛋白。用纯化后的Ｅ６蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，免疫脾细胞与骨髓瘤细胞ＳＰ２／０－Ａｇ１４在ＰＥＧ_（４０００）作用下进行融合，经ＨＡＴ培养基筛选杂交瘤细胞株，甲基纤维素半固体培养基克隆，克隆筛选，ＥＬＩＳＡ检测和再克隆，得到一株持续稳定分泌抗ＨＰＶ_（１６）Ｅ_６蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤株ＲＡＣ_６。     

抑癌基因p16原核表达载体的构建及其表达的研究

为获取具有生物学活性的ｐ１６蛋白，采用定向克隆方法将双酶切克隆质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ－ｐ１６得到的ｐ１６ｃＤＮＡ片段连接到双酶切的原核表达载体ｐＢＶ２２０上，转化大肠杆菌ＴＧ１得到含重组表达质粒ｐＢＶ２２０－ｐ１６的工程菌，温度诱导表达后，经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测证实含有ｐ１６蛋白。结果表明，ｐ１６原核表达载体构建成功并表达出ｐ１６非融合蛋白。     

粒细胞集落刺激因子基因克隆,表达及免疫检测

目的：获得纯净的抗Ｇ－ＣＳＦ蛋白的抗体，用以鉴定、检测和纯化人Ｇ－ＣＳＦ。方法：将经过改造的粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）基因重组到ＰＷＲ－４５０－１载体上得到重组质粒，转化大肠杆菌，抽提纯化ＰＷＲ－４５０－ＧＣＳＦ融合蛋白，作为抗原用以免疫兔子，获得抗血清，并对抗血清进行初步纯化，检测其效价和特异性程度。结果：用ＥＬＩＳＡ方法和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ方法检测抗血清发现本实验所获得的抗血清和融合蛋白及ＰＷＲ－４５０－１均有专一性反应，有一定的特异性。     

水蛭素基因在大肠杆菌中的克隆表达及分离纯化

目的：利用ＤＮＡ重组技术在大肠杆菌中融合表达水蛭素基因。方法：将水蛭素变体１的基因ＨＶ１克隆到ｐＥＺＺ３１８表达载体，转化Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９菌株，ＩＰＴＧ诱导表达，培养上清液经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳检测，ｈＩｇＧ－ａｇａｒｏｓｅ亲和层析纯化。结果：表达的融合蛋白相对分子质量为２０ｋＤ，表达上清的抗凝血酶活力为４７ＡＴＵ（ＡｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎＵｎｉｔ）／ｍｌ。结论：在大肠杆菌中表达的水蛭素融合蛋白对凝血酶的凝血功能具有显著的抑制作用     

大鼠ACAT的N末端片段(氨基酸1～126)在大肠杆菌中的融合表达及纯化

目的： 重组法制备纯化乙酰辅酶Ａ：胆固醇酰基转移酶（ＡＣＡＴ）Ｎ末端膜外结构域（氨基酸１～１２６）。　方法：经ＰＣＲ扩增得到的ＡＣＡＴ的Ｎ末端膜外结构域（氨基酸１～１２６）用ＥｃｏＲＩ酶解,插入到表达载体ｐＧＥＸ－２ＴＫ中,得到重组表达质粒ｐＧＥＸ－２ＴＫ／ＡＣＡＴ（氨基酸１～１２６）。阳性重组子在大肠杆菌中经ＩＰＴＧ诱导表达ＧＳＴ－Ａ－ＣＡＴ（氨基酸１～１２６）,重组表达菌裂解上清液经ＧＳＨ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－４Ｂ亲和柱纯化。　结果：ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ 和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 分析显示得到了纯的ＧＳＴ－ＡＣＡＴ（氨基酸１～１２６）融合蛋白。　结论：ＡＣＡＴ的Ｎ末端膜外结构域（氨基酸１～１２６）的分离纯化为抗ＧＳＴ－ＡＣＡＴ（Ｎ 末端片段）抗体的制备及其ＡＣＡＴ结构和功能关系的进一步研究打下了基础。     

抑癌基因p16原核表达载体的构建及其表达的研究

为获取具有生物学活性的ｐ１６蛋白，采用定向克隆方法将双酶切克隆质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ－ｐ１６得到的ｐ１６ ｃＮＤＡ片段连接到双酶切的原核表达载体ｐＢＶ２２０上，转化大肠杆菌ＴＧ１得到含重组表达质粒ｐＢＶ２２０－ｐ１６的工程菌，温度诱导表达后，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测证实含有ｐ１６蛋白。     

水蛭素基因在大肠杆菌中的克隆表达及分离纯化

目的：利用ＤＮＡ重组技术在大肠杆菌中融合表达水蛭不基因。方法：将水蛭素变体１的基因ＨＶ１克隆到ｐＥＺＺ３１８表达载体，转化Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９菌株，ＩＰＴＧ诱导表达，增减上清液经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳检测，ｈＩｇＧ－ａｇａｒｏｓｅ亲和层析纯化。结果：表达的融合蛋白相对分子质量为２０ｋＤ，表达上清的抗凝血酶和为４７ＡＴＵ／ｍｌ。结论：在大肠杆菌中表达的水蛭素融合蛋白对凝血酶的凝血功能具有显著的抑