LY294002对人纤维肉瘤HT1080细胞生长的影响及机制研究

目的 研究PI3K特异性抑制剂LY294002对人纤维肉瘤HT1080细胞生长的影响及机制.方法 将对数生长期的HT1080细胞分组培养,对照组加入不含LY294002的培养液,实验组加入LY294002,浓度分别为5、10、25、50、100 μmol/L,培养12 h和24 h后,用SunBio~(TM) Am-Blue法测定细胞增殖抑制率.100 μmol/L LY294002作用HT1080细胞24 h后,观察细胞形态的改变,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,并收集蛋白标本,Western Blotting检测p-Akt及p-mTOR蛋白的表达.结果 与对照组比较,随着LY294002剂量、作用时间的增加,对HT1080细胞增殖抑制率增大(P＜0.05).LY294002(100 μmol/L)作用24 h后HT1080细胞胞体皱缩,细胞数较对照组减少,细胞早期凋亡率较对照组增加(P＜0.05),p-Akt(0.23±0.01)及p-mTOR(0.32±0.06)蛋白的表达低于对照组p-Akt(0.63±0.02)及p-mTOR(0.71±0.02)蛋白的表达(P＜0.01).结论 LY294002通过抑制PI3K-mTOR信号通路来抑制HT1080细胞的生长,PI3K-mTOR信号通路参与纤维肉瘤细胞的生长调节,该通路可能作为治疗纤维肉瘤的新靶点.     

LY294002对舌鳞状细胞癌细胞增殖及PTEN蛋白表达的影响

目的:探讨P13K/Akt通路特异性抑制剂LY294002对体外培养的人舌鳞状细胞癌Tea8113细胞增殖活性和PTEN蛋白表达的影响.方法:取处于对数生期的Tca8113细胞以2.5×104 mL-1的浓度接种于96孔板,加入不同浓度(5、10、20、40μmol/L)的LY294002,以等体积的培养液为空白对照组,分别作用24、48、72、96 h,MTT法检测细胞增殖抑制率;免疫细胞化学法检测浓度为40 μmol/L实验组的PTEN蛋白表达.结果:随药物浓度的增加及作用时间的延长,实验组Tea8113细胞的细胞增殖抑制率逐渐增大,LY294002抑制作用与浓度及作用时间呈依赖关系;浓度为40μmoL/L实验组的PTEN蛋白阳性表达率(82.5%)高于对照组(24.3%),差异有统计学意义(P<0.05).结论:LY294002对体外培养的人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖有抑制作用,并可能促使PTEN蛋白表达.     

磷脂酰肌醇-3-激酶抑制剂对人宫颈癌细胞株生长的影响

目的运用磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3-K）特异性抑制剂LY294002[2-（4-吗啉基）-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮]作用于宫颈癌细胞株SiHa,探讨其对宫颈癌细胞增殖的抑制作用。方法培养宫颈癌细胞株SiHa,分为对照组和LY294002干预组（LY294002 5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L）分别作用6h、12h、24h、48h;MTT比色法检测体外使用抑制剂对宫颈癌细胞株SiHa生长的作用;运用流式细胞技术检测SiHa凋亡抑制率。结果 LY294002能抑制宫颈癌体外培养细胞系SiHa的生长,并以剂量-时间依赖方式诱导凋亡,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 LY294002能有效抑制SiHa细胞的增殖,呈时间-剂量依赖性。PI3K/Akt介导的信号转导通路可能宫颈癌的发生发展起作用。     

LY294002联合Znpp IX对人乳腺癌细胞增殖及侵袭能力的影响

[目的]探讨PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002联合血红素加氧酶-1(HO-1)抑制剂Znpp IX对人乳腺癌MCF7/Adr细胞增殖及侵袭能力的影响.[方法]将Znpp IX(0.625~10.000μmol/L)与LY294002(5~80μmol/L)单独或联合应用于人乳腺癌MCF7/Adr细胞,用MTT法检测药物对MCF7/Adr细胞增殖的影响.实验分为对照组、LY294002组(10μmol/L)、Znpp IX组(1.250μmol/L)和联合用药组(LY294002 10μmol/L+Znpp IX1.250μmol/L),用Transwell小室测定各组MCF7/Adr细胞的侵袭力和迁移力,Western blot法检测Akt,p-Akt和HO-1蛋白的表达水平.[结果]联合用药组、LY294002组及Znpp IX组MCF7/Adr细胞的增殖抑制率分别为58.60%±3.24%,42.50%±2.44%和39.70%±3.21%,联合用药组MCF7/Adr细胞的增殖抑制率明显高于LY294002组和Znpp IX组(P<0.05).LY294002和Znpp IX单独或联合应用均可显著抑制人乳腺癌MCF7/Adr细胞的侵袭和转移(P<0.05),其中联合用药组抑制作用显著优于LY294002组和Znpp IX组(P<0.05).Western blot检测结果显示,各组Akt蛋白表达水平间差异无统计学意义(P>0.05);LY294002组p-Akt,HO-1表达水平均明显低于对照组(P<0.05),Znpp IX组HO-1表达水平明显低于对照组(P<0.05),与LY294002组和Znpp IX组比较,联合用药组p-Akt,HO-1水平均明显降低(P<0.05).[结论]Znpp IX和LY294002单独应用均可抑制人乳腺癌MCF7/Adr细胞的增殖、侵袭及转移,联合应用时作用加强,提示Znpp IX和LY294002联合应用具有协同增效作用.     

PI3K-Akt信号通路对人大肠癌hct-8/FU耐药细胞P-GP表达和耐药性的影响

目的:研究磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路对人大肠癌hct-8/FU耐药细胞P-糖蛋白(P-GP)表达和耐药性的影响,探讨其逆转hct-8/FU多药耐药性的作用。方法:MTT法检测人大肠癌hct-8细胞、hct-8/FU耐药细胞、PI3K-Akt通路抑制剂LY294002处理的hct-8/FU耐药细胞对5-FU的半数生长抑制率和耐药指数;蛋白质印迹法检测hct-8、hct-8/FU细胞、LY294002处理的hct-8/FU耐药细胞PI3K、Akt、P-Akt、P-GP的表达变化。结果:大肠癌hct-8细胞对5-FU的半数生长抑制率为(43.2±1.4)mg.L-1,hct-8/FU耐药细胞为(516.00±20.03)mg.L-1,耐药指数为11.9;LY294002处理hct-8/FU耐药细胞后半数生长抑制率为(58.2±4.3)mg.L-1,耐药指数为1.37,较用药前对5-FU的敏感性提高,逆转指数为8.8(P<0.01);hct-8/FU耐药细胞PI3K、Akt、P-Akt、P-GP表达较hct-8细胞明显增加(均P<0.01),LY294002作用后其PI3K、Akt、P-Akt、P-GP表达较用药前明显下降(P<0.01)。结论:PI3K-AKT信号通路可能通过促进人大肠癌hct-8 P-GP的表达,增加其对5-FU的耐药性,降低肿瘤细胞对药物的敏感性。     

二氮嗪预处理对H_2O_2损伤L6骨骼肌成肌细胞的作用及机制研究

目的:研究二氮嗪(diazoxide,DZ)预处理对H2O2损伤L6骨骼肌成肌细胞(skeletal myoblast,SKM)的保护作用,并探讨其与磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)/Akt信号通路的关系。方法:体外培养的L6 Sk Ms随机分为4组:对照组、H2O2损伤组(H2O2group;0.40mmo1/L H2O2作用24h),DZ预处理组(DZ group;200μmol/L DZ预处理30 min后,0.40mmo1/L H2O2作用24 h),LY294002抑制剂组(LY group;200μmol/L DZ和50μmol/L LY294002共同孵育30 min后,0.40mmo1/L H2O2作用24 h)。采用MTT比色法检测各组细胞存活率;Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Western blotting法检测各组细胞P-Akt、Caspase-3、Caspase-9的表达水平。结果:与对照组相比,H2O2损伤可诱导细胞凋亡,显著降低细胞存活率,降低P-Akt蛋白表达而增加Caspase-3,9蛋白表达。与H2O2组比较,DZ组的细胞存活率显著上升,凋亡率显著下降,P-Akt蛋白表达明显增加而Caspase-3,9表达明显降低。而PI3K抑制剂LY294002能够显著抑制DZ预处理对细胞的保护和抗凋亡作用,同时使P-Akt蛋白表达显著降低,Caspase-3,9蛋白表达显著增加。结论:DZ预处理可激活PI3K/Akt信号通路,下调凋亡蛋白caspase-3,9,从而抑制H2O2引起的L6 SKMs的凋亡。     

萝卜硫素下调Traf6/NF-κB信号通路抑制肾癌细胞增殖的作用研究

目的 探讨萝卜硫素对肾癌细胞(RC-2)增殖的影响及其机制.方法 体外培养RC-2和Traf6过表达的RC-2细胞,不同浓度萝卜硫素处理对数生长期的细胞株,采用CCK8试剂盒检测萝卜硫素对RC-2细胞和过表达Traf6基因RC-2细胞增殖的抑制作用;免疫印迹(Western blot)和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测RC-2细胞中Traf6和NF-κB蛋白及mRNA的表达水平.结果 萝卜硫素的浓度大于10μmol/L时可抑制RC-2细胞的增殖,并随着浓度增加抑制率随之增强;Traf6的过表达可以促进RC-2细胞的增殖;RT-PCR和Western blot实验结果表明20μmol/L的萝卜硫素可以抑制Traf6的表达而引起NF-κB表达下调.结论 萝卜硫素可以抑制RC-2细胞的增殖,其机制可能与下调Traf6/NF-κB信号通路蛋白表达有关.     

吡柔比星对HL-60细胞NF-κB p65活性及细胞凋亡的影响

目的研究吡柔比星(perarubicin,THP)对髓系白血病细胞系HL-60细胞凋亡与核因子-κB p65(nucle-ar factor kappa B p65,NF-κB p65)活性的影响。方法指数生长期HL-60细胞置于96孔培养板内RPMI 1640培养液培养2 h后,分为两部分,第1部分又分为A、B 2组。A组加PBS液继续培养12 h,B组分别加1、10、100μmol/L(终浓度)的THP继续培养12 h;用DNA梯状凝胶电泳法(DNA ladder electrophoresis)和流式细胞检测技术(flow cy-tometry,FCM)分别检测HL-60细胞的凋亡率。第2部分也分为A、B 2组,A组加PBS液继续培养3 h,B组分别加1、101、00μmol/L(终浓度)的THP继续培养3 h;用FCM检测NF-κB p65活化率。结果1、10、100μmol/L的THP诱导HL-60细胞的凋亡率分别为(31.78±4.31)%(、47.25±5.27)%(、56.49±1.59)%,组间及与对照组(6.46±1.45)%比较差异有统计学意义(P<0.05);诱导的HL-60细胞NF-κB p65活化率分别为(16.21±1.20)%、(23.98±3.21)%(、32.44±2.89)%,组间及与对照组(8.44±2.20)%比较差异有统计学意义(P<0.05)。DNA梯状凝胶电泳Ladder出现从多到少的顺序为:100μmol/L THP1、0μmol/L THP、1μmol/L THP、对照组。结论THP在促进HL-60细胞凋亡的同时有诱导其NF-κB p65活化的作用,均存在剂量依赖。     

芝麻酚对体外培养人结肠癌HCT-8细胞的影响及其机制

目的：探讨芝麻酚对体外培养人结肠癌HCT-8细胞的影响及其机制。方法：体外培养人结肠癌HCT-8细胞,分为对照组、芝麻酚50μmol/L组、芝麻酚100μmol/L组和芝麻酚250μmol/L组共4组,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测各组不同作用时间细胞增殖率,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,采用蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测各组Janus激酶2/信号转导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路相关蛋白、增殖相关蛋白和凋亡相关蛋白表达水平。结果：经芝麻酚处理24、48、72 h后,HCT-8细胞的OD值从高到低依次为对照组>芝麻酚50μmol/L组>芝麻酚100μmol/L组>芝麻酚250μmol/L组,HCT-8细胞的抑制率从低到高依次为对照组<芝麻酚50μmol/L组<芝麻酚100μmol/L组<芝麻酚250μmol/L组,差异有统计学意义（P<0.05）;经芝麻酚处理后HCT-8细胞凋亡率从低到高依次为对照组<芝麻酚50μmol/L组<芝麻酚100μmol/L组<芝麻酚250μmo...     

LY294002对人乳腺癌细胞株MCF-7／ADR的耐药逆转作用

目的探讨P13K／Akt信号转导通路特异性阻滞剂LY294002在体外对人乳腺癌细胞株MCF-7／ADR的耐药逆转作用。方法乳腺癌细胞MCF-7和MCF-7／ADR各自分为未加LY294002的对照组及加入不同浓度的LY294002组,MTF法观察各组药物的细胞毒作用。选用流式细胞术（FCM）检查细胞凋亡率、细胞分布周期的变化。结果①LY294002在浓度10umol／L以下时对两种细胞基本无毒性,为安全有效的逆转剂量。②阿霉素对MCF-7和耐药细胞MCF-7／ADR的半数抑制浓度（IC50）分别为（0．14±0．02）μmol／L和（15．74±0．08）μmol／L,耐药倍数为112倍。③LY294002能够增强阿霉素对MCF-7／ADM的细胞毒作用,LY294002浓度0．1、2．5、5．0、10μmol／L分别作用于MCF-7／ADM细胞48h后,耐药细胞株的IC50分别降至（13．53±0．10）μmol／L、（10．24±0．08）μmol／L、（5．53±0．16）μmol／L、（2．29±0．12）μmol／L,差异有统计学意义（P〈0．01）。④LY294002可显著增加MCF-7／ADR细胞凋亡率（P〈0．01）。细胞周期分布显示,加用LY294002对各个细胞周期影响不明显。结论LY294002能够增加MCF-7和MCF-7／ADR的化疗敏感性,部分逆转耐药细胞MCF-7／ADR的多药耐药性。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。