脑胶质瘤中PTEN基因表达的实时定量PCR研究

目的:探讨PTEN基因在胶质瘤中的表达及意义,以及与预后的关系.方法:采用荧光实时定量PCR技术检测44例人脑胶质瘤组织及其19例邻近正常脑组织、7例良性脑肿瘤中的PTEN mRNA及内参GAPDH的表达水平.结果:高分化组(29例)PTEN基因的表达明显高于低分化组(15例)(P＜0.05)这两组分别与良性脑肿瘤组(7例)相比,均有显著差异(P＜0.05).19例胶质瘤与邻近正常脑组织有显著差异(P＜0.000).高分化组和底分化组之间在1年或3年存活率的比较中,存在明显差异(P＜0.05).结论:PTEN基因在胶质瘤的发生及发展中起重要作用,脑胶质瘤中PTEN基因的表达与胶质瘤的恶性程度及预后相关.     

重症肌无力患者免疫相关基因差异表达的基因芯片研究

目的:使用基因芯片技术研究重症肌无力(MG)患者外周血单个核细胞免疫相关基因的差异表达。方法:采用BIOSTAR Human-6-V3型人类全长基因cDNA表达谱芯片筛选30例初次发病MG患者差异表达的免疫相关基因,酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者外周血IL-6、TNF-α的水平,对MG患者病情按许贤豪绝对评分法进行评分,并比较其临床意义。结果:158条差异表达免疫相关基因中,表达上调的基因76条(Ratio值2.0倍以上),表达下调的基因82条(Ratio值0.5倍以下),差异表达的免疫相关基因主要涉及细胞因子及其受体、趋化因子及其受体、细胞黏附分子、白细胞分化抗原、免疫转录调节分子、天然免疫分子等,细胞因子中IL-6、TNF-αmRNA表达水平显著上调,与MG患者血清IL-6、TNF-α水平检测结果一致,血清IL-6、TNF-α水平与MG临床绝对评分呈正相关。结论:人类全基因芯片技术可以快速、高通量筛选出MG患者差异表达的免疫相关基因,结果证实多个免疫基因参与了MG发病过程,为进一步阐明MG发病的免疫机制及治疗提供新的思路。     

LIM结构域结合蛋白1在脑胶质瘤患者中的表达研究

目的 观察LIM结构域结合蛋白1(LIM-domain-binding 1,Ldb1)在脑胶质瘤患者中的表达.方法 采用Real-timePCR方法检测46例脑胶质瘤手术患者脑组织、18例正常对照和16例良性脑肿瘤对照脑组织标本中Ldb1 mRNA的表达水平;采用免疫组化EnVision二步法观察Ldb1在高级别胶质瘤中的蛋白表达定位.结果 脑胶质瘤患者脑组织Ldb1的mRNA表达高于正常对照组和良性脑肿瘤对照组.Ldb1在不同分级的胶质瘤中表达并不相同,在Ⅲ、ⅣV级中的相对表达量明显高于Ⅰ、Ⅱ级(P ＜0.001).在高级别胶质瘤中,Ldb1蛋白主要表达在肿瘤细胞核和胞浆内.结论 脑胶质瘤患者肿瘤组织中Ldb1表达增高,可能参与了胶质瘤的发生、发展过程.     

免疫治疗在脑胶质瘤中的研究进展

脑胶质瘤是神经系统最常见的恶性颅内肿瘤.传统的治疗方式虽然能有效的抑制脑胶质瘤的生长,但是由于其高恶性程度和高复发率,恶性胶质瘤患者的术后生存期没有显著改善.研究证实,免疫治疗不仅发挥肿瘤杀伤作用,还能提升宿主的抗肿瘤免疫反应应答,被认为是难治性肿瘤的重要的辅助治疗策略.     

大鼠C6胶质瘤细胞的基因表达谱

目的:筛选比较大鼠C6胶质瘤细胞与正常星型胶质细胞中的差异表达基因。方法:利用Illumina Hi Seq4000技术对大鼠C6胶质瘤细胞和正常星形胶质细胞进行转录组测序并对测序结果进行功能注释。以|log2 Fold Change|≥1和q值0.05为标准筛选差异表达基因,并通过GO和KEGG数据库分析其功能和参与的信号通路。结果:较之正常星形胶质细胞,大鼠C6胶质瘤细胞中共筛选得到4363个差异表达基因,其中1603个基因表达上调,2760个基因表达下调;GO富集结果表明:4109个差异表达基因共映射到906个GO term,主要与GTP酶活性正性调节、基因表达正性调节、蛋白结合和钙离子结合等功能相关;KEGG富集结果表明:1535个差异表达基因共参与106条通路,富集最多的是PI3K-Akt信号通路和癌症发生通路。结论:成功获取大鼠C6胶质瘤细胞与正常胶质细胞的基因表达谱,并对其差异基因进行GO和KEGG注释,结果有助于胶质瘤发生发展的研究。     

人脑胶质瘤基因表达谱芯片的构建和初步验证

目的：构建人脑胶质瘤特异的基因表达谱芯片,促进大规模胶质瘤表达谱的研究。方法：采用389条基因探针,优化基因芯片制作的各个条件：片基、点样液、点样大小、紫外交联、采集信号强度等。使用自制芯片检测20例胶质瘤标本的基因表达谱,并与以前报道的实验结果对比,验证芯片的特异性和灵敏度。结果：构建了针对人脑胶质瘤的基因表达谱芯片,并用于脑胶质瘤的基因表达谱分析,证实本产品可以有效地高通量检测相关基因的表达水平。结论：构建的胶质瘤芯片有望用于胶质瘤基因表达谱分析。     

脑胶质瘤浸润淋巴细胞的生物学特性

本文应用酶消化和不连续密度梯度离心方法,从9例原发性脑胶质瘤中分离出肢质瘤浸润淋巴细胞(GIL),并对其生物学特性进行分析,结果为:GIL体外长期培养生长能力强于LAK细胞;GIL的NK活性和产生γ-干扰素能力低下,经IL-2培养激活后,NK活性和产生γ-干扰素能力显著提高;GIL中71.0±11.9痞为CD_8~+的T淋巴细胞,其中CD_8~+细胞多于CD_4~+细胞。结果表明浸润在胶质瘤内的淋巴细胞功能低下,缺乏直接和间接杀伤肿瘤细胞活性。经IL-2激活后,GIL的抗肿瘤活性显著增强,可作为免疫治疗肿瘤的效应细胞。     

基因芯片筛选Bardct-Bicdl综合征患者外周血差异表达基因

目的 采用基因表达谱芯片研究Bardet-Biedl综合征(Bardet-Biedl syndrome,BBS)患者外周血单个核细胞差异基因表达谱.方法 抽取3例BBS先证者及4名年龄、性别匹配的健康对照者静脉血,分离外周血单个核细胞,用Trizol一步法提取总RNA并进行扩增和标记,然后与Affymetrix U133 Plus 2.0芯片进行杂交,扫描芯片并将图像信号转化为数字信号,GCOS1.4软件读取、处理数据.将患者与正常对照基因表达谱进行比较,最后以表达差异≥2倍(P＜0.05)为标准来确定差异表达基因.结果 BBS患者与正常对照相比,有30个基因表达有显著差异,包括15个上调基因及15个下调基因.通过GO分析,有12个基因与信号传导及细胞周期有关.结论 筛选到的差异基因与纤毛的功能或结构相关性及在BBS发生及发展中的作用有待研究.     

应用基因芯片技术对Graves病免疫相关基因的研究

应用基因芯片技术研究Graves病 (GD )和正常成人甲状腺组织免疫相关基因的差异表达。分别用Cy5和Cy3两种不同的荧光染料通过逆转录反应将GD组和对照组甲状腺组织的mRNA分别标记成探针 ,并与载有一组靶基因的基因表达谱芯片进行杂交。通过扫描荧光强度 ,计算机软件分析 ,寻找两组差异表达基因。GD组和正常对照组之间共筛选出 80条差异表达基因 ,其中表达增加的基因有 31条 (2 0倍以上 ) ,表达降低的基因有 4 9条 (0 5倍以下 )。基因表达谱芯片筛选GD与正常成人甲状腺组织差异表达基因具有样品用量少、高速度、高敏感、高通量等特性。通过筛选所得差异基因提示GD的发病涉及细胞因子、受体信号转导等多个方面 ,为进一步阐明GD的发病机制提供新线索。     

PTEN基因与脑胶质瘤

ＰＴＥＮ基因是肿瘤抑制基因家族的新成员,它具有蛋白质酷氨酸磷酶催化区域,并与张力蛋白、辅助蛋白同源,在高级别胶质瘤中ＰＴＥＮ基因发生突变而失活,但经复制缺陷型腺病毒转染野生型ＰＴＥＮ基因的瘤细胞增殖可受到抑制。     

cDNA芯片法筛选压力负荷型心肌肥厚相关基因

应用cDNA芯片技术筛选腹主动脉绑扎后4周大鼠的压力负荷型心肌肥厚相关基因。在反转录来自假手术及腹主动脉绑扎（4周）的大鼠心肌细胞RNA的过程中，用α－^33P-dATP进行探针的标记。然后将探针与微阵列尼龙腹杂交，高严谨度洗涤后分析杂交图谱。通过所获某种特定基因信号的相对强度来比较其对照及腹主动脉绑扎的大鼠心肌组织中表达水平的差异。结果显示有235个基因片段在两组之间信号差别在3倍以上，其中5倍以上差异的基因有55个，而在这55个基因中有26个基因功能未知。所得差异自然包括TGFβ受体III，raf,ARF,clk2等重要的信号传导分子与心肌肥厚的发生密切相关。     

应用基因芯片研究As2O3诱导K562细胞前后差异表达基因

目的研究三氧化二砷(As2O3)处理K562细胞前后,基因表达的变化。方法提取As2O3作用K562细胞前后的总RNA,逆转录成cDNA并用Cy3标记对照组,Cy5标记处理组,与自制的包含162个cDNA片段的K562芯片杂交。结果K562细胞经As2O3作用后,162个基因片段的表达都有所降低,其中25个基因片段的表达降低较为显著(Cy5/Cy3<0.5)。这些表达下调的基因片段包括转导因子、代谢酶、信号通路蛋白、激酶等,有6个差异表达基因与细胞的凋亡通路密切相关。As2O3可能通过抑制胰岛素样生长因子的功能,诱导细胞凋亡。结论应用自制的基因芯片筛选到了As2O3诱导K562细胞前后差异表达的基因,主要与细胞凋亡密切相关。     

与原发性食管癌进展相关基因的筛选

目的 应用基因微矩阵技术分析原发性食管癌基因表达谱,筛选与食管癌进展相关基因。方法 利用激光捕获微切割-T7 RNA聚合酶体外扩增联合cDNA芯片技术对15例原发性食管癌的基因表达谱进行筛选,并通过比较组间差异基因筛选出与肿瘤进展相关的基因。结果 在886条目的基因中,筛选出34条基因在Ⅰ/Ⅱ和Ⅲ/Ⅳ组间存在显著性差异(p<0.05),其中细胞周期调节类基因与早期食管癌发生有关,而细胞外基质类、黏附分子类基因主要参与食管癌的浸润和转移。结论 多个基因表达变化在食管癌发生中起作用,而进展相关基因的筛选为其临床诊治提供了新的思路和线索。     

基因芯片筛选成釉细胞瘤差异表达基因的研究

目的： 用生物芯片技术筛选成釉细胞瘤相关基因。方法: 分别从人成釉细胞瘤和16周人类胚胎的牙胚组织中提取总RNA并纯化为mRNA，2种组织的mRNA分别逆转录合成有荧光分子标记的探针，然后与含有14 000种人类基因的芯片进行杂交，杂交信号用ScanArray4000 Standard Biochip Scanning System扫描仪扫描，结果用芯片图像分析软件（Genepix Pro3.0）进行分析。结果: 经过杂交筛选并与人类胚胎牙胚组织比较，从14 000个基因中筛选出差异表达基因722个，占5.0%，大于2倍的上调基因有240个（33.0%），其中有92个基因表达超过3倍；下调基因482个(67.0%)。结论: 运用基因表达谱芯片可以初步筛选出成釉细胞瘤相关基因。     

基因芯片技术检测环境中常见致病菌的初步研究

目的：为了快速，准确地检测环境中存在的致病菌，建立一种采用基因芯片技术对环境中常见致病检测和鉴定的实验方法。方法：采用合成后点样的方法把自行设计合成的一系列寡核苷酸探针固定在经过醛基化修饰的显微镜载玻片上，制成用于致病菌检测的基因芯片。结果：在相同的条件下，扩增了涉及12个菌属的151株细菌的165rDNA基因片段并与基因芯片杂交，经Scan-Array3000芯片阅读仪扫描得到特异性的交杂图，归纳这些杂交图，得到一套属（种）特异的典型杂交图谱。待检的样品菌与基因芯片进行杂交，得到的杂交结果与典型图谱比对即可判断出样品的种类。用这样的方法对从实际样品中分离的细菌进行检测，准确率表达了96．2％（25／26）。结论：该项技术的建立为今后更大规模的检测研究奠定了基础，可以推广应用于感染性疾病诊断，环境监测，食品卫生监督，商品检验检疫等领域。     

用基因芯片研究人肺癌转移相关基因

目的 自制肿瘤转移相关基因芯片研究人肺癌高、低转移细胞系PG和PAa间以及肺癌、淋巴结转移癌与正常肺组织间的基因表达谱差异，筛选与肺癌转移相关的特异基因。方法 提取2种肺癌细胞系、人肺癌、淋巴结转移癌及周围正常肺组织的mRNA后逆转录标记cDNA探针，与自制的含399个肿瘤转移相关基因的微阵列膜杂交，QuantArray软件分析杂交信号强度获得差异表达基因。结果 正常肺组织与肺原发癌的基因表达谱有显著差异。淋巴结转移癌组织与PG高转移细胞系表达基因行聚类分析，共同表达且最具统计学意义的基因有64个，包括上调基因27个，下调基因37个。结论 多基因参与肺癌的转移过程，肺转移癌与高转移细胞系共同差异表达的基因可能与肺癌的高转移特性密切相关。