中医药在脑缺血再灌注后神经细胞凋亡中的研究

脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的机制目前尚未完全阐明,对凋亡的发生机制的探讨及阻止凋亡发展因素的研究是近年来缺血性脑血管病研究的热点。文章就近年来中医药抗脑缺血再灌注后神经细胞凋亡等方面的研究进展进行综述。     

中药活性成分干预脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的研究进展

<正>脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)是缺血性脑卒中血流供应恢复后出现的神经细胞结构和功能进一步损伤的病理过程^[1]。目前阻断脑卒中向CIRI进展的治疗主要以对症处理为主^[2],寻找阻断或治疗CIRI的有效药物是临床上亟待解决的问题^[3]。中医学无“脑缺血再灌注损伤”的病名,按照CIRI临床症候表现,认为其属于缺血性中风的范畴,证属本虚标实^[4]。急性期以风火、痰热、血瘀等实证为主,多治以平肝潜阳、化痰息风、清热通腑和活血化瘀;恢复期、后遗症期则以气阴两伤、脾肾亏虚等虚证为主,常治以益气滋阴、补益脾肾之法^[5]。     

牛磺酸对降低大鼠脑缺血再灌注损伤中细胞凋亡的作用

牛磺酸（ｔａｕｒｉｎｅ，Ｔａｕ）对脑缺血再灌注神经元损伤具有保护作用，其机制尚不清楚。近年，研究提示细胞凋亡是脑缺血损伤的重要形式。本实验通过建立全脑缺血模型，观察Ｔａｕ保护性治疗后细胞凋亡的变化，证明了Ｔａｕ能够降低脑缺血中细胞凋亡的发生，为在脑缺...     

芪棱汤对大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的:研究芪棱汤对脑缺血再灌注后,"缺血半暗带"神经元细胞凋亡的影响.方法:采用线栓加环扎法模型,运用TUNEL法,在脑缺血再灌注后不同时间点检测凋亡细胞数目的变化.结果:在再灌注各时间段,补阳还五汤及芪棱汤均能减少缺血半暗带神经元细胞的凋亡(P＜0.05),而芪棱汤的效果优于补阳还五汤(P＜0.05).结论:芪棱汤可以减少脑缺血再灌注损伤后细胞的凋亡,从而达到脑保护的作用.     

头针对急性脑缺血再灌注大鼠细胞凋亡的影响

目的探讨头针治疗脑缺血的可能机制。方法将90只健康SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、头针组模型组和头针组再根据缺血再灌注时间的不同而随机分为6、24、48、72h共八个亚组,采用大脑中动脉线栓法制备大脑中动脉闭塞(MCAO)再灌注模型,选取顶颞后斜线,顶颞前斜线、进针后接韩氏穴位神经刺激仪治疗;观察各时间点大鼠神经功能缺损、脑神经元TUNEL阳性细胞数的变化。结果头针组与模型组各时相上的组间比较,第72小时头针组的NSS显著低于模型组;模型组缺血侧神经细胞凋亡数随再灌注时间延长而增加,24h达高峰;头针治疗可明显减少神经细胞凋亡数,以24、48h显著。结论头针有利于大鼠脑神经功能的恢复,可减轻急性脑缺血再灌注后细胞凋亡,并在一定范围内降低阳性凋亡细胞的表达。头针抗脑缺血的作用机制可能为抑制细胞凋亡反应,减轻脑缺血再灌注损伤,实现脑组织的保护作用。     

水蛭注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡的影响

目的:观察水蛭注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡的影响,探讨其神经保护作用机制。方法:选用健康Wistar大鼠60只随机分为假手术组,生理盐水对照组,川芎嗪对照组,水蛭注射液大、小剂量组,每组各12只。除假手术组外,其余四组均采用栓线法制作大鼠脑缺血再灌注损伤模型。分别于规定时间腹腔注射生理盐水(4ml/kg)、川芎嗪(6ml/kg)、水蛭注射液(2ml/kg或4ml/kg),进行神经功能评分,测定脑梗塞面积,计算脑组织神经细胞凋亡的百分率。结果:水蛭注射液大、小剂量组大鼠再灌注损伤后的神经功能评分、脑梗死面积百分比及脑神经细胞凋亡率与生理盐水对照组比较有显著性差异(P<0.01),尤以水蛭注射液大剂量组为明显。结论:水蛭注射液能改善大鼠脑缺血再灌注损伤的神经功能缺失,减少脑梗死面积,并能减低脑神经细胞凋亡的发生率,从而对脑缺血具有保护作用。     

中医药抗脑缺血再灌注损伤实验研究进展

当前,抗脑缺血后再灌注损伤已成为脑缺血治疗中的重点,而中医药在此方面表现出独特的作用.因此,阐明其作用机理也越来越成为研究的热点.     

中医药抗缺血再灌注损伤细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡(apoptosis)又称细胞程序性死亡，是一种不同于细胞坏死的死亡方式，它是指在一定的生理或病理条件下，细胞遵循自身的程序，自己结束其生命的过程，最后细胞脱落离体或裂解为若干凋亡小体(apoptotic bodies)而被其他细胞吞噬。现代医学研究认为缺血再灌注损伤是大多数急性缺血性疾病的主要病理生理过程，而细胞凋亡则是器官、组织缺血再灌注损伤过程中细胞死亡的重要机制之一，因此干预细胞凋亡，从而防治缺血再灌注损伤已经引起国内外广泛关注。近年来的研究表明，许多中医药有抗细胞凋亡的作用。笔者就中医药抗缺血再灌注损伤细胞凋亡的研究作一综述。     

芍药苷对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响及其作用机制

目的:探讨芍药苷对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:选择健康雄性SD大鼠80只,随机分为假手术组、模型组、芍药苷组及尼莫地平组各20只,建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,观察各组大鼠神经行为学评分及脑梗死面积,TUNEL检测大鼠神经细胞凋亡情况,免疫组化法检测大鼠大脑皮层中Bcl-2和Bax蛋白表达情况。结果:假手术组大鼠未表现出神经功能缺失症状,模型组大鼠神经行为学评分及脑梗死面积高于假手术组,芍药苷组及尼莫地平组均低于模型组,差异具有统计学意义(P0.05);假手术组几乎未见神经细胞凋亡,模型组TUNEL阳性细胞明显多于假手术组,芍药苷组及尼莫地平组细胞凋亡个数及阳性率均低于模型组,其差异具有统计学意义(P0.05);假手术组大鼠大脑皮质中Bcl-2及Bax的灰度值均高于模型组,芍药苷组及尼莫地平组大鼠Bcl-2灰度值较模型组降低,而Bax灰度值较模型组明显升高,2组Bcl-2/Bax灰度值较模型组下降,其差异具有统计学意义(P0.05)。结论:芍药苷可通过抑制Bax的表达,上调Bcl-2的表达来抑制神经细胞凋亡,从而保护神经功能,减轻脑梗死。     

天花粉对脑缺血再灌注大鼠细胞凋亡的影响

目的研究天花粉对脑缺血再灌注大鼠脑神经细胞凋亡的影响及其分子机制。方法雄性SD大鼠54只随机分为假手术组、模型组和天花粉组,采用Zea Longa线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,缺血3 h后再灌注。术后分12 h、24 h、48 h 3个时间点以TUNEL法观察凋亡的情况,免疫组化观察缺血周围区Cyclin D1表达强度。结果与模型组比较,天花粉组凋亡阳性细胞数和Cyclin D1免疫阳性细胞数显著均显著减少(P均<0.01)。结论天花粉可减轻大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡,减少Cyclin D1的表达。     

红花黄素预处理对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的研究红花黄素预处理对心肌缺血-再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法采用在体左冠状动脉前降支结扎法制备心肌缺血-再灌注模型。24只SD大鼠分为3组:假手术组,缺血-再灌注组,红花黄素预处理组。缺血30 min,再灌注60 min。采用缺口末端标记法以及免疫组化法,观测心肌细胞凋亡指数(AI)、Bcl-2、Bax基因蛋白表达。结果与假手术组比较,缺血-再灌注组AI增加,Bax阳性表达增强,Bcl-2阳性表达减弱(P<0.01);与缺血再灌注组比较,红花黄素预处理组AI、Bax阳性表达下降(P<0.01),Bcl-2阳性表达上调(P<0.05)。结论红花黄素预处理通过抑制心肌细胞凋亡,下调Bax基因蛋白表达,上调Bcl-2基因蛋白表达,起到心肌缺血再灌注损伤的保护作用。     

乌附经方预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的观察含乌头、附子、半夏、栝楼的乌附经方对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用,探讨含有十八反药物的方剂用于特定病理状态的可行性。方法雄性Wistar大鼠50只随机分为5组,即：假手术对照组（SH组）、心肌缺血再灌注模型对照组（I/R组）、乌附经方低剂量组（I/R+JFL组）、乌附经方中剂量组（I/R+JFM组）及乌附经方高剂量组（I/R+JFH组）,每组10只。乌附经方低、中、高剂量组分别以0.75、1.50、3.00 mL/100 g体质量的剂量灌胃14天,浓度500 g/L;除SH组外,其他各组结扎冠状动脉左前降支,使心肌缺血30 min,再灌注120 min。透射电镜观察心肌线粒体的超微结构改变;一步法脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL）检测各组缺血心肌细胞凋亡;RT-PCR法测B细胞白血病/淋巴瘤－2基因（B-cell leukemia/lymphoma 2,Bcl-2）、与Bcl-2相关的x蛋白（Bcl-2 associated x protein,Bax）的mRNA表达;ELISA检测血清乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase,LDH）、肌酸激酶（creatine kinase,CK）活性,并测定心肌梗死面积的大小。结果与I/R组比较,乌附经方各组均能降低血清中LDH、CK的释放量（且随着剂量的增加LDH、CK的释放量递减）,减小心肌梗死面积、降低凋亡指数（P<0.05）;经方组凋亡基因Bcl-2表达水平上升,Bax表达水平下降,Bcl-2/Bax比值升高。结论乌附经方预处理可能通过减少细胞凋亡,对心肌缺血再灌注损伤产生保护作用。说明“十八反”不是绝对的,而是相对的,含有相反中药的复方制剂可用于缺血性心肌病等特定的病理状态。     

竹节参总皂苷对大鼠局灶性脑缺血/再灌注神经元凋亡的影响

目的：研究竹节参总皂苷（total rhizome panacis japonica saponins,tRPJS）对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响及机制。方法：采用大鼠右侧大脑中动脉阻断（middle cerebral artery occulusion,MCAO）局灶性脑缺血再灌注模型,大鼠随机分为假手术组、损伤模型组、tRPJS不同剂量组（50、100、200mg·kg^-1ip）,观察各组大鼠神经功能状态,应用TUNEL法和免疫组化染色分别检测神经凋亡细胞数及bcl-2、Bax蛋白表达。结果：与损伤模型组比较,tRPJS治疗组可明显改善大鼠神经功能的受损程度,并减少神经细胞凋亡数,明显增加bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白表达,并呈剂量依赖性。结论：tRPJS在局灶性脑缺血再灌时具有抗神经细胞凋亡作用,改善受损的神经功能,从而对脑缺血再灌注损伤起保护作用,其机制可能与上调bcl-2蛋白,下调Bax蛋白的表达有关。     

白藜芦醇对脑缺血再灌注大鼠JNK、P38和神经元凋亡的影响

目的 观察白藜芦醇对脑缺血再灌注（I/R）大鼠JNK、P38和神经元凋亡的影响。方法 36只SD大鼠随机分为：假手术组,I/R组,Res组[40 mg/（kg·d）]。线栓法制备SD大鼠MCAO模型,I/R后24 h,观察大鼠神经功能缺损评分,采用光镜观察各组大鼠脑组织病理学改变,用TUNEL法观察细胞凋亡情况,用Western blotting检测大鼠脑组织JNK、p-JNK、P38、p-P38的表达。结果 1）白藜芦醇组大鼠神经功能评分较I/R组明显减低（P <0.05）。2）白藜芦醇可以改善大鼠脑组织病理学改变。3)I/R组大鼠脑组织的凋亡细胞明显高于假手术组（P <0.01）,白藜芦醇组低于I/R组（P <0.01）。4)I/R组脑组织中p-JNK、p-p38的水平明显高于假手术组,Res组p-JNK、p-p38的水平低于I/R组（P <0.05）。结论 白藜芦醇对大鼠I/R损伤的保护作用可能与白藜芦醇下调p-JNK、p-p38的水平,减少大鼠神经元的凋亡有关。     

葛根素对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的:探讨葛根素对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡的影响。方法:建立大鼠缺血/再灌注模型,并给予葛根素药物干预,观察各组心肌细胞凋亡的情况,以了解细胞凋亡及葛根素在再灌注损伤中所起的作用。结果:假手术组及单纯缺血组凋亡细胞无明显增多,而缺血/再灌注组凋亡细胞明显增多(P<0.01);在再灌注前给予葛根素治疗可减少因再灌注引起的细胞凋亡(P<0.05)。结论:缺血/再灌注后可见心肌细胞凋亡发生,再灌注可加速细胞凋亡的发生;葛根素可抑制心肌细胞凋亡。     

桃红四物液对肢体缺血-再灌注损伤大鼠骨骼肌细胞凋亡的影响研究

目的:观察桃红四物液对肢体缺血-再灌注损伤大鼠骨骼肌细胞凋亡的影响。方法:2月龄雄性SD大鼠50只,按随机数字表法分为5组:正常组、缺血再灌注组(IR组)、桃红四物液低剂量组(TD-IR组)、桃红四物液中剂量组(TZ-IR组)和桃红四物液高剂量组(TG-IR组),每组10只。复制肢体缺血再灌注损伤模型,采用HE染色法观察骨骼肌细胞形态学变化,DAPI法检测细胞凋亡。结果:(1)除正常组外,各组均出现不同程度肌纤维肿胀、排列不规则、肌纤维间隙增宽等情况,较之IR、TG-IR两组,TD-IR、TZ-IR两组损伤较轻,TG-IR组损伤程度最重。(2)IR、TG-IR、TD-IR和TZ-IR 4组骨骼肌细胞凋亡率降较正常组升高(P0.05),与IR、TG-IR两组比较,TD-IR、TZ-IR两组细胞凋亡率降低(P0.05),且TZ-IR组最低、TG-IR组最高。结论:一定剂量的桃红四物液能减轻肢体缺血-再灌注损伤,降低损伤骨骼肌细胞的凋亡率,对骨骼肌有一定的保护作用,本实验中中剂量桃红四物液效果最佳,高剂量的桃红四物液反可加重肢体缺血再灌注损伤,因此在临床上应严格控制好用药剂量。     

灯盏细辛对大鼠心肌缺血再灌注心律失常和细胞凋亡的影响

目的 观察灯盏细辛（breviscapine）对大鼠缺血／再灌注（I／R）时室性心律失常和心肌细胞凋亡的影响,并与缬沙坦（valsartan）比较其作用效果。方法 40只大鼠随机分为假手术组（Sham组）、I／R组、灯盏细辛组（Bre组）和缬沙坦组（Val组）,以穿线结扎左冠状动脉前降支制备大鼠心肌I/R模型,观察各组室性心动过速（VT）、血清肌酸激酶同工酶（CK—MB）、心肌组织总超氧化物歧化酶（TSOD）及丙二醛（MDA）变化。流式细胞凋亡法检测心肌凋亡细胞（AI）及免疫组化法检测心肌P53和细胞色素C（Cyt—C）蛋白表达。结果 I／R组VT和CK—MB、MDA均高于Sham组,而TSOD低于Sham组;与I／R组比较,Bre组、Val组VT和、CK—MB、MDA均有降低,而TSOD活性增加。Bre组和Val组AI和P53、Cyt—C蛋白表达水平显著低于I/R组（P〈0．01）。结论 灯盏细辛可降低VT,下调P53、Cyt—C蛋白表达,抑制细胞凋亡,与缬沙坦有相近的保护效果。     

宝灵膏对沙鼠缺血再灌注损伤脑梗死面积及神经细胞凋亡的影响

目的 探讨宝灵膏对蒙古沙鼠脑缺血再灌注损伤脑组织梗死面积和神经细胞凋亡的影响及该影响是否存在剂量依赖性.方法 采用双侧颈总动脉阻断的方法 建造沙鼠脑缺血再灌注损伤模型.沙鼠随机分为假手术组、模型组、宝灵膏高剂量组、宝灵膏中剂量组、宝灵膏低剂量组.采用TTC染色法测腩组织梗死面积,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测脑组织凋亡神经细胞.结果 宝灵膏高、中剂量组TTC染色法测脑组织梗死面积与模型组比较差异显著,与假手术组无统计学意义;低剂量组测得梗死面积与模型组、假手术组比较差异显著.宝灵膏高、中剂量组采用TUNEL法检测脑组织凋亡神经细胞数与模型组比较有差异,与假手术组相近;宝灵膏低剂量组测得凋亡神经细胞数与模型组、假手术组比较有差异.结论 宝灵膏能减轻沙鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织梗死面积,抑制脑神经细胞的凋亡,并且其作用具有剂量依赖性.