雪旺细胞胞浆神经营养蛋白的分离纯化和理化性质测定

目的：分离纯化雪旺细胞胞浆神经营养蛋白并测定其等电点。方法：培养收集新生１－３天ＳＤ乳鼠四肢神经雪旺细胞，超声粉碎，超速离心，取上清胞浆成份超滤浓缩，收集分子量＞１０ＫＤａ浓缩蛋白液，通过ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ离子交换层析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析和Ｄｉｏｌ－１５０高压液相分子筛层析进行分离纯化，等电聚焦电泳测定纯化的活性蛋白质等电点和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其亚基分子量。结果：成功地分离纯化出一种活性蛋白质，分子量约５８ＫＤａ，等电点４．５５，结论：联合应用超滤浓缩、离子交换层析、凝胶过滤层析和高压液相能较理想地分离纯化雪旺细胞胞浆蛋白     

雪旺氏细胞分泌蛋白质及其神经营养活性物质的生化分析

成年大鼠瓦勒氏变性神经来源的雪旺氏细胞（ＳＣ），经体外无血清分离培养，收集ＳＣ无血清条件培养液，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析其超滤浓缩液（分子量大于１０ＫＤａ）中ＳＣ分泌蛋白，发现其含有１４条蛋白带，分子量从大于９４ＫＤａ至小于３４ＫＤａ。用免疫印迹技术、抗２．５Ｓ神经生长因子（ＮＧＦ）抗体鉴定证实ＳＣ分泌蛋白中含有ＮＧＦ。用Ｄｉｓｃ－ＰＡＧＥ（４℃）分离ＳＣ分泌蛋白带，分别经电洗脱、浓缩收集１０份蛋白区带，结合有髓腹侧运动神经元细胞培养、ＮＴＦｓ生物学活性鉴定，初步发现其中一组蛋白区带（Ｂ＋）含运动性神经营养因子（ＮＴＦ）活性，其分子量在６５ＫＤａ至３４ＫＤａ。     

雪旺细胞浆神经营养蛋白高效液相分离纯化及其生物活 …

目的 分离纯化雪旺细胞浆神经营养蛋白并研究其生物活性。方法 取３００只出生后１～３天ＳＤ大鼠双侧坐骨神经,纯化培养,收集雪旺细胞,超声粉碎超速离心,不同孔径分子筛滤膜（ＰＭ１０、３０、５０）超滤浓缩,收集分子量１０～３０ｋｕ,３０～５０ｋｕ、〉５０ｋｕ三种组份乐蛋白浓缩液,分别加入体外无血清培养的Ｅ１４ＳＤ胎鼠脊髓运动神经元培养液中,用ＭＴＴ酶标法检测证实１０～３０ｋｕ,〉５０ｋｕ两组份蛋白有神经     

三步法纯化雪旺细胞源神经营养蛋白

目的探索三步法纯化及获得雪旺细胞源神经营养蛋白的方法，为获得纯化蛋白进行单克隆抗体研究奠定基础。方法收集预损伤大鼠坐骨神经２００条，用酶消化结合差速粘附法纯化并收集其中雪旺细胞，将细胞超声粉碎、离心，收集上清液超滤，再经ｓｅｐｈａｄｅｘＧ１００层析，得到两个主峰，分段收集，将其中活性部分过高效液相色谱柱。结果得到三个主峰，相对分子质量分别为６８×１０３、５４×１０３和３０×１０３，用ＭＴＴ法测定生物活性，５４×１０３蛋白生物活性最大，经ＳＤＳＰＡＧＥ电泳证实基本为单一蛋白带。结论应用三步法同时各步采用合适方案是纯化雪旺细胞源神经营养蛋白的较好方法。     

雪旺氏细胞分泌的神经营养活性物质的提取及体外生物活…

雪旺氏细胞（ＳＣ）分泌多种神经营养因子促进周围神经再生，但ＳＣ分泌的各种蛋白质对周围神经再生的影响尚未完全阐明。为此，从成年大鼠瓦勒氏变性坐骨神经中分离出ＳＣ，经培养获ＳＣ无血清条件培养液（ＳＣ－ＳＦＣＭ）。通过ＰＭ１０超滤浓缩、Ｄｉｓｃ－ＰＡＧＥ和Ｂｉｏｔｒａｐ电洗脱，从ＳＣ－ＳＦＣＭ中分离出Ｄ蛋白带，分子量在４７－６７Ｋｄ之间，经ＭＴＴ检测，Ｄ带蛋白在２５－５０ｎｇ／ｍｌ浓度时对脊髓产角神经元     

雪旺细胞源神经营养蛋白的纯化及其体外生物活性的研究

目的：纯化和研究源于雪旺细胞质的运动神经营养因子。方法：２００条预损伤２周后的ＳＤ大白鼠坐骨神经，用酶消化结合差速粘附法纯化并收集其中的雪旺细胞；超声粉碎雪旺氏细胞，离心，收集上清液再经起滤，过高效液相分子柱，雪旺细胞上清液蛋白分为分子量分别为小于１０ＫＤ，２６ＫＤ，５０ＫＤ，７５ＫＤ，及大于２００ＫＤ五个组分，分别和胎鼠脊髓运动神经元联合培养２４小时，用ＭＴＴ法测定神经元活性。结果：２６ＫＤ，５０ＫＤ，和７５ＫＤ蛋白组分对脊髓运动神经元有维持成活的营养作用，结论：雪旺细胞可合成和分泌三种运动神经营养蛋白，分子量分别为２６ＫＤ，５０ＫＤ和７５ＫＤ。     

雪旺细胞分泌的〉10kD蛋白分子支持脊髓前角神经元生存的初步报告

目的：探讨成年大鼠坐骨神经瓦勒变性期雪旺细胞（ＳＣ）促进周围神经再生的物质基础。方法：将２１５ｍｌＳＣ无血清条件培养液经ＰＭ１０超滤浓缩器（分子筛）分离，获得分子量＜１０ｋＤ（１ｄａｌｔｏｎ＝０．９９２１ｕ）蛋白质滤过液及＞１０ｋＤ蛋白质浓缩液，分别加入２４孔、９６孔培养板内脊髓前角神经元（ＳＡＨＮ）的培养液中，用倒置显微镜及ＭＴＴ微量自动比色法进行神经营养活性观察。结果：在＞１０ｋＤ蛋白分子影响下，ＳＡＨＮ在体外培养４８小时仍存活良好，并伴有少部分ＳＡＨＮ长出短突起。ＭＴＴ微量自动比色法进一步显示，＞１０ｋＤ蛋白分子神经营养活性在统计学上显著高于＜１０ｋＤ蛋白分子。结论：成年大鼠瓦勒变性期ＳＣ在无血清培养条件下仍能合成与分泌神经营养因子，其活性存在于＞１０ｋＤ蛋白分子中。     

雪旺氏细胞分泌的神经营养活性物质的提取及体外生物活性研究

雪旺氏细胞（ＳＣ）分泌多种神经营养因子促进周围神经再生，但ＳＣ分泌的各种蛋白质对周围神经再生的影响尚未完全阐明。为此，从成年大鼠瓦勒氏变性坐骨神经中分离出ＳＣ，经培养获得ＳＣ无血清条件培养液（ＳＣ－ＳＦＣＭ）。通过ＰＭ１０超滤浓缩、Ｄｉｓｃ－ＰＡＧＥ和Ｂｉｏｔｒａｐ电洗脱，从ＳＣ－ＳＦＣＭ中分离出Ｄ蛋白带，分子量在４３～６７Ｋｄ之间。经ＭＴＴ检测，Ｄ带蛋白在２５～５０ｎｇ／ｍｌ浓度时对脊髓前角神经元表现出明显的体外成活作用。Ｄ蛋白带可能是一种有别于已知的ＳＣ源神经营养物质，其活性浓度达到了神经营养因子分子检测水平，值得深入研究     

雪旺细胞浆神经营养蛋白高效液相分离纯化及其生物活性研究

目的　分离纯化雪旺细胞浆神经营养蛋白并研究其生物活性。方法　取 30 0只出生后 1～ 3天SD大鼠双侧坐骨神经 ,纯化培养 ,收集雪旺细胞 ,超声粉碎 ,超速离心 ,不同孔径分子筛滤膜 (PM10、30、5 0 )超滤浓缩 ,收集分子量 10～ 30 ku,30～ 5 0 ku和 >5 0 ku三种组份胞浆蛋白浓缩液 ,分别加入体外无血清培养的 E14SD胎鼠脊髓运动神经元培养液中 ,用 MTT酶标法检测证实 10～ 30 ku和 >5 0 ku两组份蛋白有神经营养活性。再通过Diol- 15 0高效液相分子层析进一步从雪旺细胞胞浆中纯化分离出分子量为 2 6 ku和 5 8ku两种胞浆蛋白 ,并对其神经生物活性进行研究。结果　 2 6 ku和 5 8ku雪旺细胞胞浆蛋白能维持体外无血清培养的脊髓运动神经元存活 ,其最佳生物活性浓度为 2 0 ng/孔。结论　雪旺细胞胞浆内含有分子量为 2 6 ku和 5 8ku的运动神经营养蛋白     

神经再生条件液中6.16～10.23KDa蛋白粗制品对雪旺细胞的动力…

目的；了解神经再生条件液中６．１６～１０．２３ＫＤａ蛋白粗制品对雪旺细胞（Ｓｃｈｗａｎｎｃｅｌｌ，Ｓｃ）增殖的作用，方法：雪旺细胞的培养采用差速贴壁法，分成５组，每组３个标本；第１线，外周神经再生条件液中６．１６～１０．２３ＫＤａ蛋白粗制品（ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｎｅｒｖｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄｆｌｕｉｄｓ，ＮＲＣＦｐ）第２组，成纤维细胞生长因子（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔ