小儿肾积水肾脏病理改变与水通道蛋白表达的相关研究

目的 探讨小儿先天性积水肾脏(hydronephrotic kidney,HnK)不同病理改变水通道蛋白(aquaporins,AQPs)1～4及其mRNA的表达情况.方法 收集26例接受肾盂成形术和肾造瘘术的肾盂输尿管连接部狡窄(PUJO)患儿的肾组织标本,按其病理学变化程度分为轻度肾积水组(12例,病理学分级Ⅱ-Ⅲ级)和重度肾积水组(14例,病理学分级Ⅳ-Ⅴ级)2组.10例正常肾脏组织标本来自于肾母细胞瘤周围正常肾组织.免疫组织化学技术检测AQP1～4在正常肾脏和积水肾脏中的表达与定位,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测AQP1～4 mRNA在正常肾脏和积水肾脏中的表达水平.结果 免疫组化显示先天性积水肾脏中AQP1～4表达强度弱于正常埘照组肾脏;半定量RT-PCR显示重度肾积水中AQP1～4的相对表达量显著低于轻度肾积水和正常肾组织(P均<0.01).结论 小儿先天性积水肾脏中AQP1～4蛋白及其mRNA水平的表达均下调,且随积水肾脏病理改变稃度而变化,AQP1～4表达水平的变化可能在先天性肾积水的病理发展过程中发挥一定作用.     

轻度肾积水儿童肾脏水通道蛋白2、3和4的表达

目的探讨水通道蛋白2、3、4（AQP2～4）在儿童轻度积水肾脏（HnK）的表达。方法收集6例来自肾母细胞瘤周围的正常肾脏组织标本为对照组（男2例,女4例;平均60.33个月）,12例轻度肾积水患儿（男5例,女7例;平均14.58个月）的HnK标本为积水组（B超示集合系统分离均〈3.5cm,肾实质轻度变薄）。采用免疫组织化学法检测AQP2～4在正常肾脏和HnK中的定位及其表达情况。结果正常肾脏AQP2阳性着色主要分布于肾脏集合管上皮细胞胞膜和胞质,AQP3阳性着色主要分布于肾脏集合管主细胞的基底侧,AQP4阳性着色主要分布于肾内髓集合管上皮细胞基底侧。HnK中AQP2～4的表达阳性率均明显低于对照组（Pa〈0.05）。结论AQP2～4在儿童HnK组织中表达明显降低,提示AQP2～4的表达降低可能是引起HnK形态功能改变的早期因素之一。     

正常和肾积水胎儿肾脏水通道蛋白1-3的表达

目的 探讨正常和肾积水胎儿肾脏水通道蛋白1-3(AQP1-3)在孕中、晚期表达的差异.方法 收集本院母亲身体健康,因其他原因而引产的21例正常胎儿(孕中期12例,孕晚期9例)和9例孕晚期肾积水胎儿肾脏标本;应用免疫组织化学方法检测各组肾脏AQP1-3的定位与表达.同时采用Westem Blot检测正常和肾积水胎儿肾脏AQP1-3蛋白表达水平.同期收集本院8例成人因肾癌行肾切除术远离肿瘤的正常肾脏组织作为AQP1-3表达阳性对照.结果 免疫组化结果显示AQP1阳性染色主要分布于肾小球毛细血管内皮细胞、近曲小管的上皮细胞及髓袢降支细段上皮细胞胞质;AQP2阳性染色主要分布于肾脏集合管上皮细胞胞膜和胞质;AQP3阳性染色主要分布于肾脏集合管主细胞的基底侧.经Image-Pro Plus图像分析软件统计分析,孕中期肾脏AQP1-3表达分别为0.375±0.056、0.278±0.031和0.312±0.050,均弱于孕晚期组(分别为0.483±0.062、0.356±0.048和0.501±0.068),肾积水组AQP1-3表达分别为0.308±0.051、0.247±0.039和0.282±0.056,也均弱于同孕期正常胎儿,且胎儿肾脏AQP1-3表达均弱于成人对照组(分别为0.626±0.084、0.432±0.049和0.687±0.058,P＜0.05).Western Blot同样显示正常孕晚期胎儿AQP1-3蛋白表达量(0.96±0.07、0.94±0.06和0.95±0.05)显著高于孕中期(0.82±0.05、0.76±0.04和0.79±0.04),且高于同孕期肾积水组表达量(0.54±0.04、0.42±0.03和0.53±0.04,P＜0.05).结论 胎儿积水肾脏AQP1-3的表达水平较正常胎儿明显降低提示胎儿积水肾脏浓缩稀释功已经受损.     

先天性肾积水患儿肾脏水通道蛋白表达与肾实质厚度和肾小球滤过率的相关性

目的：探讨先天性肾积水患儿肾脏水通道蛋白AQP1-4 的表达与肾实质厚度和肾小球滤过率（GFR）变化之间的关系。方法：利用Western blot检测AQP1-4蛋白在10例先天性肾积水患儿(年龄62.3±18.3个月)10个肾组织和6例来自肾母细胞瘤手术切除患儿的正常肾脏组织(年龄62.7±17.1个月)中的相对表达量。同时对患侧肾脏肾实质厚度和GFR进行评估。积水肾脏AQP1-4表达与GFR以及肾实质厚度之间进行Pearson相关分析检验。结果：肾积水组AQP1-4蛋白相对表达均明显低于正常组（P＜0.05）。B超测量术前积水侧肾脏肾实质厚度平均为4.59±2.25 mm。99mTc-DTPA 测定积水侧肾脏GFR较对侧肾脏明显下降（40±12 mL/min vs 105±20 mL/min, P＜0.05）。积水组肾脏中AQP1-4蛋白相对表达量与肾实质厚度之间呈正相关,与患侧肾脏GFR之间亦呈正相关。积水侧肾脏肾实质厚度与GFR之间呈正相关。结论：先天性积水患儿肾脏AQP1-4蛋白表达下降,其表达量与肾实质厚度和肾脏GFR的变化呈正相关。     

先天性肾积水肾脏及其尿液中水通道蛋白2表达的相关性研究

目的 探讨先天性肾积水患儿肾脏水通道蛋白2(aquaporin-2,AQP2)表达水平及其尿液AQP2表达水平之间的相关性.方法 选取20例单侧先天性肾盂输尿管连接处梗阻肾积水肾脏,其中轻度和重度积水肾脏各10例,并选取8例正常肾脏作为对照组.应用免疫组织化学方法检测肾脏AQP2表达水平,并采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测其尿液中AQP2浓度.结果 AQP2阳性着色位于肾脏集合管主细胞胞膜和胞质.积水肾脏AQP2表达水平下降和其尿液中AQP2表达水平下降及尿渗透压下降相一致.重度积水组显著低于轻度积水组,重度和轻度积水组均显著低于正常对照组(P＜0.05).积水肾脏AQP2表达水平与其尿液AQP2表达水平以及尿渗透压均有显著正相关性(分别为r尿AOY2=0.706,P＜0.05;r尿渗透压=0.810,P＜0.05).结论 随着先天性.肾积水患儿积水程度增加,其肾脏AQP2表达水平和其尿液AQP2浓度及尿渗透压均明显下降.检测尿液AQP2浓度可间接反映肾脏中AQP2的表达情况,为临床评估肾脏浓缩稀释功能损害程度提供依据.     

小儿肾积水肾盂成形术后尿理化性质和尿水通道蛋白2改变的研究

目的 探讨小儿单侧先天性肾盂输尿管连接处梗阻(pyeloureteric junction obstruction,PUJO)肾积水术后1周内尿理化性质和尿水通道蛋白2(aquaporins-2.AQP2)的变化.方法 选取14例符合Grignon法四、五级标准的小儿单侧先天性PUJO.肾积水患儿;经肾盂成形术后给予严格设定的补液标准,收集术后第一、三、五、七天积水侧肾脏和对侧无积水肾脏24 h尿液,分别测定排尿量、渗透压、Na+和肌酐,并用酶联免疫吸附法(ELISA)测定尿液中AQP2水平.结果 相对于对侧无积水肾脏,积水侧肾脏梗阻解除术后1周内尿液AQP2显著降低.尿量明显增多.尿渗透压显著降低,Na+排泄分数显著增加;同时术后1周内双侧肾脏尿液AQP2、排尿量和尿渗透压有升高趋势,而积水侧肾脏Na+排泄分数有减少的趋势;积水侧.肾脏术后第五、七天的尿液AQP2.排尿量和尿渗透压较第一天均显著增加(P<0.05).对侧无积水肾脏术后第五、七天的尿液AQP2和尿渗透压较第一天也显著增加(P<0.05).其余指标在术后小同天数之间差异无统计学意义(P>0.05).结论小儿单侧先天性PUJO解除术后1周内积水侧.肾脏的尿液AQP2和尿渗透压均较对侧尤积水肾脏尿液显著减少.提示梗阻解除后尿液中AQP2可能和尿液浓缩能力改变有关.     

尿液AQP2在先天性肾积水患儿中的检测和意义

目的研究单侧先天性肾盂输尿管连接处梗阻（pyeloureteric junction obstruction，PUJO）肾积水患儿尿液水通道蛋白2（Aquaporins-2，AQP2）测定在肾脏浓缩功能评价中的意义。方法选取12例正常儿童，26例单侧先天性PUJO肾积水患儿，其中轻度14例，重度12例，均经彩超、静脉。肾盂造影证实，并排除其它泌尿系统疾病；在严格设定条件下，收集正常对照组术前和梗阻解除术后第3天患肾24h尿液，同时收集术中。肾盂尿液，测定尿渗透压，并用酶联免疫吸附法（ELISA）测定尿液中AQP2。结果与正常对照组比较，积水组术中尿液AQP2和尿渗透压明显下降（P〈0．05），且重度积水组术中尿液AQP2与轻度积水组相比，明显降低（P〈0．05），但重度积水组和轻度积水组术中尿渗透压相比无显著差异（P〉0．05）；梗阻解除后，轻、重度积水组术中尿液AQP2与术后第3天相比，无显著差异（P〉0．05），而术后第3天两组尿渗透压却明显下降／P〈0．05），术后第3天重度积水组与轻度积水组尿液AQP2和尿渗透压相比较，显著下降（P〈0．05）；正常对照组与轻、重度积水组术后第3天尿液AQP2和尿渗透压之间存在一定相关性。结论小儿单侧先天性PUJO尿液AQP2和尿渗透压较正常对照组显著降低，且二者之间存在一定相关性。尿液中AQP2下降可能和尿液浓缩功能改变有关。     

先天性肾盂输尿管连接处梗阻的诊断和治疗

目的 探讨先天性肾盂输尿管连接处梗阻(UPJO)致肾积水的诊断和治疗方法.方法 回顾分析UPJO致肾积水患儿63例的临床资料.患儿均经彩超筛查、静脉肾盂造影(IVP)、磁共振尿路成像(MRU)或电子计算机X射线断层扫描尿路成像(CTU)确诊.单侧肾积水55例中47例行一期离断式肾盂输尿管成形术,切除无蠕动功能的肾盂输尿管狭窄段和大部分扩张的肾盂;5例因重度肾积水先行患肾穿刺造瘘引流3～6个月,其中3例二期行离断性肾盂成形术,另2例因肾脏无功能行肾切除术;3例保守治疗.双侧肾积水8例中3例一期完成双侧肾盂输尿管成形术,5例分次完成.结果 术后B超随访,肾积水均有改善,肾盂前后径缩小,肾实质增厚;IVP均证实肾盂输尿管吻合口通畅.肾脏积水导致肾功能受损者,术后肾动态显像榆查患肾功能均有恢复.结论 彩超为UPJO诊断最常用的筛查方法,IVU、MRU及CTU是确诊UPJO的可靠方法,先天性肾盂输尿管连接部狭窄是造成肾积水的首要原因、肾盂进行性扩张或肾功能损害进行性加重者需行离断性肾盂成形术.     

小婴儿肾积水手术治疗及预后评价

目的 探讨小婴儿肾积水手术指征、治疗及预后.方法 总结40例小婴儿肾积水的手术治疗.全部病例术前均行彩超、IVP、静脉肾盂造影后三维CT重建及SPECT检查.所有患儿均行肾盂输尿管成形术,术后病理证实为肾盂输尿管交接处梗阻所致肾积水.术后常规随访,行彩超和SPECT检查.结果 所有患儿手术经过顺利,无手术并发症.术后3个月彩超示所有患儿肾盏扩张明显减轻,肾盂前后径和肾实质厚度均较术前好转,术前肾实质平均厚度为(4.37±1.57)mm,术后为(5.89±1.66)mm;两者比较有显著差异,P=0.000.术前.肾盂前后径为(4.20±1.66)cm,术后为(1.93±0.98)cm,两者比较有显著性差异,P=0.000.32例单侧肾积水术后25例肾脏功能稳定,7例有不同程度的恢复,没有恶化者.8例双侧肾积水较重侧手术,术后对侧积水均明显减轻.结论 小婴儿肾积水肾盂前后径增大并出现肾盏扩张、肾实质变薄者,即使肾功能正常也以手术为佳.肾功能恶化、肾积水加重或出现临床症状者应积极手术.肾盂前后径小于2 cm,肾功能在40%以上,但肾图为梗阻曲线者应密切观察.小婴儿肾积水手术效果良好,术后肾脏形态恢复显著,肾脏功能可以保存.     

重度肾积水保留肾脏的临床研究

目的 探索重度积水肾保留肾脏手术治疗的方法.方法 对20例IVP患肾不显影或极淡及SPECT检测患肾功能极差的肾积水患儿,先行经皮肾穿刺造瘘术.术后随诊1～3个月,再复查B超、CT、IVP及SPECT,决定是否保留患肾.结果 19例患肾功能均有改善,并成功实施离断性肾盂成形术;仅1例因分肾功能仍在10%以下患儿,行肾切除.结论 重度积水肾患儿先行经皮肾穿刺造瘘术后,结合手术前后肾实质厚度及分肾功能的变化,判断患肾功能恢复的状况,为尽可能保留患肾提供充分的依据.     

先天性肾积水患儿尿液水通道蛋白1表达的意义

目的研究先天性肾积水患儿尿液水通道蛋白1(AQP1)的表达情况及其临床意义。方法选取26例不同程度肾积水患儿作为试验组。其中轻度组7例,中度组10例,重度组9例。均经彩超、电子计算机X射线断层扫描技术(CT)或MRI证实,并排除其他泌尿系统疾病。对照组选取10例无泌尿系统疾病的儿童。在严格选定条件下,收集试验组患儿术前晨尿、术中肾盂尿液、梗阻解除术后第3、7天患肾晨尿,同时收集对照组患儿晨尿,采用间接ELISA法测定其尿液AQP1水平。结果与对照组比较,中、重度积水组患儿术前尿液中AQP1水平均明显下降(Pa<0.05),且重度积水组尿液AQP1水平与中度积水组比较,明显降低(P<0.05);轻度积水组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。试验组术后第3天尿液AQP1水平与术中比较,差异无统计学意义(P>0.05),术后第7天尿液AQP1水平与术中比较均明显上升,但仍低于对照组(Pa<0.05)。对照组、试验组术前及术后第7天尿液AQP1水平与尿渗透压呈正相关,实验组术中及术后第3天尿液AQP1水平和尿渗透压之间无相关性。结论尿液AQP1水平可能是新型的评价先天性肾积水患儿肾浓缩功能的指标之一。     

Decrease of renal aquaporins 1–4 is associated with renal function impairment in pediatric congenital hydronephrosis

Background

Renal aquaporins (AQP1-4) concentration is downregulated and is in proportion to the degree of hydronephrosis graded by ultrasound in pediatric congenital hydronephrosis (CH). However, the relationship between the expression of AQP1-4 with the changes of renal function impairment (RFI) evaluated by ^99mTc-DTPA renal dynamic imaging is still unclear. This study aimed to investigate the relationship between AQP1-4 expression and degree of RFI in children with CH.

Methods

The expression of AQP1-4 was evaluated in 45 children with unilateral ureteropelvic junction obstruction (28 boys and 17 girls, average age: 28±10 months) and 15 children undergoing nephrectomy for nephroblastoma (8 boys and 7 girls, average age: 26±8 months) by immunoblotting and immunohistochemistry. Renal function was graded into mild and severe RFI by ^99mTc-DTPA renal dynamic imaging.

Results

One-way analysis of variance with Bonferonni??s correction showed a significantly reduced protein expression of AQP1?C4 in the severe RFI group compared with those in both mild RFI group and controls (AQP1: 0.52±0.09 vs. 0.91±0.06 vs. 1.23±0.033; AQP2: 0.68±0.12 vs. 1.09±0.06 vs. 1.52±0.08; AQP3: 0.59±0.16 vs. 0.94±0.08 vs. 1.31±0.07; AQP4: 0.64±0.06 vs. 1.14±0.07 vs. 1.61±0.07; P<0.001, respectively). In kidneys with severe RFI, there was a reduction in the protein concentration of all four AQP isoforms which was more pronounced compared with those seen in kidneys with mild RFI and in the controls.

Conclusion

AQP1-4 expression is reduced in proportion with the impairment degree of renal function graded by ^99mTc-DTPA renal dynamic imaging in human CH.     

小儿肾积水尿细胞因子IGF-1、ET-1、TGF-β1及MCP-1水平的检测及意义

目的 探讨尿细胞因子(胰岛素样生长因子IGF-1、内皮素ET-1、转化生长因子TGF-β及单核细胞趋化蛋白MCP-1)的检测在判定小儿肾积水病肾损害程度中的临床意义.方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测41例小儿肾积水病肾尿IGF-1、ET-1、TGF-β1>及MCP-1水平,并以健肾尿作对照.41例同时行病肾组织学检查分级,并与病肾尿IGF-1、ET-1、TGF-β1>及MCP-1水平作相关分析.结果 ①病肾尿IGF-1明显降低为(186.69±24.63)pg/ml,健肾测值为(279.45±31.57)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.01);②病肾尿ET-1、TGF-β1、MCP-1明显升高,分别为(49.81±9.08)、(395.91±83.52)、(486.59±89.72)pg/ml,健肾相应测值为(13.21±2.91)、(232.57±32.68)、(328.54±36.81)pg/ml,差异均有统计学意义(P<0.05);③病肾尿IGF-1与病理分级密切负相关,差异有统计学意义(r=-0.839,P<0.01);ET-1、TGF-β1及MCP-1水平与病理分级正相关,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 小儿肾积水病肾尿IGF-1水平是从尿细胞因子检测中判定病肾损害程度的理想指标之一.     

牛磺酸对链脲佐菌素诱导的糖尿病幼鼠氧化应激系统及早期血管内皮损伤的干预性研究

目的 观察牛磺酸对糖尿病幼鼠氧化应激系统(oxLDL/LOX-1)的影响及早期血管内皮损伤的干预作用,探讨其可能的分子机制.方法 6周龄Wistar雄性大鼠30只随机取出8只作为正常对照组,其余给予链脲佐菌素(60 mg/kg)一次性腹腔注射诱导1型糖尿病模型,造模成功后随机各取8只分为糖尿病未干预组和糖尿病牛磺酸干预组(每日饮水中加入1%牛磺酸).干预4周后处死大鼠,检测大鼠外周血血糖、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、氧化低密度脂蛋白(oxLDL)及可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1);采用免疫组织化学法、免疫印迹和逆转录-聚合酶链反应法,分别检测腹主动脉壁血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)蛋白及基因表达水平.结果 糖尿病未干预组外周血TG、TC、LDL及oxLDL、sICAM-1水平均高于正常对照组(P均<0.01);腹主动脉壁LOX-1和ICAM-1的蛋白及基因表达水平亦明显高于正常对照组(P均<0.01);糖尿病牛磺酸干预组较糖尿病未干预组外周血TG(0.64±0.12与0.97±0.18)、TC(0.82±0.18与1.01±0.23)、oxLDL(3.1±0.6与4.2±0.6)、sICAM-1(108.3±18.0与130.7±17.4)水平和腹主动脉壁LOX-1、ICAM-1蛋白(1.02±0.19与2.60±0.33,1.21±0.22与2.98±0.31)及基因表达水平(0.45±0.09与0.96±0.15,0.50±0.07与0.87±0.16)均明显下降(P均<0.05).LOX-1的蛋白表达水平与血清oxLDL(r=0.922,P=0.001)、sICAM-1(r=0.753,P=0.031)以及腹主动脉ICAM-1(r=0.849,P=0.008)的蛋白表达水平均呈正相关.结论 糖尿病幼鼠存在血管内皮细胞功能损伤,牛磺酸早期干预对糖尿病幼鼠血管内皮具有保护作用.     

血管紧张素Ⅱ对幼鼠输尿管梗阻后AQP2表达变化的调控

目的 通过观察血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,ANG Ⅱ受体阻滞剂坎地沙坦对双侧输尿管梗阻(bilateral ureteral obstruction,BUO)幼鼠肾脏水通道蛋白2(aquaporin 2,AQP2)表达的影响,探讨ANG Ⅱ对梗阻肾脏功能和AQP2的调控作用。方法 24只慕尼黑幼鼠随机分为BUO组、坎地沙坦干预组(BUO+ CAN)和对照组(Sham),每组n=8只。BUO组和BUO+ CAN组均行双侧输尿管结扎,并采用微型泵分别给以生理盐水和坎地沙坦,Sham组仅游离输尿管但不结扎,24h后解除梗阻并继续观察48h后收集血液和肾脏标本,采用免疫印记技术检测肾脏AQP2表达水平。结果 梗阻解除后BUO组与Sham组相比尿量显著增高,(92±7)μl·min-1 ·kg-1比(25±3)μl· min-1·kg-1、尿渗透压显著降低,(636±55) mosmol/kgH2O比(1 853±163) mosmol/kgH2O、血浆渗透压和血浆醛固酮均显著增高,分别为(336±10) mosmol/kgH2O比(303±7)mosmol/kgH2O和(4.1±0.2)nmol/L比(1.4±0.1)nmol/L;肾脏AQP2表达下调到Sham组17％各组比较差异有统计学意义,P＜0.05。BUO+ CAN组与BUO组相比尿量显著减少,(55±5)μl·min-1 ·kg-1比(92±7)μl·min-1 ·kg-1,尿渗透压显著增高(783±47) mosmol/kgH2O比(636±55) mosmol/kgH2O,血浆醛固酮含量显著降低(2.8±0.5) nmol/L比(4.1±0.2)nmol/L,肾脏AQP2表达增高,各组比较差异有统计学意义,P＜0.05。结论 ANG Ⅱ受体拮抗剂可通过阻止AQP2下调纠正水代谢紊乱,保护肾功能,提示ANG Ⅱ通过调节肾脏AQP2表达参与输尿管梗阻后肾脏水代谢变化。     

地塞米松对高氧肺损伤新生大鼠肺水通道蛋白1表达的影响

目的 探讨地塞米松对新生大鼠高氧肺损伤时水通道蛋白1(AQP1)表达的影响及其对肺损伤的可能保护机制.方法 新生Wistar大鼠32只随机分为空气组、高氧组、空气+地塞米松组、高氧+地塞米松组.第3天取肺组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测AQP1的mRNA表达和分布变化;并对肺湿/干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中的蛋白含量、肺通透指数及组织病理学改变进行对比分析.结果 高氧暴露第3天肺组织出现出血、炎性细胞浸润和水肿,肺W/D、BALF蛋白含量、肺通透指数明显升高;地塞米松干预组肺损伤程度减轻,测定值降低.空气组、高氧组、高氧+地塞米松组AQP1 mRNA相对吸光度比值分别为0.70±0.04、0.42±0.03、1.04±0.04,各组间差异有显著性(P<0.05);与空气组相比,高氧组AQP1 mRNA表达明显降低,高氧+地塞米松组AQP1 mRNA表达显著上调;AQP1蛋白表达与其mRNA变化一致.结论 高氧肺损伤时大鼠肺AQP1表达下调;地塞米松干预对肺损伤有保护作用,上调肺AQP1的表达可能是其作用机制之一.