溶组织内阿米巴重组人单克隆抗体Fab段的筛选与表达

目的　制备抗溶组织内阿米巴滋养体表面抗原的重组人单克隆抗体Fab段。　方法　提取无症状溶组织内阿米巴包囊携带者外周血淋巴细胞 ,分离总RNA ,行逆转录聚合酶链反应扩增IgG轻链和重链Fd片段 ,并与原核表达质粒连接 ,转化大肠埃希菌构建抗体库。通过抗原夹心膜法、间接荧光抗体试验等方法 ,筛选特异性表达抗溶组织内阿米巴滋养体表面抗原的重组人单克隆抗体Fab段的克隆 ,并纯化其表达产物。　结果　共筛选 3× 10⁴个克隆 ,其中一个克隆表达的Fab段识别的抗原表位位于滋养体表面。　结论　运用原核表达系统可制备抗溶组织内阿米巴重组人单克隆抗体Fab段 ,在临床诊断和治疗上均有应用前景。     

溶组织内阿米巴的酶类及其解毒作用

研究发现溶组织内阿米以巴含有ＳＯＤ、ＣＡＴ与ＰＯａｓｅ三种解毒酶类，前者通过歧化反应清除自由基Ｏ２，后者通过催化与分解清除Ｈ２Ｏ２。它们的解毒作用是虫体生存的重要防御手段，若虫体解毒酶类发生障碍，毒物将使虫体积蓄中毒死亡，还可能对人体造成损害。并测出虫体的碱性磷酸酶的淀粉酶含量。     

溶组织内阿米巴滋养体标本的复染

溶组织内阿米巴 (Entamoebahistolytica ,Eh)滋养体染色标本 ,是人体寄生虫学实验教学中的主要内容。本室使用Eh滋养体热染标本已十余年 ,因时间久标本褪色 ,虫体结构不太清晰 ,整个虫体成空泡状。Eh滋养体标本来源较困难 ,不易搜集 ,也未见复染Eh滋养体的文献报道 ,为提高实验教学效果 ,重复利用标本资源 ,作者对 90片已褪色的Eh滋养体标本复染 ,复染成功的为 78片 ,成功率为 70 .2 % ,报告如下。1　材料与方法选用 1991年制作的粪便直接涂片热染已褪色的Eh滋养体教学标本 (图 1) ,按文献 [1]方法配制哈氏 (Harris)苏木素染色液 ,按文…     

霉菌寄生于溶组织内阿米巴体内的观察

从铁苏木素染色的一张粪便涂片标本中,发现溶组织内阿米巴包囊被虫藻壶菌属霉菌寄生的占78％,而且成熟的四核包囊甚少。包囊内的霉菌分散或成群,多数形成孢子囊。寄生部位在细胞质内、糖原块内或拟染色体上。并查见霉菌寄生于结肠内阿米巴包囊的占18％,微小内蜒阿米巴包囊的占11％。哈门氏内阿米巴包囊16个,发现1个有霉菌寄生。     

溶组织内阿米巴5例的粪便鉴定

目的探讨溶组织内阿米巴的粪便鉴定,并就溶组织内阿米巴包囊及滋养体的镜检要点及常见漏检原因进行讨论。方法用显微镜法对5例外院漏诊的肠阿米巴病患者粪便标本进行检验,分别用生理盐水涂片法、碘染色和苏木素染色法,在显微镜下进行观察鉴定。结果溶组织内阿米巴包囊及滋养体在生理盐水涂片、碘染色涂片和苏木素染色涂片中有典型的形态学特点。结论对于可疑肠阿米巴病患者,应多次及时送标本进行检验,采用几种不同方法进行鉴定,并注意将溶组织内阿米巴与吞噬细胞及迪斯帕内阿米巴相鉴别。     

多聚酶链反应分析溶组织内阿米巴的致病性

从急性阿米巴痢疾患者粪便中分离所得的溶组织内阿米巴虫株SH-3、SH-6、SH-8的DNA和包囊携带者粪便中分离所得的溶组织内阿米巴 SH-5、SH-7的 DNA应用多聚酶链反应技术扩增30个周期后作琼脂糖凝胶电泳分析,发现致病性引物 P_(11)、P_(12)可使SH-8虫株的DNA增殖;而非致病性引物P_(13)、P_(14)可使SH-3、SH-5、SH-6和SH-7虫株的DNA增殖。另外,酶株群分析和单克隆抗体反应也显示SH-8为致病性虫株,而另4株虫株均属于非致病性虫株,与多聚酶链反应的结果相一致。提示,致病性虫株与非致病性虫株的基因有区别,多聚酶链反应对溶组织内阿米巴进行基因分析是一种敏感和特异的新方法。     

我国某些地区溶组织内阿米巴酶株群的分布

对来源于北京、天津、福建等地急性阿米巴痢疾患者和包囊携带者粪便中的5株溶组织内阿米巴的磷酸葡萄糖变位酶(PGM)、葡萄糖磷酸异构酶(GPI)、己糖激酶(HK)和L-苹果酸:辅酶Ⅱ氧化还原酶(ME)的同工酶谱进行比较分析。结果表明:5株溶组织内阿米巴均属于致病性的酶株群ⅩⅣ。提示,我国主要的致病性溶组织内阿米巴的酶株群是酶株群ⅩⅣ。     

溶组织内阿米巴的酶类及其解毒作用

研究发现溶组织内阿米巴含有ＳＯＤ、ＣＡＴ与ＰＯａｓｅ三种解毒酶类，前者通过歧化反应清除自由基Ｏ２，后者通过催化与分解清除Ｈ２Ｏ２。它们的解毒作用是虫体生存的重要防御手段。若虫体解毒酶类发生障碍，毒物将使虫体积蓄中毒死亡，还可能对人体造成损害。并测出虫体的碱性磷酸酶和淀粉酶含量。     

甲硝唑酯体外抗阴道毛滴虫和阿米巴的效果

用本校药学院物理化学教研室试制的甲硝唑酯对体外培养的阴道毛滴虫和溶组织内阿米巴的作用进行观察。结果表明该药对阴道毛滴虫的致死浓度为２．６μｇ／ｍｌ，与甲硝唑的致死浓度２．０μｇ／ｍｌ相近；该药对溶组织内阿米巴的致死浓度为４０．０μｇ／ｍｌ，与甲硝唑相同。提示该药具有抗此两种原虫的作用。     

抗卫氏并殖吸虫单克隆抗体的筛选及其在诊断中的应用

本文报道测定16种抗卫氏并殖吸虫(Pw)囊蚴和成虫单克隆抗体(McAb)的同型及其交叉反应。其中,抗Pw成虫McAb A_3D_3为IgM,k型。应用Dot-ELISA方法,以McAb A_3D_3检测痰卵阳性患者21例和痰卵阴性疑似患者63例血清循环抗原(CAg)),结果痰卵阳性患者CAg阳性率为100％(21/21),痰卵阴性疑似患者CAg阳性率为85.7％(54/63);同法检测45例日本血吸虫病、55例华支睾吸虫病、24例丝虫病、49例肠线虫感染、31例肺结核患者以及93例健康人对照血清均为阴性。结果表明,McAb A_3D_3的特异性及敏感性强,因而在Pw活动性感染和Pw病的早期诊断上均具有应用和推广前景。     

抗囊虫单抗的制备及其应用研究

目的　制备分泌特异性抗猪囊虫单抗的杂交瘤细胞株 ,建立以特异性单抗检测囊虫病患者循环抗原 (CAg)的特异敏感的 EL ISA方法。　方法　制备水溶性抗原 (Ag- w)和尿素溶性抗原 (Ag- u) ,将实验用 BAL B/ c小鼠分为 Ag- u和 Ag- w组 ,分别以 Ag- u和 Ag- w免疫 ,取两组免疫鼠脾细胞与 SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,EL ISA法进行筛选 ,所获特异性阳性克隆加以扩大培养 ,并分别与包虫、血吸虫、华支睾吸虫、肺吸虫、姜片虫和丝虫抗原进行交叉反应性测定。　结果获得稳定分泌特异性抗囊虫单抗的杂交瘤细胞 5株 ,其中 1株 N1B10来自于 Ag- w组 ,另 4株 U2 A6、U2 B3、UB5 H6和UE10 H5来自于 Ag- u组。对 N1B10、U2 A6和 U2 B3初步鉴定结果表明 ,其抗体类型分别为 Ig G2 b、κ,Ig G1、κ,Ig G2 b、κ;腹水的效价分别为 1.0 2 4× 10 6、1.6× 10 4和 3.2× 10 4 ;免疫组化显示 N1B10定位于囊虫囊壁的基底膜 ,U2 A6和 U2 B3定位于囊虫的头节。杂交瘤细胞经连续培养 ,液氮反复冻存复苏后仍能稳定分泌单抗。取 3株单抗和兔抗囊虫血清建立了检测囊虫病患者 CAg的 EL ISA方法 ,测定 4 8份临床确诊囊虫病病人血清 ,阳性率达 95 .8%。　结论　成功制备了抗囊虫单克隆抗体 ,所建立的 EL ISA方法敏感性高 ,特异性强 ,可用于     

应用ELISA检测阿米巴脓抗原和循环抗原诊断阿米巴肝脓肿的价值

应用ELISA法检测阿米巴肝脏肿患者脓液和血清标本中的阿米巴抗原。结果42例患者中有41例植出脓抗原,检出率为97．6％,其中包括8例镜检阿米巴滋养体阳性和33例镜检阴性者;有39例检出循环抗原,检出率为92．9％。脓抗原阳性反应强度高于循环抗原者（P＜0．05）。各种对照标本的阿米巴抗原植出率为0。提示可用ELISA抗原检测法替代镜检和培养法进行阿米巴肝脓肿的病原学诊断。     

抗人雌激素受体单抗的制备及鉴定

分别采用部份纯化的人乳腺癌雌激素受体（ｈＥＲ）及合成的与ｈＥＲ分子中ＤＮＡ结合区序列相同的多肽（ＡＴ３）作免疫原。经用Ｋｏｈｌｅｒ和Ｍｉｌｉｓｔｅｉｎ杂交瘤技术，制备出７株抗人雌激素受体单体（１Ｈ１２、２Ｄ７、ＡＴ３～２７等），并经ｓｅｐｈａｃｒｙｌ凝胶层析、免疫沉淀反应和间接免疫荧光标记法作特异性鉴定。其中一株高亲和力、高特异性的单抗（１Ｈ１２）在免疫沉淀反应中与人乳腺癌雌激素受体的特异性结合率达４６．２±２２．０％，并用该单抗成功地进行了人乳腺癌组织冰冻切片的ｈＥＲ间接免疫荧光标记。     

人甲状腺过氧化物酶单克隆抗体的制备与鉴定

以亲和纯化的人甲状腺过氧化物酶作免疫原,用经典的杂交瘤技术制备出29株抗人甲状腺过氧化物酶单克隆抗体（TPOmAb）,探讨了甲状腺微粒体抗体（TMAb）与TPObmAb之间的关系。发现TMAb对TPObmAb与~（125）I-hTPO的结合抑制性呈显著的量-效关系（r=0.982,P<0.001）;经间接免疫荧光技术证实原代培养的人甲状腺细胞膜表面存在hTPO,而FRTL-5细胞膜表面不存在hTPO,说明所制备的TPObmAb为hT-PO特异性单克隆抗体。     

单克隆抗体抗贾第虫作用的研究

应用体外纯培养的贾第虫滋养体免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠和常规杂交瘤细胞技术，制备特异的抗贾第虫单克隆抗体（１Ｅ２，１Ｇ５），以其与贾第虫滋养体相互作用，均发现具有明显的抗贾第虫效果，生长抑制率分别为３５％和６３．４％；将此单抗加入正常培养液中，其含量与抑制率呈现明显的剂量反应关系，相关系数分别为０．９７６４和０．８９８７；单抗经滋养体吸收后，对贾第虫的生长抑制作用消失；经补体灭活前后的豚鼠血清对单抗的抑制作用无影响。