应用聚合酶链反应技术建立弓形虫表面抗原基因的克隆与测定

弓形虫主要表面抗原Ｐ３０存在于弓形虫表膜及纳虫泡内的一种蛋白，是刺激机体产生免疫反应的主要抗原。以自行设计合成的一对引物，用聚合酶链反应的方法，从弓形虫基因组ＤＮＡ中将Ｐ３０编码基因调出，经纯化及相应酶切后，插入质粒ｐＢＶ２２０中构成重组质粒ｐＢＶ２２０－Ｐ３０。经Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测序确证该重组质粒中的插入片段即为Ｐ３０基因。     

聚合酶链反应检测弓形虫的实验研究

目的建立敏感、特异、稳定的聚合酶链反应（ＰＣＲ）法,以检测弓形虫感染。方法建立ＰＣＲ法,确定最佳扩增条件;用ＰＣＲ法检测实验感染家兔血液中ＤＮＡ的动态变化,并与ＥＬＩＳＡ法检测ＣＡｇ进行比较。结果兔感染弓形虫后第２ｄ,ＰＣＲ开始出现阳性,阳性率为７６．９％（１０／１３）,总检出率达１００％。与ＥＬＩＳＡ法查ＣＡｇ进行平行检测,前者出现阳性时间早,且阳性率明显高于后者。该法敏感性高,可检测到１０ｆｇＤＮＡ含量;特异性强,对其它９种寄生虫和微生物ＤＮＡ均无交叉现象;稳定性好,对阳、阴性同一样品重复５次,结果一致。结论提示本法可用于临床诊断,在一定范围内替代病原学和免疫学检测。     

套式及免疫套式聚合酶链反应检测乙型肝炎表面抗原阴性肝病患…

为了更准确，简便而又快速地了解乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）阴性肝病患者的病因，建立了套式和免疫套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的技术，结合丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染指标的检测，对ＨＢｓＡｇ阴性肝病患者的病因进行了研究，发现套式ＰＣＲ能将单次ＰＣＲ的敏感性稳定地提高１０００倍；免疫套式ＰＣＲ可检测到０．１～０．０１ｐｇ／Ｌ水平，检测ＨＢｓＡｇ阴性肝硬化２２例（Ａ组）     

DNA聚合酶链反应检测石蜡包埋人脑组织中弓形虫的研究

孕妇感染弓形虫是胎儿先天性畸形的危险因素。本文运用DNA聚合酶链反应检测30例先天性畸形儿尸检石蜡包埋脑组织中弓形虫。结果表明,30例先天性畸形儿石蜡脑组织切片经体外扩增后出现阳性条带者13例,而对照组无1例阳性(P<0.05)。研究结果进一步支持弓形虫感染与胎儿先天性畸形有密切关系。     

弓形虫主要表面抗原基因( P30)大肠杆菌中以融合蛋白形式的初步表达(英文)

根据已发表的弓形虫主要表面抗原（ Ｐ３０）的基因序列,设计合成了一对引物,通过聚合酶链反应,扩增出 Ｐ３０ 基因,将 Ｐ３０ 基因克隆入表达质粒ｐ Ｇ Ｅ Ｍ Ｅ Ｘ１ 中,经酶切鉴定后,阳性重组质粒转化宿主菌 Ｊ Ｍ １０９（ Ｄ Ｅ３ ）,宿主菌经 Ｉ Ｐ Ｔ Ｇ 诱导表达后,产物进行 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ和 Ｗ ｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析。结果显示, Ｐ３０ 基因以融合蛋白的形式表达,表达产物具有特异的免疫反应性。     

弓形虫表面抗原研究进展

刚地弓形虫是一种广泛分布于人和哺乳动物组织细胞内的机会性致病原虫,可引起严重的人兽共患病.弓形虫抗原的研究对开发诊断制剂、疫苗以及从分子水平探讨弓形虫与宿主之间的相互关系具有重要意义,该文对近年来有关弓形虫抗原的研究进展作一综述.     

弓形虫ZS2株抗原基因的扩增及克隆

扩增弓形虫ZS2株P30抗原基因,构建PcDNA3—P30真核表达重组质粒。方法本文采用PCR技术,自行设计一对寡核苷酸引物（P1,P2）,从弓形虫ZS2基因组DNA中特异扩增出编码P30抗原的基因片段。扩增的目的片段经纯化后用EcoRI和Hind双酶切后,克隆到真核表达质粒pcDNA3中,转化入大肠杆菌TG1,用氨共青霉素和PCR初筛,将PCR扩增阳性的重组子用EcoRI和Kind双酶切鉴定。结果从弓形虫ZS2株DNA中扩增出1025bP的P30基因,构建重组质粒PcDNA3—P30,酶切产物的大小分别与预期相符。结论成功地对弓形虫ZS2株P30基因进行体外扩增及构建真核表达重组质粒PcDNA3—P30,为重组P30抗原及核酸疫苗研究做好准备。     

弓形虫表面抗原研究进展

刚地弓形虫是一种广泛分布于人和哺乳动物组织细胞内的机会性致病原虫,可引起严重的人兽共患病.弓形虫抗原的研究对开发诊断制剂、疫苗以及从分子水平探讨弓形虫与宿主之间的相互关系具有重要意义,该文对近年来有关弓形虫抗原的研究进展作一综述.     

弓形虫表面抗原研究进展

刚地弓形虫是一种广泛分布于人和哺乳动物组织细胞内的机会性致病原虫,可引起严重的人兽共患病.弓形虫抗原的研究对开发诊断制剂、疫苗以及从分子水平探讨弓形虫与宿主之间的相互关系具有重要意义,该文对近年来有关弓形虫抗原的研究进展作一综述.     

弓形虫表面抗原研究进展

刚地弓形虫是一种广泛分布于人和哺乳动物组织细胞内的机会性致病原虫,可引起严重的人兽共患病.弓形虫抗原的研究对开发诊断制剂、疫苗以及从分子水平探讨弓形虫与宿主之间的相互关系具有重要意义,该文对近年来有关弓形虫抗原的研究进展作一综述.     

弓形虫表面抗原研究进展

刚地弓形虫是一种广泛分布于人和哺乳动物组织细胞内的机会性致病原虫,可引起严重的人兽共患病.弓形虫抗原的研究对开发诊断制剂、疫苗以及从分子水平探讨弓形虫与宿主之间的相互关系具有重要意义,该文对近年来有关弓形虫抗原的研究进展作一综述.     

弓形虫表面抗原研究进展

刚地弓形虫是一种广泛分布于人和哺乳动物组织细胞内的机会性致病原虫,可引起严重的人兽共患病.弓形虫抗原的研究对开发诊断制剂、疫苗以及从分子水平探讨弓形虫与宿主之间的相互关系具有重要意义,该文对近年来有关弓形虫抗原的研究进展作一综述.     

弓形虫表面抗原研究进展

刚地弓形虫是一种广泛分布于人和哺乳动物组织细胞内的机会性致病原虫,可引起严重的人兽共患病.弓形虫抗原的研究对开发诊断制剂、疫苗以及从分子水平探讨弓形虫与宿主之间的相互关系具有重要意义,该文对近年来有关弓形虫抗原的研究进展作一综述.     

弓形虫表面抗原研究进展

刚地弓形虫是一种广泛分布于人和哺乳动物组织细胞内的机会性致病原虫,可引起严重的人兽共患病.弓形虫抗原的研究对开发诊断制剂、疫苗以及从分子水平探讨弓形虫与宿主之间的相互关系具有重要意义,该文对近年来有关弓形虫抗原的研究进展作一综述.     

弓形虫表面抗原研究进展

刚地弓形虫是一种广泛分布于人和哺乳动物组织细胞内的机会性致病原虫,可引起严重的人兽共患病.弓形虫抗原的研究对开发诊断制剂、疫苗以及从分子水平探讨弓形虫与宿主之间的相互关系具有重要意义,该文对近年来有关弓形虫抗原的研究进展作一综述.     

弓形虫表面抗原研究进展

刚地弓形虫是一种广泛分布于人和哺乳动物组织细胞内的机会性致病原虫,可引起严重的人兽共患病.弓形虫抗原的研究对开发诊断制剂、疫苗以及从分子水平探讨弓形虫与宿主之间的相互关系具有重要意义,该文对近年来有关弓形虫抗原的研究进展作一综述.     

乙型肝炎病毒聚合酶链反应基因分型法的建立及应用

目前应用基因序列测定法分析乙型肝炎病毒(HBV)基因型虽然结果可靠,但操作较复杂,且费用较高,不适用于大规模的临床和流行病学调查。旨在建立一种简便的HBV基因分型法,即基因型特异引物PCR法,并用此法对2001年北京地坛医院110例慢性乙型肝炎患者的HBV基因型进行了分析。     

应用聚合酶链反应技术快速诊断结核病

应用聚合酶链反应技术快速诊断结核病吴丽娟，邓光贵，张文俊，梁启中，李小龙应用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｎ１ｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术对各种常见临床标本直接进行结核菌ＤＮＡ分析，以快速诊断结核病，并将结果与找抗酸杆菌法（ＡＦＩ３法）...     

弓形虫主要表面抗原基因（P30）大肠杆菌中以融合蛋白形 …

根据已发表的弓形虫主要表面抗原（Ｐ３０）的基因的序列,设计合成了一对引物,通过聚合酶链反应,扩增出Ｐ３０基因,将Ｐ３０基因克隆入表达质粒ｐＧＥＭＥＸ－１中,经酶切鉴定后,阳性重组质粒转化宿主菌ＪＭ１０９（ＤＥ３）,宿主菌经ＩＰＴＧ诱导表达后,产物进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析。结果显示,Ｐ３０基因以融合蛋白的形式表达,实物具有特异的免疫反应性。