二十碳五烯酸对人树突状细胞成熟过程中基因表达谱影响的研究

目的研究二十碳五烯酸(EPA)对人树突状细胞成熟过程中基因表达谱的影响。方法采用GM-CSF及IL-4诱导人外周单核细胞获得非成熟树突状细胞,然后将细胞分为三组处理,A组,维持树突状细胞的未成熟状态;B组,LPS(100ng/ml)作用48h诱导树突状细胞的成熟;C组,经EPA(50μmol/L)预处理24h后再予以LPS(100ng/ml)诱导树突状细胞的成熟。用低通量的cDNA表达谱芯片检测三组细胞基因表达谱的情况。RT-PCR法验证相关差异表达基因的结果。结果在LPS诱导树突状细胞成熟的过程中共有29条基因表达增加,9条基因表达下降。但是经EPA孵育24h后再予以LPS诱导"成熟"的人树突状细胞其基因表达水平发生明显变化,与未经EPA处理的成熟树突状细胞比较,共有15条基因出现差异表达,其中在29条本该上调的基因中有11条基因表达出现下降,1条基因出现上调。在9条本该表达下调的基因中有1条基因出现上调,2条明显下调。RT-PCR验证了其中6条基因的芯片结果。结论 EPA对树突状细胞的成熟过程中多种基因的表达具有明显的抑制作用,其范围涉及细胞因子及抗原提呈分子等不同基因。     

蟾酥作用后HL-60细胞基因表达谱变化的研究

目的研究蟾酥作用后HL-60细胞基因表达谱的变化，为蟾酥诱导HL-60细胞凋亡的可能机制提供依据。方法采用细胞形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡；应用DNA芯片技术检测蟾酥作用前后HL-60细胞基因表达谱的变化。结果1％(v／v)的蟾酥可明显诱导HL-60细胞凋亡。细胞凋亡发生前，在检测的1152个基因中共有9个基因表达改变，其中8个基因上调，1个基因下调。结论在蟾酥诱导HL-60细胞发生凋亡过程中有多个基因参与，BCL-2下调以及IL-8上调与凋亡的发生关系密切。     

三氧化二砷对HepG2细胞表达基因调节作用

目的 应用基因芯片技术，阐明低剂量三氧化二砷作用于肝HepG2细胞之后，无机砷对差异表达基因的调节作用。方法 应用基因表达谱芯片技术，对5μmol／L三氧化二砷诱导的HepG2细胞和以生理盐水处理的相同细胞的mRNA进行差异显示分析，研究三氧化二砷诱导人HepG2细胞后的差异表达基因。结果 HepG2细胞经5μool／L三氧化二砷诱导后。所检测的4096条目的基因中有123条产生差异表达，其中48条基因表达上调，75条基因表达下调。结论 应用基因表达谱芯片成功筛选了低剂量三氧化二砷诱导肝细胞后的差异表达基因，无机砷对肝细胞有双向调节作用。     

中药复方药物血清对BID和CTNNB1基因在人卵巢癌细胞株SKOV3中表达的影响

目的:研究BID和CTNNB1基因在中药复方理冲生髓饮诱导人卵巢癌细胞株SKOV3细胞凋亡中的作用。方法:Wistar大鼠随机分组,灌胃给药,采血制备中药复方药物血清。提取对照组及理冲生髓饮组肿瘤细胞mRNA,制备DNA探针并分别用Cy3和Cy5两种荧光染料标记,与人细胞凋亡寡核苷酸微阵列芯片进行杂交,经扫描、分析得出药物作用后表达有差异的基因。结果:共筛选出显著表达差异基因66种,其中20种基因表达水平上调,46种基因表达水平下调。结论:理冲生髓饮可能通过上调BID基因和下调CTNNB1基因达到诱导细胞凋亡、抑制转移及增加化疗敏感性的目的。     

γ线照射后小鼠小肠组织基因表达谱的改变

目的探讨γ线照射对肠道辐射损伤的分子机制。方法用γ线照射小鼠腹部,照射剂量为11.5Gy,照后采用cDNA微阵列观察受照小鼠小肠组织基因表达谱的改变。结果照射组与正常组相比有48条基因表达发生了明显改变,其中25个为下调基因,有Amy2、SCD-1、Elastase2、Sprr2A、NF-κB p65等与物质代谢、细胞增殖、信号转导相关基因表达下调;23个为上调基因,有Catalase1、RGS16、GST1、rpS17、TSA-1等与代谢酶类、信号转导、DNA损伤、细胞周期相关基因表达上调。在表达异常的基因中,有21条基因是已知功能或部分功能的基因,其余27条则为未知功能的基因。结论γ线照射可导致小鼠肠组织基因表达谱异常,且下调基因数较多。     

阿魏酸钠对ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及p53蛋白表达的影响

[目的]探讨阿魏酸钠(SF)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞株(HUVECCRL1730)凋亡的抑制作用及可能机制.[方法]体外ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞损伤,用阿魏酸钠进行干预.采用四甲基偶氮唑盐法检测细胞存活率;Hoechst33258细胞核荧光染色法观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡率:Western-blot检测内皮细胞p53蛋白表达.[结果]ox-LDL可明显抑制人脐静脉内皮细胞生长和增殖,诱导细胞发生凋亡,上调p53蛋白表达水平;阿魏酸钠干预后细胞存活率明显上升(P<0.05),细胞凋亡率明显下降(P<0.05),p53蛋白表达水平明显下调(P<0.05).[结论]ox-LDL可通过上调p53蛋白表达诱导人脐静脉内皮细胞凋亡,阿魏酸钠可通过下调p53蛋白表达抑制内皮细胞凋亡.     

RNA干涉Survivin基因对SiHa细胞增殖抑制及凋亡的影响

目的:研究RNA干涉survivin基因对宫颈癌SiHa细胞的增殖抑制及凋亡的影响并探讨其作用机制。方法:重组质粒(pU6-siRNA-Survivin)及空质粒转染SiHa细胞,MTT法检测细胞增殖情况,检测survivin基因转录水平,吖啶噔染色、流式细胞术检测细胞凋亡,免疫组化染色检测survivin、caspase3基因表达。结果:RNA干涉后,抑制SiHa细胞增殖并出现细胞凋亡,survivin基因转录表达下调,caspase3基因表达上调。结论:RNA干涉survivin基因可导致SiHa细胞增殖抑制并凋亡,其机制与caspase3基因表达上调有关。     

佛波酯对BALB/c 3T3细胞转化早期基因表达的影响

目的 探讨佛波酯(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate,TPA)促进细胞转化早期基因表达谱的变化。方法 以N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)为启动剂,TPA为促癌剂,建立BALB／c3T3细胞转化模型。采用锥虫蓝染色法检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞周期变化。采用cDNA微阵列检测TPA处理早期的基因表达谱变化。结果 TPA处理早期可抑制细胞增殖,阻滞细胞于G1期与S期。TPA处理4h和24h后,在检测的1152个基因中筛选出19个差异表达基因,其中9个基因表达上调,10个基因表达下调。许多差异表达基因的功能与细胞增殖、凋亡和周期调控相关,主要涉及ras和p53基因信号传导通路。结论 TPA在促进BALB／c3T3细胞转化的早期阶段,可影响某些调节细胞周期进展基因的转录表达,从而导致细胞生长阻滞。     

氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞基因表达

目的 通过研究氧化型低密度脂蛋白(Oxidized low density lipoprotein。Ox-LDL)诱导血管内皮细胞基因表达谱的改变，为阐明氧化型低密度脂蛋白致内皮细胞功能障碍及动脉粥样硬化形成的分子机制提供科学依据。方法 采用含有4000条全长已知人类基因cDNA，以及96条参照基因cDNA克隆制作的基因表达谱芯片，筛查氧化型低密度脂蛋白(100mg／L)作用6h对人脐静脉血管内皮细胞的基因表达谱改变的影响。结果 Ox-LDL可诱导3条基因表达下调，5条基因表达上调。结论 氧化型低密度脂蛋白的早期作用即可诱导内皮细胞相关基因的表达改变；首次发现氧化型低密度脂蛋白可诱导内皮细胞H731蛋白，ST2蛋白，CyclinB1(细胞周期蛋白B1)和KDRF(KM-102-derived reductase-like factor。KM-102源性还原酶样因子)等基因表达的改变，为揭示氧化型低密度脂蛋白引起血管内皮细胞功能障碍的机制提供线索。     

RNA干扰hTERT基因对人乳腺癌细胞株MCF-7周期及凋亡影响的研究

目的 观察载体介导的RNA干扰技术能否有效抑制人乳腺癌细胞株MCF-7的hTERT的表达及其对细胞周期及凋亡的影响.方法 构建2个针对hTERT基因表达短发夹状siRNA的真核表达载体（pshRNA-hTERT）并转染人乳腺癌细胞株MCF-7,通过RT-PCR检测该基因mRNA,Western blot蛋白质检测,端粒酶活性检测,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡等方法检测RNAi效果,从中筛选出基因沉默效果好的靶位点.结果 转染乳腺癌细胞后,pshRNA - hTERT1,2质粒均能抑制hTERT基因表达,mRNA表达分别下调了54.6%,55.2% 蛋白表达分别下调46.6%,47.8%.端粒酶活性均明显下降.对乳腺癌细胞周期中S期细胞明显减少,G1/G0期细胞显著增加.结论 RNAi在体外明显抑制乳腺癌细胞中hTERT基因的表达和瘤细胞增殖.     

DIM联合顺铂诱导人卵巢癌细胞SK-OV-3凋亡机制的研究

目的:探讨顺铂(cis-diamminedichlorop latinum DDP)和3,3-二吲哚基甲烷(3,3-diindolylmethane,DIM)联合应用诱导人卵巢癌细胞SK-OV-3凋亡的机制。方法:采用免疫组化技术观察细胞内caspase3蛋白的表达,利用RT-PCR和western blot检测bcl-2、caspase3和caspase9基因和蛋白表达变化。结果:细胞培养及免疫化学染色可见各给药组与对照组比较均有不同程度抑SK-OV-3细胞增殖并诱导其凋亡作用;RT-PCR结果显示各给药组均能使caspase3和caspase9基因表达上调,bcl-2表达下调;westernblot结果表明各给药组与对照组相比caspase3和caspase9蛋白表达上调,bcl-2表达下调,且0.4mg.L-1DDP+60μmol.L-1DIM联合应用与10倍剂量DDP(4mg/L-1)单独应用效果相同。结论:DIM与DDP均可抑制PC-3细胞增殖并诱导其凋亡;其细胞凋亡机制可能与上调caspase3、caspase9基因表达,下调bcl-2表达有关;DIM与DDP联合抗瘤具有明显的减毒增效作用。     

低水平铅暴露对仔鼠海马基因表达影响

目的 采用基因芯片方法,筛查低水平铅暴露对仔鼠海马基因表达的影响.方法 建立出生前后低水平铅暴露大鼠的动物模型,即妊娠期和哺乳期给予母鼠0.2%醋酸铅溶液自由饮水,仔鼠断乳时测定其血铅水平,鉴定模型成功后提取仔鼠海马总RNA,采用[α-33P]dATP标记的基因芯片检测铅对仔鼠海马基因表达谱的影响.结果 实验组血铅水平(3.41±0.27)μmol/L高于对照组(0.29±0.06)μmol/L,P＜0.05.基因芯片筛查发现有130个基因出现2倍以上的表达变异,其中120个上调,10个下调,多为已知功能基因,上调的包括跨膜信号传递系统的系列基因、神经代谢和发生相关的基因、神经传导相关的基因及炎症因子基因等,下调的包括与凋亡和细胞应激相关的基因.结论 出生前后低水平铅暴露引起断乳期大鼠海马基因表达谱的变化,可能是发育期铅暴露影响学习记忆等海马主要生理功能的物质基础.     

电离辐射诱导人口腔上皮癌KB细胞基因表达谱变化的研究

目的 利用基因芯片技术研究辐射相对不敏感细胞人口腔上皮癌KB细胞受电离辐射后基因表达谱变化。方法 ①克隆形成实验分析不同照射剂量对KB细胞生长抑制率的影响;②采用基因芯片技术筛选与空白对照组差异表达基因并分析。结果 在基因芯片上48 000个基因中,共有749个差异表达的基因,其中上调表达269个,下调表达480个,表达差异的基因主要涉及细胞分裂、核酸合成修复、核酸结合转运、凋亡等多个方面。结论 辐射对细胞造成的损伤是多靶点多层次的,深入研究这些辐射相关基因的作用,可为进一步研究辐射敏感或抗性产生的原因提供依据。     

电磁辐射致小鼠海马神经细胞基因表达谱差异

目的研究电磁辐射后小鼠海马脑区基因表达的变化与神经损伤效应的关系。方法应用cDNA微阵列技术观察电磁辐射后小鼠海马神经细胞基因表达谱的差异，并分析筛选出差异表达基因。结果电磁辐射后即刻小鼠海马神经细胞出现5个上调表达基因。而辐照后24h差异表达基因增加为30个，其中上调表达基因为6个．下调表达基因为24个。差异表达基因主要包括应激蛋白、细胞调亡相关蛋白、信号转导调控因子及效应子、DNA损伤与修复蛋白、转录因子、受体、细胞粘附分子、细胞因子等多种基因。结论电磁辐射可使小鼠海马脑区多个基因出现差异表达，且这种差异表达表现为动态变化。电磁辐射海马神经损伤是一个多基因参与的复杂效应过程，电磁辐射后基因表达的变化规律能够在一定程度上反映出海马神经损伤效应的变化过程。     

Rb基因在染料木黄酮抑制人乳腺癌细胞生长中的作用

目的:研究Rb基因在染料木黄酮(genistein,Gen)抑制人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖中的作用。方法:采用MTT实验和集落形成实验观察Gen对人乳腺癌细胞增殖影响,Westernblotting检测Rb基因、细胞周期素cyclinE蛋白表达情况,RT-PCR检测Rb基因mRNA的表达。结果:Gen显著抑制MCF-7细胞生长,促进细胞Rb基因在蛋白及mRNA水平的表达,抑制cyclinE蛋白的表达。结论:Gen抑制人乳腺癌细胞增殖,其机制可能通过上调Rb基因表达,下调cyclinE蛋白表达。     

UHRF1的高表达降低人乳癌细胞对X射线敏感性的研究

目的：了解基因UHRF1的高表达对乳癌细胞MDA-MB-231辐射敏感性的影响.方法：利用克隆形成实验观察细胞存活;流式细胞术测定细胞周期;利用DNA片段分析和Annexin V 试剂盒测定细胞凋亡;Western blot 测定蛋白表达变化;利用经典的染色体分析,观察染色体畸变（着丝粒环和双着丝粒）.结果：与对照相比, UHRF1转染可明显降低MDA-MB-231细胞对X射线的敏感性.利用UHRF1-siRNA抑制UHRF1的表达,可显著增强细胞的辐射敏感性.UHRF1的高表达,可诱导G2/M期阻滞,抑制细胞凋亡,下调促凋亡蛋白Bax,上调DNA损伤修复蛋白Ku70和 Ku80的表达水平,而且,能抑制X射线诱导的染色体畸变.结论：UHRF1可能通过影响凋亡和DNA损伤修复成为乳癌放疗的新靶标.     

PCB153对人B淋巴母细胞基因表达谱的影响

目的 研究2,2',4,4',5,5'-六氯联苯(2,2',4,4',5,5'-hexachlorobiphenyl,PCB153)对人B淋巴母细胞基因表达谱的影响.方法 采用0(对照)和25、100、200 μmol/L的PCB153分别处理人B淋巴母细胞2、24、48 h,收集细胞后提取总RNA.PCB153处理24 h的RNA样本用Illumina人HT-12 v4全基因组表达谱芯片筛测差异表达基因,并对差异基因进行基因本体论(gene ontology,GO)分类分析.在PCB153处理2、24、48 h样本中用实时定量PCR对候选差异基因进行验证.结果 芯片结果显示,各剂量PCB153处理样本中分别发现161、191、1 006个差异基因,三个剂量组重叠差异基因数为15个,其中,上调基因4个、下调基因11个.选取6个差异基因用定量PCR进行验证,发现2个上调基因(CCDC92和TMEM175)及3个下调基因(CCL22、STK38L和GZMK)的表达改变与芯片结果一致.基因CCDC92、CCL22、GZMK和TMEM175等可影响多种淋巴细胞功能,基因STK38L可作用于细胞周期和细胞凋亡等,基因CCL22和MTDH的异常表达则与多种癌症密切相关.结论 体外急性染毒PCB153干扰了人B淋巴母细胞某些重要功能基因的表达,为多氯联苯毒性的分子作用机制提供了依据.     

应用基因芯片研究MNNG诱发小鼠胚胎畸形肢体基因的表达

[目的]研究N-甲基-N’-硝基-N-甲基亚硝基胍(MNNG)诱致小鼠胚胎畸形肢体基因表达的变化，筛选肢体畸形相关基因。[方法]应用含有8192条小鼠基因的cDNA表达谱芯片，对MNNG诱致的孕16d胎鼠畸形肢体组织及正常肢体组织的基因表达谱进行分析。[结果]畸形肢体组织共筛到差异表达基因88条，其中下调59条，上调29条。[结论]MNNG诱致的小鼠胚胎短肢、少趾畸形可有很多基因的表达改变，涉及与凋亡有关的基因、与生长因子或生长因子样物质有关的基因、结构基因及很多功能未知的相关基因，差异表达基因中以下调基因居多，这些结果可为进一步研究肢体短肢、少趾畸形的形成机制提供依据。     

cDNA微阵列检测苯中毒细胞增殖与周期调控基因差异表达

目的 通过基因表达谱研究寻找苯中毒发病机制中细胞增殖与周期调控基因差异表达。方法应用含338条免疫相关基因的cDNA芯片检测7例苯中毒患者和7例正常人的外周血白细胞基因表达谱，观察其在基因表达谱上的差异。进行了基因表达谱聚类分析和比较；筛选有统计学意义的差异表达的基因。结果所有芯片中出现差异表达的基因共有44条，其中表达上调的基因17个，主要包括有IFIM1、CDKN1B、RBL2、GSPT1、FOX01A等：表达下调的基因17个，有CDC37、MDM4、EV15、SKP2等基因；表达不一致的基因6个。聚类分析揭示40条基因的基因表达谱特征存在关联。结论通过有统计学意义的差异表达的苯中毒相关基因，推测细胞增殖与细胞周期调控可能在苯中毒发病中起重要作用。     

雄黄对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞基因表达谱的作用

目的阐明雄黄治疗多发性骨髓瘤的分子机制。方法应用cDNA芯片在不同3天时间比较雄黄治疗前后72小时多发性骨髓瘤细胞系基因表达谱的改变。结果 cDNA芯片结果显示54条基因上调,60条基因下调,进一步分析发现17条上调基因Z-score大于2,3条下调基因Z-score小于-2。结论这些基因是本研究中雄黄治疗后显著改变的基因,CCL2,CCL3,BTG1,TNFAIP3,TNFAIP8,SLC38A2,IGFBP4是重要的上调基因,涉及一系列的细胞生命活动如：细胞增殖、细胞间信号转导、凋亡调节及细胞内环境稳定。有3个显著下调的基因涉及到肌肉收缩。部分基因（CCL2,TNFAIP3,BTG1）的结果通过反转录聚合酶链反应证实。