5-氮杂-2′-脱氧胞苷通过上调法尼酯X受体启动子甲基化水平抑制HepG2细胞载脂蛋白A表达

目的 探索5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）的DNA去甲基化作用对HepG2细胞载脂蛋白A（ApoA）表达的影响,并探讨其作用机制。方法 选取ApoA高表达细胞株HepG2细胞为研究对象。噻唑蓝法测定HepG2经不同浓度（0、10、20、40、80 μmol/L）的5-Aza-CdR处理不同时间（12、24、48、72、96 h）后细胞相对存活率;Western blot检测5-Aza-CdR不同浓度组HepG2细胞ApoA、法尼酯X受体（FXR）的表达水平;逆转录聚合酶链反应检测ApoA、FXR的mRNA水平;亚硫酸氢盐测序PCR检测FXR基因启动子在5-Aza-CR不同浓度组的甲基化水平。结果 与对照组相比,5-Aza-CR 10、20、40 μmol/L组在12、24、48、72 h各组间细胞存活率无统计学差异（P>0.05）,而在20 μmol/L 96 h组、40 μmol/L 96 h组、80 μmol/L 24 h组、80 μmol/L 48 h组、80 μmol/L 72 h组以及80 μmol/L 96 h组HepG2细胞存活率存在统计学差异（P<0.05）,选取0～40 μmol/L为5-Aza-CdR的安全浓度范围,0～72 h为合适作用时间。与对照组相比,5-Aza-CdR呈剂量和时间依赖性上调FXR蛋白、下调ApoA蛋白表达,其中以40 μmol/L组最为明显（P<0.05）;与对照组相比,5-Aza-CdR呈剂量依赖性上调FXR mRNA、下调ApoA mRNA表达,其中以40 μmol/L组最为明显（P<0.05）。随着5-Aza-CdR浓度的递增,FXR基因启动子甲基化水平呈下降趋势,其中对照组FXR基因启动子甲基化率为58.3%,而40 μmol/L组FXR基因启动子甲基化率仅为8.3%。结论 5-Aza-CdR通过DNA去甲基化作用促进FXR表达,从而下调ApoA的表达。     

载脂蛋白A1对胆固醇逆转运及三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的影响

目的 观察载脂蛋白A1(apoAl)对人急性单核细胞白血病细胞株(THP-1)源性泡沫细胞内胆固醇、胆固醇酯含量和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCAl)表达的影响和机制.方法 以50 ng/ml的佛波酯诱导人THP-1,使其分化为巨噬细胞,再经50μg/ml氧化型低密度脂蛋白充分诱导使其转变为负脂的泡沫细胞;然后用不同浓度apoAl(5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20 μg/ml)孵育泡沫细胞24 h,以apoAl(10μg/ml)孵育泡沫细胞6 h、12 h、24 h.采用油红O染色观察细胞内脂滴的变化,用氧化酶法检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量;用反转录聚合酶链反应检测不同浓度apoAl干预泡沫细胞后ABCA1 mRNA的表达;用免疫荧光法检测经不同浓度和不同时间apoAl和ABCAl多克隆抗体干预泡沫细胞后ABCA1蛋白的表达.结果 (1)THP-1经佛波酯(50 ng/ml)和氧化型低密度脂蛋白(50μg/ml)分别干预48 h后可成功诱导为富含脂质的泡沫细胞;(2)apoA1可促进THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇逆向转运,减少细胞内胆固醇含量,呈浓度依赖性和时间依赖性;(3)随着apoA1干预浓度增加,THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内ABCA1 mRNA的表达变化不显著,但蛋白表达增加,0 μg/ml与5 μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20μg/ml apoAl干预浓度下油红O染色阳性细胞率分别为(55±4)%与(43±9)%、(33±4)%、(28±1)%、(26±2)%,差异有统计学意义(均P<0.05);(4)ABCAl抗体干预可增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白的表达.结论 apoA1-ABCA1通路参与泡沫细胞胆固醇逆向转运,apoA1起关键作用,apoA1增加ABCA1蛋白的表达可能与降低ABCA1蛋白的降解有关.     

丹红注射液对氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积的影响

目的　观察丹红注射液对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积的影响,并探讨其机制。方法　160　nmol/L　PMA孵育THP-1巨噬细胞24　h后,细胞分为三组：对照组、ox-LDL组（100　mg/L）和丹红组（100　mg/L　ox-LDL+30　mL/L丹红注射液）。高效液相色谱分析法检测细胞内胆固醇水平,采用液体闪烁计数法观察细胞内胆固醇的流出,Western　blot检测细胞ATP结合盒转运体A1（ABCA1）和肝X受体α（LXRα）的蛋白表达,定量　PCR　检测细胞ABCA1和LXRα的mRNA　表达。结果　丹红注射液抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积,显著降低细胞总胆固醇（TC）、游离胆固醇（FC）和胆固醇酯（CE）的含量,增加载脂蛋白AⅠ（ApoAⅠ）介导的胆固醇流出,促进THP-1巨噬细胞ABCA1和LXRα的表达。结论　丹红注射液抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积,可能与其促进LXRα-ABCA1途径介导的胆固醇流出有关。     

利拉鲁肽对高糖条件下HepG2细胞胆固醇流出的影响

目的研究利拉鲁肽对高糖条件下HepG2细胞胆固醇流出的影响,检测相关蛋白表达并探讨其分子机制。方法体外培养HepG2细胞,以高糖刺激并以不同浓度利拉鲁肽干预,采用BODIPY-胆固醇荧光法检测利拉鲁肽对高糖条件下HepG2细胞胆固醇流出的影响,通过Western blot法分析三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)、ABCG1与清道夫受体B1蛋白表达及细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)信号通路变化。结果利拉鲁肽可显著降低高糖(50 mmol/L)条件下HepG2细胞内荧光密度,增加ABCA1蛋白的表达,且增强ERK1/2的磷酸化水平。结论利拉鲁肽增强高糖条件下HepG2细胞中胆固醇流出,其机制可能与调控ERK1/2信号通路进而上调ABCA1表达有关。     

松龄血脉康对THP-1源性泡沫细胞ABCA1蛋白表达及细胞内胆固醇含量的影响

目的 观察松龄血脉康对THP-1源性泡沫细胞腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白表达及细胞内胆固醇含量的影响及其防治动脉粥样硬化(AS)的可能机制.方法 培养THP-1细胞,160 nmol/L佛波脂(PAM)使之巨噬化,用50 mg/L氧化型低密度脂蛋白使巨噬细胞形成泡沫细胞.0.81 mg/L松龄血脉康、10 μmol/L罗格列酮分别和泡沫细胞孵育6、12、24 h;0.40、0.81、1.6 mg/L的松龄血脉康、1、10、20 μmol/L的罗格列酮与泡沫细胞孵育24 h.用流式细胞技术检测ABCA1蛋白表达的水平,并测定各组细胞内胆固醇含量.结果 松龄血脉康组、罗格列酮组均增加ABCA1蛋白的表达,而细胞内胆固醇含量减少,与对照组相比,均有显著性差异(P＜0.05),且有浓度、时间依赖性.松龄血脉康组与罗格列酮组无显著性差异(P>0.05).结论 松龄血脉康具有与罗格列酮增加ABCA1蛋白及降低胆固醇含量相似的作用.增加ABCA1蛋白表达,降低细胞内胆固醇含量可能是中药松龄血脉康抗AS的机制之一.     

姜黄素对缺氧HepG2细胞中HIF-1α表达的影响及可能机制

目的:研究姜黄素对缺氧条件下人肝癌细胞HepG2中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响,并探讨其可能机制.方法:0、1、2、5、10 μmol/L的姜黄素处理缺氧条件下的HepG2细胞6 h后,用Westernblot免疫印迹法和RT-PCR检测HIF-1α的蛋白及mRNA的表达:0 μmol/L,10 μmol/L姜黄素,10 μmol/L姜黄素 10 μmol/L MG-132处理缺氧条件下的HepG2细胞6 h后,用Western blot检测HIF-1α和VEGF的蛋白水平.结果:HepG2细胞经1、2、5、10 μmol/L的姜黄素处理后,HIF-1α蛋白水平与对照组(0μmol/L姜黄素处理)比较明显降低(F=79.81,P<0.01),且降低程度随着姜黄素处理浓度的增加而变大.但各剂量组HIF-1α的mRNA水平与对照组比较无显著性差异;蛋白酶体抑制剂MG-132可以逆转姜黄素所致的HepG2细胞HIF-1α和VEGF蛋白表达抑制(F=68.47,83.79,均P<0.01).结论:姜黄素通过蛋白酶体途径,在转录后水平抑制缺氧HepG2细胞HIF-1α表达.     

NS-398对HepG2细胞增殖的抑制作用及机制探讨

目的探讨氮-2,环己氧-4,硝基苯—甲基磺胺（NS-398）对肝癌细胞株HepG2细胞的生长抑制作用及其机制。方法分别用100、200、300、400μmol/L的NS-398处理HepG2细胞,用MTT法测算肿瘤细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率,用免疫组化和Westernblot检测细胞的血管生长因子（VEGF）。结果NS-398呈剂量依赖性的方式抑制HepG2细胞增殖,并诱导其凋亡,随着NS-398浓度增大,S期细胞明显减少,有G1期细胞累积现象,其24h半数有效剂量（IC50）为300μmol/L。NS-398浓度为200μmol/L以上时HepG2细胞VEGF的表达与对照组相比,P〈0.01。结论NS-398对肝癌细胞增殖有抑制作用,并诱导其凋亡,可能与G1阻滞以及VEGF的表达受抑制有关。     

四种中药单体对人肝癌HepG2细胞枯草溶菌素转化酶9表达的影响

目的探讨齐墩果酸、金丝桃苷、槲皮素和熊果酸对人肝癌HepG2细胞枯草溶菌素转化酶9(proprotein convertase subtilisin/kexin 9,PCSK9)表达的影响,为寻找新型降血脂药物提供理论依据。方法培养HepG2细胞,用不同浓度的4种药物分别作用24 h,用RT-PCR、Western blot分别检测PCSK9 mRNA和PCSK9蛋白的表达。用MTT法检测细胞增殖的情况。筛选出可抑制PCSK9表达的药物后,选择最佳药物浓度,处理HepG2细胞0、3、6、12、24 h后,分别用RT-PCR和Western blot检测PCSK9mRNA和PCSK9蛋白表达,观察其抑制作用是否存在时间依赖性。结果金丝桃苷、槲皮素和熊果酸对HepG2细胞PCSK9的表达没有影响(P>0.05),75μmol/L和100μmol/L齐墩果酸处理24 h,与对照组比较PCSK9的表达明显减少,并呈一定的浓度依赖性(P<0.05)。100μmol/L齐墩果酸处理HepG2细胞0、3、6、12、24 h后,12 h组和24 h组明显抑制PCSK9的表达,并呈一定的时间依赖性(P<0.05)。结论齐墩果酸...     

山萘酚对HepG2细胞凋亡的影响

目的探讨山萘酚对人类肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的影响。方法以不同浓度的山萘酚孵育HepG2细胞24 h后选取最佳药物浓度100μmol/L,再以不同的时间孵育HepG2细胞。采用MTT法检测细胞存活率;采用乳酸脱氢酶(LDH)活力定量试剂盒检测细胞上清LDH活性;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用蛋白印记法检测细胞凋亡相关蛋白的表达情况。结果山萘酚对HepG2细胞凋亡有诱导作用且呈剂量和时间依赖性。当山萘酚作用于HepG2细胞24 h后,随着山萘酚浓度的增加,细胞存活率逐渐降低,细胞凋亡率逐渐增高。与空白对照组相比,作用于HepG2细胞24 h后浓度为100μmol/L的山萘酚,细胞存活率显著降低[(60.58±3.74)%vs(100±2.28)%,P0.0001],细胞凋亡率明显升高[(16.43±0.07)%vs(0.68±0.09)%,P0.0001]。经蛋白印记检测,在山萘酚孵育HepG2细胞24 h的情况下,随着山萘酚浓度的增加,凋亡因子Cleaved-caspase3蛋白表达增加。当山萘酚浓度为100μmol/L时,随着山萘酚作用于HepG2时间的延长,细胞凋亡率也呈逐渐升高趋势。与空白对照组相比,浓度为100μmol/L的山萘酚作用于HepG2细胞24 h后,细胞存活率明显降低[(59.36±3.09)%vs(100±2.28)%,P0.0001],细胞凋亡率显著升高[(16.71±1.12)%vs(0.35±0.01)%,P0.0001],随着时间延长,Cleaved-caspase3表达增加。结论山萘酚对于人类肝癌细胞系HepG2细胞的凋亡具有诱导作用,呈剂量-时间依赖性。表明高浓度山萘酚可通过促进凋亡因子Cleavedcaspase3的表达诱导HepG2细胞凋亡,从而拥有潜在的抗肝癌活性作用。     

晚期氧化蛋白产物对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的影响

目的探讨晚期氧化蛋白产物对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达及胆固醇流出的影响。方法用160nmol/L的佛波酯诱导THP-1细胞24h,使其贴壁并转化为巨噬细胞,并以50mg/L的氧化型低密度脂蛋白孵育细胞使其转化为泡沫细胞,再用不同浓度的晚期氧化蛋白产物(0、50、100、200μmol/L)处理细胞24h,或以100μmol/L的晚期氧化蛋白产物处理细胞不同的时间(0、12、24、48h)。采用液体闪烁计数法观察细胞内胆固醇的流出....     

载脂蛋白A1诱导骨髓源性巨噬细胞向抗炎性M2型极化的作用

目的 观察载脂蛋白A1对骨髓源性巨噬细胞极性的影响，探讨高密度脂蛋白抗炎的细胞机制。方法体外培养小鼠骨髓源性巨噬细胞，分别用5、10、15 mg/L浓度的载脂蛋白A1孵育细胞24 h后，应用流式细胞术检测膜分子CD16/32、CD206的表达；用酶联免疫吸附法检测白细胞介素10和白细胞介素12的分泌；用实时荧光定量聚合酶链反应检测Toll样受体4、髓样分化因子88、干扰素调节因子5 mRNA的表达。结果 经载脂蛋白A1干预后的巨噬细胞，CD16/32、白细胞介素12表达明显下降，CD206、白细胞介素10表达明显升高，并伴有Toll样受体4、髓样分化因子88、干扰素调节因子5 mRNA表达的下降,呈剂量依赖性。结论 载脂蛋白A1促进巨噬细胞向抗炎性M2型巨噬细胞极化，此效应可能与高密度脂蛋白的抗炎作用有关。     

血浆过氧化脂质和载脂蛋白A1,B水平与NIDDM大血管病 变的关系

测定了41例NIDDM病人(25例有大血管病变,16例无血管并发症)及33例正常人的血浆Lpo、ApoA_1、ApoB和脂蛋白。NIDDM各组与正常对照组、NIDDM合并大血管病变组与无血管病变组之间比较,前者Lpo、ApoB水平升高,ApoA_1水平下降,且差异极显著。提示上述变化与NIDDM大血管病变的发生关系密切。NIDDM病人血浆Lpo水平与ApoB、LDL-C、TC、TG的水平呈极显著正相关,提示NIDDM病人Lpo代谢异常与其他血脂代谢异常有伴同关系。     

载脂蛋白A1、载脂蛋白A1与载脂蛋白B比值与下肢动脉粥样硬化闭塞症的关系

目的　探讨下肢动脉粥样硬化闭塞症 (PAD)患者血清各项血脂指标的变化 ,分析各项血脂指标与该疾病及其下肢动脉病变程度、范围的关系。方法　PAD患者 (PAD组 ) 111例 ,测定各项血脂成分 ,并以同期住院的心脏神经官能症患者 (对照组 )作比较。结果　PAD组各项血脂均有不同程度的改变 ,ApoA1、ApoA1/ApoB、LDL C与对照组比较差异有显著性或非常显著性 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ,各项血脂在不同狭窄组间比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。PAD与ApoA1(r =-0 .2 165 )、ApoA1/ApoB(r=-0 .2 80 1)呈负相关 ,与LDL C(r=0 .2 195 )呈正相关。结论　ApoA1、ApoA1/ApoB和LDL C可能是PAD发病的危险因素     

游泳对高脂饮食老年大鼠高密度脂蛋白及载脂蛋白A1基因表达的影响

目的探讨运动对高脂饮食老年大鼠血脂代谢的影响. 方法建立饮食性高脂血症大鼠模型,采用不同时间(45 min和90 min)的游泳运动,测定各组大鼠血清胆固醇(TC)、血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和载脂蛋白A1(apoA1);并用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测各组大鼠肝脏apoA1 mRNA水平. 结果参加运动的高脂饮食大鼠血清HDL-C分别为(1.48±0.24)mmol/L和(1.49±0.25)mmol/L,apoA1分别为(0.13±0.07)mmol/L和(0.17±0.03)mmol/L,均较对照组和单纯高脂组升高(P＜0.05),高脂饮食的老年大鼠肝脏apoA1mRNA表达明显减少为0.651±0.24(P＜0.01),而游泳运动则使其显著恢复,两运动组apoA1 mRNA表达量分别为1.623±0.61和1.577±0.49,差异无显著性(P＜0.05). 结论游泳运动通过调节大鼠肝脏apoA1 mRNA的表达,影响高脂饮食大鼠血浆高密度脂蛋白(HDL)的变化.     

载脂蛋白A1-P11融合蛋白诱导血清抗体在大鼠、小鼠及家兔中的动态变化

目的探讨载脂蛋白A1-P11融合蛋白诱导血清抗体在大鼠、小鼠以及家兔中的变化,比较融合蛋白在三种动物中的反应原性,确定适于评价载脂蛋白A1-P11药效的动物种类。方法大鼠、小鼠及家兔各14只,随机选取7只按照1mg/kg体重静脉注射载脂蛋白A1-P11融合蛋白,隔天给药;各组余下的7只动物注射生理盐水作为对照。并在给药前1天、第2、4、8、12、15、18和20次给药时及停药后第1、2、3和4周采血。用酶联免疫吸附法检测不同时间点的中和抗体。结果载脂蛋白A1-P11在这三种动物中抗体变化的消长规律基本一致,但是家兔产生抗体显著高于小鼠和大鼠。结论三种动物中,大鼠和小鼠更适合作为评价载脂蛋白A1-P11长期功效的动物,因而这两种动物的病理模型可作为评价载脂蛋白A1-P11药效的候选动物,为探讨载脂蛋白A1-P11治疗高脂血症和干预动脉粥样硬化奠定基础。     

血清载脂蛋白水平在HBV慢性肝病肝损伤程度判断中的作用

目的:研究HBV慢性肝病中的血清载脂蛋白水平的变化与肝损伤严重程度的关系.方法:113例HBV相关的慢性肝病患者,其中慢性乙型肝炎33例,肝硬化46例,重型肝炎肝衰竭34例,肝衰竭又分为良好预后组和不良预后组,检测其入院时空腹血清载脂蛋白ApoA1和ApoB水平,计算患者的MELD和Child-Pugh评分,并分析Ap...     

Plasma apolipoprotein A5 and triglycerides in type 2 diabetes

Aims/hypothesis Variation in the human apolipoprotein (APO) A5 gene (APOA5) is associated with elevated plasma triglycerides. However, data on the exact role of plasma concentrations of APOA5 in human triglyceride homeostasis are lacking. In the present study, we estimated plasma APOA5 levels in patients with type 2 diabetes at baseline and during atorvastatin treatment, a lipid-lowering treatment that results in a reduction in plasma triglycerides and APOC3.Subjects, materials and methods Plasma APOA5 concentration was measured by ELISA in 215 subjects with type 2 diabetes, who were taken from the Diabetes Atorvastatin Lipid-lowering Intervention (DALI) study, a 30-week randomised, double-blind, placebo-controlled study, and given atorvastatin 10 mg or 80 mg daily.Results At baseline, average plasma APOA5 concentration was 25.7±15.6 μg/100 ml. Plasma APOA5 (R _s=0.40), APOC3 (R _s=0.72) and APOE (R _s=0.45) were positively correlated with plasma triglyceride levels (all p<0.001). In multiple linear regression analysis, adjusted for age and sex, the variation in plasma triglycerides was explained mostly by APOC3 (52%) and only to a small extent by APOA5 (6%) and APOE (1%). Atorvastatin treatment decreased plasma triglycerides, APOA5, APOC3 and APOE (all p<0.0001). After treatment, APOC3 remained the major determinant of plasma triglyceride levels (59%), while the contributions of APOA5 and APOE were insignificant (2 and 3%).Conclusions/interpretation Our findings reveal a positive association between plasma APOA5 and triglycerides in patients with type 2 diabetes. Treatment with atorvastatin decreased plasma APOA5, APOC3, APOE and triglycerides. In contrast to APOC3, APOA5 is not a major determinant of triglyceride metabolism in these patients.Members of the DALI study group are listed in the Appendix.     

载脂蛋白A5对甘油三酯代谢的影响及其机制

载脂蛋白A5是载脂蛋白家族的新成员,它具有较强的表面排斥力和很强的脂质结合能力.在动物与人类研究中发现,它主要参与调节甘油三酯代谢,但两者之间的关系目前研究结果尚不一致.它可通过维持细胞内脂滴的形态、影响肝细胞极低密度脂蛋白-甘油三酯的产生、增加血浆富舍甘油三酯脂蛋白的清除及增加脂蛋白脂肪酶和肝酯酶的活性调节甘油三酯的代谢,但其具体机制仍有待进一步研究.     

ApoB-100, ApoE and CYP7A1 gene polymorphisms in Mexican patients with cholesterol gallstone disease

AIM: To determine the possible association of the ApoB100 (Xba Ⅰ ), ApoE (Hha Ⅰ ) and CYP7A1 (Bsa Ⅰ ) gene polymorphisms, with the development of cholesterol gallstone disease (GD) in a Mexican population. METHODS: The polymorphisms were analyzed by polymerase chain reaction followed by restriction fragment length polymorphism, in two groups matched by ethnicity, age and sex: patients with GD (n = 101) and stone-free control subjects (n = 101). RESULTS: Allelic frequencies in patients and controls were: 34....