日本血吸虫26ku谷胱甘肽硫—转移酶基因的克隆及分析

目的 扩增日本血吸虫２６ｋｕ谷胱甘肽硫－转移酶（Ｓｊ２６ＧＳＴ）基因片段,构建其重组原核载体,以研制ＳｊＧＳＴ重组克隆。方法 根据已知基因序列设计一对引物,运用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增Ｓｊ２６ＧＳＴ目的基因ｃＤＮＡ片段,将其克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（ＫＳ）质粒中,并经酶切、ＰＣＲ和测序鉴定。结果 获得ＧＳＴ－ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（ＫＳ）重组克隆。结论 本实验获得Ｓｊ２６ＧＳＴ重组克隆,为进一步研     

日本血吸虫(大陆株)26ku谷胱甘肽转移酶基因真核表达载体构建及序列分析

目的　构建日本血吸虫大陆株 2 6ku谷胱甘肽转移酶 (GST)基因真核表达质粒 pBK SjGST并进行序列分析 ,为进一步进行重组蛋白的表达及保护性免疫研究提供条件。方法　根据日本血吸虫菲律宾株 2 6kuGST核苷酸序列 ,设计合成一对引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫总RNA为模板 ,通过RT PCR合成日本血吸虫中国大陆株 2 6kuGSTcDNA片段。将其克隆入 pGEM T载体 ,经双酶切及PCR鉴定后 ,再亚克隆入 pBK CMV真核表达质粒 ,构建重组质粒pBK SjGST ,转化到大肠杆菌BL2 1感受态细胞 ,提取重组质粒双酶切鉴定并进行序列分析。结果　PCR、pGEM T SjGST及 pBK SjGST分别经双酶切获得一特异性基因片段 .经测序分析该片段具有一个 670bp的全基因序列 ,而其开放阅读框 (openreadingframe,ORF)为 65 7bp ,编码 2 18个氨基酸 ,并对其基因序列及编码的蛋白质进行了分析。结论　成功地构建了日本血吸虫中国大陆株 2 6kuGST基因真核表达重组质粒 ,并对其核苷酸序列及推导的氨基酸序列蛋白激酶磷酸化位点进行分析     

日本血吸虫 Mr=26×103谷胱甘肽S-转移酶基因植物表达载体的构建

【目的】构建日本血吸虫Mr=26×103谷胱甘肽S-转移酶(GST)基因的植物表达载体,为研制血吸虫病口服疫苗做前期准备。【方法】采用PCR技术,扩增目的基因GST,与植物表达载体pBI121连结,构建重组表达载体pBI121-GST。【结果】通过PCR检测和双酶切鉴定以及重组质粒序列测定,结果表明,该目的基因片段已被整合到植物表达载体pBI121中,通过电激转化,将质粒转入农杆菌菌株LBA4404、EHA105中。【结论】本实验成功地构建了日本血吸虫Mr=26×103谷胱甘肽S-转移酶GST基因的植物表达载体。     

重组日本血吸虫26 ku谷胱甘肽-硫-转移酶的表达、纯化及其免疫特性分析用于急性血吸虫病免疫诊断

目的将日本血吸虫(中国大陆株)26 ku谷胱甘肽-硫-转移酶(26 ku SjGST)基因克隆入pET28a(+)并诱导表达26 ku rSjGST蛋白,纯化并用于急性血吸虫病免疫诊断.方法构建重组质粒pET28a-SjGST,转化到E.coli BL21,经IPTG诱导表达并进行SDS变性蛋白质电泳,以小鼠抗GST单克隆抗体为一抗,进行Western-blot分析.用His·BandPurification Kit亲和层析纯化重组蛋白,以此重组蛋白作为抗原,用ELISA法检测急性血吸虫患者血清和非流行区正常人血清. 结果成功地构建了重组质粒pET28a-SjGST,SDS变性蛋白质电泳显示可见一与预期分子量大小相符的特异蛋白条带的表达.Western blot分析表明,该重组蛋白能被小鼠抗GST单克隆抗体识别.ELISA结果表明,rSj GST用于急性血吸虫患者血清中抗体检测的阳性率为92.3%.结论 rSj GST得到表达和纯化,该重组蛋白用于急性血吸虫患者血清中抗体的检测具有良好的免疫反应性,为进一步探讨其在血吸虫病诊断中的应用奠定了基础.     

日本血吸虫成虫抗原基因的克隆和序列分析

本实验在用感染兔血清和单克隆抗体对日本血吸虫（大陆株）成虫ｃＤＮＡ表达文库进行筛选的基础上，对筛选出的阳性克隆插入片段ＤＮＡ进行了亚克隆和序列分析。     

日本血吸虫谷胱甘肽转移酶基因在真核表达载体中的亚克隆

目的 将日本血吸虫谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ）基因片段克隆到真核表达载体ＰＢＫＣＭＶＫ ,以便以进行酸疫苗的研究。方法 特定核苷酸引物的设计和合成,ＴＲＩＺＯＬ试剂以日本血吸虫成虫ＲＮＡ〈ＲＴ－ＰＣＲ法扩增ＧＳＴ基因编码序列,将扩增产物连接ＰＧＥＭ－Ｔ克降体,再亚克隆到真核表达载体ＰＢＫＣＭＶ中。结果 ＲＴ－ＰＣＲ法特异性扩增出ＳｊＧＳＴ编码基因片段。其大小约为６７０ｂｐ,经双酶切、ＰＣＲ鉴定表明所构     

日本血吸虫新基因的克隆及分析

目的：克隆并分析日本血吸虫（Schistosoma japonicum,Sj）新基因,提供有效的疫苗候选分子。方法：用Sj雄虫可溶性抗原免疫家兔血清为探针筛选Sj成虫cDNA文库,将所获阳性克隆的插入片断进行PCR扩增并测序,通过互联网NCBI GenBank和蛋白质分析软件进行分析。结果：共筛选得11个阳性克隆,经分析有2个新基因,分别是Sj-P8（GenBank注册号AF517843）和Sj肌球蛋白cDNA序列（GenBank注册号AY770506）,分别编码含75个氨基酸的跨膜蛋白和含212个氨基酸的蛋白片断。结论：Sj-P8和Sj肌球蛋白cDNA序列可能为日本血吸虫疫苗的研究提供有价值的材料。     

日本血吸虫成虫抗原基因的获取及生物信息学分析

目的 筛选新的日本血吸虫（Schistosoma japonicum,sj）候选抗原基因.方法 以Sj雄虫成虫DNA为模板,设计引物扩增并纯化特异性片段,构建pBS-T克隆载体,将其克隆入大肠杆菌DH5α菌株,筛选阳性克隆,初步进行菌落PCR鉴定后测序,与EBI数据库中的已知序列比对分析,并用蛋白质分析软件预测其结构与功能.结果 利用日本血吸虫cDNA序列设计并合成引物,以Sj雄虫DNA为模板,成功地扩增和克隆出一个目的基因.通过菌落PCR检验和测序,BLAST比对分析显示其与日本血吸虫22.6 kDa抗原分子具有很高同源性,氨基酸预测分析其具有潜在螺旋跨膜和酪氨酸激酶磷酸化位点.结论 成功克隆一个目的基因,通过氨基酸预测和功能分析,预测其在血吸虫病免疫防治领域具有一定的意义.     

日本血吸虫中国大陆株32ku抗原cDNA的克隆及其核苷酸序列分析

目的　研究日本血吸虫重组疫苗，表达和制备血吸32ku抗原重组疫苗。方法　根据Merekelbach等报道的日本血吸虫中成虫32ku抗原完整编码序列设计引物，以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板，采用逆转录—聚合酶链反应技术，扩增其32ku抗原完整编码区cDNA。将cDNA重组于pGEM-T easy载体上，转化大肠杆菌。结果　重组质粒经测序进行鉴定，结果与Merckelbach等报道的32ku抗原编码区cDNA进行比较，二序列一致。结论　32ku抗原在不同的地区异株间的32ku蛋白进化上存在高度保守性，因此32ku抗原可以作为重组疫苗的候选抗原。     

日本血吸虫32ku抗原基因的克隆及在耻垢分枝杆菌中的表达

日本血吸虫３２ ｋｕ抗原（简称ｓｊ３２ｋｕ）是血吸虫的一种保护性抗原,为研究其重组疫苗的保护作用,将该抗原基因的全编码序列按正确的阅读框顺序插入到穿梭质粒 ｐＢＣＧ２１００,受控于人结核杆菌热休克蛋白 ７０（Ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏ－ｔｅｉｎ ７０,简称ｈｓｐ７０）启动子,构建成重组表达质粒 ｐＢＣＧ－ｓｊ３２,在大肠杆菌－分枝杆菌两个系统中能稳定复制。重组分枝杆菌于 ４２℃诱导 ２ ｈ或 ４５℃诱导 ３０ ｍｉｎ,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,在 ３２ ｋｕ的位置能见到明显的蛋白条带,表明 ３２ ｋｕ抗原能在分枝杆菌中高效表达。     

日本血吸虫p50亲免素基因的扩增及其免疫学特性

目的扩增日本血吸虫(Sj)p50亲免素(IP)基因全长cDNA和DNA序列,进行原核克隆和研究其免疫学特性。方法从Sj成虫RNA中RT-PCR扩增Sjp50亲免素基因完整的编码阅读框,从Sj成虫基因组中扩增其DNA序列,对其cDNA序列和DNA序列进行比较分析,寻找内含子。将其cDNA序列克隆入pET30a( )体中,原核表达并纯化表达产物,Western-blot比较重组蛋白与Sj体内相应天然蛋白的免疫原性和免疫反应性,间接免疫荧光法对p50亲免素进行组织定位。结果Sjp50IP基因DNA序列与cDNA相比,有6个内含子;重组p50IP与Sj体内的天然蛋白具有相同的免疫学特性,该蛋白位于Sj成虫的被膜上。结论成功扩增得到了Sjp50IP基因的全长编码区的cDNA序列和DNA序列,其DNA序列中有6个内含子;重组Sjp50IP的免疫学特性支持将该基因作为疫苗进行进一步的研究。     

细粒棘球蚴中国大陆株谷胱苷肽S-转移酶基因的克隆和序列分析

目的 对细粒棘球蚴谷胱苷肽S-转移酶基因进行克隆和序列分析。方法 从包虫病患者体内获取细粒棘球蚴原头蚴提取总RNA，根据国外细粒棘球蚴谷胱苷肽S-转移酶基因的已知序列设计一对引物，采用RT-PCR技术扩增，将PCR产物纯化后，将其克隆到pGEM-T载体后进行序列测定以及生物信息学分析。结果 用RT-PCR成功扩增出细粒棘球蚴中国大陆株谷胱苷肽S-转移酶基因，测序表明该基因开放阅读框为660bp，与已发表基因核苷酸序列相比，同源性为99％。结论 成功克隆了细粒棘球蚴中国大陆株谷胱苷肽S-转移酶基因序列，为其进一步的研究奠定基础。     

Bioinformatics Analysis of Glutathione S-transferase Gene of Taenia saginata

目的:分析牛带绦虫成虫谷胱甘肽S-转移酶(GST)基因结构并预测其编码蛋白的结构和功能.方法:利用生物信息学网站如NCBI和ExPASY系统中的生物信息学分析工具,并结合其它分析软件,分析该基因的结构并预测其编码蛋白质的结构和功能.结果:该基因全长908bp,编码区为135～771bp,编码212个氨基酸,无各种亚细胞定位序列;与猪带绦虫GST的一致性为93％,相似性为96％;预测3个主要的抗原表位33～53aa,62～68aa,179～184aa位于空间结构上相距较远的分子表面.结论:从牛带绦虫成虫Cdna文库中筛选出GST基因,预测为胞浆型蛋白,可能具有较好的免疫学诊断抗原应用前景.     

牛带绦虫成虫谷胱甘肽S-转移酶基因的生物信息学分析

目的:分析牛带绦虫成虫谷胱甘肽S-转移酶(GST)基因结构并预测其编码蛋白的结构和功能。方法:利用生物信息学网站如NCBI和ExPASY系统中的生物信息学分析工具,并结合其它分析软件,分析该基因的结构并预测其编码蛋白质的结构和功能。结果:该基因全长908 bp,编码区为135～771 bp,编码212个氨基酸,无各种亚细胞定位序列;与猪带绦虫GST的一致性为93%,相似性为96%;预测3个主要的抗原表位33～53 aa,62～68 aa,179～184 aa位于空间结构上相距较远的分子表面。结论:从牛带绦虫成虫cDNA文库中筛选出GST基因,预测为胞浆型蛋白,可能具有较好的免疫学诊断抗原应用前景。     

日本血吸虫(大陆株)Sj26基因的克隆与序列分析

目的 构建日本血吸虫(大陆株)26kDa谷胱甘肽-S-转移酶(Sj26)基因的真核表达载体，并测定基因序列和进行序列分析。方法 用PCR的方法特异性地扩增Sj26基因，并将此基因克隆于真核表达载体pcDN3，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，阳性克隆的重组质粒DNA经酶切、PCR扩增鉴定，用双脱氧链末端终止法进行序列测定，应用BIAST方法分析Si26基因序列并进行同源性比较。结果 PCR扩增得到特异的Sj26基因，双酶切及PCR鉴定表明获得正确的pcDNA3-Sj26重组质粒，测序结果获得的基因片段大小为651bp，编码217个氨基酸残基。基因序列同源性为99％。结论 成功构建真核表达重组质粒pcDNA3-Sj26。