脂质体介导Endostatin IL-12基因联合治疗移植型鼠肝癌的实验研究

目的:探讨脂质体介导Endostatin及IL-12基因联合治疗肝癌的可行性.方法:将已构建的Endostatin和IL-12真核表达载体给荷瘤BALB/c鼠瘤内注射,每周两次测量瘤体积.ELISA法检测肿瘤局部IL-12、IL-2、Endostatin含量,MTT法检测NK细胞杀伤活性,流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡情况.结果:联合治疗组肿瘤体积明显小于其它各组(P＜0.05);肿瘤局部IL-12、IL-2、Endostatin的表达明显高于pVAX1空载体和生理盐水对照组(P＜0.05);NK细胞杀伤率和肿瘤细胞凋亡率分别为52.0%和48.2%.结论:联合应用Endostatin和IL-12基因可有效抑制鼠肝癌的生长.     

IL-2经皮局部注射治疗肝癌的临床观察

目的试用白细胞介素2(IL-2)局部注射治疗肝癌并观察临床疗效.方法对50例原发性肝癌患者分别用IL-2、IL-2加无水酒精及单纯无水酒精局部注射治疗,对比观察治疗前后肿块大小,生活质量、肝区痛及肝、肾功能、TNF、sIL-2R、淋巴细胞亚群等免疫指标.结果发现IL-2局部注射治疗肝癌有效.IL-2及IL-2加无水酒精治疗组患者的生活质量提高、肝区痛缓解优于酒精治疗组;IL-2组TNF、NK细胞活性、sIL-2R等均明显优于单纯用无水酒精治疗组.副作用明显少于单纯无水酒精治疗组.结论IL-2局部注射治疗肝癌可能为一些不适于手术、栓塞或酒精治疗患者提供一种治疗方法,或作为辅助性治疗的一种手段.     

As2O3对小鼠膀胱癌作用的实验研究

 目的　探讨瘤体局部注射As₂O₃ 治疗膀胱源性实体肿瘤的可行性并探讨可能的作用机制。方法　通过在小鼠局部接种肿瘤细胞建立小鼠异位移植膀胱癌 ,在瘤体局部注射As2 O3 1mmol/L 0 .2ml,连续 7d后取瘤体及肝、肾行病理检查。采用原位末端转移酶标记技术检测瘤体内肿瘤细胞的凋亡情况。结果　不同时间开始的砷剂治疗均可以使肿瘤体积缩小 ,重量减轻与对照组比较有显著差异 (P <0 .0 5 )。与对照组相比治疗组瘤体内的肿瘤细胞发生明显凋亡。结论　瘤体局部注射As2 O3 可以有效地抑制膀胱源性实体癌瘤的生长 ,其机制可能于促使肿瘤细胞凋亡有关。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型tk基因的克隆及其真核表达载体的构建

目的:为观察携带小鼠白细胞介素12(mIL-12)逆转录病毒包装细胞株在肝癌局部注射后,对体内肝癌治疗效果.方法:构建携带mIL-12的逆转录病毒载体,将该载体转染包装细胞系PA317,应用该包装细胞对实验性原位肝癌大鼠分别在不同时间进行治疗,观察其抗肿瘤作用,免疫功能变化,病理及毒性反应.结果:携带mIL-12逆转录病毒包装细胞(PA317-mIL-12)在原位肝癌局部注射后能明显抑制肝癌细胞生长,其早期治疗可使大鼠长期生存,中晚期治疗,大鼠虽然不能长期生存,但较空白对照组及携带空载体对照组的生存期明显延长,(P<0.01).其治疗组NK细胞及T细胞明显增加,其早期治疗效果优于中期治疗,另外,本研究对肝癌局部进行IL-12基因转染,可使另一叶肝癌消退,这表明IL-12可通过激活机体免疫细胞,杀灭未转染的肿瘤细胞,这对于临床应用IL-12基因治疗非常重要.同时,生存期超过2个月大鼠,再次接种相当数量的肝癌细胞,该大鼠不能再次形成肝癌.结论:肝癌局部注射IL-12基因能激发机体抗肿瘤免疫反应.     

脂质体介导的体内外细胞因子基因转移效果的初步研究

本研究用反相蒸发技术制备出包裹IL-2 DNA或IL-6 DNA的脂质体，将其与体外培养的靶细胞共育，或将其直接注射至小鼠腹腔内及荷瘤小鼠的瘤体内．研究其介导体内外基因转移的效果，结果表明我们研制的脂质体不但能将目的基因转移至体外培养的靶细胞中，并可通过腹腔内注射及瘤体内注射后，在腹腔内及肿瘤原位直接将IL-2和IL-6基因转移至腹腔细胞及肿瘤细胞中，稳定表达IL-2和IL-6。     

恶性肿瘤的基因治疗

白细胞介素2(IL-2)在体内能激活多种抗肿瘤免疫细胞。但生理条件下体内IL-2浓度极低,大量输注外源性IL-2除了费用昂贵外,还会导致严重的毒副作用。为了探讨IL-2用量少而有效的抗瘤方法,本文对19例晚期肿瘤患者的原位瘤或转移瘤瘤体IL-2局部治疗进行了临床观察。同时以自体肿瘤细胞为靶细胞/自体肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)为效应细胞,测定了IL-2诱导前后的细胞毒活性,比较观察了外周血PBL与肿瘤局部TIL的抗肿瘤能力,以探讨肿瘤局部的免疫状况,为IL-2瘤体注射提供实验依据。     

A-LAK/IL-2局部应用抗肿瘤作用的研究

目的观察A-LAK和NA-LAK的体外生长与增殖,研究A-LAK/IL-2局部注射的体内抗肿瘤作用.方法绘制A-LAK和NA-LAK生长曲线.小鼠体内作A-LAK/IL-2抗肿瘤治疗实验.结果A-LAK在培养第10天时达到增殖高峰增加16.08倍,而NA-LAK增殖高峰在第7天仅增加3.36倍.体内实验表明,A-LAK/IL-2肿瘤旁局部注射与全身应用相比,能明显抑制肿瘤生长,延长动物存活期(P＜0.05).结论A-LAK具有增殖倍数高,抗瘤活性强的特点,局部注射是强于静脉给药的给药途径.     

重组腺病毒抗小鼠移植瘤生长

目的:研究携带细胞因子基因hIL-2、hTNF-a的重组腺病毒对小鼠移植瘤生长抑制作用。方法:将分别携带有hIL-2基因、hTNF-a基因的重组腺病毒感染人肺腺癌Anip973细胞系,应用ELISA试剂盒检测转染后的细胞IL-2、TNF-α的分泌量;通过肿瘤局部注射重组腺病毒的方法观察其在小鼠体内的抗肿瘤作用。结果:转基因的肿瘤细胞生长能力、克隆形成率等无明显变化。24h细胞培养上清IL-2的分泌量为50pg/2×105细胞,TNF-α的分泌量为20pg/2×105细胞。体内实验表明注射重组腺病毒后小鼠肿瘤生长缓慢,体积明显小于对照组(P<0.05),存活期显著延长。结论:瘤内注射重组腺病毒具有明显抗肿瘤作用。     

IL-2重组痘苗病毒修饰的肿瘤细胞破碎物局部应用后的抗肿瘤作用研究

细胞因子基因转染的瘤苗在体内具有明显的抗肿瘤作用,但逆转录病毒载体转染的肿瘤细胞作为瘤苗在制备及保存上仍然存在不足。本文采用编码人IL-2基因的重组痘苗病毒载体(rVV-IL-2)转染B16-F10小鼠黑色素瘤细胞,经超声破碎及高速离心,制成IL-2基因转染的肿瘤细胞破碎物(IL-2VBO),以此作为瘤苗,局部注射治疗荷瘤小鼠,结果明显抑制了小鼠肿瘤的生长,延长其存活期,外周血淋巴细胞对B16-F10细胞的杀伤活性明显增高,而对YAC-1细胞的杀伤活性则增加不明显,表明IL--2VBO诱导了机体对B16-F10特异性的免疫功能。由于IL-2VBO制备方便,易于保存,同时由于痘苗病毒本身可加强诱导出的免疫反应,因此可望作为一种新的瘤苗应用于肿瘤的主动性免疫治疗。     

用表达IL-2的重组腺病毒瘤体内注射诱导肿瘤消退及免疫反应

IL-2能通过增强CTL细胞的杀伤活性、诱导LAK细胞及激活TIL等具有抗肿瘤作用。而腺病毒以其扩增快、转染范围广,以及不整合入感染细胞的基因组等优点适于临床应用。本文作者将携带IL-2基因的重组腺病毒AdCA IL-2转入肿瘤细胞后种入小鼠体内或直接在肿瘤部位进行瘤体内注射,检测了IL-2的表达,并观察了对肿瘤生长的影响。     

A-NK/IL-2抗肿瘤作用的新研究

目的研究A-NK/IL-2在完全培养基(CM)和无血清培养基(AIMV)中体外扩增及杀伤肿瘤细胞作用.同时探讨IL-12对于A-NK/IL-2治疗的辅助作用.方法用MIT法比较不同培养条件下的A-NK细胞体外增殖能力,并测定细胞体外杀伤肿瘤细胞的活性.通过做扫描和透射电镜,对A-NK细胞杀伤的肿瘤细胞进行形态学观察.结果不同培养条件下的A-NK细胞均可在短期内大量扩增(P＞0.05),且均有很强的杀伤肿瘤的活性(P＞0.05).被A-NK细胞杀伤的肿瘤细胞的死亡形式是溶解坏死(necrosis)和凋零坏死(apoptosis).结论 AIMV可替代CM用于A-NK细胞的培养.联合应用IL-12激活A-NK细胞可降低IL-2的使用剂量,从而避免IL-2带来的副作用.本研究为A-NK细胞的进一步研究和临床应用推广奠定了理论基础.     

IL-8在循环肿瘤细胞自我种植促进人骨肉瘤进展中的作用机制

目的:探讨IL-8在循环肿瘤细胞自我种植促进人骨肉瘤进展中的作用。方法:免疫组织化学SP法检测30例临床骨肉瘤及10例骨软骨瘤病例肿瘤组织中IL-8表达;建立骨肉瘤原位荷瘤裸鼠模型后,实验组尾静脉注射红色荧光蛋白标记的肿瘤细胞(RFP-F5M2),对照组注射PBS,分别于第2、4、8周后将处理组原位瘤体冰冻切片置于荧光显微镜下观察自我种植细胞荧光强度;对原位肿瘤进行组织块法原代培养,细胞免疫荧光半定量检测IL-8表达水平。结果:93.3%骨肉瘤组织中IL-8表达阳性,骨软骨瘤中IL-8表达均为阴性。冰冻切片显示,随着时间增加,循环肿瘤细胞自我种植现象明显增加,实验组中第2、4、8周原位灶原代培养细胞免疫荧光显示IL-8表达量逐渐增加,并较对照组具有统计学意义(P＜0.05)。结论:IL-8在循环肿瘤细胞自我种植促进人骨肉瘤细胞增殖及转移中发挥着重要作用,可为骨肉瘤患者早期诊断和治疗提供一个新的策略。     

肿瘤靶向基因治疗中基因转移系统的研究

采用同种异体 LAK(Allogeneic-LAK,Allo-LAK)细胞代替患者自身LAK细胞,较好地解决了LAK细胞前体来源问题.通过超声雾化吸入及胸腔内注射Allo-LAK/IL-2治疗肺癌能改善肿瘤微环境,激活肿瘤局部免疫细胞抑制肿瘤细胞,并且较好地解决了Allo-LAK的安全性,避免了大剂量应用IL-2所致的毒副作用.1 材料与方法1.1 病例选择临床确诊为晚期肺癌不能手术切除的14例病人,其中男10例,女4例,年龄39～68岁,平均57.64岁.均经病理或组织细胞学检查确诊为鳞癌7例,腺癌5例,小细胞未分化癌(SCLC)2例,8例并发胸腔积液,4例并发对侧肺转移,3例并发纵隔及锁骨上淋巴结转移,另有2例及1例分别并发骨及肝转移.     

IL-2和IL-12基因联合治疗小鼠头颈鳞癌的实验研究

目的观察白细胞介素-2(IL-2)基因与白细胞介素-12(IL-12)基因联合治疗小鼠头颈鳞癌的疗效. 方法建立小鼠头颈鳞癌动物模型,在荷瘤部位将脂质体包裹的IL-2基因和IL-12基因直接注入肿瘤中,观察肿瘤大小变化,并检测此两种基因在肿瘤细胞中的蛋白表达情况、小鼠脾脏自然杀伤细胞(NK)和细胞毒T淋巴细胞(CTL)活性. 结果 IL-2基因和IL-12基因联合治疗组,肿瘤生长明显受抑制,疗效显著优于单独治疗组和对照组(P<0.01).在注射有IL-2、IL-12基因的肿瘤组织中,其相对应的IL-2、IL- 12蛋白水平明显升高,小鼠脾细胞NK活性和CTL杀伤活性增强. 结论 IL-2、IL-12基因治疗可抑制小鼠头颈鳞癌生长,提高机体的抗肿瘤免疫应答.二者联合应用,可产生协同效应并加强其抗肿瘤效果.     

IFN-γ基因转导A549细胞对异种小鼠S180抑瘤作用

[目的]探讨γ-干扰素(IFN-γ)转基因疫苗对异种小鼠S180肿瘤的抑瘤作用及其影响因素.[方法]将IFN-γ基因修饰的转化细胞株,经γ-60Co照射后制成转基因疫苗,测定其MHC-Ⅰ、Ⅱ分子的表达,以及60Co照射与冻融等因素对其影响.在添加肿瘤细胞裂解物和GM-CSF、IL-2及变换注射部位等,观察对异种荷瘤S180小鼠的抑瘤作用.[结果]经IFN-γ基因修饰后,其细胞表达MHC-Ⅰ、Ⅱ分子明显提高,该两分子的上调并不受照射及冻融等因素的影响.变换注射部位及用IL-2取代转基因疫苗作预防性注射后依然有抑瘤作用.[结论]经IFN-γ基因修饰的A549细胞疫苗其MHC-Ⅰ、Ⅱ分子的上调并不受照射、冻融等因素及变换注射部位的影响,仍可对异种动物肿瘤产生较强的免疫抑瘤作用.     

甲型流感病毒治疗小鼠S180腹水瘤的研究

目的:从机体的免疫应答来探讨甲型流感病毒对小鼠S180腹水瘤的作用机制.方法:小鼠S180腹水瘤模型建立后,分别腹腔注射生理盐水或甲型流感病毒治疗15 d.观察实验小鼠的生存时间;用ELISA法检测小鼠血清IL-2,IL-6和TNF-α的含量;DNAladder法、流式细胞仪(FCM)、荧光显微镜检查和电镜(EM)用以检测腹水瘤细胞凋亡.结果:用甲型流感病毒治疗的实验组荷瘤小鼠的平均存活时间、生存率均显著高于生理盐水对照组.实验组小鼠血清中IL-2,IL-6,TNF-α的含量亦显著高于对照组.实验组小鼠腹水瘤细胞DNA发生了特异性降解,出现典型的DNA梯形条带.结论:甲型流感病毒对于小鼠S180腹水瘤具有治疗作用,在此过程中,有机体免疫系统的参与和肿瘤细胞凋亡的产生,而病毒本身通过腹腔注射并不引起小鼠的死亡.     

白细胞介素—2使用方法与临床效果分析

根据IL-2激活LAK细胞免疫活性变化规律的研究与IL-2治疗晚期肿瘤转移及治疗HBV阳性患者的临床疗效分析,探讨了IL-2使用方法与临床效果的关系.不管采用何种治疗方法要取得治疗效果,IL-2剂量均需达到有效阈值以上.有效阈值是在一定细胞密度条件的有效IL-2剂量,即有效IL-2剂量与细胞密度比,我们的实验值为4单位IL-2/1万细胞/ml.体内体外条件不同,IL-2有效剂量也不一样.正常情况下静脉输注IL-2,有效血浓度为1000IU/ml左右,局部肿瘤、胸腔、腹腔及淋巴结周围注射低剂量IL-2(10~4～10~5IU)也可以达到有效剂量,既可获得明显的治疗效果,又方便安全.     

肿瘤相关巨噬细胞与肿瘤细胞上皮间质转化关系的研究进展

上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮细胞在形态学上发生向间质细胞表型的转变,在肿瘤的侵袭和转移过程中发挥重要作用,肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associatedmacrophage,TAM)是肿瘤的基本成分之一,通过分泌TNF-α、IL-6、EGF、VEGF、MMP-9、uPA等因子诱导肿瘤细胞发生EMT,协同其刺激新生血管形成、降解基质、促进肿瘤细胞发生局部侵袭及远处转移.     

生物疗法在荷瘤裸鼠体内的抗瘤效应

目前,对LAK细胞临床治疗效果评价不一,为进一步研究其抗瘤效亡,本文做了如下探讨.以自建荷胃癌裸鼠为动物模型进行抗瘤试验:对照组用生理盐水,实验组每只鼠每次分别用IL-2、脾细胞IL-2/LAK和CD3-IL-2/LAKI细胞肿瘤局部注射、隔日一次,每次注射前计最大小,注射后定时观察动物生活情况     

IL-2基因转导自身肿瘤特异性细胞毒T细胞对小鼠实体瘤作用的实验研究

许多研究发现自身肿瘤特异性细胞毒T细胞(CTL)能定位于体内肿瘤所在部位．其杀瘤细胞活性及特异性远在LAK细胞之上，来源和增殖性方面较TIL为优，因此可作为较为理想的载体细胞导入各种治疗基因。将IL-2基因导入CTL中表达并回输．通过其聚集在肿瘤发生局部持续分泌一定量的IL-2，激活机体肿瘤免疫反应或直接杀伤肿瘤细胞，