AccQ－Tag法测定复方氨基酸注射液中氨基酸的含量

采用６－氨基喹啉－Ｎ－羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯（ＡＱＣ）为衍生剂，与各种氨基酸柱前定量衍生后，用ＷａｔｅｒｓＨＰＬＣ仪，ＡＱＣ－Ｔａｇ￣ＴＭＣ＿１８柱，以１４０ｍｍｏｌ／Ｌ从醋酸钠溶液（ｐＨ＝４．９５）为溶剂Ａ，乙腈－水（３：２）为溶剂Ｂ进行梯度洗脱，检测波长为２４８ｎｍ，以α－氨基丁酸为内标。所有１８种氨基酸在３７ｍｉｎ内测定完毕，各种氨基酸测定的重现性ＲＳＤ％均小于２．０％（ｎ＝５），平均回收率为９７．０％６～１０５．０％（ｎ＝５）。     

马桑内酯对脑γ－氨基丁酸分泌和谷氨酸脱羧酶及其受体结合力的影响

为探讨癫痫发病的生物化学机制，用培养的大鼠大脑皮层神经元和大脑皮层匀浆及突触膜为模型，采用酶联免疫法，放射分析法观察马桑内酯（ＣＬ）对大鼠脑内γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）分泌，谷氨酸脱梭酶（ＧＡＤ）活性和谷氨酸（Ｇｌｕ）受体结合力的影响。结果表明，５０μｍｏｌ／ＬＣＬ可抑制ＧＡＢＡ分泌，１２、２４、４８小时抑制率为８．３％～１４。５％；在０．１５～１５０μｍｏｌ／Ｌ范围，ＣＬ可抑制ＧＡＤ活性，抑制率为１．３２％～１８．７６％；ＣＬ在２．８～３５０μｍｏｌ／Ｌ范围内可降低Ｇｌｕ受体结合力，降低程度为１８．８％～３１．６％，且各剂量组与对照组差异均有极显著意义（Ｐ＜０．０１）。证实ＣＬ可抑制培养神经元ＧＡＢＡ分泌，并呈时间依赖和剂量依赖关系。     

AccQ—Tag法测定复方氨基酸注射液中氨基酸的含量

采用６－氨基喹啉－Ｎ－羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯（ＡＱＣ）为衍生剂，与各种氨基酸柱前定量衍生后，用ＷａｔｅｒｓＨＰＬＣ仪，ＡＱＣ－Ｔａｇ＾ＴＭＣ１８柱，以１４０ｍｍｏｌ／Ｌ醋酸钠溶液（ｐＨ＝４．９５）为溶剂Ａ，乙腈－水（３：２）为溶剂Ｂ进行梯度洗脱，检测波长为２４８ｎｍ，以α－氨基丁酸为内标。所有１８种氨基酸在３７ｍｉｎ内测定完毕，各种氨基酸测定的重现性ＲＳＤ＾均小于２．０％，平均回收率为９７．０     

应用反相高效液相色谱法测定大鼠血浆,晶体和房？…

采用柱前衍生ＲＰ－ＩＩＰＬＣ法测定大鼠血浆、晶体及房水中的牛磺酸及氨基酸含量的方法。采用美国Ｗａｔｅｒｓ公司ＮＯＶＡ－ｐａｋＣ１８色谱柱，梯度洗脱，荧光检测，激发波长Ｅｘ３３８ｎｍ，发射波长Ｅｍ４２５ｎｍ，牛磺酸及氨基酸的线性范围２μｍｏｌ／Ｌ￣２４μｍｏｌ／Ｌ，相关系数ｒ＝０．９９５６￣０．９９９７，回收率为９２．４１％￣９５．８９％。     

高效液相色谱柱前衍生法测定牛磺酸含量

目的探讨高效液相色谱柱前衍生法测定血、房水、晶状体中牛磺酸含量的价值。方法采用２种流动相,流动相Ａ为０．０５ｍｏｌ／Ｌ醋酸钠缓冲液（ｐＨ＝６．５）甲醇四氢呋喃（８０∶２０∶０．８）,流动相Ｂ为０．０５ｍｏｌ／Ｌ柠檬酸缓冲液（ｐＨ＝６．５）甲醇（２０∶８０）;色谱柱为ｎｅｃｌｅｏｓＯＤＳΦ４．６ｎｍ×１５０ｎｍ。Ｗｉｓｔａｒ大鼠的血浆、房水、晶状体经处理和衍生后进样分析。结果该方法最低检出限为１０μｇ／ｍｌ,氨基酸浓度与相对响应值之间平均相关系数为０．９９８±０．００２,回收率为９１．０７％～９６．７９％,牛磺酸峰面积变异系数在进样量３μｌ时为１０．７５％,进样量５μｌ时为３．１２％。结论高效液相色谱柱前衍生法可使血、房水、晶状体中的牛磺酸与其它氨基酸很好地分离,是测定牛磺酸含量的好方法。     

新西兰兔血脂值测定

利用全自动生化分析仪检测８０只新西兰兔的血脂值，包括甘油三脂（ＴＧ）、总胆固醇（ＣＨＯ）、高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬＣ）、低密度脂蛋白胆固醇（ＬＤＬＣ）、载脂蛋白Ａ（ＡｐｏＡＩ）、载脂蛋白Ｂ（ＡｐｏＢ）、脂蛋白（Ｌｐ［ａ］）等７项指标，其数值分别为１．００±０．７３、１．７５±０．９１、０．４７±０．１７、０．８１±０．７１ｍｍｏｌ／Ｌ、０．１９±０．０４、０．０４±０．０１ｇ／Ｌ和１９．８±３０．７ｍｇ／Ｌ，并推算ＨＤＬＣ／ＣＨＯ、ＡｐｏＡ／ＡｐｏＢ为０．３４±０．１５、５．８５±３．６７。     

早孕蜕膜中淋巴细胞抗原的表达及IFN－γ测定

本文以几种抗淋巴细胞表面标志的单克隆抗体，采用花环标记、碱－磷酶抗碱－磷酶（ＡＰＡＡＰ）法、酶联免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）法，对２３例早孕蜕膜组织中的淋巴细胞及γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）进行了测定。结果发现，早孕蜕膜淋巴细胞中ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ１６＋及Ｂ细胞百分率（ｘ±ｓ）分别为２９．５２±６．８０％、２３．６０±４．８６％、２０．９１±４．０６％、１．０７±１．００％、７．８１±２．５６％，ＣＤ４／ＣＤ８为１．２０±０．２０。ＣＤ３－淋巴细胞呈大颗粒淋巴细胞（ＬＧＬ）形态，蜕膜组织浸液中ＩＦＮ－γ含量＜０．６μｇ／Ｌ。提示，早孕蜕膜中存在较多ＣＤ３－、ＣＤ１６－的形态呈ＬＧＬ的ＮＫ细胞，ＣＤ４＋细胞与ＣＤ８＋细胞的比值较正常外周血明显降低     

AccQ-Tag法测定田参氨基酸胶囊中的氨基酸含量

以６－氨基喹啉－Ｎ－羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯（ＡＱＣ）为衍生剂，与田参氨基酸胶囊中的氨基酸柱前定量衍生，用ＷａｔｅｒｓＨＰＬＣ仪，Ｐｉｃｏ．Ｔａｇ柱，以１４０ｍｍｏｌ／Ｌ的醋酸钠溶液（ｐＨ４．９５）为溶剂Ａ，乙腈－水（３∶２）为溶剂Ｂ，进行梯度洗脱，于２４８ｎｍ测定十种氨基酸，方法简便，结果满意。     

人源性抗EB病毒IgG/VCA抗体在SCID小鼠中的诱导

将人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）和腹腔淋巴结淋巴细胞（ＰＬＮＬ）移植入严重联合免疫缺陷疾病（ＳＣＩＤ）小鼠腹腔，２个月后，小鼠血清内产生人源性ＩｇＧ和抗ＥＢ病毒壳抗原ＩｇＧ抗体（ＩｇＧ／ＶＣＡ）。比较结果显示，用Ｂ９５－８细胞作为ＶＣＡ来源所诱导的实验组１０只小鼠，ＩｇＧ／ＶＣＡ阳性率为７０％（７／１０），对照组为１７％（２／１２）。ＩｇＧ／ＶＣＡ的几何平均滴度（ＧＭＴ）和血清ＩｇＧ浓度，在１４只ＳＣＩＤ－ＰＬＮＬ小鼠中为１∶１０８和（９６．２±５６．４）μｇ／Ｌ；在８只ＳＣＩＤ－ＰＢＬ小鼠为１∶７．８和（１３．８４±６．０）μｇ／Ｌ。该结果提示，ＳＣＩＤ－ＰＬＮＬ小鼠较ＳＣＩＤ－ＰＢＬ小鼠更适合用于人源性特异ＩｇＧ的诱导。     

大鼠脑突触体的制备及形态和活性研究

用低浓度（０．３及０．８ｍｏｌ／Ｌ）蔗糖熔液为分离介质，在低离心力下制备各大鼠脑突触体。以电镜观察和测定乳酸脱氢酶活性检测其结构的完整性，以高钾刺激下突触体内游离Ｃａ＋浓度和氨基酸《Ａｓｐ，Ｇｌｕ，Ｇｌｙ，Ｔａｌｌ和ＧＡＢＡ）释放量的变化判断其生物活性。结果表明，本方法制备的突触体具有结构完整性和较强的生物活性。本实验建立了一个快速制备突触体的方法。     

上尿路结石的氨基酸分析

本文对34例肾、输尿管结石(草酸钙结石20例,磷酸盐结石8例,尿酸盐结石5例,碳酸钙结石1例)中蛋白质的主要氨基酸含量进行了测定,其结果是:尿酸盐结石氨基酸含量明显高于草酸钙结石(P<0.002)和磷酸盐结石(P<0.05),草酸钙结石的氨基酸含量与磷酸盐结石比较无显著差异(P>0.5)。各类氨基酸含量以脂肪族最多,占58.65％,其中直(?)氨基酸占62.88％,含硫氨基酸最少;酸性氨基酸含量高于碱性氨基酸。尿酸盐结石中以甘氨酸含量最高,占65％,而组氨酸缺乏。蛋白质代谢与氨基酸构成密切相关,根据尿石中氨基酸含量的分析,可能为进一步研究结石的成因和预防措施,提供依据。     

人乙型肝炎病毒包膜蛋白多态性的生物信息学分析及其意义

目的 构建乙肝病毒生物数据库（Bio-HBV Database），针对HBV包膜蛋白序列进行多态性分析。方法 构建Bio-HBV生物数据库获得国际基因序列库中所有完整的包膜蛋白并进行比对，采用信息熵评价序列位点的保守性，结合BLOSUM90评分系统和PAML（phylogenetic analyses by maximum likelihood）软件包寻找选择压力下的异常氨基酸替换模式。结果包膜蛋白中ps35，ps132，s49和s127等氨基酸替换具有高度的统计学意义。此外包膜蛋白内有多个重要区段，直接影响HBV生物学功能。我们对这些区段逐一分析了功能与结构的关系。结论 通过Bio-HBV生物数据库，用生物信息学方法不仅验证了已知生物学特性的功能域的保守性，更提出了潜在的可以作为研究切入点的新功能域。     

柱前衍生化HPLC测定中药材氨基酸的含量

目的:建立中药材有效成份氨基酸柱前衍生HPLC分析测定方法。方法:从常见中药材党参和山楂中提取氨基酸,邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生,反相高效液相色谱分离测定,以保留时间定性,面积外标法定量。结果:水解温度108℃,提取24 h,可有效提取药材中的氨基酸;梯度洗脱程序为(t,C%):(t:保留时间C:甲醇):(0,0);(9,30);(16,45);(25,60);(28,65);(32,80),二种药材中的十六种氨基酸得到较好分离和定性定量结果,其中天冬氨酸和胱氨酸的平均加样回收率分别为101.0%和94.4%。结论:采用HPLC柱前衍生分离分析党参和山楂中十六种氨基酸的方法灵敏、简便、快捷、高效,适于推广应用,可为解决中药材氨基酸分离测定难题提供参考。     

SELECTION AND ANALYSIS OF AMINO ACID SEQUENCE OF AN ANTIGENIC DOMAIN OF THE RABIES VIRUS GLYCOPROTEIN

A new procedure for the selection of antigenic determinant of rabies virus glycoprotein is described. The glycoprotein was purified by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). The glycoprotein fragments digested with protease V8 were separated by 25% PAGE, transferred onto nitrocellulose membrane, immunostained with monoclonal antibodies (McAb) against glycoprotein. One McAb-positive fragment (G-V-6) was obtained by using the Western blot analysis. The amino acid sequence of the fragment was analysed. The data indicated that the antigenic determinant of glycoprotein was located in a region between residues 130-141. These suggest that the Western blot analysis will be a useful tool for the development of synthetic vaccines.     

我国人类免疫缺陷病毒-1主要流行株外膜蛋白基因V3-V4区及其临近区域的特征性氨基酸分析

目的鉴定我国HIV-1主要流行毒株亚型的env,V3-V4区及其临近区域的特征性氨基酸,并阐明其在追踪传染源和研究疫苗中的作用。方法应用nested—PCR对157份来自我国12个省份的HIV-1毒株env区序列进行扩增,并使用ABI377型测序仪测序,然后应用BLAST、GCG、MEGA和VESPA等生物学软件或程序对env基因V3-V4区及其临近区域序列进行基因型鉴定、系统树分析及特征性氨基酸鉴定。结果157份样本包括54份B′(34．40％)、61份B′／C(38．85％)和42份CRF01-AE(26．75％)毒株。系统树分析结果显示,B′亚型毒株序列均与B．CN．RL42十分接近,B′／C毒株主要与97CN54A和97CNGX6F聚成一簇。而CRF01—AE序列与THCM240和97CNGX2F聚在一起．而且分别聚成明显不同的两个亚组。特征性氨基酸分析发现,我国B′和B′／C毒株分别具有8个保守的特征性氨基酸,而且与代表株的相同位点氨基酸基本一致。而CRF01-AE重组毒株具有11个保守的特征性氨基酸,其中有9个位点与97CNGX2F和TH.CM240不一致。包括这9个特征性氨基酸的样本主要来自除云南省以外的其他省份。结论目前流行于我国的B′和B′／C毒株具有单一的共同传染源,而CRF01-AE毒株可能是通过不同输入源或不同传播途径先后从泰国传入我国的。这将对我国艾滋病防治策略的制定和正在进行的疫苗研究具有重要的指导意义。     

与脑梗死关联的氨基酸代谢通路研究进展与发现

本文通过检索文献,分析近年来应用代谢组学手段检测到的与脑梗死相关氨基酸以及代谢通路的文章,讲述了氨基酸的代谢变化与脑梗死的相关性,发现在脑梗死产生、演变过程中产生作用或者发生异常的有7种氨基酸以及多条代谢通路,并且从分子微观层面上描述了脑梗死的发生机制,发现脑梗死机制多集中于三羧酸循环能量代谢失衡、缺血缺氧以及兴奋毒性作用.     

RT一PCR法制备NGFcDNA

本研究直接以新生１８～２１天龄的小鼠脑的全ＲＮＡ（含ＮＧＦｍＲＮＡ）为底物，进行逆转录一聚合酶链反应（ＲＴ一ＰＣＲ），制备出了神经生长因子（ＮＧＦ）的ｃＤＮＡ片段。用ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测序分析表明，所制备的ＮＧＦｃＤＮＡ片断为３６３ｂｐ，与编码成熟ＮＧＦ的ｍＲＮＡ碱基顺序相对应。直接利用全ＲＮＡ进行ＲＴ与ＰＣＲ一步联合反应，不仅简化了实验步骤，而且最大程度地减少了样品的需要量，减小了样品可能损失或破坏的机率，提高了反应效率。