体外沉默异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶对人舌鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 通过小干扰RNA(siRNA)干扰技术体外沉默异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(Icmt)基因,探讨体外沉默Icmt对舌鳞状细胞癌(TSCC)细胞增殖和凋亡能力的影响.方法 针对人Icmt基因序列设计并构建3条siRNA,经脂质体瞬时转染技术转染抑制TSCC细胞系CAL-27和SCC-4细胞Icmt表达,同时设置...     

周期性张应力对人牙周膜细胞Periostin表达的影响

目的:研究在机械力作用下人牙周膜细胞(h PDLCs)内Periositn(PN)m RNA和蛋白的表达变化。方法:采用组织块酶消化法培养h PDLCs,经鉴定后将第4代细胞随机分为4个实验组和1个对照组(非加力组),4个实验组分别采用Flexcell-5000 Tension System应力加载系统对h PDLCs加载6、12、24、48 h的周期性张应力;然后采用q RT-PCR、Western blot分别检测各组h PDLCs中PN m RNA和蛋白的表达变化。结果:在正常h PDLCs中表达PN m RNA和蛋白;与对照组相比,加力6 h后,PN m RNA和蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05);加力12 h后,PN m RNA和蛋白的表达均逐渐升高,并持续至24 h达最高水平(P<0.05);而在加力48 h时,PN m RNA和蛋白表达均明显下降,并恢复至对照组的表达水平(P>0.05)。结论:机械力可诱导h PDLCs中PN的表达增强及活化,且具有时间依赖性;提示PN可能参与了细胞内生物力学信号的转导。     

环状RNA在口腔鳞状细胞癌中的作用探讨

目的: 探讨环状RNA在口腔鳞癌中的作用。方法: 选取8对口腔鳞癌组织,采用高通量测序,检测环状RNA在口腔鳞癌中的表达。挑选出差异表达的环状RNA,采用qRT-PCR技术对40对口腔鳞癌及癌旁组织进行验证。采用GraphPad Prism 5.0软件,通过t检验得到表达有显著差异的环状RNA,利用生物信息学方法预测差异表达的环状RNA在口腔鳞癌中的可能作用。结果: 口腔鳞癌中存在大量环状RNA。经qRT-PCR验证,口腔鳞癌组织中hsa_circ_ 0093229、hsa_circ_0006208和hsa_circ_0006677显著下调。经生物信息学分析,此3种环状RNA可能吸附miRNA,在口腔鳞癌中起调控作用。结论: 口腔鳞癌中存在大量环状RNA。首次发现 hsa_circ_0093229、hsa_circ_0006208和hsa_circ_0006677可能参与口腔鳞癌调控,为口腔鳞癌生物标志物的研究提供了新的方向。     

沉默信息调节因子3对舌癌细胞凋亡的影响

目的:探讨沉默信息调节因子3(sirtuin3,SIRT3)对舌癌细胞凋亡的影响。方法:采用小干扰RNA(small interfere RNA,siRNA)沉默舌癌细胞中的SIRT3。MTT法检测SIRT3沉默对舌癌细胞增殖活力的影响;TUNEL染色检测SIRT3沉默对舌癌细胞凋亡的影响;酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测SIRT3沉默对舌癌细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性的影响;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测SIRT3沉默对舌癌细胞Caspase-3和多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)表达的影响。结果:SIRT3沉默有效,在SIRT3沉默后观察到舌癌细胞的增殖活力降低,细胞凋亡增加,Caspase-3活性增加,Caspase-3和PARP表达增加。沉默SIRT3前后,舌癌细胞的增殖活力、TUNEL阳性细胞比例、Caspase-3的活性值以及Caspase-3和PARP表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论:SIRT3沉默可促进舌癌细胞凋亡。     

PPARγ在脂多糖刺激牙周膜细胞中调控NF-κB信号通路的作用研究

目的:探讨PPARγ在牙周炎中调控作用机制。方法:组织块法培养健康人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells, hPDLCs)并鉴定。细胞处理分为以下4组,A组:对照组;B组:脂多糖(lipopolysaccharide,LPS )刺激组;C组:罗格列酮对照组,即二甲基亚砜(dimethylsulfoxide, DMSO)处理组;D组:罗格列酮处理组。免疫印迹法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor γ,PPARγ)和核因子κB(nuclear factor κB, NF-κB) p65胞核、胞浆及总蛋白含量,细胞免疫荧光检测NF-κB p65表达部位。实时定量PCR和酶联免疫法检测白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)RNA和蛋白表达。结果:LPS刺激下,胞核PPARγ表达降低NF-κB p65表达升高,相应的IL-1β和TNF-α RNA及蛋白表达量均升高。同时加入罗格列酮后,胞核PPARγ表达升高NF-κB p65表达降低,且IL-1β和TNF-α RNA及蛋白表达量均降低。差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:PPARγ通过下调NF-κB信号通路抑制脂多糖刺激下牙周膜细胞炎症因子RNA表达和蛋白分泌,进而调节牙周炎症反应。     

Circ_0000502靶向调节miR-1231促进口腔鳞状细胞癌HSC-3细胞增殖和抑制细胞凋亡的体外研究

目的:探讨环状RNA 0000502(circ_0000502)是否靶向微小RNA-1231(microRNA-1231,miR-1231)调控口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞HSC-3的增殖和凋亡.方法:实时定量聚合酶链反应(real-time quantita...     

microRNA表达调控与口腔鳞状细胞癌

［摘要］ 微小RNA(microRNA,miRNA)属于一类小非编码RNA,可以通过作用于目标信使RNA(messenger RNA, mRNA)来调控生物进程。miRNA具有作为肿瘤生物标志物和药物作用靶点的潜能,因此阐明其在肿瘤发生发展中的作用机制十分重要。口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是一种常见的口腔恶性肿瘤,预后不良。该文对miRNA在OSCC中的生物学功能,相关表达谱改变,调控机制和临床应用前景作一综述。     

PTEN对H2O2诱导的牙周膜细胞增殖凋亡的影响

目的:探讨第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的牙周膜细胞增殖凋亡的影响。方法:分离培养人牙周膜细胞,转染PTEN小干扰RNA、小干扰RNA阴性对照,H₂O₂处理,Western blot检测PTEN表达水平。结果:人牙周膜细胞转染PTEN小干扰RNA后的细胞中PTEN表达受到抑制。结论:干扰PTEN表达能够拮抗 H₂O₂诱导的人牙周膜细胞凋亡及人牙周膜细胞增殖抑制作用。     

LincRNA-EPS对脂多糖诱导的小鼠牙周膜细胞炎症因子表达的影响

目的:探究基因间区长链非编码RNA-EPS(long intergenic noncoding RNA,lincRNA-EPS)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的小鼠牙周膜细胞(mouse periodontal ligament cells,mPDLCs)炎症因子表达的影响.方法:使用C...     

双硫仑对口腔鳞癌细胞上皮-间充质转化的影响及机制探讨

目的 基于Smad4突变状态探讨双硫仑对口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)的影响。方法 将2017年6月—2018年6月在安徽医科大学附属口腔医院进行肿瘤切除术的46例OSCC患者手术切除的癌组织和癌旁组织切片纳入研究,同时购置人舌鳞状细胞癌细胞系SCC-25和CAL-27。采用免疫组织化学染色观察组织中Smad4的表达情况,Western免疫印迹测定细胞中Smad4的表达情况,分析双硫仑对TGF-β1诱导的细胞EMT迁移、侵袭、形态学以及p38、JNK和ERK表达的影响。采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计分析。结果 癌组织中Smad4阳性表达率显著低于癌旁组织(P<0.05)。双硫仑浓度为5、10、20 μmol/L时,SCC-25和CAL-27细胞存活率与对照组相比无显著差异(P>0.05),双硫仑浓度≥30 μmol/L后,SCC-25和CAL-27细胞存活率显著小于对照组(P<0.05)。经TGF-β1处理后,SCC-25和CAL-27细胞形态由上皮样转变为间质样,上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)表达显著降低,波形蛋白(Vimentin)和神经性钙黏附蛋白(Snail)表达显著升高,迁移能力显著增强(P<0.05)。经双硫仑+TGF-β1处理后,随着双硫仑浓度上升,SCC-25和CAL-27细胞形态改变逐渐减小,E-cadherin蛋白表达逐渐升高,Vimentin和Snail蛋白表达逐渐降低,迁移能力逐渐减弱(P<0.05)。TGF-β1刺激后5 min后,SCC-25和CAL-27细胞中p-ERK水平逐渐上升,在15 min时达到最大值,随后逐渐降低(P<0.05)。经20 μmol/L双硫仑+TGF-β1处理后,SCC-25和CAL-27细胞中p-ERK水平随作用时间延长而逐渐下降(P<0.05)。结论 双硫仑可通过阻断MAPK信号通路中ERK磷酸化,达到抑制Smad4突变与Smad4非突变OSCC细胞EMT作用。     

热疗联合Id-1基因沉默对舌鳞癌CAL-27细胞增殖及侵袭的影响

目的: 探讨热疗联合Id-1基因沉默对舌鳞癌细胞增殖及侵袭的影响及其机制。方法: 将培养的舌鳞癌细胞株CAL-27分为4组。①沉默Id-1组（Id-1-siRNA）—用siRNA基因转染法沉默舌鳞癌CAL-27细胞中Id-1的表达,RT-PCR法检测其Id-1的mRNA表达变化;②热疗组（HT）—细胞置于42.5℃恒温培养箱内40min;③联合组（HT+ Id-1-siRNA）—siRNA基因转染法沉默细胞内Id-1的表达后进行42.5℃、40 min的热疗处理;④空白对照组—常规培养细胞。通过CCK8和Transwell侵袭实验,分别检测CAL-27细胞的增殖能力和侵袭能力变化; Western免疫印迹法检测CAL-27细胞中PI3K、磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表达变化。采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析。结果: siRNA能成功沉默CAL-27细胞内Id-1的表达,沉默Id-1组与空白对照组相比,Id-1的mRNA表达水平下降81.6%。沉默Id-1和热疗均可抑制CAL-27细胞的增殖和侵袭能力,下调PI3K、p-Akt蛋白表达（P<0.05）,热疗联合沉默Id-1作用于CAL-27细胞后的结果更为显著（P<0.01）。结论: 热疗协同沉默Id-1可显著抑制人舌鳞癌细胞的增殖及侵袭能力,其作用是通过PI3K/Akt信号通路来实现。     

has-miR-16�����۰��е�����ѧ���ܼ����ӻ����о�

??Objective    To study the role and molecular mechanism of has-miR-16 in the development of tongue squamous cell carcinoma ??TSCC??. Methods    The expression of has-miR-16 was detected in 36 cases of TSCC tissues and matched normal tissues by using Quantitative real time PCR. The expression of has-miR-16 in TSCC cells ??CAL-27 and SCC-9?? and the normal human oral mucosa fibroblast cells ??hOMF?? was also analyzed by Quantitative real time PCR. The cell proliferation and migration of CAL-27 and SCC-9 were analyzed by MTT and wound healing assays after being transfected with has-miR-16 mimics or mimics control. The target gene of has-miR-16 was predicted by bioinformatics and verified by dual luciferase reporter assay. Results    The expression of has-miR-16 in TSCC tissues was significantly lower than matched normal tissues ??P < 0.05??. The expression of has-miR-16 was also down-regulated in CAL-27 and SCC-9 cells compared with hOMF cells ??P < 0.05??. Over-expression of has-miR-16 inhibited cell proliferation and migration in CAL-27 and SCC-9 cells ??P < 0.05??. MYB ??Myeloblastosis oncogene?? was the target gene of has-miR-16 in TSCC. Conclusion    Has-miR-16 is down-regulated in TSCC tissue and cell lines??over-expression of has-miR-16 inhibites CAL-27 and SCC-9 cells proliferation and migration??has-miR-16 acts as tumor suppressor in TSCC??which may play its role via regulating MYB.     

Apicidin对人舌鳞癌CAL-27细胞作用的初步研究

目的探讨Apicidin对体外培养人舌鳞癌CAL-27细胞影响及作用机制。方法体外培养人舌鳞癌CAL-27细胞,采用不同浓度的Apicidin作为实验组,并设立对照组,倒置显微镜观察细胞形态,CCK-8法检测细胞增殖、TUNEL、流式细胞仪检测Apicidin对CAL-27细胞凋亡作用。结果 Apicidin可显著抑制CAL-27细胞的生长(P<0.05),呈时间剂量依赖性。通过TUNEL法、流式细胞仪检测显示CAL-27细胞的凋亡,并且使CAL-27细胞停留在G2期。结论 Apicidin能显著抑制CAL-27的体外生长并能诱导细胞凋亡。     

巨噬细胞来源的白细胞介素6对口腔鳞癌细胞增殖活性的影响

目的: 探讨巨噬细胞来源的白细胞介素6（interleukin 6,IL-6）对口腔鳞状细胞癌细胞系增殖活性的影响。方法: 通过MTT法检测不同浓度重组IL-6对口腔鳞状细胞癌细胞系SCC-15和CAL-27增殖活性的影响。建立佛波酯诱导的THP-1巨噬细胞分化模型,分别通过实时定量荧光PCR（RT-PCR）和酶联免疫吸附试验,分析脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激下的THP-1细胞中mRNA水平的变化以及THP-1细胞培养基中IL-6的含量。利用MTT法检测含THP-1条件培养基对SCC-15和CAL-27细胞系增殖活性的影响。采用GraphPad 7.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 培养基中添加IL-6,可促进SCC-15和CAL-27细胞系的增殖活性。LPS可刺激活化的THP-1巨噬细胞分泌IL-6;活化的THP-1细胞培养基可促进SCC-15和CAL-27细胞的增殖活性。结论: LPS刺激巨噬细胞分泌的IL-6,可促进口腔鳞状细胞癌细胞系SCC-15和CAL-27的增殖活性。     

过表达miR-218对舌鳞癌细胞系SCC-4和SCC-9的增殖和侵袭的影响

目的 探讨miR-218在舌鳞癌细胞中的表达,以及对细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 在人舌鳞癌细胞系SCC-4和SCC-9中分别转染negative control、miR-218模拟物和抑制剂,然后利用MTT法检测细胞增殖活性;通过流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡;通过Transwell实验检测细胞侵袭能力,采用GraphPad 7.0软件包对数据进行统计学分析。结果 与对照组相比,转染miR-218 抑制剂的SCC-4和SCC-9细胞,细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和侵袭能力无显著改变;而转染miR-218 模拟物的细胞,增殖能力变弱,凋亡数增加,侵袭能力显著降低。结论 miR-218在口腔癌中的表达量和细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和侵袭能力相关,提示miR-218与口腔癌的发生、发展有一定关系。     

热化疗诱导舌鳞癌CAL-27细胞免疫原性死亡的实验研究

目的:探讨平阳霉素（pingyangmycin, PYM）、热疗（hyperthermia, HT）及两者联合能否诱导舌鳞癌CAL-27细胞发生免疫原性死亡。方法:对人舌鳞癌细胞CAL-27分别进行PYM、HT及两者联合处理,采用CCK-8实验、Annexin V/PI联合染色、流式细胞术及酶联免疫吸附实验探讨不同处理方式对细胞增殖、凋亡、CRT膜表达及HMGB1分泌的影响。采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析。结果:PYM抑制CAL-27细胞活性,且呈浓度依赖性（P<0.05）。PYM及HT均使CRT膜表达率升高;两者联合应用,细胞凋亡、CRT膜表达率及HMGB1分泌均较未处理组、单纯化疗组及单纯HT组升高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:PYM化疗及HT均能诱导舌鳞癌CAL-27细胞CRT由胞内至膜表面转位,并促进HMGB1分泌;两者联合应用,无论在诱导凋亡还是在诱导免疫原性死亡方面,效果优于单纯PYM化疗组。     

体外沉默异戊二烯化酶二牛龙牛儿基转移酶Ⅰ对舌鳞状细胞癌增殖的影响

目的 研究异戊二烯化酶二牛龙牛儿基转移酶Ⅰ（GGTase-Ⅰ）在舌鳞状细胞癌增殖中的作用。方法 登录Genebank确定人GGTase-Ⅰ基因序列,设计3条小干扰RNA（siRNA）,并将siRNA转染至舌癌细胞Cal-27（GGTase-ⅠsiRNA组）。设立空白对照组（只加入转染试剂,不加入siRNA）和阴性对照组（NC-siRNA）。采用实时定量聚合酶链反应和蛋白质免疫检测转染后各组细胞GGTase-Ⅰ、RhoA的mRNA和蛋白表达;蛋白质免疫检测转染48 h后Cyclin D1、p21的表达变化;细胞增殖活性检测试剂盒和流式细胞术检测细胞的增殖活性和细胞周期变化。结果 与阴性对照组和空白对照组相比,GGTase-Ⅰ siRNA 组细胞的GGTase-Ⅰ的mRNA和蛋白表达下降（P<0.05）,RhoA的mRNA和蛋白表达无明显改变（P>0.05）;Cyclin D1的表达下降,p21表达升高,细胞的增殖活性下降,细胞周期发生改变（P<0.05）。结论 GGTase-Ⅰ siRNA能抑制舌鳞状细胞癌细胞中GGTase-Ⅰ的表达,抑制细胞增殖,提示GGTase-Ⅰ在舌鳞状细胞癌增殖中可能发挥重要作用。     

氯喹增强口腔癌CAL-27细胞对顺铂化疗敏感性的观察

目的利用氯喹（chloroquine,CQ）及顺铂（cisplatin,DDP）作用于CAL-27细胞,探讨自噬在口腔癌化疗中的作用及机制,为临床增强口腔癌化疗敏感性提供理论依据。方法应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法比较药物对CAL-27细胞的生长抑制作用,采用激光共聚焦显微镜观察自噬特异性蛋白LC3-Ⅱ的表达,AnnexinV/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡,流式细胞术观察细胞周期的分布。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果不同浓度氯喹及顺铂处理CAL-27细胞不同时间后,细胞生存率逐渐降低,呈浓度和时间依赖性。5 mg/L氯喹联合顺铂在IC₅₀浓度（5 mg/L）处理后,与单独顺铂处理相比,显著降低了CAL-27细胞的生存率（P<0.05）。氯喹或顺铂作用于CAL-27细胞48 h后,自噬在细胞中分布清晰,顺铂组（DDP组）细胞平均荧光强度高于对照组、氯喹处理组（CQ组）及氯喹与顺铂联合处理组（CQ+DDP组）（P<0.05）;氯喹组细胞平均荧光强度显著低于其他3组（P<0.05）。氯喹或顺铂作用于CAL-27细胞48 h后,与对照组相比,DDP组和CQ+DDP组细胞凋亡率显著提高（P<0.05）;与顺铂单独作用相比,CQ+DDP组细胞凋亡率显著提高（P<0.05）。氯喹和顺铂作用于CAL-27细胞48 h后,DDP组和CQ+DDP组G1期细胞明显增多,出现G1期阻滞,CQ+DDP组G1期细胞数显著高于DDP组（P<0.05）。结论抑制自噬能够提高CAL-27细胞对顺铂的化疗敏感性,CAL-27细胞本身的自噬是产生化疗耐药的重要机制。自噬抑制剂有望成为口腔癌化疗的增敏剂。