人肝脏再生增强因子对体外肝细胞生长的影响

目的基因工程方法纯化人肝脏再生增强因子（hALR）,研究hALR对体外培养肝细胞生长的影响。方法构建hALR原核表达载体PGEX-3X-hALR,诱导表达、纯化收集GST-hALR,用X因子切去GST,凝胶过滤得到高纯度hALR蛋白;分别用正常肝细胞（L-02细胞）和肝癌细胞（HepG2细胞）分析hALR对其生长的影响。结果hALR原核表达载体pGEX-3X-hALR构建成功,经诱导表达,可纯化得到高纯度的hALR蛋白。hALR蛋白能促进正常肝细胞的生长,并与浓度成正相关;而肝癌细胞的生长却起抑制作用。结论成功表达和纯化重组hALR蛋白,hALR促进正常肝细胞的生长而抑制肝癌细胞生长。     

丹黄方对大鼠肝再生过程中PC3、c—fos、LRF—1影响的实验研究

目的：探讨丹黄方对大鼠肝切除肝再生模型中促肝细胞再生的作用机制。方法：采用肝部分切除肝再生模型，用丹黄方进行干预，通过RT-PCR、电泳凝胶等方法检测与肝再生密切相关因子PC3 mRNA、c-fos mRNA、LRF-1 mRNA的表达，观察丹黄方对肝细胞再生的影响。结果：丹黄方对肝再生模型大鼠肝组织PC3 mRNA、c-fos mRNA的表达有增强作用，与模型比较，差异有显著性意义；对肝组织LRF-1 mRNA表达的影响不显著。结论：丹黄方可能是通过增强肝组织PC3 mRNA、c-fosmRNA的表达而促进肝细胞的增殖。     

肝细胞再生及其调节因子

自1931年McJunkin和Breuhaus首先证实肝部分切除(PH)后的鼠肝匀浆可促进肝细胞增殖以来,先后发现了不少调节肝细胞再生的物质.有的理化性质已明确,如胰岛素、胰高血糖素;有的虽经部分纯化,但性质仍未确定,如肝细胞生长因子和抑制因子,它们可能通过刺激和/或抑制作用,共同控制肝细胞的生长.对于这些因子的研究,不仅有助于了解肝损伤后肝细胞再生的机理,而且对探讨致癌过程中细胞增殖的控制与失控有重要意义,并可为探索肝病的治疗开拓新的途径.激素在肝细胞再生中的作用血液中至少有6种激素可促进肝细胞的再     

湖北钉螺凝集素分离纯化及相对分子质量的测定

目的分离、纯化湖北钉螺(Oncomelania hupensis)体内凝集素,测定其相对分子质量。方法用饱和度为0～40%的硫酸铵对钉螺腹足部软体组织匀浆液进行分离,对其沉淀物先后采用Sephadex G-75凝胶过滤层析和Sepharose 4B亲和层析进行纯化。采用Brandford法测定纯化后凝集素的蛋白质含量,红细胞凝集试验测定其凝集活性,并计算比活力。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测凝集素的纯化效果,并测定其亚基相对分子质量。利用Sephadex G-75凝胶层析测定钉螺凝集素的相对分子质量。结果饱和度为0～40%硫酸铵对钉螺凝集素组织匀浆液进行分离,比活力从组织匀浆液的21.74 titer/mg提高到了61.93 titer/mg。经Sephadex G-75凝胶层析和Sepharose 4B亲和层析,钉螺凝集素的比活力分别提高到75.89 titer/mg和963.86 titer/mg。对凝胶过滤层析和亲和层析纯化后的凝集素进行SDS-PAGE分析,可见单一清晰条带,凝集素亚基的相对分子质量约为Mr 53 000。凝胶层析测定钉螺凝集素的相对分子质量约为Mr 78...     

促肝细胞生长因子的基础及临床研究进展

1984年，Nakamura T等从部分肝切除大鼠的血清中分离到一种能刺激原代培养的肝细胞生长和合成的肝源性因子，并首次命名为肝细胞生长因子（Hepatocyte Grouth Factor，HGF）。此后，许多国家对HGF进行了一系列深入研究，认为是一类能促进人类及动物肝细胞再生的具有生物活性的小分子物质。国际上它的名称可谓繁多，如：促肝细胞生长刺激因子，肝细胞刺激物质等，均指同一物质。     

人血清载脂蛋白CⅠ和CⅢ的分离提纯及其单克隆抗体的制备

本文应用超速离心、凝胶过滤层析、高效液相色谱法分离纯化了人血清极低密度脂蛋白—载脂蛋白ＣⅠ和ＣⅢ。经等电聚焦电泳、十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺电泳、双向免疫扩散等方法鉴定了纯度。以载脂蛋白ＣⅠ和ＣⅢ纯品免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，应用淋巴细胞杂交瘤技术建立了４株抗人载脂蛋白ＣⅠ和２株抗人载脂蛋白ＣⅢ杂交瘤细胞。所得单克隆抗体与载脂蛋白ＡⅠ、ＡⅡ、Ｂ、ＣⅡ、Ｅ和白蛋白等无交叉反应。     

肝细胞生长因子研究进展

肝细胞坏死性肝炎的预后取决于肝细胞坏死程度和再生能力。70年代学者们集中探索体液因素对肝细胞再生的影响,并分别在血液和肝脏中都发现有促使和抑制肝细胞分裂繁殖的因子存在,这些因子的变化对肝细胞再生起着重要的作用。已陆续发现下述因子有促使肝细胞分裂作用:表皮生长因子     

肝细胞生长素治疗病毒性肝炎

1975年Labrccquc 从断乳大鼠的肝脏提取到一种能促进肝细胞DNA 合成的物质,命名为肝细胞再生刺激因子(hepatic stimulator substance,HSS)。1988年以后,我国多个单位先后从断乳大鼠、乳猪、小牛和人胎肝细胞浆中提取出具有刺激肝细胞DNA 合成、促进肝细胞再生的小分子多肽物质。分别命名为肝细胞     

人血浆脂联素分离纯化及活性鉴定

目的: 从人血浆中分离纯化各亚型脂联素(APN),建立人血浆APN活性的检测方法,同时获得制备抗APN各亚型特异性抗体所需的抗原。方法:将-80℃保存的人血浆融解后稀释,采用硫酸铵沉淀、阴离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化人血浆中不同亚型的APN。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹（Western blot）和ELISA检测纯化的产物及回收率。通过孵育人脐静脉内皮细胞后,检测磷酸腺苷激活的蛋白激酶（AMPK）的水平反映APN的活性。结果:所获不同亚型的APN均具有生物学活性,高聚体APN激活AMPK的能力最强。APN活性回收率为40%。结论: 建立了一种能够快速、简便从人血浆中分离纯化APN及其亚型并保持其天然的生物学活性的方法,为APN的深入研究奠定了基础。     

大鼠原代肝细胞分离与培养

目的分离及培养高纯度的原代大鼠肝细胞。方法用D—Hanks液及胶原酶消化液分两步原位灌注大鼠肝脏,分离细胞经3次低速离心（50xg,5min）后获得纯化的肝细胞。肝细胞存活率检测用台盼蓝拒染法,鉴定用PAS染色法。结果每只体质量约200g的大鼠能成功分离出（1．0～1．5）×10。个肝细胞,成活率在90％以上,细胞培养24h,有部分细胞贴壁,48h有大量细胞贴壁。以PAS染色对肝细胞进行鉴定,肝细胞为粉红色。结论肝细胞分离培养成功,对分离方法的改进措施可行。     

肝再生增强因子研究进展

肝再生增强因子是一种新型的肝细胞刺激因子。本文从分子生物学特性、生物活性与作用机制等方面对肝再生增强因子的研究进展进行综述。     

老年脑梗死患者血清中肝细胞生长因子变化的临床研究

肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)最初是从血浆和血小板中纯化获得并认为是一种刺激肝细胞增生的有丝分裂原,对肝切除或化学损伤后的肝再生起重要作用。近年来,研究者发现HGF有广泛的生物学效应,是一种特异性血管新生因子,可抑制内皮细胞凋亡和促进血管平滑肌细胞     

高效液相色谱分离纯化鼠疫菌Pla蛋白

目的用高效液相色谱分离纯化鼠疫菌纤溶酶原激活因子。方法优化离子交换、凝胶过滤,并将2种层析组合实现纯化。结果用高效液相色谱纯化的Pla主要由相对分子质量约31×10^3、35×10^3、37×10^3的3条蛋白带组成,占蛋白总量80％以上。结论Pla经高效液相色谱分离可以达到基本纯化。     

人肝再生增强因子小干扰RNA表达质粒的构建和鉴定

目的 检测人肝癌细胞株HepG2细胞有无人肝再生增强因子(hALR)的表达，构建针对人肝再生增强因子基因编码区的小干扰RNA(siRNA)表达质粒pSIALR-A及其阴性对照质粒pSIALR-B，观察其对人肝再生增强因子表达的影响。方法 用免疫细胞化学法观察HePG2细胞表达hALR的情况。将构建成功的pSIALR-A和pSIALR-B分别转染HepG2细胞，转染后48h，用免疫细胞化学法及逆转录聚合酶链反应法观察人肝再生增强因子蛋白及mRNA的表达。结果 HePG2细胞有人肝再生增强因子的表达。成功构建了针对人肝再生增强因子基因编码区的siRNA表达质粒pSIALR-A，并发现它能明显抑制人肝再生增强因子的表达，而随机序列的siRNA却无此作用。结论 人肝再生增强因子的siRNA具有明显和特异性的抑制人肝再生增强因子的表达作用。     

日本血吸虫未成熟虫卵26-28kDa抗原的分离与纯化

本文采用超凝胶AcA柱层析方法和SDS-PAGE结合凝胶洗脱方法等,分离纯化了日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)26-28kDa组分.SDS-PAGE、免疫印迹分析(EITB)和银染色等证明,采用该方法分离纯化的26-28kDa抗原纯度高,有较强的免疫活性,并证明该抗原组分在SIEA中含量丰富.纯化的SIEA26-28kDa可作为抗日本血吸虫生殖产卵和抗卵胚发育侯选抗原,用于抗病保护性免疫的研究.     

肝源性肝细胞生长因子的研究与临床应用现状

肝源性肝细胞生长因子的研究与临床应用现状北京军区总医院（１００７００）林梅肝细胞在受到损伤后具有很强的再生功能，这种再生的调控受内分泌、旁分泌和自分泌等多种因素的影响。目前已发现有不少影响肝细胞再生的因子和激素，除了一些非特异性的作用相对较为广泛的调...     

家蝇幼虫分泌物抗菌组分的抗菌效果观察及筛选

目的筛选家蝇幼虫分泌物中的抗菌组分并测定其抗菌活性。方法用盐析、凝胶过滤层析、反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化分泌物中抗菌蛋白肽,以大肠埃希菌为指示菌种,采用平板滤纸片法检测抗菌活性,并观察其对金黄色葡萄球菌等多种细菌的抗菌活性。结果经50%~80%硫酸铵盐析沉淀、Sephadex G-100、G-50凝胶过滤柱层析分离得到一活性峰,该活性峰对大肠埃希菌及金黄色葡萄球菌等细菌显示较强的抗菌作用,进一步用反相高效液相色谱纯化,该活性峰由3个活性组分构成。结论家蝇幼虫分泌物中含有3个抗菌组分,对多种革兰氏阳性及阴性菌具有较强的抗菌活性。     

培养人胎肝细胞的形态与功能研究

目的探讨人胎肝细胞分离与培养的简易方法．方法采用体外两步灌流法分离人胎肝细胞，选择条件培养液加以培养，并进行形态学和蛋白分泌功能的动态观察．结果用该法分离的肝细胞经台盼蓝拒染试验证实存活率在９５％以上，培养时间可达２周，并保持正常形态和良好的蛋白合成分泌功能．结论用酶灌流分离和条件培养的胎肝细胞性能良好，可用作肝细胞移植的供体．     

生物人工肝临床应用的疗效与难点

各种原因导致的肝衰竭病死率高,人工肝不仅为肝衰竭患者等待肝移植提供过渡,还为部分患者延长生存时间、争取肝脏再生、避免肝移植提供可能.肝脏具有复杂的代谢、合成、转化等功能,生物人工肝支持系统引入肝细胞,从而部分替代肝脏的解毒与生物合成的功能.随着肝细胞及其体外分离、培养,纯化技术的深入研究,国内外许多类型的生物人工肝支持系统进入临床研究[1 2].     

肝再生的发生机制及血清标志物的研究现状

肝再生是在肝损伤及坏死后,为维持肝脏体积及功能,一系列因子和信号转导通路参与的重要反应。其过程包括三个主要阶段:某些因子引发有丝分裂的初始阶段,促进肝细胞重新进入细胞周期的增殖阶段,促使肝细胞达到一定数量及肝脏质量恢复的终止阶段。介绍了促使各种肝干细胞分化为肝细胞以恢复肝脏体积和功能的各种因子及多种细胞信号通路,并归纳了本课题组前期研究发现——AFP是肝衰竭后肝再生的重要血清标志物。经分析表明,深入研究肝再生的发生基础及临床应用,有助于进一步增加对肝再生的了解,更好预测急慢性肝病的预后,为各种晚期肝病的临床诊治提供新的思路和方法。