rhG-CSF对新生鼠缺氧缺血性脑损伤HIF-1α表达的影响

目的：探讨重组人粒细胞集落刺激因子（recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF）对缺氧缺血性脑损伤新生鼠海马区及皮质HIF-1α（hypoxiainducible factor 1α）表达的影响。方法：将7日龄新生Wistar大鼠随机分成假手术组,HIBD组和rhG-CSF治疗组。在乙醚麻醉下行右侧颈总动脉结扎,氮氧混合气缺氧2.5h制备HIBD模型。应用免疫组织化学法检测HIF-1α。结果：免疫组化结果显示：在新生大鼠大脑皮层和海马区,HIBD组较假手术组HIF-1α表达明显增加（P〈0.01）,治疗组较HIBD组HIF-1α表达明显增加（P〈0.01）。结论：缺氧缺血性脑损伤后,脑组织HIF-1α表达增加,可能与促进血管形成及抑制神经细胞凋亡有关。rhG-CSF可能通过调节HIF-1α的表达,减少神经细胞凋亡,增强脑组织对缺氧的耐受,从而改善缺氧缺血性脑损伤小鼠的预后。     

缺氧缺血性新生大鼠脑皮质氧化还原因子-1蛋白的表达

目的：探讨新生大鼠脑组织缺氧缺血后，氧化还原因子-1(APE／Ref-1)蛋白在脑皮质不同时相的表达及其意义。方法：将新生7日龄SD大鼠制成缺氧缺血性脑损伤(HIBD)动物模型，采用免疫组织化学方法及原位缺口末端标记(1UNEL)法分别观察正常对照组、假手术组及缺氧缺血1、3、6、12、24、48小时APE／Ref-1蛋白及神经细胞凋亡变化，分析两者关系。结果：氧化还原因子-1蛋白在正常对照组、假手术组及右侧大脑半球神经细胞核广泛表达；而缺氧缺血组脑皮质区该蛋白表达随缺血时间的延长而下降，且各时间点间差异显著。脑皮质区凋亡阳性细胞表达脑皮质区与APE／Ref-1相反，其随缺血时间的延长逐渐增多，并在24小时达到高峰。结论：新生大鼠脑组织缺氧缺血后，脑皮质区神经元APE／Ref-1蛋白表达减少，凋亡细胞表达增加，提示APE／Ref-1蛋白减少和．DNA修复功能失败可能与脑缺氧缺血后神经细胞凋亡的发生有关。     

孕酮干预对缺氧缺血性脑损伤新生鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的:观察胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在缺氧缺血性脑损伤新生鼠脑组织中的表达及孕酮对其影响,从分子水平探讨孕酮对新生鼠缺氧缺血性脑病星形胶质细胞的保护机制。方法:24只新生Wistar大鼠随机均分成3组,假手术组、缺氧缺血组和药物预防组动物,建立缺氧缺血脑病动物模型。假手术组仅分离左侧颈总动脉,不结扎,亦不做缺氧处理。药物预防组动物于建立模型前30min按8mg/kg腹腔注射0.5g/L的孕酮溶液,24h后动物被全部处死,采用免疫组化和RT-PCR方法检测各组大鼠脑组织中GFAP表达的变化。结果:各组大鼠星形胶质细胞中都有GFAP表达,缺氧缺血组的GFAP阳性细胞数和GFAPmRNA的表达水平明显高于假手术组(均P<0.05),药物预防组的GFAP阳性细胞数和GFAPmRNA的表达明显低于缺氧缺血组(均P<0.01)。结论:缺氧缺血性脑损伤可引起新生鼠脑组织GFAP大量表达,孕酮可抑制缺氧缺血后脑组织星形胶质细胞过度表达,发挥抗缺氧缺血性脑损伤的作用。     

促红细胞生成素对新生HIBD大鼠凋亡相关蛋白Bax表达的影响

目的观察重组人促红细胞生成素(rhEPO)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后凋亡相关蛋白Bax表达的影响,探讨rhEPO发挥神经保护作用的可能机制。方法将新生7日龄SD大鼠120只随机分为3组,假手术组、对照组、rhEPO治疗组。其中rhEPO治疗组,在建立新生大鼠HIBD模型后,即刻一次性给予rhEPO 3000U/kg颈部皮下注射,用HE及免疫组化方法观察给药后不同时间点凋亡相关蛋白Bax表达的变化。结果新生7日龄大鼠HIBD后神经细胞凋亡增加,凋亡蛋白Bax的表达在各时间点较rhEPO治疗组和假手术增加(P<0.01),rhEPO干预后凋亡相关蛋白Bax表达较对照组明显减少(P<0.01),差异有统计学意义。结论 rhEPO可以通过下调凋亡相关蛋白Bax的表达,抑制细胞凋亡而发挥其神经保护作用,为临床治疗新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)提供有意义的理论依据。     

高压氧对缺氧缺血新生大鼠脑组织神经可塑性相关蛋白的影响

目的研究高压氧(HBO)对缺氧缺血新生大鼠脑组织神经相关蛋白(GAP-43)和神经生长抑制因子(Nogo-A)的影响,探讨HBO对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用及机制。方法7日龄Wistar大鼠24只随机分为3组:正常对照组(CON组),HIBD组和HBO组,每组各8只,HBO组于缺氧缺血1h后行HBO处理,每日1次,连续7d。各组分别于17日龄时处死取材。苏木素-伊红(HE)染色观察脑组织病理改变,免疫组织化学方法检测3组大鼠大脑皮层GAP-43蛋白和Nogo-A表达。结果HBO组病理改变较HIBD组减轻。GAP-43表达:平均灰度值HIBD组较正常对照组明显降低(P<0.05),HBO组较HIBD组明显降低(P<0.05)。Nogo-A表达:平均灰度值HIBD组较正常对照组降低(P<0.05),HBO组较HIBD组明显增加(P<0.05)。结论HBO治疗可以通过增加缺氧缺血新生大鼠脑组织GAP-43蛋白和降低Nogo-A的表达,发挥其对脑损伤的保护作用。     

新生小鼠缺氧缺血性脑病脑组织 caspase-3#br# 表达的变化

摘要： 目的 观察半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 （caspase） -3 在新生儿缺氧缺血性脑病 （NHIE） 小鼠模型脑组织中表 达的变化。方法 选取 7 d CD1 新生小鼠 30 只, 按随机数字表法分为假手术组 （9 只） 和 NHIE 模型组 （21 只）, 后者 制备 NHIE 动物模型。用 TTC 染色法检查 2 组的脑组织梗死面积; DAPI 染色观察脑组织病理变化; 原位末端标记 技术检测脑组织细胞凋亡; 荧光免疫组化法检测脑组织中 caspase-3 表达水平。结果 假手术组小鼠脑组织未见梗 死灶, 脑组织细胞排列致密整齐, TUNEL 阳性细胞数（ [ 18.57±4.98） 个]和 caspase-3 阳性细胞数[(9.17±2.14)个]明显低 于 NHIE 模型组的 TUNEL 阳性细胞数（ [ 209.57±41.27） 个]和 caspase-3 阳性细胞数（ [ 63.33±16.22） 个]; 与假手术组相 比, NHIE 模型组小鼠的右侧半球可见梗死灶, 脑组织细胞大量坏死脱落、 周围组织间隙变大。结论 NHIE 模型鼠 出现的脑组织损伤可能与caspase-3 表达增加、 脑组织细胞凋亡增加有关。     

褪黑素对新生鼠缺氧缺血性脑损伤表达NF-κB的影响

目的：探讨褪黑素（melatonin,MT）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用及作用机制。方法：新生健康7日龄Wistar大鼠120只,随机分为3组：假手术组（40只）、缺氧缺血模型组（40只）、MT治疗组（40只）,参照经典方法建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型,MT治疗组于模型制作完成后立刻注射MT10mg/kg1次于腹腔内,脑损伤组则于腹腔内注射等量的0.9%氯化钠注射液。各组分别于手术后6、24、48、72 h取脑组织切片,免疫组织化学方法检测核因子-κB（NF-κB）的表达.结果：与假手术组相比,缺氧缺血组NF-κB表达随时间的变化增加显著（P〈0.01）。与缺氧缺血组相比较,MT治疗组NF-κB表达在12,24,48h三个时间点中下降显著（P〈0.01）。结论：MT对HIBD后海马区神经细胞具有保护作用,其作用机制可能与抑制NF-κB在海马区的持续活化有关。     

艾灸对缺氧缺血性脑病新生小鼠脑组织炎症细胞浸润和 CD11b表达的影响

目的 观察艾灸对缺氧缺血性脑病新生小鼠脑组织炎症细胞浸润和CD11b表达的影响。方法 出生7 d 新生ICR小鼠,随机分为3组：假手术组（n=20）、模型组（n=24）和艾灸组（n=20）。假手术组只做颈部手术,不闭合颈 总动脉,不缺氧;模型组行颈总动脉闭合术,并给予缺氧处理;艾灸组在模型组的基础上给予艾灸治疗,每日1次,35 min/次。采用TTC染色检测小鼠脑梗死的面积;HE染色观察小鼠脑组织形态结构和炎症细胞浸润;组织免疫荧光染 色检测脑组织CD11b表达。结果 与假手术组相比,模型组小鼠的脑梗死面积增大,患侧脑组织大量细胞坏死脱 落,并伴有大量炎症细胞浸润,CD11b阳性细胞数明显增多;与模型组相比,艾灸组小鼠的脑梗死面积缩小,患侧脑组 织细胞排列较致密、整齐,炎症细胞较少,CD11b阳性细胞数明显减少。结论 艾灸具有减轻新生小鼠缺氧缺血性脑 损伤的作用,这可能与其减少脑组织小胶质细胞浸润、减轻炎症反应有关。     

碱性成纤维细胞生长因子在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后海马神经发生中的作用

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后神经细胞内源性修复机制的相关性.方法 128只SD大鼠随机均分为假手术(A)组、单纯缺氧(B)组、单纯缺血(C)组和缺氧缺血(D)组.建立HIBD模型,免疫组化检测溴化脱氧核糖尿嘧啶(BrdU)阳性细胞表达,RT-PCR检测海马bFGF mRNA表达.结果 与其余各组比较,D组BrdU阳性细胞数及bFGF mRNA表达于HIBD后7、14 d明显增加(P＜0.05).结论 HIBD后海马齿状回存在神经细胞再生,bFGF可能参与HIBD后神经细胞内源性修复机制.     

丙戊酸钠对小鼠全脑缺血后认知功能恢复与海马神经元再生的促进作用

目的 研究丙戊酸钠（valproate acid,VPA）对小鼠全脑缺血（global cerebral ischemia,GCI）后认知功能恢复与海马神经元再生的影响及其作用机制。方法 将48只小鼠随机分为4组：假手术组、VPA组、GCI组和VPA+GCI组,每组12只。GCI组和GCI+VPA组给予抽血和双侧颈总动脉夹闭20 min,假手术组和VPA组仅给予切开和缝合处理。术后VPA组和GCI+VPA组腹腔注射VPA 30 mg·kg^-1·d^-1,连续7 d,假手术组和GCI组给予同等剂量生理盐水。通过选择性T迷宫实验测试小鼠空间记忆认知功能的改变;尼氏法染色小鼠海马CA1区神经元,检测其形态学的改变;免疫荧光观察小鼠海马齿状回（dentate gyrus,DG）区DCX阳性细胞数;Western blot法检测海马nNOS、GAP-43蛋白的表达情况。结果 VPA处理后,GCI小鼠在选择性T迷宫中的认知功能得到改善,海马CA1区神经元密度增加,DG区DCX阳性细胞增加,同时,海马中nNOS表达水平下调,GAP-43表达上调。结论 VPA可在小鼠GCI后起到神经保护作用,并促进海马神经元再生,达到改善GCI认知功能的目的,其机制可能与抑制nNOS并促进GAP-43表达有关。     

超微脑得健对局灶性脑缺血大鼠脑内GAP-43的影响

目的探讨超微脑得健对局灶性脑缺血大鼠脑内生长相关蛋白43（GAP-43）的影响。方法采用脑中动脉阻塞法复制大鼠局灶性脑缺血模型,将动物随机分为正常组、假手术组、模型组、补阳还五汤组、脑得健原方组、超微脑得健全量组、超微脑得健1/3剂量组。采用RT-PCR法检测大鼠脑组织GAP-43 mRNA表达。结果正常组和假手术组脑内有一定水平GAP-43 mRNA表达。模型组GAP-43 mRNA表达至14 d达到高峰,模型组各时间点GAP-43 mRNA含量与同时间点正常组和假手术组比有显著差异（P〈0.05）。给药3 d后各治疗组动物脑组织中GAP-43 mRNA含量较同时段模型组比较明显增加（P〈0.05）。结论超微脑得健能促进脑缺血后GAP-43的表达,可能为其促进脑缺血后神经再生机制之一。     

Neuregulin-1β对大鼠缺血再灌注后GAP-43表达及神经功能的影响

目的观察神经调节蛋白-1（Neuregulin-1β;NRG-1β）对大鼠脑缺血再灌注后灰质梗死周围区生长相关蛋白（GAP-43）的影响。方法成年健康雄性SD大鼠54只,随机分NRG-1β给药组,NS对照组,空白对照组。采用线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注动物模型（MCAO/R）,分别于MCAO/R后1 d组,3 d组和7 d组进行神经功能学评分;斜板实验：测大鼠随意运动功能及RT-PCR法观察GAP-43 mRNA的表达。结果NRG-1β组3 d和7 d,GAP-43 mRNA表达较NS对照组和空白组表达增加,差异有统计学意义（P〈0.05）。NRG-1β注射后7 d,神经功能也有改善。结论神经调节素促进大鼠脑灰质缺血再灌注后神经功能恢复,改善大鼠随意运动和提高GAP-43 mRNA表达,具有神经保护作用。     

神经节苷脂在大鼠脑外伤中对GAP-43蛋白表达的影响

目的:研究神经节苷脂对大鼠自由落体脑损伤后脑内生长相关蛋白(GAP-43)表达的影响.方法:将S-D雄性大鼠随机分为4组:即正常对照组,假手术组,脑损伤(TBI)模型组,TBI后GM-1治疗组.复制大鼠自由落体脑损伤模型,在外伤后1、3、7、14 d,利用HE染色观察神经细胞形态和免疫组化染色检测神经细胞内GAP-43蛋白表达的变化.结果:脑内GAP-43蛋白的表达水平在头部损伤后逐渐升高,以伤后第三天、第七天最明显,随后有所下降,至第十四天仍轻度增高,TBI组各时段的GAP-43阳性蛋白表达均高于同时段正常对照组及假手术组,差异有统计学意义;神经节苷脂治疗组能促进TBI后GAP-43蛋白的表达,与同时段模型组对比差异有统计学意义,P均<0.05.结论:GAP-43蛋白在大鼠受到脑外伤后表达增高,可促进中枢神经损伤后的再生.神经节苷脂GM-1在TBI后可促进脑内GAP-43的表达,有稳定细胞膜、减轻细胞水肿、促进神经再生的作用.     

氯胺酮对SD幼鼠海马GAP-43蛋白的影响分析

目的:分析氯胺酮对SD幼鼠海马GAP-43蛋白表达的影响。方法:取7~10日龄的SD幼鼠36只,随机分为A、B、C三组各12只。A组注射生理盐水50 mg/kg,B组注射氯胺酮25 mg/kg,C组注射氯胺酮50 mg/kg。24 h后处死小鼠取海马组织,分别采用免疫组化与Western Blotting检测海马GAP-43蛋白的表达情况。结果:经图像分析软件处理后得知,A组、B组、C组条带灰度值分别为187.43±7.98、164.87±8.35、154.31±6.98,组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。A组、B组、C组GAP-43阳性细胞计数分别为(87.45±14.98)个/mm2、(66.48±12.36)个/mm2、(35.32±9.93)个/mm2,组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:氯胺酮可明显降低SD幼鼠海马GAP-43蛋白的表达水平,这可能与其影响幼鼠神经系统发育有关。     

APP17肽对心肺复苏大鼠海马神经元NGF、BDNF表达的影响

目的观察心肺复苏术后大鼠海马神经元神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达的变化,以及APP17肽对NGF、BDNF表达的影响。方法采用窒息法制作大鼠呼吸心跳骤停模型,然后行心肺复苏术(cardiopulmonary re-suscitation,CPR)。♂性Wistar大鼠18只,随机分3组:手术对照组(A组)、心肺复苏组(B组)、心肺复苏+APP17肽组(C组),复苏至自主循环恢复(return of spontaneous circula-tion,ROSC)时静脉注射APP17肽10μg·(300g)-1。应用免疫组化方法观察各组大鼠复苏2h后海马神经元表达NGF、BDNF情况。结果与对照组(A组)相比心肺复苏组(B组)大鼠海马神经元NGF、BDNF表达明显降低(P<0.05);心肺复苏+APP17肽组(C组)NGF、BDNF表达明显增加,高于B组和A组(P<0.01)。结论心肺复苏模型大鼠自主循环恢复2h海马神经元NGF、BDNF表达降低,APP17肽能恢复神经元NGF、BDNF的表达,对缺血、缺氧性神经元损伤有保护作用。     

梓醇上调GAP-43表达伴随局灶脑缺血大鼠神经功能恢复

目的观察滋阴中药地黄的主要活性成分梓醇对局灶脑缺血大鼠神经功能恢复及缺血周围区大脑皮质生长相关蛋白-43表达的影响。方法♂SD大鼠42只,随机分为假手术组、模型组、生理盐水组、梓醇低、中、高剂量治疗组(剂量分别为1、5、10mg.kg-1)和胞二磷胆碱(剂量为0.4g.kg-1)对照组,每组6只。采用开颅电凝右侧大脑中动脉的方法制备局灶脑缺血模型。造模后6h,经腹腔注射首次给予梓醇进行干预,每天1次,连续7d。给药前及术后1、4、7及15d分别评定各组大鼠姿势反射及肌力变化,并在术后15d断头取脑,制备脑片和脑组织匀浆,采用免疫荧光组织化学染色和Western blot检测缺血周围区大脑皮质GAP-43蛋白表达。结果假手术组无明显神经功能障碍;梓醇高、中剂量治疗组姿势反射及肌力恢复明显优于模型组、生理盐水组和胞二磷胆碱组,且梓醇各剂量治疗组缺血周围区GAP-43蛋白表达比其它实验组明显上调(P<0.05)。结论梓醇可上调脑缺血大鼠缺血周围区皮质GAP-43表达,促进轴突再生,加速其神经功能恢复。     

嗅成鞘细胞与神经干细胞共移植对阿尔茨海默病大鼠海马生长相关蛋白-43表达的影响

目的探讨嗅成鞘细胞(OECs)与神经干细胞(NSCs)共移植对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马生长相关蛋白(GAP)-43表达的影响。方法雄性SD大鼠双侧穹隆-海马伞切断,建立AD大鼠模型。实验动物分为4组:NSCs移植组、NSCs与OECs共移植组、AD模型组、正常对照组,每组30只。从SD胎鼠(孕16～18d)取材,在体外分别培养和共培养OECs与NSCs,并将共培养的OECs与NSCs移植于AD大鼠大脑侧脑室;观察各组大鼠行为学、宿主脑海马GAP-43和NOS阳性神经元表达的变化。结果①NSCs与OECs共移植组潜伏期明显缩短、通过平台次数明显增加,与NSCs移植组、AD模型组差异有统计学意义(P<0.05)。②反转录聚合酶链反应(RT-PCR)与Western Blot分析,NSCs与OECs共移植组宿主脑海马GAP-43mRNA和GAP-43蛋白的表达量高于NSCs移植组、AD模型组(P<0.05)。③NSCs与OECs共移植组NOS阳性细胞(22.2±1.7)较NSCs移植组(13.1±1.9)、AD模型组(7.1±0.9)明显增多(P<0.05)。结论嗅成鞘细胞与神经干细胞共移植能促进宿主脑海马GAP-43的表达,其可能在AD大鼠中枢神经系统损伤时具有促进神经再生和修复的作用。     

重组粒细胞集落刺激因子对大鼠急性缺血性脑梗死后损伤修复的研究

目的观察人重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对大鼠急性局灶性脑梗死轴突、血管再生的影响。方法健康雄性Wistar大鼠建立局灶性脑缺血模型,随机分为脑缺血组及相应时间点的假手术组、药物组。免疫组织化学法检测脑内血管内皮细胞生长因子(VEGF)变化及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测神经生长相关蛋白(GAP)-43表达。结果①缺血组及药物组1～10d GAP-43均呈增高趋势,2组各时间表达量有区别;②缺血组VEGF表达1～10d内缓慢增高;药物组上调VEGF表达,1～4d迅速增高,4d时达到高峰,4～10d有降低趋势,10d与假手术组相比仍有差别。结论G-CSF可促进轴突再生、血管增殖,延长缺血治疗窗,发挥脑保护作用。     

L-精氨酸治疗缺氧性肺动脉高压

目的 :探讨L -精氨酸 (L -Arg)干预缺氧性肺血管结构重建的机制。方法 :将18只Wistar大鼠采用随机设计分为对照组、缺氧组和缺氧 +L -Arg组 (共6个配伍组 )。以右心导管法测定肺动脉压力 ,并对大鼠肺组织标本进行显微结构观察和超微结构观察 ,同时以免疫组化方法分析肺动脉I型胶原表达。结果 :缺氧组大鼠肺动脉平均压 (mPAP)为 (2 7±0 3)kPa ,对照组为 (2 1±0 1)kPa ,两者比较 ,P<0 05。缺氧组大鼠肺血管显微及超微结构发生明显改变 ,有肺血管结构重建形成。然而 ,缺氧 +L -Arg组大鼠mPAP为 (2 2±0 2)kPa ,缺氧组为 (2 7±0 3)kPa ,两者比较 ,P<0 05。L -Arg缓解了缺氧性肺血管结构重建的形成。结论 :L -Arg 对缺氧性肺血管结构重建以及缺氧性肺动脉高压的形成有重要的调节作用