葡萄胎发病相关新基因的克隆

目的筛选和克隆与葡萄胎发病相关的新基因。方法采用抑制性消减杂交方法，建立葡萄胎组织与正常早孕绒毛组织间的差示cDNA文库，从中筛选出新基因序列，并克隆其全长。结果从差示cDNA文库中共筛选出28个克隆，测序结果提示含10种基因序列，其中3个基因片段被确认为功能未明的新基因，并获得其中一条基因的全长序列（按克隆序列号命名为F10）。结论F10等新基因可能与葡萄胎的病理发生发展密切相关。     

应用抑制性消减杂交技术筛选成骨肉瘤转移相关基因

目的：探讨与人成骨肉瘤转移相关的基因表达变化．方法：通过抑制性消减杂交技术从一对同一亲本、转移表型不同的人成骨肉瘤细胞株中分别提取细胞总RNA，筛选差异表达基因并测序，将结果与核酸数据库进行同源性比较．结果：获得12个在低转移成骨肉瘤中高表达的、均与已知的人类基因片段有很高同源性的核甘酸片段．结论：差异表达的基因可能与成骨肉瘤细胞转移生物学特性呈密切相关，特别是在维持肿瘤细胞自身稳定、防止转移中起重要作用．     

抑制性消减杂交筛选与克隆果蝇七氟烷敏感性相关基因

目的 采用抑制性消减杂交(SSH)方法筛选与克隆果蝇七氟烷敏感性相关的基因,以进一步研究吸人麻醉药的作用机制.方法 以对七氟烷敏感和耐药的果蝇品系为研究模型,以野生型黑腹果蝇作为对照,应用SSH方法筛选与吸人麻醉药七氟烷敏感性相关的候选基因.结果 筛选到的差异片段中,在敏感品系中高调的有77个.低调的有56个;在耐药品系中高调的有58个,低调的有52个;在敏感品系中高调而耐药品系中低调的有4个.经过与果蝇基因库比对,确定了其中大部分基因的功能,发现这些基因均非位于Y染色体上;与吸入麻醉药敏感性相关的基因大部分位于第2号染色体上.结论 本实验结果与先前有的学者用遗传学方法定位所得结果基本一致,七氟烷麻醉相关基因定位于2号染色体上,为常染色体显性遗传,并且果蝇对吸入麻醉药的敏感性在雌性与雄性间无差异,为进一步研究吸人麻醉药的作用机制提供了新的思路和方法.     

人膀胱癌异质性表型相关基因的筛选与鉴定

目的 筛选和鉴定膀胱肿瘤异质性生物学表型相关的基因。方法 以已建立的两株同一来源、不同生物学表型的膀胱移行细胞癌细胞系为材料,采用抑制性削减杂交技术筛选差异表达的基因片段,构建cDNA文库;挑取克隆进行筛选,获得差异表达片段,测序并与Genbank比对,Northernblotting验证差异片段在两株细胞系的不同表达。结果 建立了两个消减文库,分别含有168和206个白色克隆,白色克隆含有约200～700bp的插入片段,对这些克隆进行筛选,获得35个差异表达基因片段,其中15个对应于细胞骨架蛋白、细胞代谢酶基因等已知基因,另外19个为未知功能基因,1个为新EST片段,注册Genbank（注册号为DR008207）。结论 抑制性消减杂交技术是筛选、克隆差异表达基因的有效手段;keratin7、Vimentin等细胞骨架蛋白的不同表达,与细胞形态的表型差异有关;DDH等代谢基因的不同。与细胞的药物敏感性差异相关;筛选到的新基因片段为进一步克隆其全长、研究基因功能提供了实验基础。     

用抑制性消减杂交方法筛选人肾癌相关基因

目的 应用抑制性消减杂交技术构建人肾癌差异表达基因文库并进行差异表达基因筛选.方法 以肾癌细胞株RLC-310和肾近曲小管细胞株HK-2互为实验组和对照组,提取mRNA,应用抑制性消减杂交技术进行正反两向消减杂交,获得人肾癌细胞差异表达基因文库,结合反向Northern斑点印迹杂交,筛选差异基因克隆,并进行测序分析.结果 正向和反向文库共包含1200多个阳性克隆,经斑点杂交筛选后,对213个差异克隆进行测序并经BLAST分析,得到144个差异表达基因,与肾癌相关的高表达基因67个,低表达基因77个,其中新EST 14个,未知功能基因21个;对测序基因进行聚类分析发现与细胞生长、黏附、凋亡等肿瘤细胞生物学行为相关.结论 该文库质量可靠,所筛选出的差异基因和新的基因为进一步筛选肾癌特异性相关基因,绘制肾癌差异基因表达谱,最终阐明肾癌发生、发展、转移机制提供了实验材料和研究靶点.     

甲状腺癌特异性低表达基因的筛选与克隆

目的 筛选并克隆在甲状腺癌组织中特异性低表达的基因。方法 (1)应用抑制性消减杂交(SSH)进行基因差异表达分析，构建人甲状腺癌组织与正常甲状腺组织之间差异表达的cDNA消减文库。(2)克隆、鉴定甲状腺癌组织特异性低表达的基因。(3)登录Genbank，运用Blastn程序进行同源性分析。(4)应用cDNA末端快速扩增法(RACE)获取目的基因TCRS30的cDNA全长。(5)Northem blot验证TCRS30号基因的差异表达。结果 构建了高消减效率的人甲状腺癌cDNA消减文库，通过筛选阳性克隆，获得一个在甲状腺癌组织中低表达的基因片段，经检索Genbank表明，在已知的人类EST数据库中找不到高度同源的序列，提示它可能来自于在甲状腺癌中特异性低表达的新基因。以RACE法获知TCRS30的cDNA全长约为4．5kb，通过Northem blot初步验证了TCRS30号基因在甲状腺癌和正常甲状腺组织中存在差异表达。结论 通过SSH和RACE技术，获得了一个在甲状腺癌和正常甲状腺组织中差异表达的未知基因片段TCRS30，它可能代表着一条对甲状腺癌有抑制作用的新基因。     

大鼠部分肝切除后再生肝组织中上调表达基因的克隆与分析

目的克隆肝再生中差异表达的基因,为最终阐明肝再生的调控机制奠定基础。方法采用大鼠短间隔连续肝切除(SISPH)模型,用抑制性消减杂交技术(SSH)研究4～8h之间差异表达的基因。结果用SSH分析0、4h、8h和12h模型的4～8h再生肝,筛选出33个与肝再生有关的上调表达序列标记(EST),其中17个为已在肝再生中报道的已知基因,6个为首次报道的已知基因,10个为大鼠中尚未报道的新基因,并对新基因在NCBI进行注册。结论在肝再生中SSH是一个分离肝再生差异表达基因的强有力工具,这些差异基因的分离,尤其是在肝再生中首次报道的已知基因和新基因的分离,可为进一步阐明肝再生的机制奠定基础。     

人类1号染色体的显微切割

本实验从染色体标本制备开始，引进强化的IRS－PCR方法，成功地扩增了染色体切割片段，并用原位抑制杂交法验证切割及扩增结果。同时，对扩增出的DNA片段进行克隆和鉴定。     

乳腺癌相关差异表达基因的筛选及分析

目的构建乳腺癌组织与癌旁正常乳腺组织差异表达的cDNA消减文库,筛选乳腺癌相关基因并进行分析。方法应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术对15对乳腺癌组织及正常癌旁乳腺组织进行差异基因的消减,构建cDNA消减文库,并转化大肠杆菌进行文库扩增,采用数字表法随机挑选克隆经PCR鉴定后,对200个阳性克隆插入片段的序列进行测定及同源性分析。结果建立了乳腺癌差异表达片段cDNA消减文库;通过测序和同源性分析,得到173个差异表达基因,其中26个与肿瘤发生发展相关;26个基因中有15个已被文献明确报道在乳腺癌组织或细胞中有差异表达。结论应用SSH技术成功建立了乳腺癌差异表达基因cDNA消减文库,为乳腺癌的发病机制研究及寻找潜在的治疗靶点提供了有力的支持。     

胃癌癌前病变相关研究进展

胃癌癌前病变是指胃黏膜上皮异型增生(不典型增生或上皮内瘤变),具有恶变倾向,与胃癌的发生关系密切且受多种因素影响和调控.在胃癌癌前病变的形成过程中,饮食和环境因素以及幽门螺杆菌感染占有重要位置.近年来,相关学者对胃癌癌前病变的发生及其癌变机制进行了深入研究,文章就该方面的研究进展作一综述.     

应用抑制性消减杂交技术分析涎腺腺样囊性癌转移相关基因

目的：克隆涎腺腺样囊性癌转移相关的基因。方法：应用mRNA抑制性消减杂交技术，研究涎腺腺样囊性癌高、低转移细胞系基因表达上的差异。结果：以高转移细胞ACC-M为测试子，低转移细胞ACC-2为驱赶子，获得高表达的基因序列有7个，均为已知序列同源基因。其中XAGE-1b基因为肿瘤睾丸抗原家族中的一个重要基因。结论：与ACC-2相比ACC-M中部分基因的高表达与涎腺腺样囊性癌高转移特性的获得有关，此结果为进一步探索腺样囊性癌肿瘤转移分子机理以及肿瘤转移控制和基因治疗提供了重要的依据。     

幽门弯曲菌与胃癌及胃异型增生

本文对102例胃癌及35例胃异型增生的活检标本进行了光镜及电镜观察,胃癌、胃异型增生的幽门弯曲菌(CP)检出率分别为52.94%、62.86%,与对照组22.0%比较,P<0.01。CP 均在癌旁及异型增生旁组织中检出。癌旁活动性胃炎的 CP 检出率明显高于非活动性胃炎,P<0.01,萎缩性胃炎 CP 检出率高于浅表性胃炎,0.01相似文献   

食管癌相关基因片段的筛选与鉴定

目的 :从已构建的中国人食管癌特异的消减cDNA文库中 ,初步筛选与鉴定食管癌相关基因片段。方法 :随机挑选 48个片段作反Northern印迹杂交分析 ,将杂交信号有差别的 15个片段送测序公司进行测序 ,用Gen BankBlast程序检索 ,以同源性很小的cDNA片段作为新基因的候选基因 ,观察其在食管癌组织和正常食管粘膜组织中的表达情况。结果 :所获得的 7个序列中 :3y5 9与已知基因同源性很小 ,且 3y5 9在 30例食管癌及其配对正常食管粘膜组织中 ,19例 (6 3.3 % )表达有差别 ,11例 (36 .7% )表达无差别 (P <0 .0 5 )。 3y88与已知基因geminin基因部分同源。另外 5个片段 3y2 0 ,3y14,3y90 ,3y91和 3y92分别与核糖体蛋白RpL7a,TLH2 9蛋白驱动子 ,Hsp70 /Hsp90 organizingprotein ,Keratin6 (KRT6C)和内膜蛋白等已知基因序列高度同源。结论 :3y5 9可能是与食管癌的发生、发展有关的新的候选基因。首次发现 ,geminin基因 ,核糖体蛋白RpL7a,TLH2 9蛋白驱动子 ,Hsp70 /Hsp90 organizingpro tein ,Keratin6 (KRT6C) ,内膜蛋白等已知基因可能与食管癌的发生发展有关     

应用抑制消减杂交克隆支气管哮喘病人嗜酸细胞差异表达基因

目的 探讨嗜酸细胞在支气管哮喘发病中的分子机制。方法 提取1名哮喘发作病人嗜酸细胞总RNA为实验子,治疗后作为对照的嗜酸细胞的RNA为驱动子。检测子、驱动子的总RNA由SMART cDNA合成方法合成双链cDNA,进而由抑制消减杂交方法获得消减杂交产物。消减杂交产物克隆到T载体建立消减文库,对部分克隆进行杂交筛选及序列比对。结果 消减杂交文库挑取400个克隆进行PCR扩增,阳性率约为80%。部分阳性克隆经2轮杂交筛选及序列对比后获得6个差异片段,涉及与编码炎症介质、细胞信号传导、能量代谢和细胞凋亡相关的基因。结论 抑制消减杂交技术有效地克隆了支气管哮喘发作期和缓解期嗜酸细胞差异表达的基因,为阐明嗜酸细胞在支气管哮喘发病中的分子机制奠定了良好的基础,并为临床防治支气管哮喘、寻找新的药物和方法提供了依据。     

哮喘发作与细胞骨架重建相关基因的差异表达

目的:研究外周血嗜酸性粒细胞(EOS)在哮喘发作时与细胞骨架相关基因的差异表达.方法:应用Super SMART cDNA synthesis技术从总RNA合成足量的双链cDNA. 经液相杂交消减两组共同序列,以抑制性PCR方式扩增差异表达序列. 构建上调与下调cDNA文库,菌落PCR扩增差异片段,应用差异筛选技术进一步鉴定差异表达基因并测序,结果通过核酸数据库进行同源性比较.结果:构建了高效的上调与下调消减cDNA文库,经鉴定及同源性分析有6个与细胞骨架重建有关,包括上调基因slingshot磷酸酶(SSH-2L),蛋白磷酸酶1β亚型(PP1Cβ),无功能糖基转移酶样蛋白(DOCK-8),蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型6 (PTPN6)与非受体型12(PTPN12);下调基因,肌凝蛋白调节轻链结合蛋白(MIR).结论:这些骨架重建相关基因的差异表达可能参与了哮喘发作,进一步进行功能研究可能为哮喘治疗提供新的作用靶点.     

猫视神经慢性损伤相关差异表达基因消减cDNA文库的构建

目的:构建猫视神经慢性损伤相关差异表达基因消减cDNA文库.方法:15只成年家猫随机分为正常对照组、视神经压迫4周组和视神经压迫8周组(n=5),压迫4周组和压迫8周组猫利用球囊植入法建立慢性视神经损伤模型.取各组动物视神经,TRIzol法提取总RNA,SMART技术合成cDNA,随后利用抑制消减杂交方法分离受压4周和8周视神经中差异表达基因的cDNA片段,将其与T载体进行T/A连接构建文库,将连接产物用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行文库扩增和蓝白斑筛选,随机挑取300个白色克隆进行菌落PCR鉴定.结果:菌落PCR扩增显示每个文库80%的克隆中均有200～800 bp的插入片段.结论:成功构建猫视神经慢性损伤相关差异表达基因消减cDNA文库,为进一步筛选、克隆慢性视神经损伤相关差异表达基因奠定了基础.     

胃黏膜上皮异型增生与早期胃癌关系的临床病理研究

目的 利用病理形态学诊断标准，随访观察胃黏膜上皮异型增生与早期胃癌的关系。方法 采集我院10年间2860例胃黏膜活检标本，从中检出66例各类型增生为随访观察对象。结果 各类型异型增生均可癌变，但以重度异型增生癌变率高。结论 轻中度异型增生为可逆性病变。重度异型增生为不可逆病变或正在癌变中的黏膜变化。     

Preliminary observation of genes specifically expressed in brain tissues during stroke-like episodes in rats

Apoplexyisacomplexdisordercausedbyacom-binationofgeneticandenvironmentalfactors,whichleadstoneurondeath,lossofmotor,sensoryand/orsomeotherfunctions,withahighestmortality.Clini-calandepidemiologicalstudieshaveprovidedstrongevidencefortherelationshipbetweenhypertensionandstroke.Hypertensionisgenerallyacceptedasadiseaseresultingfrommultiplefactorswithcomplexinteractions[1].Weestablishedaratmodelofstroke,andthegenesspecificallyexpressedinbraintissuesofratsoftheapoplexygroupandthecontrolwerestud-ie…     

人脐静脉内皮细胞脂多糖刺激后上调基因表达谱的分析

目的 对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)受脂多糖(LPS)刺激后上调基因表达谱进行筛选及分析。方法 以受LPS刺激HUVEC为实验方，末刺激别HUVEC为驱使方，进行抑制消减杂交(SSH)建立消减cDNA文库，经菌落原位斑点杂交筛选文库后将阳性克隆测序和同源性分析，并用RT-PCR验证新的cDNA序列。结果 共获得25条上调表达的基因，分别与炎症反应、细胞骨架重构、细胞生长和凋亡、胞内信号转导相关，并克隆到3条新基因表达序列标签(EST)，RT-PCR验证了这些新EST序列只在LPS刺激的内皮细胞中表达。结论 抑制消减杂交有效地克隆了人脐静脉内皮细胞LPS刺激后上调表达基因，有助于阐明LPS直接激活血管内皮细胞的分子机制。