Ca2+调节人表皮角质形成细胞中PAI-3的表达

目的探讨Ca2 对人表皮角质形成细胞(keratinocyte, KC)中PAI-3表达的调节作用.方法利用免疫细胞化学、RT-PCR方法,检测高低Ca2 浓度作用下,培养的人表皮KC中PAI-3的表达变化.结果 PAI-3 mRNA及蛋白质在高低Ca2 浓度下培养的人表皮KC中均有表达,并且高Ca2 浓度培养条件下较低Ca2 浓度下明显增强.PAI-3阳性染色在低Ca2 浓度培养下主要位于核膜周围,而在高Ca2 浓度培养条件下主要位于细胞质.结论 Ca2 调节人表皮KC中PAI-3的表达,PAI-3可能具有调节KC分化的作用.     

人表皮角质形成细胞中PAI-3/PCI的表达及作用

目的探讨人表皮角质形成细胞(KERATINOCYTE,KC)中,PAI-3/PCI的表达及作用。方法利用免疫细胞化学、RT-PCR方法,检测高CA2 浓度作用下,培养的人分化表皮KC及KC提取物角质壳中PAI-3的表达变化。结果高CA2 浓度下培养24H后,分化标记物K10弱阳性表达,PAI-3呈阳性表达;培养48H后,K10强阳性表达,而PAI-3的阳性表达明显增加,72H后,表达开始降低,在低CA2 浓度下阳性染色主要位于细胞核膜周围而高CA2 浓度下主要位于细胞质,同时,PAI-3存在终末分化KCS角质壳中。结论人表皮KC分化过程中,PAI-3的表达随着分化的增加而增加,PAI-3存在终末分化KCS角质壳蛋白中,表明PAI-3参与KC分化的作用。     

DC-LAMP与DC-SIGN在寻常型银屑病皮损中的表达

目的  检测寻常型银屑病皮损中树突细胞溶酶体相关膜蛋白(DC-LAMP) 、树突细胞特异性非整合素(DC-SIGN)的表达,探讨其在银屑病发病机制中的作用。方法  采用免疫组化SP法检测DC-LAMP、DC-SIGN在寻常型银屑病皮损与正常皮肤的表达。结果   DC-LAMP在银屑病表皮角质形成细胞（KC）基底层和棘层以及真皮树突细胞（DC）均高表达,在正常皮肤表皮KC基底层和真皮DC中呈低表达(P<0.01);DC-SIGN在银屑病表皮KC和真皮DC中均高表达,在正常皮肤表皮KC基底层和真皮DC中低表达(P<0.01)。结论  寻常型银屑病发病与DC LAMP、DC-SIGN有关。DC、KC可能通过表达DC-LAMP和DC-SIGN发挥抗原递呈作用,参与银屑病免疫发病过程。     

TIG2在寻常型银屑病中的表达变化及意义

目的 研究TIG2在寻常型银屑病中的作用机制.方法 用免疫组化和原位杂交的方法检测正常组织,未受累组织和银屑病皮损中TIG2蛋白和mRNA的表达变化.结果 在正常组织及未受累组织中,TIG2表达于表皮全层,在银屑病周围皮损中,可见TIG2阳性染色于棘层上部,在棘层下部及基底层中表达较少,而在银屑病中间皮损中无表达.TIG2在正常和未受累皮肤基底层中的表达高于其在银屑病边缘皮损基底层中的表达(p<0.01);TIG2在正常皮肤和未受累皮肤中的表达高于其在银屑病中间皮损中的表达(P<0.01);银屑病边缘皮损基底上层中的表达高于其在银屑病中间皮损中的表达(P<0.01).结论 TIG2可保持表皮正常分化功能,TIG2的降低可能参与银屑病的发生和发展.     

TIG2在皮肤鳞癌中的表达及意义

目的:研究TIG2(tazarotene induced gene-2)在皮肤鳞癌中的作用机制.方法:用免疫组化和原位杂交的方法检测正常皮肤组织,未受累组织及鳞癌皮损中TIG2蛋白和mRNA的表达变化.结果:TIG2蛋白和mRNA表达于正常组织及未受累组织的表皮全层;在鳞癌的边缘皮损中,可见TIG2表达于角质层,棘层上中部,而不表达于棘层下部及基底层;在Ⅰ-Ⅱ期鳞癌中,TIG2可轻度表达于分化较好的角化珠周围;而在Ⅲ～Ⅳ期鳞癌中无表达.在正常组织和未受累皮肤中,TIG2的表达高丁鳞癌组织中的表达(P<0.01);边缘皮损基底层中的表达低于正常组织及未受累组织基底层中的表达(P<0.01);在Ⅲ～Ⅳ期鳞癌中的表达明显低于鳞癌边缘皮损中的表达(P<0.01).结论:TIG2可能参与鳞癌的发生和发展.     

AnnexinⅡ在已分化人表皮角质形成细胞中表达的研究

目的探讨annexinⅡ在已分化人表皮角质形成细胞(keratinocyte,KC)中的表达.方法采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)技术检测早、中、晚期人胚胎表皮KC及成人表皮KC中annexinⅡ蛋白的表达.结果①annexinⅡ在人胚胎期表皮KC中的表达随胚胎的发育逐渐增强,在成人期表皮KC中的表达明显高于胚胎期.②annexinⅡ呈胞膜方式表达,主要分布于基底上层的分化KC中.结论annexinⅡ可能参与表皮KC分化的调控.     

卵巢癌组织中uPA与PAI-1 mRNA表达及意义

目的 探讨尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）和纤溶酶原激活剂抑制物-1（PAI—1）mRNA在卵巢癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用逆转录-聚合酶链反应技术,检测38例卵巢癌、21例卵巢良性上皮性肿瘤及17例正常卵巢组织中uPA及PAI-1 mRNA的表达,并分析其与病理分化程度的相关性。结果 uPA及PAI—1 mRNA在卵巢癌中的表达水平均较卵巢良性上皮性肿瘤、正常卵巢组织显著升高（F=184．51、51．00,q=11．34～26．69,P〈0．05）。在不同分化程度的卵巢癌组织中uPA及PAI-1 mRNA的表达量随肿瘤分化程度的降低而增加（F=110．62、38．43,q=3．10～6．86,P〈0．05）。结论 卵巢癌组织中uPA及PAI—1 mRNA呈高表达,且与卵巢癌的病理分化程度相关。     

成纤维细胞生长因子10 mRNA在寻常型银屑病皮损中的表达

目的:研究成纤维细胞生长因子10 mRNA在寻常型银屑病皮损中的表达,探讨其在银屑病发病中的作用机制.方法:应用原位杂交法检测FGF10 mRNA在22例正常皮肤组织、银屑病皮损和未受累皮肤中的表达和分布.结果:原位杂交法检测发现,在22例正常皮肤组织、银屑病皮损和未受累皮肤表皮的全层或表皮中下层可见FGF10 mRNA表达(95%);在正常皮肤表皮的基底层或少量细胞内可见FGF10 mRNA的表达(5%);在寻常型银屑病非皮损表皮的中下层或个别细胞内可见FGF10 mRNA的表达(82%).寻常型银屑病皮损表皮中FGF10 mRNA的表达明显高于正常对照组(P＜0.05).结论:FGF10 mRNA在银屑病发病早期阶段的表达增高可能与银屑病的早期发病有关.     

骨关节炎滑膜组织中uPA、uPAR及PAI-1 mRNA的表达及其临床意义

目的:检测尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA) 、其受体(uPAR)及其抑制剂(PAI-1)mRNA在骨关节炎(OA)滑膜中的表达,探讨uPA、uPAR及PAI-1 基因在OA 细胞外基质降解中的作用. 方法:采用RT-PCR检测了36例骨关节炎(OA) 和21 例正常滑膜组织中uPA、uPAR及PAI-1 mRNA 的表达情况.结果:实验组总共36例,经RT-PCR实验,uPA阳性例数21例,uPAR阳性例数17例,PAI-1阳性例数15例,对照组创伤患者总共21例,uPA、uPAR及PAI-1阳性例数均为2例;再将实验组按年龄及软骨破坏程度分组,三种RNA表达除按年龄分组外差异均有统计学意义(P<0.05).结论:OA滑膜组织存在高水平uPA、uPAR及PAI-1mRNA 的表达,提示在OA的发生发展过程中, uPA、uPAR及PAI-1 基因起着重要作用,为骨关节炎的治疗提供了一个崭新的思路.     

子宫内膜癌组织uPA和PAI-1 mRNA表达及其意义

目的 探讨纤溶酶原激活因子(uPA)及纤溶酶原抑制因子-1(PAI-1) mRNA在子宫内膜癌组织表达及意义.方法 采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测35例子宫内膜癌、18例子宫内膜增生和16例正常子宫内膜组织中uPA及PAI-1 mRNA的表达情况.结果 uPA 、PAI-1 mRNA在子宫内膜癌组织中表达水平均显著高于子宫内膜增生组织及正常子宫内膜组织(F=55.22、51.78,q=11.696～12.218,P<0.01);而子宫内膜增生组织中uPA 、PAI-1 mRNA的表达与正常子宫内膜组织比较,差异无统计学意义(q=0.215、0.441,P>0.05).子宫内膜癌组织中uPA、PAI-1 mRNA的表达水平随手术病理分期(F=17.28、21.88,q=9.347～84.716,P<0.01)及组织学分级的增高(F=31.22、27.95,q=6.960～10.931,P<0. 01)、肌层浸润深度的增加(t=2.885、3.316,P<0.01)及淋巴结的转移显著增高(t=5.177、3.954,P<0.01),与病人病理类型无关(t=0.060、0.115,P>0.05).结论 子宫内膜癌组织uPA及PAI-1 mRNA的高表达与子宫内膜癌发生、发展及浸润转移有一定关系,并且与疾病进展、预后有关.     

食管鳞状细胞癌组织中uPA和PAI-1表达与浸润转移及预后的关系研究

目的探讨食管鳞状细胞癌组织中尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）和纤溶酶原激活物抑制剂1（PAI-1）基因表达及其对预后的影响。方法应用免疫组织化学方法检测uPA、PAI-1基因在80例食管鳞癌患者及20例食管癌旁正常组织中的表达,并应用Cox回归模型和Kaplan-Meier生存曲线检测分析其与患者预后的关系。结果在食管癌组织中uPA、PAI-1蛋白表达显著高于食管正常黏膜组织（P〈0．05）。uPA、PAI-1的表达与食管癌浸润深度、淋巴结转移有关（P〈0．05）,但与年龄、民族无关。uPA和PAI-1的表达呈正相关（r=7．092,P〈0．05）。单因素Kaplan-Meier生存分析表明,10年总生存率为20％。食管癌uPA、PAI-1阳性表达组较阴性表达组有生存优势,但差异无统计学意义。Cox模型多因素分析表明,uPA、PAI-1不是影响生存期的独立因素,而肿瘤浸润深度和转移是影响生存期的独立因素。结论uPA、PAI-1蛋白表达与食管癌的发生发展有-定的关系,并可能成为判断预后的指标之一。     

Clinical significance of the uPA system in gastric cancer with peritoneal metastasis

Background

It has been demonstrated that urokinase-type plasminogen activator (uPA) is involved in tumor cell metastasis by degrading the extracellular matrix. However, there is little direct evidence of clinical uPA system expression in peritoneal metastatic tissues of gastric cancer. The objective of this study was to investigate uPA system expression in peritoneal tissues of peritoneal and nonperitoneal metastasis patients, and to explore the diagnostic value of the uPA system.

Methods

Expressions of uPA, uPAR, and PAI-1 were measured by semi-quantitative RT-PCR and ELISA. uPA activity was detected using a uPA activity kit.

Results

There was no significant difference in uPA, uPAR, and PAI-1 expression in two types of peritoneal tissue in seven patients with peritoneal metastasis. However, uPA, uPAR, and PAI-1 expressions in peritoneal metastatic lesions were significantly higher than those in normal peritoneal tissues of 24 nonperitoneal metastasis patients (P <0.05). Moreover, no statistical discrepancy of uPA activity was observed in various different tissues.

Conclusions

The expression of the uPA system positively correlates with peritoneal metastasis of gastric cancer. This expression difference in peritoneal or nonperitoneal metastasis patients may provide a reference for diagnosis of peritoneal metastasis.     

Gene expression of fibrinolytic factors urokinase plasminogen activator and plasminogen activator inhibitor-1 in rabbit temporo-mandibular joint cartilage with disc displacement

Background The urokinase plasminogen activator system is believed to play an important role in degradation of the extracellular matrix associated with cartilage and bone destruction; however its precise roles in temporomandibular disorders have not yet been clarified. The aims of this study were to investigate the gene expression of fibrinolytic factors urokinase plasminogen activator (uPA) and plasminogen activator inhibitor-1(PAI-1) in the articular cartilage of rabbit temporomandibular joint (TMJ) with disc displacement (DD) and to probe the relationship between fibrinolytic activity and cartilage remodeling.Methods Disc displacement of right joints was performed in 36 of 78 rabbits under investigation. The animals were sacrificed at 4 days and 1, 2, 4, 8 and 12 weeks after surgery, respectively. The right joints of these animals were harvested and processed for the examination of mRNA expression of uPA and PAI-1 in articular cartilage using in situ hybridization techniques.Results The expression of uPA and PAI-1 was co-expressed weakly in the chondrocytes from transitive zone to hypertrophic zone and mineralized zone, while no hybridizing signals were shown in proliferative zone and superficial zone in control rabbits. The most striking was the up-regulation of uPA and PAI-1 mRNA in 4-day rabbits postoperatively at the onset of cartilage degeneration. The strongest hybridizing signals for uPA and PAI-1 were seen in 2-week rabbits postoperatively. After 2 weeks, the expression of uPA and PAI-1 began to decrease and reached nearly normal level at 12 weeks.Conclusions The expression of the uPA/PAI-1 system coincides with the pathological changes in condylar cartilage after DD. The uPA/PAI-1 system may be one of the essential mediators in articular cartilage remodeling.     

Caspase3、Bcl-2和PCNA在银屑病皮损组织中的表达

目的　探讨银屑病发生发展中细胞增殖和凋亡相关指标表达的趋势。方法　应用免疫组化技术检测 30例寻常型银屑病皮损、邻近皮肤及 10例正常皮肤中PCNA、Bcl - 2、Caspase3的表达。结果　在正常表皮中Bcl - 2和PCNA在基底层阳性表达 ,但在寻常型银屑病皮损中Bcl- 2表达明显低于正常皮肤组 ,皮损处与邻近皮损处表达、邻近皮损处与正常皮肤表达比较有统计学差异 (均P <0 0 5 ) ;PCNA在银屑病皮损处为角质形成细胞广泛阳性表达 ,皮损处与邻近皮肤的表达、邻近皮肤与正常皮肤相比有统计学差异 (P <0 0 1) ;Caspase3在寻常型银屑病皮损处与邻近皮肤及正常皮肤的表达无统计学差异 (P >0 0 5 )。结论　银屑病时 ,PCNA过度表达 ,Bcl - 2低表达 ,表明细胞过度增殖 ,凋亡基因Caspase3表达无统计学差异     

uPA和PAI-1基因克隆及真核表达载体的构建及鉴定

目的：克隆人卵巢上皮癌组织uPA和PAI-1基因cDNA全长,构建表达uPA和PAI-1基因的真核表达载体。方法：采用RT-PCR技术从人卵巢上皮癌组织总RNA中逆转录uPA和PAI-1基因的cDNA全长,克隆到pGEM-TEasy Vector上,通过酶切和测序进行鉴定;酶切后与真核表达载体pcDNA3.1/myc-his（-）B连接,酶切及测序再次鉴定;采用脂质体法将重组质粒DNA转染至卵巢癌上皮细胞SKOV3细胞;采用有限稀释法和G418分别加压筛选并培养SKOV3-uPA和SKOV3-PAI-1细胞及对照细胞;Western blot法检测转染前后SKOV3细胞uPA和PAI-1基因的表达。结果：成功扩增出uPA和PAI-1基因的cDNA的全长,并克隆入T载体,DNA测序证实序列正确,通过连接成功构建含正确目的基因的表达载体pcDNA3.1-uPA和pcDNA3.1-PAI-1,Western blot能检测到uPA和PAI-1基因蛋白分别在SKOV3-uPA和SKOV3-PAI-1细胞中的表达。结论：成功构建了uPA和PAI-1表达基因的真核表达载体,为进一步研究uPA和PAI-1基因在卵巢癌侵袭转移中的作用提供了实验基础。     

uPA、PAI-1蛋白在大肠癌中的表达及其与预后的关系

目的 探讨尿激酶型纤溶酶原激活物（urokinase-type plasminogen activator,uPA）、纤溶酶原激活物抑制物（plasminogen activator inhibitor type 1,PAI-1）蛋白在大肠癌中的表达及其与大肠癌侵袭、转移的关系.方法 采用免疫组化SP法对uPA、PAI-1蛋白在29例正常大肠黏膜、28例大肠腺瘤、51例无淋巴结转移大肠癌、50例有淋巴结转移大肠癌样本中的表达情况进行检测.结果 （1） uPA及PAI-1蛋白在大肠癌发生发展过程中表达均逐渐升高,差异有统计学意义（P＜0.05）,且均与大肠癌是否有淋巴结转移有负相关关系（P＜0.05,rs＇=-0.7408及P＜0.05,rs＇=-0.7807）;与分化程度之间差异有统计学意义（P＜0.05）,而与浸润深度之间差异无统计学意义; （2）在大肠癌中,uPA及PAI-1蛋白的表达呈正相关关系（P＜0.05,rs＇=0.2043）; （3）应用Cox比例风险模型回归分析,显示uPA的表达程度是影响结直肠癌患者术后生存的因素之一,PAI-1蛋白表达程度和患者年龄是影响结直肠癌患者术后生存的因素.结论 uPA及PAI-1蛋白在大肠癌发生发展中起一定的作用,是影响大肠癌预后的一个因素.     

实验性肺癌尿激酶型纤溶酶原激活物和抑制物的表达及意义

目的 研究尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase type plasminogen activator,uPA)和抑制物-1(PA inhibitor．PAI-1)在实验性肺癌的发生、发展及侵袭转移过程中的作用。方法 将Lewis肺癌瘤株腹腔注射C57／BL小鼠．于接种后9、17、13天各处死6只．取瘤、肺组织匀浆．低温离心取上清液．采用酶联免疫吸附(enzyme-liked immunosorbent assav．ELISA)法检测血浆和组织中uPA和PAI-1的含量．按环磷酰胺 刺五加组、环磷酰胺组、刺五加组、肿瘤对照组和正常对照组分别进行对比分析。结果 肿瘤组uPA和PAI-1含量高于正常对照组;环磷酰胺一刺五加组血浆、瘤和肺组织中uPA和pAI-1活性低于肿瘤组。结论 检测实验性肺癌uPA和PAI-1含量可能对其侵袭转移、预后等有一定的参考价值。     

PUVA治疗银屑病Caspase3、bcl-2和PCNA在皮损组织中的表达

目的探讨银屑病经光化学疗法（PUVA）治疗后细胞增殖和凋亡相关指标表达的趋势。方法应用免疫组化技术检测30例寻常型银屑病经PUVA治疗前后及10例正常皮肤中PCNA、Bcl-2、Caspase3的表达。结果在正常表皮中Bcl-2和PCNA在基底层阳性表达，但在寻常型银屑病皮损中Bcl-2表达明显低于正常皮肤组，皮损经PUVA治疗后的表达恢复，有显著性统计学意义（P〈0．01）；PCNA在银屑病皮损为角质形成细胞广泛阳性表达，皮损经PUVA治疗后表达恢复，治疗前后有显著性统计学意义（P〈0．01）；Caspase3在寻常型银屑病皮损与正常皮肤的表达无显著性统计学意义（P〉0．05），皮损处与经PUVA治疗后皮肤的表达相比有显著性统计学意义（P〈0．01）。结论银屑病经PUvA后，Caspase3表达增加，PCNA、Bcl-2、表达恢复正常。     

Effects of N-(4-hydroxyphenyl) retinamide on urokinase-type plasminogen activator and plasminogen activator inhibitor-1 in prostate adenocarcinoma cell lines

Previous investigations have demonstrated that a synthetic retinoid, N-(4-hydroxyphenyl) retinamide (4-HPR), inhibits the invasion of prostate adenocarcinoma in vitro. Urokinase-type plasminogen activator (uPA) is a prerequisite for tumor invasion. The purpose of this study was to evaluate the effects of 4-HPR on uPA and plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) in prostate cancer. Human prostate adenocarcinoma cell lines, TSU-PR1 and PC3, were grown in serum-free media containing 4-HPR. Cellular mRNA and protein were subsequently extracted. Northern blot analysis, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and chromogenic functional analysis were performed on the samples. Administration of 10(-6) M 4-HPR for 3 days resulted in an increase in uPA mRNA expression (TSU-PR1: 391%, PC3: 356%), and a simultaneous increase in PAI-1 mRNA expression (TSU-PR1: 217%, PC3: 235%) was observed. ELISA concomitantly demonstrated a significant increase (p < 0.05) in uPA protein in the conditioned media (TSU-PR1: 134%, PC3: 139%) and cell lysates (TSU-PR1: 284%, PC3: 255%). Both cell lines demonstrated a significant increase (p < 0.05) in PAI-1 protein in the conditioned media (TSU-PR1: 152%, PC3: 167%) and cell lysates (TSU-PR1: 170%, PC3: 222%). Concentrations below 10(-6) M failed to alter the protein production of either uPA or PAI-1. The functional uPA assay demonstrated a reduction of the proteolytic activity of uPA (TSU-PR1: 13%, PC3: 7%) in cell lysates of 10(-6) M 4-HPR (p < 0.05), while there was minimal uPA activity in the conditioned media. 4-HPR stimulates a paradoxical increase in uPA and PAI-1, but the anti-invasive effects of 4-HPR are consistent with the increase in both uPA and PAI-1, resulting in an overall reduction of functional uPA activities.     

卵巢癌组织中尿激酶型纤溶酶原激活物、受体及其抑制物-1的表达以及与化疗耐药的关系

目的探讨卵巢上皮性癌(卵巢癌)组织中纤溶酶原激活系统--尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)、受体(uPAR)及其抑制物-1(PAI-1)的表达与卵巢癌化疗耐药的关系及其临床意义.方法:卵巢癌患者77例,根据临床治疗和随访结果分为化疗耐药组(26例)与非耐药(51例)组,采用免疫组化法测定两组癌组织中uPA、PAI-1和uPAR的表达,并探讨其与化疗耐药的关系;采用多因素Logistic回归分析法探讨卵巢癌患者的年龄、手术病理分期、病理类型及分级、残留灶直径、化疗方案和三者表达与卵巢癌化疗耐药的关系;同时对预后进行多因素的COX生存分析.结果:uPA、PAI-1的阳性表达率,耐药组分别为96%(25/26)和92%(24/26),均明显高于非耐药组的80%(41/51)和82%(42/51,P值均＜0.01);uPAR的阳性表达率,耐药组为31%(8/26),非耐药组为35%(18/51),两组差异无显著性(P=0.668).多因素分析显示uPA、PAI-1表达与卵巢癌的手术病理分期均为与耐药(P值均＜0.05)及预后(P值分别为0.045、0.031、0.001)相关的独立危险因素.结论:卵巢癌组织中uPA、PAI-1的高表达是卵巢癌化疗耐药及预后的危险因素.