癌痛消药物血清对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404体外增殖及凋亡的影响

目的观察癌痛消药物血清对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404体外增殖及凋亡的影响,探讨其作用机制。方法癌痛消饱和溶液按86.4、43.2、21.6 g/kg剂量给予SD大鼠灌胃1周,取血制备含药血清,加入SMMC-7721及Bel-7404肝癌细胞培养液。不同浓度癌痛消药物血清处理人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404肝癌细胞后,MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞术检测细胞凋亡。结果体外研究显示,癌痛消方药物血清低、中、高剂量组对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404均具有不同程度的抑制作用,且这种抑制作用在一定范围内呈浓度依赖性,癌痛消药物血清对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404有促凋亡作用。结论癌痛消方药物血清在体外对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404肝癌细胞有抑制增殖作用和促凋亡作用。     

白藜芦醇联合放疗对肝癌Bel-7404细胞体外凋亡的影响

目的探讨不同剂量白藜芦醇联合不同剂量放疗对肝癌Bel-7404细胞凋亡的影响。方法用MTT法检测不同浓度白藜芦醇(0,25,50,100μmol/L)对肝癌Bel-7404细胞增殖的影响,用荧光显微镜检测不同浓度白藜芦醇细胞凋亡情况,寻找恰当的白藜芦醇的浓度进行下一步实验。按照不同的放射治疗剂量分组如下:A组予单纯白藜芦醇干预组;B组行放射治疗剂量2 Gy+白藜芦醇干预;C组行放射治疗剂量4 Gy+白藜芦醇干预;D组行放射治疗剂量6 Gy+白藜芦醇干预;检测肿瘤细胞的增殖、运动侵袭、细胞凋亡及各组细胞MMP-2、VEGF的表达情况。结果检测结果显示,白藜芦醇可以有效抑制肝癌Bel-7404细胞生长、促进肝癌Bel-7404细胞凋亡,呈浓度依赖关系。根据实验结果,选择25μmol/L白藜芦醇进行体外放疗的实验。与A组相比,B、C、D组对肝癌Bel-7404细胞的增殖凋亡作用均有显著性差异(P均0.05);B组与C、D组有显著性差异(P均0.05),C组与D组无显著性差异(P0.05)。结论不同剂量放疗联合25μmol/L白藜芦醇均可提高放射治疗后肝癌Bel-7404细胞凋亡率,降低肿瘤侵袭性;白藜芦醇可能具有放疗增敏的作用。     

走马胎生物转化产物S1的抗肿瘤活性及对Bel-7402肝癌细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:研究走马胎中的生物转化产物S1对不同肿瘤细胞株增殖的影响,并检测S1对肝癌细胞Bel-7402凋亡及周期的影响。方法:利用燕麦曲霉对走马胎中的化合物Ag3进行生物转化,得到新的化合物S1。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT比色法)检测S1的抗肿瘤活性;筛选对S1较敏感的细胞株,观察细胞形态学变化、检测细胞凋亡和细胞周期。结果:S1作用于Bel-7402、MCF-7、A549等6株肿瘤细胞后的半数抑制浓度(IC50)范围为12.8~27.3μmol/L,其中Bel-7402细胞株对S1最为敏感。含S1培养基(终浓度为0、5、10、20μmol/L)干预Bel-7402细胞24h后,早期凋亡较明显,凋亡率分别为0.91%、3.13%、43.26%、71.34%,中、高剂量组凋亡最为明显,凋亡率具有明显的浓度依赖性,各剂量组与阴性对照组比较均有显著差异;S1将细胞阻滞于G2/M期,该期细胞明显增多,S期细胞明显减少,通过抑制细胞增殖达到抗肿瘤活性。结论:S1对6种肿瘤细胞株均有一定的抑制作用,对Bel-7402细胞的抑制作用较强,诱导Bel-7402细胞的凋亡机制可能与阻滞细胞周期相关。     

复合中药多糖对人肝癌Bel-7402细胞株抗癌作用研究

目的：探讨复方中药多糖对人肝癌Bel-7402细胞株的影响。方法：采用T淋巴细胞转化试验观察复合多糖对人肝癌小鼠细胞，屯疫功能的影响；采用MTT法观察复合多糖对Bel-7402株的细胞增殖抑制；采用流式细胞仪观察复合多糖对Bel-7402株细胞凋亡的影响。结果：复合多糖为1．5、0．75、0．25g，kg剂量时可提高Bel-7402小鼠的淋巴细胞转化功能；复合多糖在40、20mg／L浓度时对Bel-7402细胞株增殖具有抑制作用；复合多糖浓度在40、200、10mg／L时作用24、48、72h使Bel-7402株细胞凋亡率增加。结论：复合多糖可提高Bel-7402小鼠的淋巴细胞转化功能；对Bel-7402细胞株增殖具有抑制作用；使Bel-7402株细胞凋亡率增加，并呈现时间、浓度依赖性。     

蒲葵根提取物的体外抗肿瘤实验研究

目的:用体外细胞培养法研究蒲葵根提取物对七种肿瘤细胞株生长的抑制作用。方法:采用MTT法、细胞集落形成法、生长曲线法测定蒲葵根提取物对白血病细胞株L1210和P388D1、宫颈癌细胞株Hela、人胃癌细胞株SGC7901、黑色素瘤细胞株B16、神经性肿瘤细胞株NG108-15、人肝癌细胞株Hele 7404生长的抑制情况。结果:MTT法、细胞集落形成法、生长曲线法测定的结果均显示,当蒲葵根提取物浓度在5.0μg/m l以上时,7类肿瘤细胞株的生长均受到明显抑制。结论:蒲葵根提取物在体外具有抗肿瘤作用。     

沙枣对人肝癌Bel-7404细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察沙枣提取物对人肝癌Bel-7404细胞增殖抑制作用及其对细胞凋亡的影响。方法:以没食子酸为对照品,采用Folin-Ciocalteu法测定沙枣提取物各分离组分的总酚含量。通过MTT法,观察各组分对Bel-7404细胞增殖抑制作用。选取对Bel-7404增殖抑制活性最强的20%乙醇洗脱组分,设50、100、150μg/ml剂量组,采用Ainexin V-FITC/PI双染法,流式细胞仪检测其诱导细胞凋亡,并采用Hoechst 33258荧光染色法观察细胞形态变化。结果:沙枣提取物各分离组分对Bel-7404增殖抑制作用各不相同,其中20%乙醇洗脱组分的50、100、150μg/ml剂量组的凋亡率分别为29.8%、58.7%和76.2%;凋亡细胞的细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光。结论:沙枣提取物可抑制Bel-7404细胞增殖,诱导其凋亡,并与总酚含量呈现一定的量效关系。     

乌拉甘草有效成分对人体4种肿瘤细胞增殖与凋亡的影响

目的测定乌拉甘草提取物对人体4种肿瘤细胞的抑制效果。方法应用MTT法测定甘草水提物（甘草酸）与醇提物（总黄酮）对宫颈癌细胞株（Hela）、乳腺癌细胞株（Bcap-37）、胃癌细胞株（MGC-803）以及肝癌细胞株（Bel-7404）增殖的抑制作用；运用Hochest 33258荧光染色剂测试其诱导细胞凋亡的生物学效应。结果甘草酸的抑瘤效果表现出浓度依赖性，与浓度呈正相关关系。高浓度甘草酸（1000μg／ml）对Bcap-37，Hela，MGC-803的增殖均有较强的抑制作用，其抑制率分别为76．37％，79．71％，71．06％，对Bel—7404细胞增殖的抑制作用较差，抑制率仅为24．29％。在一定浓度范围内（200～1000μg／ml），其对4种肿瘤细胞增殖的抑制率与样本浓度大小呈负相关关系，200μg／ml剂量的甘草黄酮抑制肿瘤细胞增殖的效果最佳，其对Bcap-37，Hela，Bel-7404，MGC-803等4种肿瘤细胞增殖的抑制率分别为79．55％，79．98％，67．91％以及37．86％。甘草酸、甘草黄酮均能有效诱导这4种肿瘤细胞发生凋亡。结论甘草酸和甘草黄酮诱导细胞凋亡是其显著抑制肿瘤细胞增殖的重要途径。     

徐长卿水提物抗肝癌作用初探

目的：通过体外实验探讨徐长卿水提物抗肝癌的作用。方法：以徐长卿水提物作用于体外培养的Bel-7407细胞株,观察其对Bel-7407细胞生长曲线的影响及评价其抗肝癌作用。结果：徐长卿水提物浓度为80g/L和40g/L时,能使Bel-7407细胞的生长受到抑制,20g/L和10g/L时对细胞增殖没有明显的抑制作用。结论：徐长卿水提物浓度为80g/L和40g/L时,在体外细胞培养中对Bel-7407细胞增殖有较好的抑制作用。     

余甘子叶提取成分没食子酸的体外抗肿瘤实验研究

目的 探讨从余甘子叶提取分离得到的活性成分没食子酸的抗肿瘤作用.方法 采用MTT法和细胞集落形成法观察没食子酸对人肝癌细胞株Bele7404、人胃癌细胞株SGC7901、小鼠肝癌细胞株H22和小鼠肉瘤细胞株S1804种肿瘤细胞的体外抑制作用.结果 MTT法和细胞集落形成法测定的结果均显示,当没食子酸浓度在2.5 μg/ml 以上时,4种肿瘤细胞株的生长均受到明显抑制.结论 余甘子叶提取成分没食子酸在体外对不同组织来源的肿瘤细胞增殖有明显的抑制作用.     

蟾酥对白血病CEM细胞的抑制作用及诱导其凋亡的研究

目的研究蟾酥对CEM细胞的抑制作用及其机制。方法应用MTT比色试验观察蟾酥对CEM细胞的抑制作用;采用光镜、电镜技术观察细胞形态结构的改变;利用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率。结果①蟾酥能明显抑制CEM细胞的生长,药物浓度在0.032μg/ml即具有显著的抑制作用,抑制率呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为0.16μg/ml,当药物浓度为4μg/ml,作用72 h后,其抑制率达85.50%;②细胞形态学改变,细胞体积缩小,细胞膜皱缩,染色质明显浓缩,核聚集,边聚于核膜下呈新月形等典型的凋亡特征;③流式细胞术证实蟾酥能诱导CEM细胞凋亡,凋亡率也呈剂量和时间依赖性。结论蟾酥对白血病CEM细胞的生长具有极强的抑制作用,诱导细胞凋亡是其机制之一。     

蜈蚣提取液对裸鼠移植肝癌治疗作用研究

目的探讨蜈蚣提取液体内对肝癌的治疗作用及其机制。方法建立裸鼠Bel-7404人异位肝癌移植模型,以蜈蚣提取液予以灌服,观察肿瘤生长、裸鼠胸腺与脾质量及肝癌转移情况。结果裸鼠Bel-7404人异位肝癌移植模型成功率100%。蜈蚣提取液对裸鼠Bel-7404移植瘤有明显抑制作用,在移植后第31天,对照组的肿瘤体积为(1 187.5±117.4)mm3,治疗组为(506.1±65.7)mm3;裸鼠处死后,对照组的肿瘤质量为(1 059±125.2)mg,治疗组为(647±122.89)mg,抑制率达38.91%。治疗组胸腺指数为(2.15±0.43)%,脾指数为(10.63±3.7)%,对照组胸腺指数(0.81±0.27)%,脾指数为(7.90±2.58)%,2组比较有显著差异性。结论蜈蚣提取液能抑制裸鼠Bel-7404移植瘤的生长,机制为其能提高荷瘤裸鼠的胸腺指数及脾指数,具有增强裸鼠免疫功能作用。     

苦参碱体外诱导人肝癌细胞系Bel-7404分化及机制

目的:研究苦参碱对人肝癌细胞系体外诱导分化作用,并探讨其作用机制。方法:不同浓度苦参碱体外作用于Bel-7404细胞,噻唑蓝比色法(MTT法)绘制生长曲线,光镜下观察细胞形态变化,分别以软琼脂集落形成试验、细胞黏附试验、运动试验、侵袭试验检测细胞生物学特性变化,以流式细胞仪分析细胞周期变化。结果:0.5-1.0g/L苦参碱作用于Bel-7404细胞后,明显抑制细胞增殖,细胞形态向正常转化,克隆形成率显著降低,细胞黏附力明显上升,运动力和侵袭力则显著下降。细胞周期分析G1期细胞堆积,G2和S期细胞显著降低。结论:一定浓度的苦参碱具有抑制Bel-7404细胞生长增殖和诱导分化作用,其作用机制可能与细胞周期调节有关。     

动力素kinectin基因mRNA在7404肝癌细胞株的表达及意义

目的研究动力素作为肝癌相关抗原其在肝癌细胞株中的表达情况,评价其作为分子肿瘤标记以及肿瘤免疫治疗特异性靶位的可能性。方法运用RT-PCR技术检测国内建株的肝癌细胞株BEL-7404 kinectin基因(D2剪接区)mR-NA的表达,并与肝癌组织、相应癌旁肝组织、正常肝组织比较。结果肝癌细胞株BEL-7404中kinectin基因(D2选择剪接区)呈强阳性表达,肝癌组织中也呈较强的阳性表达,癌旁肝组织则表达呈弱阳性。结论 kinectin基因可作为肝癌诊断的辅助分子标记,并具有作为肝癌免疫治疗特异性靶位的潜在价值。     

健脾化瘀方含药血清对人结肠癌细胞LoVo凋亡的影响

目的:探讨健脾化瘀方含药血清对人结肠癌细胞LoVo凋亡的影响。方法:①应用MTT法检测健脾化瘀方含药血清对人结肠癌细胞LoVo的增殖抑制作用;②运用TUNEL法和AnnexinV/PI法检测LoVo细胞的凋亡率。结果:①健脾化瘀方含药血清高浓度(20%)可抑制LoVo细胞的增殖(P<0.01);②健脾化瘀方含药血清作用细胞48h后可以诱导细胞凋亡。结论:健脾化瘀方含药血清能抑制结肠癌细胞LoVo的增殖能力,并诱导细胞凋亡。     

振明正生合剂对5种人肿瘤细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其急性毒性试验

目的评估振明正生合剂对人肺癌、大肠癌、神经胶质瘤、肝癌、乳腺癌的抑制作用及其安全性。方法①Balb/c裸鼠分别接种人肺癌细胞系A549、人大肠癌细胞系SW480、人神经胶质瘤细胞系Ln229、人肝癌细胞系L7402和人乳腺癌细胞系MB231,2×106只-1。接种后24 h开始给药,实验组每天口服振明正生合剂0.2 mL/只,连续4周。对照组口服生理盐水0.2 mL/只。每周测量实验组和对照组动物肿瘤大小,计算肿瘤生长抑制率。②振明正生合剂原液浓缩6倍,按照每只小鼠灌胃最大容量,口服浓缩药物0.6 mL/20 g。观察24 h,计算LD50。结果①振明正生合剂对5种人肿瘤裸鼠移植瘤均有明显的抑制肿瘤生长作用。经过3~4周的治疗,该中药对肺癌模型的体积抑制率达到41%(P<0.05),对大肠癌模型质量抑制率超过60%(P<0.05),对神经胶质瘤模型质量抑制率超过69%(P<0.05),对肝癌模型质量抑制率超过79%(P<0.05),对乳腺癌模型的质量抑制率达到94%(P<0.01)。②LD50大于180 mL/kg。结论振明正生合剂对这5种肿瘤模型均有显著的治疗作用,振明正生合剂为无毒/低毒制剂。     

草苁蓉乙醇提取物对大鼠肝星状细胞体外增殖与凋亡的影响

目的:探讨草苁蓉乙醇提取物对体外培养的大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)生长抑制及诱导凋亡的影响.方法:选用大鼠HSC-T6进行体外培养,用MTT法测定0.25,0.5,0.75,1.0 g·L-1草苁蓉乙醇提取物作用12,24,36,48 h后对细胞增殖的抑制作用;应用Annexin V与碘化丙啶(PI)双染色荧光显微镜及透射电镜技术观察药物作用后细胞形态学改变;应用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率的变化.结果:①MTT实验表明草苁蓉乙醇提取物能抑制HSC-伪细胞增殖,并显出量效和时效关系.0.75 g·L-1草苁蓉刺激12,24,36,48 h对HSC-T6增殖的抑制率分别为(44.58 ±1.42)％,(51.56±1.34)％,(63.83±0.99)％,(74.77±3.40)％(P＜0.05).②荧光显微镜及透射电镜观察发现草苁蓉乙醇提取物作用于HSC -T6细胞后呈现出典型的细胞凋亡形态学改变,细胞表面微绒毛消失,细胞体积变小,细胞质浓缩,核染色质边集、细胞核固缩、核碎裂、出泡等.③草苁蓉处理后HSC-T6被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率上升,且表现出明显量效关系.0.75 g·L-1草苁蓉乙醇提取物改变HSC-T6周期分布,使G0/G1期细胞由(50.33±0.80)％增至(61.46±1.07)％,表现出G0/G1期阻滞;同时诱导HSC-T6凋亡,凋亡率由(1.44±0.43)％增至(14.20±0.98)％(P＜0.05).结论:草苁蓉乙醇提取物可明显抑制HSC-T6细胞增殖,其作用可能与诱导细胞凋亡,并使细胞周期阻滞于G0/G1期有关.     

蜂毒素对人胃癌细胞株BGC-823凋亡及其细胞周期的影响

目的：观察蜂毒素体外对人胃癌细胞株BGC-823增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法：采用MTT法观察不同浓度的蜂毒素（32,16,8,4,2μg/mL）体外对人胃癌细胞株BGC-823增殖的影响,并用流式细胞仪检测其诱导的细胞凋亡和周期阻滞效应。结果：①与对照组比较,蜂毒素有抑制人胃癌细胞株BGC-823增殖的作用（P〈0.01）,随着药物浓度的增大,其对细胞的抑制率也明显增大,呈现剂量依赖性。②蜂毒素浓度从4μg/mL开始,即可诱导细胞产生凋亡,随着剂量的增加诱导凋亡的效果更加明显。③在细胞周期方面,与阴性对照比较,蜂毒素作用24小时后S期细胞比例上升,而G0/G1期比例明显下降,蜂毒素浓度达到16μg/mL时G0/G1期前出现明显的亚二倍体区。结论：蜂毒素对人胃癌细胞株BGC-823的增殖具有抑制作用,且能够引起该细胞的凋亡及改变其细胞周期。     

进展期肝细胞癌分子靶向药物治疗疗效预测动物模型的建立

目的建立肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)分子靶向治疗药物药效学检验与预测模型。方法本次实验选择了MHCC97-H细胞(高侵袭性的HCC细胞系)建立了裸鼠皮下肿瘤模型、肝脏原位接种HCC组织模型、肝门静脉注射HCC细胞模型;选取分子靶向药物索拉非尼(sorafenib)、阿帕替尼(apatinib)以及安罗替尼(anlotinib)为模式药物;裸鼠灌胃给予2 mg·kg^-1的索拉非尼、阿帕替尼以及安罗替尼进行治疗后,确定这些分子靶向药物对不同肿瘤模型的抗肿瘤作用,计算药物抑制肿瘤细胞生长的抑制率。结果索拉非尼、阿帕替尼以及安罗替尼均能够显著抑制不同模型中MHCC97-H细胞的生长,阿帕替尼以及安罗替尼的作用较优于索拉非尼。结论本实验成功建立了分子靶向药物治疗进展期肝细胞癌疗效预测动物模型。     

半夏蛋白抗肿瘤活性组分的提取分离

目的分离半夏蛋白的抗肿瘤活性组分,研究该半夏蛋白组分的抗肿瘤作用。方法用凝胶柱分离纯化半夏粗总蛋白,采用四氮唑蓝比色法(MTT法)观察半夏蛋白对肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制,应用流式细胞术(FCM)检测其对细胞凋亡的影响。结果半夏粗总蛋白中30%硫酸铵沉淀部分、60%硫酸铵沉淀部分对肿瘤抑制的量效关系不明显,30%硫酸铵沉淀部分经分离后0.05mol/L和0.1mol/LNaCl的洗脱峰呈现较好的量效关系,且对Bel-7402细胞的抑制作用与空白对照组有显著性差异。30%硫酸铵沉淀蛋白有促进Bel-7402细胞凋亡的作用。结论半夏蛋白中30%硫酸铵沉淀部分对Bel-7402细胞生长具有明显抑制作用及促进Bel-7402细胞凋亡的作用。