声动力化学疗法对体外C6胶质瘤细胞作用的研究

目的研究声动力化学疗法(SDT)对体外C6胶质瘤细胞作用效果,试图探索一种治疗脑胶质瘤的新方法。方法采用MTT法观察SDT后的各时段、加不同氧活性物质(ROS)后的抑瘤率;流式细胞学检测C6细胞的凋亡率及细胞周期百分比;透射电镜观察C6细胞亚细胞结构变化。结果SDT后抑瘤率显著增高;超声组也有一定的抑瘤率;血啉甲醚(HMME)组抑瘤率与对照组无明显差别。与SDT组比较,加NaN_3抑瘤率显著降低,加过氧化氢酶及SOD抑瘤率亦较SDT组低,加甘露醇抑瘤率无明显变化。SDT后凋亡率升高,G_0/G_1期、G_2/M期百分比降低,S期百分比升高、凋亡增殖比(APR)升高。透射电镜观察对照组C6细胞无明显变化,SDT组细胞呈现凋亡或坏死状态。结论SDT能显著杀伤体外C6胶质瘤细胞。     

靶向脑胶质瘤干细胞的树突状细胞疫苗治疗恶性脑胶质瘤的体外实验研究

目的 研究应用脑胶质瘤干细胞抗原制备的树突状细胞(DC)疫苗对胶质瘤细胞的杀伤作用.方法 反复冻融法获得源于胶质瘤细胞系U251中的肿瘤干细胞的胞溶物,和源于小鼠间充质干细胞的DC共培养,获得胶质瘤干细胞疫苗.流式细胞仪检测疫苗表面标志变化;CCK-8法检测其促T细胞增殖能力以及对胶质瘤细胞的靶向杀伤作用;ELISA法检测培养基中干扰素-γ的含量.用热处理U251细胞制备的DC疫苗作为对照组.结果 与对照组相比,脑胶质瘤干细胞疫苗的CD80、CD86、CD11c和MHC Ⅱ等表面标志表达显著提高,具有更强的促T细胞增殖能力(P＜0.01),对U251细胞特异性靶向杀伤率随效靶比的提高而增加,最高为(78.508±4.156)％,相应的干扰素-γ分泌水平也达到最高.结论 胶质瘤干细胞疫苗能更有效地诱导特异性细胞毒性T细胞,表现出更强的抗肿瘤特性.     

光动力疗法对胶质瘤细胞侵袭性膜结构破坏的原子力显微镜研究

目的 探讨光动力治疗对胶质瘤细胞表面侵袭性特异结构的影响。方法 应用细胞培养及原子力显微镜技术，对5-氨基乙酰丙酸（5-ALA）作用前后U251胶质瘤细胞表面特异膜结构进行纳米尺度形态学对比研究。结果 胶质瘤细胞膜表面大量伪足结构和微绒毛结构经5-ALA治疗，由直径约400nm微绒毛结构，呈指状突起，长度1μm，改变为直径300nm球状颗粒．指状突起消失，膜状伪足、丝状伪足消失。结论 经5-ALA介导的光动力治疗对胶质瘤细胞侵袭性具有显著的破坏作用。     

ZnPcS4-BSA对光动力杀伤胶质瘤细胞效应的影响及其机制研究

目的 研究新型光敏剂ZnPcS4-BSA对光动力杀伤人神经胶质瘤细胞U251效应的影响,并对机制进行初步探讨. 方法 紫外光谱法观察U251细胞对ZnPcS4-BSA的摄取规律,确定最佳孵育时间;CCK-8法测定不同浓度ZnPcS4-BSA、不同剂量激光辐射对U251的细胞毒性和ZnPcS4-BSA介导光动力疗法(PDT)的最佳浓度和最佳激光剂量;应用20 μmol/L ZnPcS4-BSA作用U251细胞4h后给予100 J/cm2的激光辐射,以同样条件培养而未作PDT治疗的细胞作为对照,流式细胞术、RT-PCR分别检测细胞凋亡率和VEGF基因表达的变化. 结果 紫外光谱法扫描发现ZnPcS4-BSA作用4h后U251细胞摄取ZnPcS4-BSA的量达到峰值.不同浓度ZnPcS4-BSA处理后细胞生存率的差异无统计学意义(P＞0.05).400J/cm2激光辐射后细胞生存率低于0、25、50、100、200J/cm2激光辐射组,差异有统计学意义(P＜0.05).30 μmol/L ZnPcS4-BSA作用U251细胞4h后给予25、50、100、200 J/cm2激光照射,随着激光剂量的增加,细胞存活率降低,差异有统计学意义(P＜0.05).20、40、60、80、100 μmol/L ZnPcS4-BSA作用U251细胞4h后,给予200J/cm2激光辐射,随着ZnPcS4-BSA浓度的增加,细胞的抑制率增加,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,经20μmol/L ZnPcS4-BSA作用,100 J/cm2的激光辐射后U251细胞凋亡率、VEGF基因的表达升高,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 新型光敏剂ZnPcS4-BSA具有良好的增强光动力效能,其介导的PDT能诱导细胞凋亡,其机制可能与VEGF基因有关.     

不同条件下光动力治疗对C6胶质瘤细胞的作用

目的 分析不同条件下应用血卟啉衍生物(HpD)的光动力学疗法(PDT)对体外培养大鼠C6胶质瘤细胞的作用.方法 MIT法检测PDT后C6细胞的生存率:(1)不同HpD浓度组(0、2、5、10、20、30及40 mg/L)C6细胞PDT(628 nm、20 mW/cm2、照光5 min)后的生存率;(2)C6细胞分别与不同浓度HpD(0、5、10、20、30及40 mg/L)孵育不同时间(0.5、1、3、6、12及24 h)行PDT(628nm,20 mW/cm2)后的生存率;(3)不同照光强度下(10、20及30 mW/cm2)PDT后C6细胞的生存率.结果 不同条件下PDT治疗对C6细胞的作用不同:(1)当HpD浓度低(2mg/L)、HpD与细胞孵育时间短(<3 h)时不能对细胞产生抑制或杀伤效应;(2)PDT后C6细胞的生存率随着HpD浓度的升高而降低,随着细胞与HpD孵育时间的延长而降低(>12 h后各组间差异无统计学意义),随着照光强度的增强而下降(20与30 mW/cm2之间差异无统计学意义).结论 HpD介导的PDT对体外培养大鼠C6胶质瘤细胞的作用与HpD浓度、HpD与细胞孵育时间及照光强度等有关,在不同条件下可表现为促进肿瘤细胞生长或杀伤肿瘤细胞的作用.     

干细胞样抗原提高树突状细胞介导胶质瘤免疫治疗的体外研究

目的 比较胶质瘤干细胞样抗原与非干细胞样抗原致敏树突状细胞(DCs)疫苗对胶质瘤的体外作用.方法 体外用无血清法和血清法培养恶性胶质瘤细胞,有限稀释法检测其克隆形成率;冻融法获取相应胶质瘤抗原;GM-CSF、IL-4体外诱导人外周血单核细胞获取DCs,与抗原孵育后再激活T淋巴细胞,同位素法检测效应细胞对胶质瘤细胞的杀伤率;流式细胞术检测DCs表面分子变化以及非贴壁细胞中T细胞比例的变化.结果 无血清培液中的胶质瘤细胞具有更高的克隆形成率(P<0.01);DCs经不同抗原刺激后HLA-A、HLA-DR、CD80、CD86表达上调(P<0.01);非贴壁细胞与DCs共培养后T细胞比例明显增高;干细胞样抗原激活的效应细胞对非干细胞样细胞和干细胞样细胞杀伤率分别为(70.2±5.13)%和(56.7±7.81)%(P<0.001),而非干细胞样抗原活化的效应细胞相应的杀伤率为(36.6±6.45)%和(9.05±3.49)%(P<0.001).结论 无血清培养液中的胶质瘤细胞具有更强的增殖能力,胶质瘤干细胞样抗原较传统抗原具有更强的抗原性,为进一步提高胶质瘤DCs疫苗疗效奠定基础.     

胶质瘤树突状细胞融合疫苗诱导抗肿瘤细胞毒性T淋巴细胞

在本研究中,我们检测树突状细胞(DC)与胶质瘤细胞U87融合是否会产生融合细胞,并确定此融合细胞是否会于体外诱导产生胶质瘤细胞U87特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。一、材料与方法1. 培养产生树突状细胞:从基因型为HLAA0201的健康人外周血中得到的单核细胞。分离CD14 单核细胞,重悬于10mlX-VIVO15培养液中,加入GM-CSF和IL-4。第5天,移走一半培养液,并加入相同体积的含有细胞因子GM-CSF和IL-4的新鲜培养液。第7天,应用冷的Hanks液收集DC并将其用做抗原递呈细胞。2. 树突状细胞的表型分析:在培养的第7天,流式细胞仪(FCM)检…     

脑胶质瘤树突状细胞疫苗的研究现状及进展

脑胶质瘤是最常见的中枢神经系统原发肿瘤,约占颅内肿瘤的40%.尽管目前手术切除、放疗、化疗等治疗方法已有很大进展,但是胶质瘤病人预后仍然很差,特别是恶性胶质瘤,其平均生存期不足1年.     

树状突细胞疫苗在脑恶性胶质瘤治疗中的研究进展

脑恶性胶质瘤是中枢神经系统（CNS）原发性恶性肿瘤中最常见的肿瘤,采用目前现有的手术加放疗加化疗的综合治疗措施仍难以根治.树突状细胞（DC）是功能最强的抗原提呈细胞（APC）,能够诱导特异性的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）生成.应用肿瘤相关抗原或抗原多肽体外冲击致敏DC制成疫苗,回输或免疫接种于载瘤宿主,可诱发特异性CTL的抗肿瘤免疫反应.本文就DC疫苗在脑恶性胶质瘤治疗研究中的进展进行综述.     

光动力疗法对C6胶质瘤细胞转化生长因子-B的影响

目的探讨C6胶质瘤细胞中转化生长因子-B（TGF—B）和光动力疗法（PDT）之间的关系,阐明PDT对C6胶质瘤的治疗效果的机制。方法以C6胶质瘤细胞系为对照组,实验组添加25nM血啉甲醚（HMME）,再用240J／cm2PDT照射,依据光照时间公式中光源输出的光斑面积,计算出照射时间,利用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测PDT处理前后,C6细胞上清液中的TGF—B的表达;提取HMME—PDT实验组细胞上清液为条件培养基,对照组细胞上清液为非条件培养基,培养人血管内皮细胞（HUVEC）,使用MTT法观察HuVEC的增殖情况;建立Wistar大鼠脑胶质瘤模型,以HMME联合PDT疗法为HMME—PDT组,生理盐水治疗为非治疗组,免疫组化法观察胶质瘤血瘤屏障中CD31的表达。结果与未处理组c6比较,经HMME—PDT处理的C6细胞上清液TGF-B含量明显降低（P〈0．01）;经HMME—PDT处理的c6细胞条件培养基可以抑制HuVEC的增殖,与非条件培养基组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）;与非治疗组比较,HMME—PDT组的大鼠脑胶质瘤血瘤屏障CD31表达明显降低（P〈0．01）。结论HMME联合PDT降低c6细胞旁分泌TGF—B,明显抑制胶质瘤血瘤屏障血管生成,为PDT从抑制胶质瘤细胞旁分泌角度,抑制胶质瘤血管新生奠定基础,具有重要的临床应用前景。     

三氧化二砷对人脑SHG-44胶质瘤细胞作用的体外实验研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对人脑SHG-44胶质瘤细胞株的增殖抑制及诱导凋亡机制.方法 将不同浓度的As2O3与体外培养的SHG-44胶质瘤细胞相互作用后,采用MTT比色法检测As2O3对胶质瘤细胞的增殖抑制;倒置显微镜、荧光显微镜下观察吉姆萨及Hochest33258染色后细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测细胞凋亡及对SHG-44胶质瘤细胞周期影响.结果 MTT比色法检测到As2O3对SHG-44胶质瘤细胞增殖具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性和时间依赖性;倒置显微镜及荧光显微镜下可观察到给药组细胞生长密度低以及出现细胞凋亡的特征性改变;流式细胞仪检测到给药组细胞凋亡比率明显高于空白对照组(P＜0.05),并具有剂量依赖性及时间依赖性,同时将胶质瘤细胞阻滞在S期,抑制了细胞周期的进程.结论 As2O3对SHG-44胶质瘤细胞增殖具有明显的抑制作用、可诱导SHG-44胶质瘤细胞的凋亡,并抑制细胞周期进程.     

光动力疗法治疗脑胶质瘤的护理

目的 总结脑胶质瘤光动力治疗围手术期护理经验。方法 回顾性分析14例行光动力治疗的胶质瘤的临床资料。结果 14例均手术顺利,多数肿瘤切除比较完整,与肿瘤相关的临床症状得以减轻及控制,3例出现皮肤过敏,5例术后有血压升高,7例术后有呕吐现象,经过医护的精心护理,对症治疗,症状很快得以控制。结论 加强对胶质瘤光动力手术了解,掌握光动力治疗胶质瘤的护理措施,了解围手术期护理的问题及注意事项,可提高该手术的成功率、减少并发症的发生率。     

5-ALA介导的光动力治疗鼠C6胶质瘤的实验研究

目的研究以5-氨基乙酰丙酸（5-ALA）作为光敏剂的光动力治疗（PDT）对大鼠C6胶质瘤移植瘤的效果。方法通过皮下接种C6胶质瘤细胞建立大鼠移植胶质瘤模型。将24只荷瘤大鼠平均随机分成3组：A组按剂量20mg／kg在瘤内注射5-ALA，2h后在肿瘤局部行激光照射；B组行单纯激光照射，不予任何光敏剂；C组为荷瘤空白对照组，不给任何治疗。PDT后不同时间，测量肿瘤体积并观察其组织学变化。结果治疗后第4、8和14天A组肿瘤体积与B、C组相比明显缩小（P〈0．05），组织学上可见大量肿瘤细胞坏死。结论5-ALA作为光敏剂介导的PDT能使大鼠C6胶质瘤移植瘤组织坏死，生长速度明显减慢，有望成为胶质瘤治疗的新途径。     

树突状细胞制备脑胶质瘤疫苗的体外研究

目的　通过体外实验探讨应用树突状细胞制备的肿瘤疫苗抗脑胶质瘤的作用机制。方法　培养大鼠树突状细胞,冻融法制备胶质瘤抗原,以肿瘤抗原致敏树突状细胞而制备胶质瘤疫苗。将实验动物分为4组,分别将胶质瘤疫苗、树突状细胞、生理盐水注入正常大鼠体内,到达预定时间取出大鼠脾脏,MTT法检测大鼠淋巴细胞活性。结果　1次输入胶质瘤疫苗的正常大鼠的淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性明显低于3次输入胶质瘤疫苗的正常大鼠;比较输入培养8d的树突状细胞和输入生理盐水的大鼠,其淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性无统计学差异。结论　应用树突状细胞制备胶质瘤疫苗可明显激活体内抗肿瘤免疫反应。     

人胶质瘤干细胞样抗原致敏树突状细胞疫苗Ⅰ期临床试验研究

目的 探讨胶质瘤干细胞样抗原致敏DC疫苗在临床应用的可行性、安全性及有效性.方法 选取5例复发胶质瘤患者;二次手术后体外无血清培养胶质瘤细胞,CD133磁珠分选和X线照射后获取干细胞样抗原;同体外周血单核细胞经GM-CSF、IL-4诱导后再与干细胞样抗原共孵育获得成熟DC疫苗;每周1次皮下接种DC疫苗,共3次,联合替莫唑胺化疗.观察不良反应,头颅MRI增强随访及生存期评估疗效.结果 5例胶质瘤标本中均含有不同比率的CD133+细胞,DC疫苗接种后患者无明显不良反应,患者平均生存期为72.2周.结论 干细胞样抗原致敏DC疫苗对于胶质瘤患者安全可行,联合化疗能延长患者生存期.

Abstract：

Objective To investigate the feasibility ,safety and efficiency of dendritic cells (DCs) vaccine pulsed with tumor stem - like associated antigens against malignant glioma in recurrent patients.Method Cells derived from fresh specimens of recurrent gliomas in serum - free medium were magenetically sorted with CD133 -antibody and irradiated with X -ray to attain freeze -thaw lysates.Autologous DCs from mononuclear cells with GM-CSF and IL-4 were matured by the lysates.Five patients with recurrent glioma received the DCs vaccine once a week (3 times ) followed combination with chemotherapy after recurrent tumor resection.Follow - up was procedured with MRI scans and clinical protocol.Results Five malignant glioma cell lines contained different ratio of CD133 + cells.DCs were successfully prepared and applied in all patients.No side -effect was observed.Mean survival time was 72.2 weeks.Conclusions Combination of DCs vaccine and chemotherapy is safe and may benefit the patients with malignant glioma.     

光动力联合顺铂治疗大鼠脑胶质瘤的生存期观察

目的 探讨光动力（PDT）联合顺铂治疗大鼠脑恶性胶质瘤的杀伤效应、机制及对大鼠生存期影响.方法 健康Wistar雄性大鼠30只,体重280～300g,建立C6胶质瘤模型,2周后随机分为3组,对照组、顺铂治疗组、PDT联合顺铂治疗组,分别进行生存观察和生存分析.结果 大鼠平均生存时间：对照组（38.2±3.5）d,顺铂组（39.6±4.0）d,PDT联合顺铂组（41.9±4.0）d.联合顺铂组与对照组及顺铂组比较,生存分析曲线差异有显著性（P〈0.05）.结论 光动力（PDT）联合顺铂治疗对大鼠脑胶质瘤有明显的杀伤和抑制作用,光动力开放血脑屏障、血瘤屏障后为化疗药物有效作用于肿瘤组织提供新途径,延长大鼠生存期.     

光动力学疗法对体外培养大鼠C6胶质瘤细胞的效应研究

目的探讨血卟啉衍生物介导的光动力学疗法对体外培养大鼠C6胶质瘤细胞的杀伤效应。方法①应用MTT法测定不同HpD浓度组(0,2,5,10,20,30及40mg/L)C6细胞PDT(628nm,20mW/cm2,照光5min)后的生存率;②采用光镜及电镜观察PDT后C6细胞的形态学变化;③DNA琼脂糖凝胶电泳检测各组样本的DNA条带;④TUNEL法检测各组样本PDT治疗后的细胞凋亡阳性率。结果①HpD浓度分别为2、5、10、20、30、40mg/L各组样本的细胞生存率分别为:110.31±6.25%、74.63%±6.57%、41.74%±4.16%、36.43%±2.14%、31.94%±2.25%及30.25%±2.88%;②PDT后C6细胞(HpD浓度>5mg/L时)出现细胞回缩等改变;透射电镜观察发现10mg/LHpD组C6细胞出现染色质边集、凋亡小体形成等改变;20mg/LHpD组C6细胞出现胞膜破裂崩解、细胞核肿胀等表现;③DNA琼脂糖凝胶电泳检测发现10mg/L及5mg/LHpD浓度组产生了明显的梯状条带;④TUNEL测定5mg/L及10mg/LHpD浓度组C6细胞凋亡阳性率分别为33%和63%;20mg/LHpD浓度组细胞凋亡阳性率为6%。结论当HpD浓度为2mg/L时PDT对C6胶质瘤细胞无杀伤效应;当HpD≥5mg/L时PDT治疗能够引起C6胶质瘤细胞出现细胞凋亡及坏死,较低浓度(5-10mg/L)时C6细胞以凋亡为主,较高浓度HpD(≥20mg/L)时C6细胞主要以坏死为主。     

树突状细胞疫苗治疗大鼠脑胶质瘤的实验研究

近年来随着对树突状细胞（dendriticcells，DCs）研究的不断深入，其在肿瘤抗原提呈和肿瘤免疫中重要作用逐渐被揭示，开拓了肿瘤免疫治疗的又一新领域。DCs是目前已知的抗原加工与提呈功能最强的专职抗原提呈细胞（antigen presenting cells，APCs），也是唯一能刺激纯真T细胞的抗原提呈细胞，而T细胞介导的免疫应答在机体抗肿瘤免疫中起重要的主导作用田。据此，本实验采用细胞因子诱导骨髓细胞分化为DC，以C6细胞裂解物致敏DC制备疫苗，再以该疫苗经颈内动脉、尾静脉、皮下三种不同注射途径回输荷C6脑胶质瘤大鼠，探讨其对荷瘤大鼠的免疫治疗效应，并试图从多种入药方式中寻找一种最为简便有效的方式，以便今后应用于临床工作。     

光动力疗法辅助手术治疗功能区脑胶质瘤

目的 介绍光动力疗法辅助手术治疗功能区脑胶质瘤的方法和疗效。方法 1999年7月至2000年6月收治的脑胶质瘤病人中,有10例给予光动力辅助手术治疗。术中暴露肿瘤的同时静脉推注光敏剂,显微镜下切除肿瘤后,应用LH400型激光动力治疗仪对肿瘤残腔进行光动力照射,以杀伤残存肿瘤细胞。术后避光3d,随访其术后效果。结果 术后近期临床效果满意,无皮肤光毒反应;随访至今全部病例临床症状改善,未见肿瘤复发。结论 激光光动力疗法是一种有效的脑胶质瘤辅助治疗方法,它与手术结合综合治疗功能区脑胶质瘤,有利于减轻脑损伤,减少功能缺失,提高病人生存质量和疗效。     

神经胶质瘤光动力学治疗的回顾与展望

神经胶质瘤是发生于神经外胚叶组织的肿瘤，目前无法根治，光动力疗法(photodynamic theyapy，PDT)是上个世纪70年代发展起来的一种治疗恶性肿瘤的方法，PDT在神经胶质瘤的治疗中有其重要的应用价值和特殊地位，本对其原理，材料和具体临床应用方法进行回顾和展望。