全反式维甲酸对HL-60细胞核干细胞因子mRNA表达的影响

目的:检测全反式维甲酸(ATRA)诱导后HL-60细胞核干细胞因子(NS)mRNA表达的变化,探讨NS mRNA表达与细胞分化之间的关系.方法:从NS基因的3个变异体中筛选出共同序列设计特异性引物,用终浓度为0.1 μmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L的ATRA诱导分化HL-60白血病细胞48 h,以不加ATRA的HL-60细胞作为对照,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测HL-60细胞NS mRNA表达水平的变化.结果:ATRA诱导HL-60细胞分化后NS mRNA表达均有所降低,0.1 μmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L浓度下NS mRNA表达量分别下降3.72%±0.84%、58.70%±4.98%和61.60%±2.26%.其中1 μmol/L和10 μmol/L组与对照组和0.1 μmol/L组比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论:NS可能与白血病细胞分化有关,参与调控细胞分化过程.     

全反式维甲酸诱导分化的HL-60细胞表面凝集素受体的变化

目的：了解人类早幼粒细胞性白血病细胞株（HL-60）细胞经全反式维甲酸诱导分化后各时相细胞表面5种凝集素受体的变化.方法：以刀豆凝集素（ConA）、麦胚凝集素（WGA）、花生凝集素（PNA）、蓖麻凝集素（RCA）、荆豆凝集素（UEA-1）共5种Na^125I-凝集素,标记经全反式维甲酸诱导分化的HL-60细胞,检测各时相细胞表面凝集素受体的变化.结果：HL-60细胞从幼稚分化发育至成熟各阶段中,细胞表面与UEA-1、WGA、ConA结合的凝集素受体有增多的趋势,诱导分化前后各凝集素放射活性比较有显著性差异（P＜0.05）,其中WGA放射活性在分化前后明显增加,而与PNA结合的凝集素受体在HL-60细胞分化过程中呈减少的趋势,在诱导分化后期减少最为明显,诱导分化前后放射活性比较有显著性差异（P＜0.05）.结论：D-半乳糖-N-乙酰氨基半乳糖结构主要表达于HL-60细胞早幼粒阶段,随着细胞的分化成熟而显著减少,其可能是肿瘤特异性抗原.HL-60细胞在经全反式维甲酸诱导分化过程中,细胞膜上含L-岩藻糖糖链结构增多,N-乙酰氨基葡萄糖结构增多和/或唾液酸化作用增强,并出现D-葡萄糖和/或D-甘露糖糖链结构.     

全反式维甲酸对白血病细胞的体外诱导分化研究

应用ＡＴＲＡ对４２例各种不同类型白血病细胞进行了体外诱导化化研究。结果发现经ＡＴＲＡ１－５μｍ浓度诱导分化后，２６例ＡＰＬ患者获得与临床疗效相一致的结果。ＡＴＲＡ诱导分化组织除形态趋于成熟外，还伴有功能上的成熟。经ＡＴＲＡ治疗后，所有ＡＰＬ病例的ＣＦＵ－Ｌ形成明显减低，正常造血细胞集落则恢复至正常水平。表明ＡＴＲＡ除有诱导ＡＰＬ细胞分化，成熟这一特性外，在参于造血重建中有重要作用。     

二烯丙基二硫与全反式维甲酸合用对HL-60细胞的影响

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）与全反式维甲酸（ATRA）联合用药对HL-60细胞生长抑制及诱导分化的影响。方法采用M1Tr、流式细胞术检测细胞周期及生长抑制，用HL-60细胞表面分化抗原CD11b及NBT实验检测HL-60的诱导分化作用。结果DADS与ATRA联合使用可以增加HL-60细胞的生长抑制率，并将HL-60细胞阻滞在G0/G1期。CD11b的表达和NBT实验结果表明两者合用对HL-60细胞的诱导分化作用与任何一种药物单独使用差异无显著性，但当两者剂量各自减少一半时，其诱导分化作用却增加，与任何一种药物单独使用时的诱导分化作用相似。结论DADS与AT—RA联合使用可以协同抑制HL-60细胞的生长，剂量减半合用时可协同对HL-60细胞的诱导分化作用。     

全反式维甲酸诱导HL60细胞分化前后蛋白表达差异分析

目的:建立全反式维甲酸(All trans-retinoic acid,ATRA)诱导HL60细胞向粒系分化的模型,研究采用改良双向电泳条件对分化前后的细胞全蛋白进行分离分析,寻找差异表达蛋白.方法:采用全反式维甲酸对HL60细胞进行诱导分化.通过MTT、流式细胞技术分析细胞增殖情况和CD11b细胞表面分化抗原的表达,选择最适的药物浓度和诱导时间;再通过细胞化学染色对分化结果进行验证,构建分化模型.采用改良双向电泳分离技术对细胞全蛋白进行分离,运用PDQuest软件分析HL60细胞分化前后蛋白表达差异,并用基质辅助激光解吸-飞行时间质谱(MALDI-TOF)对差异蛋白点进行分析.结果:ATRA明显抑制HL60细胞增殖,并随药物浓度的增加,抑制效果也越显著;2 μmol/L的ATRA连续作用HL60细胞5 d即有90%以上的细胞有粒系分化标志抗原CD11b的表达.细胞化学染色结果亦表明诱导后的HL60细胞向粒系分化.将分化前后的HL60细胞全蛋白经过改良双向电泳技术分离,PDQuest软件比对,MAIDI-TOF分析,发现有25个蛋白点仅在未分化凝胶谱中找到,有15个蛋白点仅在分化细胞蛋白表达谱中找到.其中有的是癌基因表达蛋白,有的是抑癌基因表达蛋白,还有的则参与凋亡过程等.结论:在选定的药物浓度和作用时间下,ATRA可以诱导HL60细胞向粒系分化.改良双向电泳技术对药物作用前后细胞蛋白的分离,可发现不同于传统双向电泳分离所得的蛋白结果.     

褪黑素联合全反式维甲酸对HL-60细胞作用的研究

目的观察褪黑素联合全反式维甲酸对人早幼粒细胞白血病细胞株HL-60的增殖、凋亡、分化及细胞周期的影响。方法以1 mmol/L褪黑素与1μmol/L全反式维甲酸联合作用于HL-60细胞,药物作用24 h、48 h、72 h后进行试验。以姬姆萨染色观察细胞形态变化,以CCK-8的方法检测药物的抑制率,以流式细胞术检测细胞凋亡率,细胞膜表面抗原CD11b的表达阳性率,及细胞周期的变化情况。结果褪黑素联合全反式维甲酸作用于HL-60细胞,细胞逐渐出现凋亡,其抑制率24 h、48 h和72h分别为0.31±0.02,0.57±0.06和0.83±0.04,其促进细胞凋亡的比例为15.67±2.38%,26.93±1.60%和50.13±1.76%,其细胞表面CD11b的阳性率为20.98±0.46%,58.96±6.05%和83.80±2.48%;其对细胞周期的影响表现为G1期细胞增多（69.3±0.5%、75.2±0.1%和85.3±0.1%）,S期细胞减少（20.1±0.1%、23.2±0.5%和9.2±0.2%）,均优于单用褪黑素组或全反式维甲酸组（P〈0.05）。结论褪黑素联合全反式维甲酸可以抑制HL-60细胞的增殖、促进其凋亡,诱导其分化,影响其细胞周期,联合用药的作用优于单用褪黑素组或全反式维甲酸组。     

魁蒿内酯与1,25-二羟基维生素D_3或全反式维甲酸协同诱导HL-60细胞分化的作用

薰衣草Lavandula angustifolia干花与沸蒸馏水混合,搅拌15 min后过滤,滤液冷冻干燥得活性物质。向原代培养的SD幼鼠小脑颗粒细胞培养液中分别加入盐水或薰衣草提取物10、102、103和104μg/mL,30 min后加入10-7mol/L的谷氨酸培养16 h,另设薰衣草提取物104μg/mL组(培养16 h)和谷氨酸对照组。各培养液用台盼蓝染色,通过     

全反式维甲酸诱导HL60细胞分化的细胞周期时相性研究

目的　探讨全反式维甲酸诱导分化的HL6 0细胞周期变化 ,进一步揭示细胞分化在细胞周期中的时相特异性。方法　以分化诱导剂全反式维甲酸 (终浓度为 10 μmol/L)影响下不同时间点的HL6 0细胞为检测对象 ,应用流式细胞术分析细胞的大小及细胞表面的分化标志 ;碘化丙啶 (PI)染色后用激光共聚焦显微镜观察细胞形态从而对已分化细胞进行确认 ;应用流式细胞术分析药物诱导的细胞周期变化 ,检测G1期的Ki6 7表达水平 ;再应用流式分选术结合激光共聚焦显微镜观察各期细胞形态。结果　①随着药物诱导时间的延长 ,细胞的体积逐渐增大 ,被诱导的细胞出现髓系细胞表面的分化标志物CD11b。②全反式维甲酸导致HL6 0细胞周期的G0 /G1峰升高 ,S期水平下降。③随着药物诱导时间的延长 ,G1期的Ki6 7的表达水平逐渐下降。④只在G1期细胞中可见到已分化细胞。结论　全反式维甲酸可以诱导HL6 0细胞周期的G1早期→G1晚期阻滞 ,并诱导HL6 0沿着粒系方向分化 ,细胞分化完成于细胞周期中的G1早期。     

全反式维甲酸诱导对乳腺癌细胞放射敏感性影响的研究

目的 探讨不同浓度全反式维甲酸(all-trans-retinoicacid,ATRA)分化诱导对乳腺癌细胞的放射敏感性影响.方法 MTT法检测细胞体外增殖能力,电镜形态学的观察,流式细胞仪进行细胞周期分析.结果 全反式维甲酸分化诱导乳腺癌A431细胞株,细胞增殖能力下降,凋亡增加,更多的细胞被阻止于G1/G0期,放射敏感性增强.结论 全反式维甲酸分化诱导能增强乳腺癌A431细胞株放射治疗敏感性,并与浓度成量效关系.     

bcl-2和bax在三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡过程中的变化

目的:探讨bcl-2和bax在三氧化二砷(arsenic trioxide,As₂O₃)诱导HL-60细胞凋亡过程中的变化。方法:7.5μmol/L的As₂O₃作用HL-60细胞12、24 h,RT-PCR和Western-blot分别检测bcl-2和bax基因mRNA表达及相应的蛋白表达变化。结果:7.5μmol/L的As₂O₃作用HL-60细胞12、24 h后,bcl-2 mRNA相对表达分别为(65.02±4.69)%、(40.70±3.94)%,baxmRNA相对表达分别为(46.71±4.26)%、(95.65±5.57)%,Western-blot检测bcl-2蛋白相对表达分别为(56.34±6.45)%、(42.01±3.01)%,bax蛋白质表达分别是(50.65±4.50)%、(66.78±5.05)%,对照组与实验组差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:As₂O₃诱导HL-60细胞凋亡过程中,下调bcl-2 mRNA和蛋白质表达,同时上调bax mRNA和蛋白质表达,可能是As₂O₃诱导细胞凋亡信号传导通路之一。     

大蒜油诱导HL-60细胞分化的实验研究

目的：观察大蒜油对HL-60细胞的诱导分化作用。方法：MTT法检测大蒜油对HL-60细胞的增殖抑制,Giemsa染色观察细胞形态改变,流式细胞术分析细胞周期改变,并检测CD11b、CD15的表达。RT-PCR检测bcl-2、c-myc／mad、mpo基因mRNA的表达。同时设ATRA、As2O3为阳性对照,与大蒜油的作用进行比较分析。结果：大蒜油明显抑制了HL-60细胞增殖,使大部分细胞阻滞于G0／G1期,作用强于ATRA和As2O3;诱导细胞成熟分化的能力与ATRA接近,优于As2O3;通过抑制bcl-2、c-mvc和mpo基因的表达,促进mad基因的表达来发挥作用。结论：大蒜油对HL-60细胞有明显的增殖抑制和诱导分化作用,有可能成为新的临床诱导分化剂。     

骨髓造血基质细胞对HL—60细胞逆转分化作用的超微结构观察

利用透射电镜技术观察正常人骨髓造血基质细胞对HL－60细胞的逆转分化作用，从而探讨基质细胞对异常实质细胞的调控作用。结果表明：正常人骨髓造血基质细胞对人急性早幼粒白血病HL－60细胞株有逆转分化作用，表现在促分化和抑制增殖作用两方面。其机理主要以直接接触而发挥其调控作用。     

昆明山海棠根部水提液诱导HL-60细胞凋亡及对c-Myc基因表达的调控

目的 研究昆明山海棠Tripterygium hypoglaucum(Celastraceae)(THH)根部水提液对早幼粒白血病HL-60细胞凋亡的诱导作用及机制。方法 通过特征性的形态学观察，Annexin—V标记，以及流式细胞仪检测中次G1峰的形成确定THH的诱导细胞凋亡作用；应用Western Blotting研究THH对c—Myc蛋白表达的影响。结果 THH根部水提液可诱导早幼粒白血病HL-60细胞凋亡。在浓度高于18μg／mL时，THH对HL-60细胞的诱导凋亡作用呈现浓度与时间的相关性。在THH处理2～4h后，癌基因蛋白c—Myc表达降低99％以上。结论 THH抑制了c—Myc蛋白的翻译或后翻译过程，从而降低了c—Myc在细胞周期运转中的作用，导致大量细胞凋亡．     

蟾蜍灵诱导白血病HL-60细胞分化及相关基因表达

目的：研究中药蟾酥中蟾毒成分蟾蜍灵(bufalin)的抗癌机制。方法：以早幼粒白血病HL－60细胞为靶细胞，应用电镜技术观察bufalin诱导的细胞分化，免疫组化方法检测增殖细胞核抗原（PCNA）和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子p21^WAF1的表达。结果：0．001μmol/L bufalin作用HL－60细胞，细胞向粒细胞方向分化，p21^WAF1表达显著升高，而PCNA表达显著下降，二者显著负相关（P＜0．01）。结论：bufalin诱导HL－60细胞分化，与其上调p21^WAF1的表达、下调PCNA表达有关。     

虫草多糖增强雷公藤内酯醇诱导的HL-60细胞凋亡作用及其机制

目的:探讨虫草多糖增强雷公藤内酯醇诱导白血病细胞HL-60的凋亡作用及其可能的分子机制.方法:将HL-60细胞分为对照组,雷公藤内酯醇对照组(5 ng/ml)和虫草多糖预处理+雷公藤内酯醇作用组.选用二种不同虫草多糖浓度(100 μg/ml,200 μg/ml)的药物处理HL-60细胞18 h,通过MTT法测定各组细胞的存活率,并用流式细胞仪通过Annexin V/PI双染法检测各组细胞的凋亡百分比.用Western blot方法检测各组细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3、6、7、9和NF-κB的表达.结果:不同浓度的虫草多糖能抑制雷公藤内酯诱导的HL-60细胞的存活率,而且虫草多糖可协同增加雷公藤内酯诱导的HL-60细胞的凋亡百分比,呈现出明显的剂量依赖关系;Western blot检测显示,虫草多糖降低Caspase-3、6、7、9和NF-κB的蛋白表达,且随着浓度的升高,蛋白的表达量表现出逐渐减少的趋势.结论:虫草多糖对雷公藤内酯诱导的HL-60细胞凋亡有不同程度的抑制作用,其机制可能与抑制细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3、6、7、9和NF-κB信号传导通路的激活有关.     

昆明山海棠诱导HL—60细胞凋亡的初步研究

目的 探讨中药昆明山海棠（THH）诱导急性白血病细胞凋亡的规律及发生机制。方法 应用染料排除法、活细胞荧光染色、DNA电泳、流式细胞仪、斑点杂交、原位杂交和荧光Ca^2 指示剂进行检测和观察。结果 HL-60细胞在THH作用下出现典型的细胞凋亡特征,包括细胞形态改变,DNA梯状带以及亚G1峰,并且存在明显的量效和时效关系。进一步研究表明,Bcl-2基因在凋亡过程中的表达持续下凋,细胞内游离Ca^2 浓度未发生明显变化。结论：THH有较强的诱导白血病HL-60细胞凋亡的能力,其作用机制与下凋Bcl-2基因表达有关。     

铁超载与铁剥夺对Ara-C诱导HL-60细胞凋亡的影响

目的 :探讨铁超载对铁剥夺对Ara C诱导HL 60细胞凋亡的影响。方法 :细胞培养法、台盼蓝活细胞拒染实验、细胞活力测定、光镜形态学观察、DNA琼脂糖电脉及流式细胞仪 (FCM )等方法检测HL 60细胞凋亡。观察不同浓度的三氯化铁 (FeCl3 )、铁剥夺剂 去铁胺 (DFO)等对HL 60细胞的作用 ,选择 10 0 μmol/LFeCl3 和 10 μmol/LDFO与Ara C共同作用于HL 60细胞 ,并以单用Ara C及生理盐水作对照。结果 :①FeCl3 (10 0 μmol/L) +Ara C(10 0 μg/ml) 6h ,12h ,2 4h ,APO %和Sub -G1%低于单用Ara C(10 0 μg/ml)组 ,两组相比有显著差异性 (P <0 0 5 )。②DFO(10 μmol/L) +Ara C(10 0 μg/ml)组APO %、DNA电泳ladder数目 ,FCM检测Sub -G1%均比单用Ara C高 (P <0 0 1)。③等摩尔的DFO与等摩尔FeCl3 共同作用于HL 60细胞 ,结果与生理盐水组相同 ;等摩尔DFO加等摩尔FeCl3 和Ara C(10 0 μg/ml)与单用Ara C(10 0 μg/ml)结果相同。 结论 :铁超载抑制化疗药物Ara C诱导HL 60细胞凋亡作用 ,铁剥夺 (DFO)可促进化疗药物Ara C诱导HL 60细胞凋亡作用。临床上可采用铁剥夺的方法协同治疗白血病 ,白血病患者补铁应慎重     

磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂对分化的HL-60细胞凋亡的诱导

目的：探讨磷脂酰肌醇3—激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3-K)抑制剂对分化的人急性粒细胞白血病HL—60细胞生存的影响。方法：流式细胞仅检测分化抗原CD11b的表达，以确定分化程度；DNA梯形条带电泳确定凋亡；流式细胞仅分选分化与未分化细胞，并检测凋亡。结果：1μmol/L全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)ATRA处理HL—60细胞12，24，48h后，CD11b的阳性率分别为20．2％，31．1％，64．5％；经ATRA处理过的HL—60细胞中加入PI3—K的抑制剂wortmannin(1μmol/L)2h，在琼脂糖凝肢电泳上可见凋亡细胞特征性的“梯形”带；流式细胞仅分选出分化与未分化细胞后，在分化细胞中加入wortmannin(1μol/L)2h，PI染色流式细胞仪直方图上可见亚二倍体峰。结论：全反式维甲酸诱导分化的HL—60细胞的生存是依赖于PI3—K信号通路传导生存信号的。