TGF-β和BMP对胎兔颅骨成骨样细胞增殖和分化相互作用的实验研究

目的研究转化生长因子β(TGF-β)和骨形态发生蛋白(BMP)对成骨细胞增殖和分化的影响及其相互作用。方法取胎兔颅骨成骨样细胞进行体外培养，使用不同方法，加入TGF-β与BMP，在不同时间点检测其成骨样细胞增殖和分化的相互作用。结果TGF-β增加成骨样细胞DNA含量，抑制ALP活性、骨钙素的产生和矿化骨基质的形成。而BMP的作用相反。联合应用时，TGF-β减弱了BMP对成骨样细胞骨钙素产生和ALP活性的增强作用，BMP降低了TGF-β对成骨样细胞DNA合成的促进作用。在序惯性给药时，早期(9d)用BMP治疗并不影响随后加入的TGF-β对成骨样细胞ALP活性和基质钙化的抑制作用。而早期(10d)用TGF-β治疗却诱导了随后加入的BMP对成骨样细胞分化的促进作用。结论TGF-β促进成骨细胞增殖，BMP促进成骨细胞分化，它们在各自的不同时期发挥对成骨样细胞增殖和分化的影响。     

TGF-β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨作用

目的 :探讨TGF β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨作用。方法 :显微相差动态观察、细胞增殖计数、ALP活性测定及骨结节计数观察TGF β体外成骨作用。结果 :TGF β对该细胞的增殖 ,低剂量有促进作用 ,高剂量有抑制作用。TGF β(在 3～ 7d)对ALP活性有促进作用 ,并呈一定的时效和量效关系。TGF β低剂量对骨结节形成有促进作用 ,高剂量时为强有力的抑制作用 ,与剂量有相关关系。结论 :TGF β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨表现为双相作用。     

胎兔颅骨成骨样细胞体外培养模型的建立

目的：建立成骨细胞体外培养模型,为骨代谢和成骨机理研究提供细胞学基础。方法：用酶消化和组织块移行生长相结合方法,从胎兔颅骨中分离出成骨样细胞群进行原代及传代培养,应用组织学、酶细胞化学、免疫细胞化学和染色体染色对其生物学和遗传学特性进行鉴定。结果：胎兔颅骨成骨样细胞具有体内成骨细胞的形态特征、ALP活性及合成分泌BMP等的功能,并能在体外发生钙生,其遗传学性状稳定。结论：该模型具有体内成骨细胞的生物学和遗传学特性,可用于成骨细胞代谢和成骨作用的体外研究。     

胎兔颅骨成骨样细胞体外培养模型的建立△

目的建立成骨细胞体外培养模型,为骨代谢和成骨机理研究提供细胞学基础.方法用酶消化和组织块移行生长相结合方法,从胎兔颅骨中分离出成骨样细胞群进行原代及传代培养,应用组织学、酶细胞化学、免疫细胞化学和染色体染色对其生物学和遗传学特性进行鉴定.结果胎兔颅骨成骨样细胞具有体内成骨细胞的形态特征、ALP活性及合成分泌BMP等的功能,并能在体外发生钙化,其遗传学性状稳定.结论该模型具有体内成骨细胞的生物学和遗传学特性,可用于成骨细胞代谢和成骨作用的体外研究.     

TGFβ1和BMP2对培养兔关节软骨细胞增殖和分化的作用

目的：探讨TGFβ1和BMP2对培养兔关节软骨细胞增殖和分化的影响，从而了解其在关节软骨损伤修复及骨关节炎（OA）病理变化中的作用，方法：采用光电镜、免疫细胞化学、液烁计数、流式细胞仪分析细胞周期等方法观察软骨细胞的直微结构和增殖、分化及其特异性的表达。结果：TGFβ1显著增加了原代软骨细胞^3H-TdR的掺入和使其进入S-G2/M期细胞比例增加。而BMP2则对第5代软骨细胞有明显的促增殖作用。结论：TGFβ1能促进原代软骨细胞的增殖，但不能阻止其增殖能力随传代培养而减弱，而BMP2则显著促进了第5代软骨细胞的增殖，这可能与细胞的分化状态和细胞外基质（ECM）、细胞骨架等有关。     

Kartogenin与TGF-β3/BMP-2/DEX对兔滑膜间充质干细胞增殖及成软骨分化的对比研究

目的：比较Kartogenin（KGN）与转化生长因子β3（TGF?β3）/骨形态发生蛋白2（BMP?2）/地塞米松（DEX）对兔滑膜间充质干细胞（synovial?derived mesenchymal stem cells, SMSCs）增殖及成软骨分化的作用。方法于6~10月龄新西兰大白兔膝关节处滑膜中分离培养SMSCs,并进行鉴定。设置KGN组（采用KGN干预）、T/B/D组（TGF?β3/BMP?2/DEX联合干预）及空白对照组,采用PELLET系统培养法分别培养各组细胞。通过比较各组细胞的增殖速度、软骨微球的直径和重量、Ⅱ型胶原（Col?Ⅱ）表达情况、成软骨分化相关标志基因表达及蛋白质合成量等指标来评价KGN对SMSCs增殖及成软骨能力的影响。结果成功从兔膝关节滑膜分离出SMSCs;KGN组的SMSCs增殖能力弱于T/B/D组,但KGN组软骨微球直径最大,重量最重,Ⅱ型胶原合成量最多,且均显著高于其他组;PCR及Western Blot结果表明KGN组成软骨分化相关基因的表达最强,蛋白质合成量最多。结论 KGN不能明显增强SMSCs的增殖能力,但对SMSCs的成软骨分化能力强于TGF?β3/BMP?2/DEX,将来可能应用于修复软骨损伤。     

外源性TGF-β和BMP对兔尺骨骨折愈合作用的研究

目的：探讨外源性TGF—β和BMP对骨折愈合的作用。方法：用兔尺骨骨折模型，在骨折局部单独或联合应用TGF-β和BMP，通过X线片观察、生物力学、骨几何参数和骨痂钙含量测定对骨折愈合进行评估。结果：各骨生长因子治疗组的骨痂量、骨痂钙含量、骨愈合情况和骨折愈合后的力学强度明显优于对照组，TGF—β和BMP联合应用优于单用一种生长因子，单用TGF—β好于BMP。结论：在兔骨折周围局部应用外源性TGF-β和BMP，可促进骨折愈合，单用TGF—β的作用强于BMP，它们联合应用时，这种作用进一步增强，在促进骨折愈合方面具有协同作用。     

骨形成蛋白和转化生长因子-β对兔尺骨骨折愈合后生物力学性能的影响

目的 探讨外源性骨形成蛋白(BMP)和转化生长因子—β(TGF—β)对骨折愈合后生物力学性能的影响。方法 36只日本大耳白兔，体重3．5～4．5kg。随机分成4组：空白对照组、TGF—β组、BMP组和TGF—β BMP组，每组9只。采用兔尺骨骨折模型，在骨折局部将聚乳酸(PAL)为载体制备成TGF—β／PAL、BMP／PAL、TGF—β BMP／PLA缓释系统，手术当天将各缓释系统植入骨折区，对照组在相应部位置入PAL，术后50天取材，通过三点弯曲法测骨折愈合后整体骨弯曲结构力学性能的变化。取断端密质骨，用三点弯曲、压缩和拉伸方法测骨试件的材料力学特性的变化，同时测骨痴的几何参数和骨密度的变化来对骨折愈合进行评估。结果 治疗组尺骨的几何参数，整体骨弯曲的破坏载荷、极限强度和弹性棋量，骨试件的弯曲、压缩和拉伸的极限强度，以及弯曲和压缩的弹性棋量明显高于对照组，各治疗组与对照组比较，具有统计学意义(P＜0．01)，TGF—β BMP组高于TGF—β和BMP组；TGF—β组高于BMP组，各治疗组之间两两比较，有统计学意义(P＜0．05)。在骨密度方面，各治疗组与对照组之间无明显差异。结论 兔骨折周围局部应用外源性TGF—β和BMP可促进骨痴形成，增强骨折愈合后骨组织的生物力学强度，TGF—β的作用优于BMP，联合应用优于单用一种生长因子，在促进骨折愈合方面具有协同作用。     

成骨生长肽对大鼠骨髓基质细胞增殖和成骨分化的作用

目的：观察成骨生长肽诱导体外培养的大鼠骨髓基质细胞增殖及向成骨分化的作用。方法：取6周龄SD大鼠，贴壁法分离培养骨髓基质细胞，在不同浓度成骨生长肽的诱导下，观察细胞形态变化，绘制骨髓基质细胞生长曲线，碱性磷酸酶和钙结节组织化学染色。结果：成骨生长肽对骨髓基质细胞增殖和成骨分化的作用呈剂量依赖性：成骨生长肽浓度在10^-10及10^-11mol／L时促进骨髓基质细胞增殖，而在10^-8及10^-9mol／L时对骨髓基质细胞的增殖略有抑制作用；成骨生长肽浓度在10^-10及10^-11mol／L时骨髓基质细胞碱性磷酸酶染色基本呈阴性，与对照组相比差异无统计学意义，而在10^-8及10^-9mol／L浓度下可以显著提高骨髓基质细胞碱性磷酸酶染色的阳性率。结论：成骨生长肽可以明显促进大鼠骨髓基质细胞增殖及向成骨细胞分化，其促成骨活性具有显著的浓度依赖性。     

组织工程骨修复兔颅骨缺损的实验研究

目的　探讨组织工程化骨修复骨缺损实用价值。方法　将自体成骨样细胞即刻种植在胶原包埋的聚羟基乙酸（PGA）基质材料上,然后将该复合体或单纯基质材料移植到兔颅骨的一侧全层骨缺损区,作为实验侧Ⅰ或实验侧Ⅱ。对侧设对照,不作任何植入。将40只新西兰兔分别于术后2、6、8、12w处死,标本行大体组织学检查,X线摄片及灰量测定检查。结果　术后2w实验侧I缺损区可见骨小梁形成,且各期成骨面积明显优于实验侧Ⅱ及对照侧,另外,植入材料内的灰量测定结果及X线摄片结果也表明实验侧I成骨量明显大于实验侧Ⅱ（p<0.01）,而对照侧为纤维组织修复。结论　应用胶原包埋PGA加成骨样细胞复合体移植可修复自体的兔颅骨缺损,为组织工程化骨在颅面外科及整形外科领域的临床应用奠定了基础。     

微小颗粒骨异位成骨过程中TGF-β1的表达

目的 通过观察转化生长因子β1(TGF-β1)在自体微小颗粒骨(300-500μm)异位成骨过程中的表达，探讨微小颗粒骨移植的成骨机制。方法 采用日本大耳白兔造股二头肌肌袋模型，分别植入自体微小颗粒骨及自体块骨。术后1、3、5、7、11、14、21、28d取材，进行组织学、免疫组化染色及原位杂交。检测TGF-β1及TGF-β1 mRNA表达并作图像分析。结果 ①术后5d，颗粒骨组开始有软骨生成，7d时达到高峰．21d后有骨吸收；块骨组则以骨吸收为主。②术后1d见基质及血肿中TGF-β1阳性染色，亦见骨细胞TGF-β1阳性染色。5～11d颗粒骨组见成骨细胞、软骨细胞、间充质细胞及骨细胞表达大量TGF-β1。14d以后TGF-β1渐减少，21d以后渐平稳。颗粒组TGF-β1表达高峰出现早、强度高、持续时间长。③颗粒骨组TGF-β1 mRNA阳性表达细胞出现早，高峰在术后5-11d，主要为软骨细胞、成骨细胞、骨细胞及问充质细胞。结论 颗粒骨异位成骨能力强于块骨，TGF-β1表达高峰出现时间早、量大、持续时间长。TGF-β1 mRNA定位细胞广泛，信号明显强于各期块骨组。     

转化生长因子β1对成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的：探讨转化生长因子β1（TGFβ1）对成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其意义。方法：采用非放射性细胞增殖检测,3H－胸腺嘧啶摄入,3H－哺氨酸摄入及DNA定量分析方法,观察TGFβ1对体外培养的生长融合后早期（24h)的病理性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞的增殖活性和胶原合成的作用。结果：经TGFβ1作用后,来自瘢痕的成纤维细胞的3H－胸腺嘧啶核苷和3H－脯氨酸掺入增强（P＜0．01）,但来自正常皮肤的无明显变化（P＞0．05）。结论：在细胞生长融合后早期（24h),TGFβ1对瘢痕成纤维细胞的增殖和胶原合成具有正性调控作用,其在瘢痕的形成中可能具有重要作用。     

几丁聚糖和透明质酸钠对成纤维细胞增殖影响的实验研究

目的：比较几丁聚糖和透明质酸钠对成纤维细胞增殖的影响。方法：用含不同浓度的几丁聚糖和透明质酸钠的培养液培养成纤维细胞，以四唑盐比色法测细胞增殖，并用流式细胞仪测细胞周期。结果：几丁聚糖在≥0.1mg/ml时即对成纤维细胞的增殖有抑制作用，透明质酸钠的抑制浓度为1mg/ml，透明质酸钠和几丁聚糖都可使细胞周期中G1期比例增加。结论：几丁聚糖和透明质酸钠均抑制成纤维细胞的增殖，但几丁聚糖的抑制作用较强。     

冷冻保存胎兔颅骨骨膜修复关节软骨缺损的实验研究

为探讨关节软骨缺损的修复方法，采用家兔３０只，平均分成两组。在每个动物的双侧髌股关节股骨关节面作４ｍｍ×７ｍｍ全层软骨缺损。将经二步冷冻法保存的胎兔颅骨骨膜移植于一组动物一侧后肢作为实验组，另一侧用自体骨膜移植作为自体对照组。在另一组动物的一侧后肢用新鲜胎兔颅骨骨膜移植作为新鲜对照组，另一侧关节软骨缺损不修复作为空白对照组。术后肢体不作外固定。１６周后取材，经大体观察、组织学观察及氨基酸成分分析。结果发现，经冷冻保存的胎兔颅骨骨膜移植后能形成透明样软骨，与自体对照组无显著性差异（Ｐ＞０．０５），与新鲜对照组及空白对照组主要指标有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。氨基酸分析示实验组新生物接近纤维软骨（Ｐ＞０．０５）。认为，冷冻胎兔颅骨骨膜移植为关节软骨缺损的修复提供了实验依据。     

1a，25双羟维生素D3对成骨样细胞增殖与分化的影响

采用同位素掺入．细胞周期、细胞化学和扫描电镜等方法观察了1a，25双羟维生素D3[1．25(0H)2D3]对人及大鼠成骨样细胞OS-732和ROSl7／2．8增殖及分化的影响。结果表明：1，25(OH)2D2对0S-732细胞增殖的抑制作用呈明显的时效和量效关系。在给10^7mol／L的1.25(OH)2D3后第4和第6天，对0S-732细胞生长的抑制率分别为40%和60%；对DNA．RNA和蛋白质合成的抑制作用分别为59%，4l%和22%。流式细胞计测定结果表明：1.25(0H)2D3使DNA合成受阻；扫描电镜显示：1，25(OH)2D3有抑制ROSl7／2．8细胞表面徽绒毛的作用。此外，细胞化学染色表明：该激素有增加成骨样细胞碱性磷酸酶活性和促进骨形态形成蛋白合成的作用，即刺激骨形成的作用。     

乳酸对成骨样细胞成骨表型及碱性磷酸酶基因表达的影响研究

目的 明确聚乳酸降解终产物乳酸对细胞成骨表型和基因表达的影响机理，为聚乳酸支架的精确设计提供参考意义。方法 配制乳酸浓度为8、16、22、27 mmol/L的培养基，将不含乳酸培养基作为对照组，检测培养基的pH和渗透压。利用培养基培养大鼠成骨样细胞Ros17/2.8，观察细胞形态，测定细胞I型胶原、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性和骨钙素含量，盐酸四环素染色钙结节并定量分析。采用实时定量PCR法检测细胞ALP mRNA表达。结果 与对照组相比，随着乳酸浓度增加，培养基pH下降，渗透压升高，成骨样细胞形态改变，数量减少。低浓度乳酸组（8、16 mmol/L）的I型胶原量都显著高于对照组，其余组与对照组相比无显著差异。含乳酸组的细胞ALP活性都低于对照组，并且乳酸浓度越高，细胞ALP活性越低。含乳酸组的骨钙素量与对照组之间没有显著差异。随着乳酸浓度增加，含乳酸组细胞所形成的钙结节阳性面积减少，都低于对照组。低浓度乳酸组（8、16 mmol/L）的细胞ALP mRNA表达量都低于对照组。结论 聚乳酸降解终产物乳酸可抑制细胞ALP mRNA的表达，降低ALP活性。随着乳酸浓度增加，乳酸抑制作用增强，最终降低细胞的成骨矿化能力。此外，乳酸不会抑制细胞分泌I型胶原和骨钙素。     

碱性成纤维生长因子对颅缝细胞成骨分化的影响

目的 探讨碱性成纤维生长因子（FGF-2）对颅缝细胞成骨方向分化的影响.方法 ①获取新生SD大鼠颅骨矢状缝及冠状缝处颅缝细胞.②添加不同浓度FGF-2,观察颅缝细胞ALP染色、ALP活性及成骨标志物（osteocalcin,OC）表达量,了解不同浓度FGF-2对颅缝细胞向成骨分化的影响.结果①各浓度FGF-2作用于颅缝细胞后,ALP染色、活性均较对照组减弱（P ＜0.05）.其中10ng/ml FGF-2诱导的细胞ALP受到的抑制最弱.②各浓度FGF-2作用于颅缝细胞后,OC表达量均较对照组增加（P ＜0.05）.其中10ng/mlFGF-2诱导的细胞其OC表达量最高.结论 ①FGF-2抑制颅缝细胞早期成骨标志物ALP的表达,而增强晚期成骨标志物OC的表达.②较低浓度的FGF-2（10ng/ml）对ALP抑制作用最弱,对OC促进作用最强,最利于促进颅缝细胞向成骨方向分化.     

阻断转化生长因子—β信号转导抑制成纤维细胞增殖和I型胶质合成

目的：研究阻断转化生长因子-β（TGF－β）受体的信号转导对正常皮肤成纤维细胞增殖和I型胶原合成的调控。方法：组织块法体外培养皮肤成纤维细胞，加入缩短型TGF－βⅡ型受体的重组腺病毒（实验组，50pfu/cell)或β－半乳糖苷酶重组腺病毒（对照组，50pfu/cell)，培养后行细胞计数和Western Blot检测细胞增殖率和I型胶原合成状况。结果：缩短型TGF－βⅡ型受体在皮肤成纤维细胞的过度表达能有效抑制细胞增殖达34％－50％，并显著减少I型胶原的合成。结论：过度表达缩短型TGF－βⅡ型受体可以通过阻断TGF－β的信号转导来抑制成纤维细胞的细胞增殖和I型胶原合成。     

雄激素和转化生长因子β1协同调节前列腺基质细胞增殖和分化

目的：探讨双氢睾酮（DHT）和转化生长因子β1（TGF－β1）对体外培养的前腺基质细胞增殖和分化的影响及前列腺基质增生的机制。方法：体外培养人前列腺基质细胞，加入DHT和TGF－β1，采用MTT法检测细胞增殖，免疫组化、RT－PCR方法检测平滑肌细胞特异性标记蛋白的表达。结果：对平顶期的前列腺基质细胞，单独应用DHT或TGF－β1无显著刺激增殖作用（P＞0．05）；DHT和TGF－β1联合应用时，可显著刺激基质细胞增殖（P＜0．01），TGF－β1可使前列腺基质细胞中平滑肌细胞特异性标记蛋白的表达增加（P＜0．05），与DHT联合应用时这种作用更强。结论：DHT和TGF－β1具有协同促进前列腺基质细胞增殖和分化的作用。TGF－β1和雄激素可能是前列腺基质增生和平滑肌细胞过度增殖的重要诱因。