肿瘤坏死因子在前列腺癌细胞凋亡中的作用

目的 :研究参与维甲酸诱导的前列腺癌细胞DU - 1 4 5凋亡过程的相关基因。方法 :应用浓度为 1 0 - 5mol·L- 1 全反式维甲酸作用前列腺癌细胞系DU - 1 4 5细胞 36h和 72h ,诱导DU - 1 4 5细胞凋亡 ,光镜及电子显微镜观察细胞形态及结构的改变 ,并采用基于PCR的改良消减杂交技术克隆与凋亡相关的基因。结果 :在DU - 1 4 5细胞凋亡过程中 ,有大量TNF基因及其家族成员的参与。结论 :TNF家族基因在由全反式维甲酸诱导的前列腺癌细胞系DU - 1 4 5细胞凋亡过程中 ,起着相当重要的作用     

MS-275与姜黄素联用阻断细胞生存信号通路诱导前列腺癌细胞凋亡

目的探讨小剂量姜黄素和组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275联用诱导前列腺癌细胞系DU145凋亡的作用机制。方法 DU145细胞分为对照组,MS-275组(分别用1、2、4、8μmol/L的MS-275单独处理细胞24、48h)、姜黄素组(分别用10、20、40、80μmol/L的姜黄素处理细胞24、48h)、MS-275+姜黄素组(1μmol/LMS-275+20μmol/L姜黄素处理细胞24、48h)。采用MTT比色法测定药物单用或联用对细胞的杀伤效应,流式细胞术分析细胞周期的改变,Westernblotting检测细胞内蛋白表达水平的变化。结果 MS-275和姜黄素单用都能够呈剂量和时间依赖性地杀伤DU145细胞;小剂量MS-275(1μmol/L)+姜黄素(20μmol/L)联用时能够协同杀伤细胞,两种药物联合处理细胞48h后,细胞的生存率仅为45.9%;细胞周期检测表明MS-275和姜黄素联用导致细胞出现明显的亚G1峰,提示DU145细胞被诱导凋亡;Western blotting结果证实联合用药48h后,细胞内生存信号蛋白激酶Akt和ERK的磷酸化水平下降,同时凋亡标志蛋白PARP发生剪切。结论 MS-275和姜黄素联用可以协同杀伤DU145细胞,并通过抑制细胞内Akt和ERK生存信号通路的活性来诱导细胞凋亡。     

异鼠李素对人肺癌细胞抑制作用的观察

目的研究异鼠李素对人肺癌YTLMC-90细胞的抑制作用并探讨其作用机制。方法采用细胞生长、克隆形成和^3H—TdR掺入实验,流式细胞术等方法研究异鼠李素对、YTLMC-90细胞增殖和凋亡的作用及其分子机制。结果异鼠李素抑制YTLMC-90细胞的生长和增殖,诱导凋亡,使bcl-2,c—myc、H—ras癌基因表达下降,增强bax、c—fos基因表达。结论异鼠李素可能通过下调bcl-2、c-myc、H-ras基因的表达,增强bax、c—fos基因表达来达到抑制YTLMC-90细胞增殖和生长,诱导凋亡和分化。     

全反式维甲酸对人卵巢癌细胞糖原代谢影响的实验研究

目的　探讨全反式维甲酸干预后卵巢癌细胞株(体外)及裸鼠卵巢上皮性癌动物模型(体内)肿瘤细胞内糖原的变化及 意义。方法　以不同浓度及作用时间的全反式维甲酸对COC2细胞株进行体外干预后,测定细胞质糖原、乳酸脱氢酶含量,并行光 镜、电镜观察;以每只2mg/(kg·d)×4周剂量的全反式维甲酸对CAOV3细胞株荷瘤裸鼠经胃管针给药干预,收集肿瘤标本进行光 镜、电镜、组织化学及免疫组织化学检查。结果　COC2经5μmol/L及10μmol/L全反式维甲酸作用后细胞内糖原含量增加、乳酸脱 氢酶含量下降且均与时间呈正比,在30μmol/L全反式维甲酸作用后细胞则以凋亡为主;CAOV3荷瘤裸鼠经全反式维甲酸干预后,裸 鼠肿瘤细胞同样出现细胞内糖原增加的改变。结论　全反式维甲酸直接用于COC2细胞或经消化道给药间接作用于CAOV3荷瘤 裸鼠肿瘤后,均出现细胞内糖原含量增加、乳酸脱氢酶下降的改变,减缓了肿瘤细胞内的能量代谢,从而起到抑制肿瘤生长的作用。     

全反式维甲酸对乳腺癌MCF-7细胞周期和增殖活性的影响及restin基因表达的初步研究

目的:检测全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)在乳腺癌MCF-7细胞周期、增殖、分化和凋亡过程中的作用,以及对。restin基因表达的影响,从而为研究其功能提供线索。方法:用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期的变化;MTT 法检测细胞增殖活性;RT-PCR检测restin基因表达。结果:在ATRA诱导下,细胞出现G1期阻滞和生长抑制,增殖活性下降,restin基因开始表达,并呈增长趋势。结论:在ATRA诱导MCF-7细胞分化、凋亡过程中,ATRA能使MCF-7细胞 G1期阻滞,并能抑制MCF-7细胞生长,促使其凋亡,restin基因参与细胞周期的调控,特别是细胞凋亡。     

荧光染色技术在检测肿瘤细胞药敏中的应用

药物对肿瘤细胞的作用包括抑制增殖,诱导分化、凋亡和坏死等,基于形态学改变和分子机制等方面的检测已有很多方法,其中形态学判断的方法是最直观而可靠的方法。全反式维甲酸(All-trans retinoic acid,ATRA)是肿瘤细胞分化和凋亡诱导药物,我们用ATRA作用于低分化胃癌细胞株MGC-803,设计3种荧光染色方法,检验肿瘤细胞分化、核酸含量、细胞的凋亡与坏死,现报告如下。     

新基因TIG-310的原核表达、细胞和亚细胞定位及其在Ty21a免疫中的表达变化研究

目的：研究Ty21α免疫相关新基因(Ty21α immunization—associated gene，TIG—310)的原核表达、细胞和亚细胞定位及其在Ty21α免疫中的变化规律。方法：采用PCR技术，扩增TIG—310可能的编码区，将其克隆至pQE30载体，在M15菌株中进行诱导表达；采用原位杂交技术对TIG—310基因的表达产物在肠黏膜组织进行细胞定位；将其亚克隆至绿色荧光蛋白表达载体pEGFP—N1，通过电击传染导入L细胞，确定其亚细胞定位；通过RT—PCR研究其在Ty21α免疫中的变化规律。结果与结论：TIG—310的编码区在原核表达系统中获得包涵体表达；原位杂交结果显示该基因表达在肠黎膜的上皮细胞中；与绿色荧光蛋白融合表达的实验结果表明，该蛋白定位于整个细胞内。该基因在正常的BALB／c小鼠的胃肠黏膜高表达，在Ty21α第一次灌胃免疫后表达量显著增高，随着免疫次数的增加，TIG—310的表达量逐渐恢复正常。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的克隆、表达、纯化及生物学活性鉴定

目的：在大肠杆菌中表达人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的可溶性片段（soluble TNF-related apoptosis-inducing Ligand，sTRAIL），并鉴定其生物学活性。方法：以人胎盘cDNA为模板，根据GenBank中序列NM_003810设计引物，以PCR方法扩增sTRAIL基因，将其克隆人pET-32a，转化BL21（DE3），IPTG诱导后，收集菌体，超声破碎，离心取上清纯化，鉴定其生物学活性。结果：表达载体经DNA测序鉴定，氨基酸序列与预期一致。宿主菌高效表达目的蛋白，经SDS-PAGE、氨基酸测序鉴定均正确。可溶部分占表达总量的20％。经过两步纯化，sTRAIL纯度达到95％，表达量可达20mg／L培养基。纯化产物在体外能够明显诱导L929、NCI157、BEL7402、DU145等细胞凋亡，Hela细胞不敏感。对于L929，其半数致死量为0．10μg／ml。结论：本研究在原核表达系统中表达了sTRAIL，获得高纯度sTRAIL蛋白，为其进一步研究提供了良好基础。     

癌基因蛋白c-erbB-2和p21~(ras)在肺癌中的表达及意义

目的　探讨原癌基因c erbB 2和p2 1ras在肺癌形成机制中所起的作用。方法　用免疫组织化学SABC法对原发性肺癌中两种基因表达作一检测。结果　 5 5例肺癌中 ,2 2例 (44 % )c erbB 2过度表达 ,2 5例(45 % )p2 1ras过度表达 ,其中 10例小细胞肺癌中均未见两种基因过度表达。c erbB 2基因过度表达与淋巴结有无转移具有明显相关性 (P <0 0 5 )。c erbB 2 ,p2 1ras蛋白表达在肺癌分化程度中呈负相关 (P <0 0 5 )。结论　c erbB 2 ,p2 1ras在肺癌形成和发展中协同作用 ,有助于评估肺癌患者的预后     

miR-155对前列腺癌放射治疗的增敏作用

 目的 探讨miR-155在前列腺癌放射治疗(简称放疗)中的增敏作用。方法 转染anti-miR-155,抑制前列腺癌DU145和PC-3细胞中miR-155水平,联合应用放射治1疗,通过观察DU145和PC-3细胞的存活率、黏附率,以及前列腺癌细胞的凋亡率,并观察Caspase-3和Caspase-9表达水平和活性的变化。结果 与对照组相比,DU145和PC-3细胞经放射或anti-miR-155单独处理后,细胞存活率(放射组分别为25.6%±2.0%和21.6±1.0%;anti-miR-155处理组分别为20.5%±1.0%和15.5%±1.0%)和黏附率(放射组分别为0.8%±0.1%和0.7%±0.1%;anti-miR-155处理组分别为0.7%±0.1%和0.6%±0.1%)均显著降低(P<0.01);前列腺癌细胞凋亡率增高(放射组分别为3.3%±0.3%和4.2%±0.3%;anti-miR-155处理组分别为4.1%±0.1%和3.9%±0.2%);Caspase-3和Caspase-9表达水平和活性均提高(P<0.01);联合组的细胞存活率(分别为10.1%±0.5%和6.1%±0.5%)和黏附率(分别为0.4%±0.1%和0.4%±0.1%)低于单独处理组(P<0.01,n=6),细胞凋亡率(分别为6.9%±0.4%和6.8%±0.3%),Caspase-3和Caspase-9表达水平和活性等均高于单独处理组(P<0.01)。结论 抑制miR-155可增加人前列腺癌的放疗敏感性,提高放射线对人前列腺癌细胞的治疗效果,其机制可能与Caspase-3和Caspase-9参与细胞凋亡的途径相关。     

全反式维甲酸联合丁酸甘油酯诱导滤泡状甲状腺癌的实验研究

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)联合丁酸甘油酯(TB)诱导滤泡状甲状腺癌细胞株FTC-133钠/碘同向转运体(NIS)和甲状腺球蛋白(Tg)表达及其碘的摄取.方法 单独使用1 μmol/LATRA或0.1,0.25,0.5,1 mmol/L TB和联合使用该2种药物诱导FTC-133 48 h后,用实时定量PCR反应检测NIS mRNA和Tg mRNA的表达,蛋白印迹法检测NIS蛋白表达,放射免疫法检测Tg蛋白含量以及检测FTC-133诱导后摄碘变化.结果 TB可诱导FTC-133 NIS、Tg蛋白及mRNA的表达增高,并呈剂量依赖性.联合1 μmol/L ATRA及各浓度TB后较单独使用1 μmol/L ATRA及TB明显提高了FTC-133 NIS、Tg蛋白及mRNA的表达,并且增加了FTC.133对125I的摄取.结论 ATRA联合TB有效增强了FFC-133的摄碘能力,为低分化甲状腺癌的放射性碘治疗提供了一条新的研究途径.     

二氧化硒诱导肺腺癌SPCA-1细胞凋亡的研究

目的：研究二氧化硒诱导肺腺癌细胞系SPCA—l细胞凋亡。方法：采用台盼兰拒染法和四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度二氧化硒作用不同时间对肺癌SPCA—l细胞生长的抑制作用；采用流式细胞(FCM)技术，观察二氧化硒作用后SPCA—l细胞的凋亡率及细胞周期的变化；通过HE染色和透射电镜观察SPCA—l细胞的形态变化。结果：二氧化硒可有效的地抑制SPCA—l细胞的生长，具有时间、浓度依赖性；二氧化硒诱导SPCA—l细胞的凋亡具有浓度依赖性；二氧化硒低浓度时阻滞SPCA—l细胞于S期，高浓度时选择性诱导S期细胞凋亡；二氧化硒作用后，SPCA—l细胞呈现典型的凋亡细胞形杰特征。结论：二氧化硒通过诱导S期细胞凋亡而抑制肺腺癌细胞系SPCA-1细胞的生长，具有时效、量效及周期特异性。     

茶多酚诱导肝癌细胞凋亡

为进一步研究茶多酚诱导体外培养的肝癌细胞株HepG-II细胞发生凋亡的作用,采用MTT法、形态学观察、琼脂糖凝胶电泳和末端脱氧核苷酸转移标记法观察被茶多酚处理后的ＨepG－II细胞的形态学和生化等指标的变化。MTT法研究结果显示,当茶多酚浓度为250μg/ml时即时诱导HepG-II细胞凋亡,并与浓度呈正相关;当茶多酚浓度＞2000μg/ml时,抑制率增强的幅度明显减慢。透射电镜下观察到核染色质浓集呈块并可见凋亡小体;荧光染色在荧光显微镜下可见部分细胞核或细胞质内出现致密浓染的黄绿色块状和颗粒状荧光等凋亡细胞的形态学改变。琼脂糖凝胶电泳呈典型的DNA梯形图像。末端脱氧核苷酸转移标记法进一步证实茶多酚可诱导HepG-II细胞的凋亡。提示茶多酚可诱导体外培养的肝癌细胞株HepG-II细胞发生凋亡,具有抗肝癌的作用。     

腺病毒介导p53基因转染增加人胃癌细胞的放射敏感性

目的评价腺病毒介导p53基因(Adp53)转染对人胃癌细胞的凋亡效应和放射增敏作用。方法以重组腺病毒介导p53基因感染4种不同p53状况的人胃癌细胞，用免疫组织化学法和Western blot法检测P53蛋白在胃癌细胞中的表达；用细胞集落形成法检测细胞存活率；用TUNEL法检测细胞凋亡。胃癌细胞感染Adp53后照射4Gy，用流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡；胃癌细胞种植肿瘤内注射Adp53后照射6Gy，以肿瘤相对体积增长曲线观察肿瘤抑制情况。结果1：100效靶比(MOI)Adp53产生细胞高转染率，以及p53基因在4种胃癌细胞中均高表达，并产生G2/M期阻滞、凋亡增加和细胞增殖抑制。如果以凋亡评价放射效应，Adp53转染对4Gy照射4种细胞的凋亡率比值为：W细胞3．0，M细胞3．6，neo细胞2．2，823细胞2．5。体内实验结果显示，Adp53对w细胞肿瘤6Gy照射的抑瘤率比值为1．41，而对M细胞肿瘤为1．91。结论腺病毒介导p53基因转染产生细胞凋亡并提高人胃癌细胞的放射敏感性，这种作用不依赖于细胞内在的p53状况。     

Inhibition of cell growth induced by photosensitizer PP(Arg)2-mediated photodynamic therapy in human breast and prostate cell lines. Part I

Photodynamic therapy can become an effective alternative method to surgery. The experiments reveal that using low photosensitizer doses and relatively low energy doses allow us to obtain effective results after PDT (to limit formation of colonies by investigated cancer cells). The prostate and breast cancer cell lines were investigated: MCF-7, a human breast cancer responsive to androgen therapy; MDA-MB231, a more aggressive human breast cancer non-responsive to androgen therapy; LNCaP, a lymphonodal metastasis of prostate carcinoma responsive to androgen therapy; DU-145, a human prostate cancer non-responsive to androgen therapy. Clonogenic assay shows that certain PP(Arg)(2) and light energy low doses stimulate the researched colony-forming cancer cells growth. Some low energy doses used during PP(Arg)(2)-mediated PDT also cause the increase in the colony-forming tumor cells. Among investigated cancer lines, MCF-7 exhibited the biggest sensibility towards PP(Arg)(2) and LNCaP the smallest one. PP(Arg)(2) based PDT is an effective method in colony growth limitation of breast cancer cell lines: MCF-7, MDA-MB231 and prostate cancer cell lines: LNCaP, DU-145.     

Radiation sensitivity and apoptosis in human lymphoma cells

PURPOSE: The impact ofapoptosis on radiation-induced eradication of clonogenic tumour cells is uncertain. The aim was to analyse the relationship of different functional stages during the apoptotic process to cell death and clonogenic cell eradication. MATERIALS AND METHODS: Apoptosis in Jurkat T-cells was studied by morphology, light scatter and caspase activation. Mitochondrial integrity was determined by the mitochondrial membrane potential (delta(phi)m). Cell death was quantified using propidium iodide exclusion. Clonogenic cell death was determined using a dilution survival assay. The influence of Bcl-2 was tested using a Bcl-2 transfected Jurkat clone. RESULTS: Irradiation induced profound apoptosis within 48 h associated with caspase activation and breakdown of delta(phi)m. Inhibition of caspases abrogated the apoptotic morphology with no influence on breakdown of delta(phi)m and survival. Over-expression of Bcl-2 abrogated all hallmarks of apoptosis; delayed cell death, however, had no influence on clonogenic survival after irradiation. CONCLUSION: Based on Bcl-2 as a positional marker, radiation-induced apoptosis can be divided into two stages: the initiation/decision phase, characterized by a breakdown of the mitochondrial membrane potential, and the execution phase, characterized by caspase activation. The execution phase had no influence on survival, whereas the initiation/decision phase controls immediate survival. However, abrogation of both phases did not influence radiation sensitivity.     

Radiation Effects on K+-activated Metabolic Reactions

Abstract

Purpose: The aim of this study was the evaluation of induced DNA damages of human prostate cancer cells, DU-145, treated with a combination of radiofrequency capacitive hyperthermia (HT) and teletherapy (EBRT) compared to a combination of teletherapy with high-dose rate brachytherapy (BR).

Materials and methods: DU-145 cells were cultured as spheroids in 300 micron diameter. Then the following treatments were conducted: (a) EBRT at doses of either 2?Gy or 4?Gy of photon 15?MV, (b) HT for 0, 30, 60, and 90?minutes duration at 43?°C from a 13.56?MHz radiofrequency capacitive heating device (Celsius TCS), (c) BR with Ir-192 seed at doses of either 2?Gy or 5.5?Gy, (d) The mentioned HT followed by EBRT (HT?+?EBRT) and (e) EBRT followed by BR (EBRT?+?BR). Alkaline comet assay was performed to measure tail moment.

Results: The induced DNA damages of DU-145 cells treated by adding HT to EBRT compared with EBRT alone, showed a significant enhancement; 3.28 and 5.14 times respectively for 30 and 60?minutes HT. By plotting dose-response curves, we could find a range of doses, which create radiobiological iso-effect in HT?+?EBRT and EBRT?+?BR treatments.

Conclusions: This study suggests that about DNA damages of DU-145 cells, HT?+?EBRT could partly be considered as an alternative to EBRT?+?BR.     

UV-C诱导的凋亡SMC内Actin蛋白的表达

目的 :观察经UV -C照射诱导的体外凋亡动脉中膜平滑肌细胞 (SMC)内Actin表达的变化。方法 :应用免疫组织化学技术和图象分析技术检测凋亡SMC内Actin的表达。结果 :UV -C照射可诱导SMC发生凋亡 ,凋亡细胞内Actin表达较正常大大增强 ,并出现从胞周向核周、从胞浆向核内的迁移和再分布。结论 :Actin表达的改变可能是参与UV -C诱导的SMC凋亡的信号传递过程中的重要因素之一。