驻极体对成纤维细胞生长和表面电荷的影响

目的：研究驻极体对成纤维细胞表面电荷的影响及其细胞表面电荷与细胞生长、细胞凋亡的关系。方法：选用±300 V和±1 000 V驻极体分别作用成纤维细胞24、48和72 h,用流式细胞术和细胞电泳技术测定成纤维细胞的生长周期和细胞表面电荷。结果：(1)负极性驻极体作用成纤维细胞使细胞的电泳率和S期内的细胞数显著增加。(2)成纤维细胞表面负电荷和S期内细胞数的增加量与驻极体的表面电位成正比。(3)负极性驻极体能减少凋亡细胞的表面电荷量。(4)正极性驻极体作用成纤维细胞使G2和S期中的细胞数减少,同时减少了细胞表面的负电荷数量。结论：负极性驻极体具有促进成纤维细胞生长和增加细胞表面负电荷量的作用。正极性驻极体具有抑制成纤维细胞生长和降低细胞表面电荷密度的作用。凋亡细胞的表面电荷量较正常细胞要少。     

驻极体诱导3T3细胞内游离钙离子浓度的变化

目的：研究公主体对3T3细胞内游离Ca^2 浓度变化的,体诱导3T3细胞凋亡与游离Ca^2 浓度变化之间的关系。方法：选用－300V和－500V驻极体作用3T3细胞48h,即时依次加入CaCl2,A23187,EDTA,通过流式细胞术检测细胞内Ca^2 浓度的变化和3T3细胞的凋亡量。结果：（1）负极性驻极体作用3T3细胞后,3T3细胞出现10％的凋亡量;（2）驻极体作用3T3细胞以后,细胞质游离Ca^2 浓度升高,Ca^2 浓度的升高不是由于细胞内钙池的释放,而是由于细胞外Ca^2 内流所引起,结论：驻极体诱导3T3细胞凋亡的机制可能是细胞外Ca^2 内上起的。     

驻极体对成纤维细胞生长周期的影响

目的: 研究驻极体对成纤维细胞生长周期的影响及其调控机制。方法: 利用流式细胞术通过二维点图研究聚四氟乙烯(PTFE)驻极体对成纤维细胞(3T3)生长周期的时相参数的影响。结果: (1)负极性PTFE驻极体作用于3T3细胞24 h后, S期内的细胞数明显增加。(2)负极性驻极体在促进细胞生长的同时对部分细胞有促进其凋亡的作用。(3)正极性驻极体作用于3T3细胞24 h后,G1期内的细胞数增加,G2期和S期中的细胞数减少。结论: 负极性驻极体具有促进细胞生长的作用,正极性驻极体具有抑制3T3细胞生长的作用。     

PHEMA微孔人工角膜支架材料对成纤维细胞生长的影响

目的：研究微孔聚甲基丙烯酸β－羟乙酯（poly(2-hydroxyethl methecylate),PHEMA) 对成纤维细胞生长的影响并与无孔PHEMA材料进行比较。结果：通过含材料浸渍液的培养基培养成纤维细胞来评价微 孔和无孔的PHEMA材料的细胞毒性，分别于24、48和72h用0．5％台盼蓝法对每组进行细胞活力的测定。结果：成纤维细胞在含材料浸渍液的培养基中生长良好，培养24、48和72h后细胞活力与对照组差异无显著性（P＞0．05）；微孔PHEMA与无孔PHEMA之间对细胞活力影响亦无明显差异（P＞0．05）。结论：微孔PHEMA材料具有良好的生物相容性，是理想的人工角膜支架材料。     

重组人内皮抑素对肺癌细胞H-52黏附和侵袭力的影响

目的：观察重组人内皮抑素对肺癌细胞H-52增殖和凋亡的影响。方法：在培养液中加入梯度浓度的重组人内皮抑素（0．1、0．5、1．0，5．0、10．0、20．0mg／L）分别作用24、48、72h，采用噻唑蓝（MTF）比色法检测细胞黏附性，以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力。结果：内皮抑素对H-52细胞的增殖有抑制作用。其中，作用48h的抑制率分别为13．46％、15．38％、20．82％、24．71％、30．12％和37．44％，呈剂量依赖关系。给药后24h和48h，内皮抑素组细胞G／G期比例增高，而S期细胞比例降低（P〈0．05）。72h两组差异无统计学意义（P〉0．05）。24h和48h的凋亡率分别为（1．430±0．145）％和（1．760±0．054）％，均高于对照组（0．670±0．181）％和（1．260±0．138）％（P〈0．05）。透射电子显微镜下，内皮抑素组细胞微绒毛减少，染色质厚薄不均，位于核膜下。结论：重组内皮抑素可以在体外直接抑制肺癌细胞的增殖，诱导凋亡，影响细胞骨架等结构。     

负极性驻极体对胰岛素介电特性及降糖效果的影响

目的 研究负极性驻极体外静电场对胰岛素介电特性和结构的影响,观察经电场作用的胰岛素的降糖效果。方法 采用栅压电晕充电系统将聚丙烯膜制备成－500、－1 000、－1 500 V的负极性驻极体,分别作用于胰岛素,使用补偿法测量实验各驻极体在48 h内的等效表面电位,通过介电常数d₃₃测量胰岛素的极化规律与外静电场的关系,采用核磁共振和凝胶电泳检测外静电场对胰岛素分子结构的影响。将经不同表面电位负极性驻极体作用12 h的胰岛素溶液注入糖尿病大鼠体内,观察驻极体作用后胰岛素的降糖效果。结果 不同表面电位负极性驻极体作用胰岛素溶液48 h时,0～4 h内胰岛素溶液两侧的电位差均随时间延长呈指数规律上升,4 h后逐渐趋于恒定。－500、－1 000和－1 500 V驻极体作用胰岛素贴剂12 h时d₃₃值相比无驻极体静电场作用分别提高了14.7倍、26.7倍和45.0倍,12 h后趋于稳定。经外电场作用后胰岛素的空间结构没有发生明显变化,而大部分基团的氢键含量减少;胰岛素结构中单聚体的比例提高,主要以单聚体和二聚体的形式存在。－500 V和－1 000 V驻极体作用胰岛素治疗组处理8 h时大鼠的血糖含量与无驻极体作用胰岛素组相比分别下降了50.9%和22.1%（P<0.05）,具有良好的降糖效果。结论 负极性驻极体可进一步改善胰岛素的降糖效果。     

左旋肉碱对高糖条件下人腹膜间皮细胞增殖、凋亡及纤维连接蛋白分泌的影响

目的：探讨左旋肉碱对高糖条件下体外培养人腹膜间皮细胞增殖、凋亡及纤维连接蛋白（FN）分泌的影响。方法：以不同浓度左旋肉碱作用体外培养人腹膜间皮细胞，MTT法测定细胞增殖，Annexin V-FITC／PI双标记法检测细胞凋亡，ELISA法检测培养液中FN浓度。结果：不同浓度左旋肉碱作用24h后，0．1％左旋肉碱组细胞增殖活性显著升高（P〈0．05），作用72h后0．5％及1．0％左旋肉碱组细胞增殖活性明显降低（P〈0．05）。作用48及72h后0．05％及0．1％左旋肉碱组细胞凋亡率降低。作用24h后0．05％左旋肉碱组培养液中FN浓度升高（P〈0．05），作用72h后左旋肉碱组培养液中FN浓度均下降（P〈0．01）。结论：高糖条件下一定浓度的左旋肉碱可以促进人腹膜间皮细胞增殖、减少其凋亡。     

白藜芦醇对人宫颈癌SiHa细胞增殖与凋亡作用的影响

目的：探讨白藜芦醇（Res）诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的作用及可能的机制．方法：MTT法检测不同浓度（0,12．5,25,50,100,200,300,400和600μmol／L）Res处理24,48和72h对SiHa细胞的抑制率;流式细胞仪采用AnnexinV和PI双染检测细胞的凋亡率．荧光显微镜观测SiHa细胞的形态学改变．分光光度法检测Caspase-3活性．结果：Res在一定浓度范围内,以浓度和时间依赖的方式抑制宫颈癌SiHa细胞的生长（P〈0．05）．以0,200和300μmol／L Res处理细胞48h,SiHa细胞早期凋亡率分别为1．1％,8．9％和11．1％,晚期凋亡比例为3．1％,15．0％和14．0％．荧光显微镜下细胞呈现典型的凋亡性改变．200μmol／L Res处理8h后,Caspase-3活性增加,24h达高峰,后逐渐下降,经50,100和200μmol／L Res处理24h后,Caspase-3活性与对照组相比,分别增加了1．92倍,2．51倍和4．53倍（P〈0．05）．结论：白藜芦醇通过诱导Caspase-3活性增加以时间依赖和浓度依赖的方式抑制宫颈癌SiHa细胞增殖,诱导细胞凋亡．     

奥美拉唑诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及其机制研究

【目的】探讨质子泵抑制剂奥美拉唑体外对宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用及其可能机制。【方法】0、100、200、300μmol／L奥美拉唑分别作用于体外培养的HeLa细胞,荧光显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测凋亡基因caspase-3和bcl-2的mRNA表达。【结果】HeLa细胞经奥美拉唑作用24h后,均可见染色质凝集;MTT法检测示各组24h增殖抑制率为（2．19±0．24）％、（16．70±1．61）％、（27．50±1．37）％和（31．20±2．04）％,48h增殖抑制率为（2．38±0．76）％、（16．80±3．00）％、（40．50±2．64）％和（45．80±2．18）％。增殖抑制率随奥美拉唑浓度和作用时间增加而增加（P〈0．05）;各组流式细胞仪检测24h凋亡率为（3．99±0．75）％、（11．50±2．61）％、（25．70±3．1）％和（37．3±2．67）％;200μmol／L组48h凋亡率为（45±2．15）％,72h为（62．4±2．89）％。细胞凋亡率随奥美拉唑浓度和作用时间增加而增加（P〈0．05）;RT-PCR结果示casepase-3基因表达随奥美拉唑浓度增加而增加,bcl-2基因表达随奥美拉唑浓度增加而降低。【结论】奥美拉唑通过上调casepase-3和下调bcl-2基因的表达,诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡。     

端粒酶基因hTRT反义寡核苷酸对其酶活性和肿瘤细胞增殖的影响

（1）目的：探讨端粒酶基因hTRT反义寡核苷酸对肿瘤细胞增殖和端粒酶活性的影响。（2）方法：采用MTT法检测反义寡核苷酸对肿瘤细胞HL－60增殖的影响。采用TRAP－PCR法检测反义寡核苷酸处理肿瘤细胞后端粒酶活性的变化；采用Giemsa染色观察反义寡核苷酸处理后肿瘤细胞形态学变化，采用DNA凝胶电泳和三苯胺法检测反义寡核苷酸处理后肿瘤细胞DNA片段化。（3）结果：端粒酶基因hTRT反义寡核苷酸作用48h对肿瘤细胞增殖出现抑制作用。5μmol/L反义寡核苷酸处理24h后，细胞端粒酶活性下降，并且随作用时间的延长，活性不断降低，96h下降至对照组的44．4％，用5μmol/L反义寡核苷酸处理96h的HL－60细胞出现凋亡的形态学特征，处理24，48，72，96h后凋亡指数为0.053,0.127,0.257,0.315,，用5μmol/L反义寡核苷酸处理HL－60细胞96h后，电泳出现DNA梯状条带。作用24，48，72，96h细胞DNA片段化率分别为17．98％，29．34％，35．43％，41．24％；（4）结论：端粒酶hTRT基因反义寡核苷酸能抑制肿瘤细胞的增殖和端粒酶活性，并能诱导肿瘤细胞HL－60凋亡。     

化学促渗剂与负极性驻极体促进5-氟尿嘧啶体外透过大鼠增生性瘢痕和背部皮肤的比较

目的 比较化学促渗剂和负极性驻极体对5-氟尿嘧啶（5-FU）体外经增生性瘢痕皮肤的促渗作用,为驻极体5-FU缓控释贴剂的制备奠定基础。方法 通过Franz扩散池和高效液相色谱仪,研究1%氮酮、10%油酸乙酯、-1 000 V驻极体、-1 500 V驻极体和-2 000 V驻极体作用后5-FU的体外经大鼠瘢痕皮肤或背部皮肤的透皮规律。结果 （1）1%氮酮和10%油酸乙酯均可促进5-FU经大鼠瘢痕皮肤的渗透,且10%油酸乙酯的促渗效果优于1%氮酮。（2）化学促渗剂作用下的5-FU经大鼠瘢痕皮肤和背部皮肤的体外渗透规律相似,但是5-FU经瘢痕皮肤的累积透皮量少于经背部皮肤的累积透皮量。（3）负极性驻极体对5-FU均具有良好的促渗作用,促渗效果的优劣顺序依次为：-2 000 V驻极体、-1 500 V驻极体、-1 000 V驻极体。同样,负极性驻极体作用下5-FU经大鼠瘢痕皮肤的累积透过量少于经背部皮肤的累积透皮量。结论 化学促渗剂和负极性驻极体均能促进5-FU的经皮渗透。其中,10%油酸乙酯和-2 000 V驻极体对5-FU的促渗效果最佳,可用于驻极体5-FU缓控释贴剂的制备。     

Survivin反义寡核苷酸诱导肺癌细胞株凋亡的研究

目的: 探讨生存素(Survivin)的反义寡核苷酸(A SO DN)对肺癌细胞株的作用。方法: 在脂质体介导下,分别以100 nmol/L、300 nmol/L和500 nmol/L的Survivin A SO DN作用于小细胞肺癌细胞株NCI-H446和肺腺癌细胞株SPC-A1,于24 h、48 h、72 h用逆转录聚合酶链反应(RT-P CR)检测Survivin mRNA表达,Western blot检测Survivin蛋白,流式细胞仪检测凋亡。结果: NCI-H446和SPC-A1皆表达Survivin基因和蛋白。随着ASODN浓度增加,Survivin mRNA明显下调,其差异有显著性,其中ASODN 500 nmol/L作用72 h时两种细胞Survivin mRNA抑制率分别达62.72%和67.43%;Survivin蛋白表达也有类似的变化;ASODN对两种细胞生长抑制和诱导凋亡作用随浓度增大和作用时间延长而增强。结论: Survivin ASODN能够抑制肺癌细胞株Survivin基因和蛋白表达,呈时间、浓度依赖性,诱导凋亡的效果也呈剂量、时间依赖性,500 nmol/L的浓度作用72 h效果最佳。     

驻极体静电场对巨噬细胞迁移能力的影响

目的 探讨驻极体产生的静电场对巨噬细胞迁移能力的影响.方法 常温下利用低温等离子体放电法(栅控恒压电晕放电)制备得-2000 V聚丙烯驻极体,借助常规等温表面电位衰减测量方法研究驻极体在储存和实验条件下的电荷储存稳定性.用紫外线消毒后的驻极体作用于对数生长期的小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞),采用细胞划痕实验、Transwell细胞实验、荧光探针示踪法研究在驻极体静电场作用下细胞的迁移和形态变化.结果 -2000 V驻极体在常温、常湿条件下放置14 d时其表面电位稳定在初始值的70％,置于细胞培养箱28 h后其表面电位与0 h时相比差异无统计学意义(P>0.05).细胞划痕实验结果显示,驻极体静电场作用28 h时RAW264.7细胞向划痕区迁移、增殖能力增强,划痕面积减小.Transwell实验结果显示,驻极体静电场作用12和24 h时跨膜细胞数均较对照组增加(P均<0.01).荧光探针示踪实验结果显示,驻极体静电场作用下RAW264.7细胞体积变大,发生延展,褶皱增多,生出板状伪足、丝状伪足等突足结构.结论 制备的-2000 V驻极体可在体外提供稳定的静电场并持续作用于细胞,其静电场促进巨噬细胞体积变大、发生延展、褶皱增多并生出板状伪足和丝状伪足等突足结构,增强了巨噬细胞的迁移能力.     

不同浓度的维生素C对C2C12成肌细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察不同浓度的维生素C（VitC）对体外培养的骨骼肌成肌细胞（C2C12）增殖、凋亡的影响。方法：取体外培养的C2C12细胞,胰酶消化后制成单细胞悬液,离心重悬,调整细胞密度,按200 μL/孔接种,常规培养,待细胞融合率达80%且未出现细胞分化时,将细胞分6组：阴性对照组（C2C12 细胞中加入单纯无血清培养基）、H2O2组（C2C12 细胞中加入含500 μmol/L H2O2的无血清培养基）和VitC 1,2,3,4组（C2C12 细胞中加入含500 μmol/L H2O2的无血清培养基的基础上,分别加入不同浓度的VitC：10,20,60,100 mg/L）。分别在干预0,6,24,36,48,72 h后采用四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测各组C2C12细胞的增殖。在干预36 h后采用Annexin V-PI双染法检测各组C2C12细胞凋亡率。结果：在干预36和72 h时,各浓度的VitC组的吸光度（OD）值均较H2O2组显著升高（P＜0.001）,其中以VitC 4组升高最为显著,而且VitC 4组在干预36 h时的吸光度值高于阴性对照组（P＜0.05）;在干预36 h时,VitC 2,3和4组的C2C12成肌细胞凋亡率明显低于H2O2组;VitC 2和3组的C2C12成肌细胞凋亡率高于阴性对照组,而VitC 4组的C2C12成肌细胞凋亡率明显低于阴性对照组,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：VitC能够有效抑制H2O2诱导的C2C12成肌细胞的凋亡,高浓度的VitC可能在干预36 h时对C2C12成肌细胞有促增殖的作用。     

ETM study of electroporation influence on cell morphology in human malignant melanoma and human primary gingival fibroblast cells

Objective

To estimate electroporation (EP) influence on malignant and normal cells.

Methods

Two cell lines including human malignant melanoma (Me-45) and normal human gingival fibroblast (HGFs) were used. EP parameters were the following: 250, 1 000, 1 750, 2 500 V/cm; 50 µs by 5 impulses for every case. The viability of cells after EP was estimated by MTT assay. The ultrastructural analysis was observed by transmission electron microscope (Zeiss EM 900).

Results

In the current study we observed the intracellular effect following EP on Me-45 and HGF cells. At the conditions applied, we did not observe any significant damage of mitochondrial activity in both cell lines treated by EP. Conversely, we showed that EP in some conditions can stimulate cells to proliferation. Some changes induced by EP were only visible in electron microscopy. In fibroblast cells we observed significant changes in lower parameters of EP (250 and 1 000 V/cm). After applying higher electric field intensities (2 500 V/cm) we detected many vacuoles, myelin-like bodies and swallowed endoplasmic reticulum. In melanoma cells such strong pathological modifications after EP were not observed, in comparison with control cells. The ultrastructure of both treated cell lines was changed according to the applied parameters of EP.

Conclusions

We can claim that EP conditions are cell line dependent. In terms of the intracellular morphology, human fibroblasts are more sensitive to electric field as compared with melanoma cells. Optimal conditions should be determined for each cell line. Summarizing our study, we can conclude that EP is not an invasive method for human normal and malignant cells. This technique can be safely applied in chemotherapy for delivering drugs into tumor cells.     

重组腺病毒介导的HSP70转染对肠上皮细胞缺氧再复氧损伤的防护作用

目的　研究重组腺病毒介导的热休克蛋白 70转染对肠上皮细胞缺氧再复氧损伤的保护作用。方法　将重组含人全长HSP70基因的腺病毒载体 (AdCMVHSP70 )转染体外培养的肠上皮细胞株IEC 6 ,检测转染细胞HSP70的基因表达水平。对照组 (转染空载体组 )、转染HSP70 2 4h、48h及72h组IEC 6细胞经缺氧再复氧处理后 ,分别对细胞的活力、凋亡及死亡水平进行检测分析。结果AdCMVHSP 70转染组细胞HSP70基因表达为阳性 ,对照组无表达。经缺氧再复氧处理后 ,AdCMVHSP70转染组细胞活力较对照组明显增强 (P <0 0 1 ) ,Annexin V Flous试剂盒检测死亡细胞明显减少 (P<0 0 1 ) ,凋亡有一定水平的抑制 (P <0 0 5)。结论　重组腺病毒介导的HSP70转染可保护肠上皮细胞抵抗缺氧再复氧损伤 ,具有明确的细胞保护作用。而其具体保护机制可能与抑制细胞凋亡有关