非小细胞肺癌通过EPO/EPOR信号促进自身增殖的分子机制研究

目的 研究促红细胞生成素(EPO)及其受体(EPOR)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况及其对NSCLC发生发展的影响.方法 qPCR、western blot检测EPO/EPOR在9种肺癌细胞系中的表达水平;MTT法检测rhEPO促细胞增殖的作用,流式细胞术检测rhEPO对细胞凋亡和周期的影响,Transwell检测细胞迁移;qPCR、western blot检测rhEP0对Cyclin D1和Cyclin A表达水平的影响.结果 EPO/EPOR在部分肺癌细胞中高表达,rhEP0促进高表达EPO/EPOR的肺癌细胞的增殖,而对肺癌细胞凋亡和迁移无影响,rhEP0诱导Cyclin D1表达,使用Jak2/Stat5抑制剂或干涉Jak2/Stat5后rhEP0作用消失.结论 高表达EPO/EPOR非小细胞肺癌通过Jak2/Stat5/Cyclin D1通路促进自身增殖.     

促红细胞生成素对达卡巴嗪抗小鼠黑色素瘤细胞活性的调节作用

目的检测小鼠黑色素瘤细胞株B16促红细胞生成素受体(Erythropoietin receptor,EPOR)的表达,探讨促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)对达卡巴嗪抗B16细胞活性的影响及与Bcl-2家族蛋白表达的关系。方法采用RT-PCR、免疫荧光和激光共聚焦显微镜、Western blot等方法检测B16 细胞EPOR mRNA和蛋白的表达。MTT法和克隆形成试验检测EPO与达卡巴嗪联合应用时对B16细胞增殖的影响。Western blot法检测EPO对B16细胞Bcl-2、Bcl-xL、Bax蛋白表达的影响。结果B16细胞表达EPOR mRNA和蛋白。EPO能有效减少达卡巴嗪诱导B16细胞的凋亡（P<0.05）,EPO作用后,B16细胞Bcl-2、Bcl-xL蛋白表达水平明显增加（P<0.05）,Bax蛋白表达水平未见明显变化。结论B16细胞表达EPOR,EPO可调节化疗药对B16细胞的作用,其作用机制可能与其影响Bcl-2家族蛋白表达有关。     

熊果酸对卵巢癌细胞转移的抑制作用

目的 熊果酸(UA)对人卵巢癌细胞株HO-8910PM黏附、侵袭及趋化运动的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 采用MTT法方法检测熊果酸对HO-8910PM细胞黏附能力的影响;Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭实验检测熊果酸对HO-8910PM细胞侵袭及运动的影响;采用RT-PCR和Western blot方法检测熊果酸对HO-8910PM细胞中MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA和蛋白的表达的影响。结果 在黏附试验中,不同浓度熊果酸作用细胞24h后,抑制率分别为44.03%、46.62%和55.11%,与对照组比较具有统计学意义(P＜0.05)。不同浓度的熊果酸在体外作用24h后可以显著抑制HO-8910PM细胞的侵袭能力,穿膜细胞数与对照组比较具有统计学意义(P＜0.01)。熊果酸处理后细胞趋化运动能力降低与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。不同浓度熊果酸作用24小时后,HO-8910PM细胞MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA表达量明显低于正常对照组(P＜0.05),Western blot结果显示:HO-8910PM细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达量受到明显抑制(P＜0.05)。结论 熊果酸抑制人卵巢癌细胞株HO-8910PM黏附、侵袭和转移的生物学行为,其作用机制可能与熊果酸显著抑制MMP-2、MMP-9表达水平有密切关系。     

米非司酮对高转移卵巢癌细胞株HO-8910PM蛋白水解作用的影响

目的研究高转移卵巢癌细胞株HO-8910PM基质金属蛋白酶的表达情况及米非司酮对HO-8910PM细胞水解基质蛋白作用的影响.方法应用免疫组化染色法,检测H0-8910PM卵巢癌细胞基质金属蛋白酶的表达情况;采用水解空斑法检测不同浓度米非司酮对HO-8910PM细胞的体外水解人血浆基质蛋白空斑的变化.结果HO-8910PM细胞MMP-10及MMP-9表达较高,MMP-2表达较低;10 μmol/L、20μmol/L米非司酮培养48小时可显著降低具有蛋白水解作用的HO-8910PM细胞的百分比(P＜0.01),而5 μmol/L米非司酮组无明显变化(P＞0.05);不同浓度的米非司酮(5 μmol/L、10 μmol/L、20μmol/L)明显缩小HO-8910PM细胞的平均水解空斑面积.结论HO-8910PM细胞可表达MMP-10、MMP-9、MMP-2;米非司酮可抑制HO-8910PM细胞体外水解基质蛋白的能力.     

苏拉明对体外培养的人卵巢癌细胞HO-8910PM增殖影响

目的 探讨苏拉明对体外培养的人卵巢癌细胞增殖的影响。方法 不同浓度苏拉明作用于人卵巢癌细胞株HO-8910PM，用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测HO-8910PM增殖情况。结果 MTT结果显示50、100,200、300,400、500、600ug／mL浓度的苏拉明作用于HO-8910PM细胞96h的生长抑制率（GI）分别是13．1％、22．6％,35．1％、43．7％、54．3％、64．8％、70．9％，不同时间及不同浓度组吸光光度值A差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 苏拉明以时间及剂量效应方式抑制体外培养的HO-8910PM增殖；提示苏拉明作为HPA抑制剂有望成为转移性卵巢癌联合化疗用药。     

NDRG2基因亚型对卵巢癌HO-8910细胞增殖的影响

目的:构建表达N-myc下游调节基因2(NDRG2)两种亚型(长短2种亚型分别命名为NDRG2L、NDRG2S)的重组逆转录病毒载体,观察逆转录病毒介导的NDRG2基因对卵巢癌HO-8910细胞增殖抑制的影响.方法:以携带人NDRG2基因的两种亚型逆转录病毒载体转染体外培养的卵巢癌细胞株HO-8910.采用Western blot检测目的基因的表达,MTT、平板克隆实验检测对细胞增殖能力的影响.结果:细胞经逆转录病毒转染后,Westem blot检测NDRG2两亚型蛋白特异表达.MTT、平板克隆实验结果显示NDRG2基因两种亚型对HO-8910细胞生长均有明显促进作用(P＜0.05),而二者之间无明显差别.结论:逆转录病毒载体使卵巢癌细胞表达NDRG2基因,可以明显促进HO-8910细胞的生长和增殖.     

DOC-2对卵巢癌细胞HO-8910致瘤力的影响

背景与目的：作为近年发现的新的肿瘤抑制基因，DOC-2的作用机制还不完全清楚。本实验的目的在于观察DOC-2转染后对卵巢癌细胞系HO-8910在克隆形成率、细胞周期、裸鼠致瘤能力等方面的影响，并对其作用机制进行初步探讨。方法：实验分3组：卵巢癌细胞系HO-8910（无DOC-2基因的表达）、8910-P93（经转染并表达DOC-2基因）、8910-pcDNA3．1（转染空载体pcDNA3．1），首先通过软琼脂克隆形成实验比较3组细胞克隆形成率的差异，之后利用流式细胞仪观察其细胞周期的变化，最后用裸鼠荷瘤实验进一步验证DOC-2对肿瘤细胞致瘤能力的影响。结果：卵巢癌细胞系HO-8910在转染DOC-2后其克隆形成率明显降低，与转染前差异明显（P〈0．05），同时G．和G，期细胞明显增多而S期细胞明显减少，移植瘤裸鼠荷瘤实验显示HO-8910-P93细胞在裸鼠体内生长缓慢，肿瘤体积及重量均明显低于对照组（P〈0．05）。结论：DOC-2基因能明显抑制卵巢癌细胞系HO-8910的致瘤力。     

反义脱氧寡核苷酸抑制人卵巢癌HO-8910细胞株中ILK基因的表达

目的:探讨整合素连接激酶 (integirn-linked kinase,ILK) 反义寡核苷酸 (antisense oligonucleotide,ASODN) 对卵巢癌HO-8910细胞株中ILK基因表达的抑制作用.方法: 将ILK反义寡核苷酸(ILK-ASODN) 导入卵巢癌细胞株,阻断ILK的表达.转染后72h,用RT-PCR和Western-bllot法检测各组卵巢癌细胞ILK mRNA和蛋白表达量的变化.结果: ILK-ASODN处理后,各组卵巢癌细胞mRNA表达量明显下降,与两对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),且mRNA表达量随转染浓度的增高而减低;各组蛋白表达量均显著下降,各组与两对照组比较差异有极显著意义(P＜0.01),且蛋白表达量随转染浓度增高而减低.结论: ILK-ASODN导入卵巢癌细胞株后可以明显抑制卵巢癌HO-8910细胞株中ILK基因的mRNA表达和蛋白表达.     

促红细胞生成素及其受体在肿瘤发生发展中的作用

研究发现,促红细胞生成素(EPO)及EPO受体(EPOR)在多种恶性肿瘤组织中表达,且EPO能促进肿瘤微血管形成,刺激肿瘤细胞增殖,抑制凋亡,还调节肿瘤细胞对放化疔治疗的敏感性.另有研究表明,EPO的应用不利于肿瘤的控制和预后.EPO对肿瘤患者的疾病进展和生存期的影响仍需进一步研究.     

长链非编码RNA FOXD2-AS1对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响

  目的  观察长链非编码RNA（lncRNA）FOXD2-AS1对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响。  方法  收集2017年2月至2017年9月华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院（武汉市妇幼保健院）手术切除的16例卵巢癌患者的组织标本,采用荧光实时定量聚合酶链式反应（quantitative PCR,qPCR）检测组织标本、人卵巢癌细胞系及人正常卵巢上皮细胞系中的FOXD2-AS1表达水平。将HO-8910细胞分为实验组和对照组,分别转染siRNA-FOXD2-AS1和阴性对照RNA。细胞计数CCK-8法、Transwell迁移实验分别检测沉默FOXD2-AS1表达对卵巢癌HO-8910细胞增殖活性和迁移能力的影响。生物信息学方法预测FOXD2-AS1的下游靶基因,qPCR检测下游靶基因表达,Western blot法检测葡萄糖调节蛋白94（glucose regulated protein94,GRP94）和信号通路Wnt/β-catenin的蛋白表达。  结果  卵巢癌组织中的FOXD2-AS1相对表达量8.56±0.51明显高于正常癌旁组织的2.38±0.21（P < 0.01）,FOXD2-AS1在卵巢癌细胞系OC3、HO-8910、A2780、SKOV-3中表达明显增加（P < 0.05）。下调FOXD2-AS1表达明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖活性和迁移能力（均P < 0.01）。生物信息学方法显示,FOXD2-AS1靶向结合miR-150-5p后,可靶向结合GRP94基因。实验组和对照组miR-150-5p相对表达量分别为5.45±0.91和1.01±0.08（P < 0.01）,GRP94 mRNA相对表达量分别为0.32±0.05和1.02±0.11（P < 0.01）。GRP94和Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达减少。  结论  FOXD2-AS1在卵巢癌组织和细胞系呈高表达,下调FOXD2-AS1可调控miR-150-5p表达,抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖和迁移,可发挥抑癌基因的功能。      

MTDH和VEGF-C在上皮性卵巢癌组织中的表达及其临床病理特征

目的本实验主要研究MTDH和VEGF-C在上皮性卵巢癌组织中的表达情况,及其临床意义和病理特征的相关性,为卵巢恶性肿瘤的发病原因、转移机制提供一定的理论依据。方法 本研究主要通过应用免疫组化SP法检测病变卵巢组织,其中包括19例上皮性卵巢良性肿瘤、25例上皮性卵巢交界性肿瘤、112例上皮性卵巢恶性肿瘤中MTDH和VEGF-C的表达情况;进一步分析上皮性卵巢病变组织的相关临床和病理特征与MTDH和VEGF-C阳性表达率之间的关系。结果 在卵巢癌和卵巢交界性肿瘤中MTDH和VEGF-C的阳性表达率要显著高于卵巢良性肿瘤(P＜0.01)。其中MTDH在上皮性卵巢肿瘤组织中的阳性表达率与患者的年龄和病理类型无统计学意义(P＞0.05),而与组织分级、临床分期、淋巴结转移等有统计学意义(P＜0.05),其中卵巢肿瘤组织的分化程度低、分期晚和淋巴结转移者,MTDH和VEGF-C阳性表达率高。在卵巢恶性肿瘤中,MTDH与VEGF-C阳性表达呈正相关,且与CA125值有密切相关性。结论 MTDH和VEGF-C在上皮性卵巢癌的发生、发展中起重要的作用,可作为判断卵巢癌恶性程度、病情进展的重要指标,联合检测对于指导临床诊断有重要的意义。     

上皮性卵巢癌组织中环氧化酶-2的表达与化疗耐药的相关性研究

目的:探讨上皮性卵巢癌组织中环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达与化疗耐药的关系,以及与p53表达的相关性。方法:用免疫组化SP法检测108例上皮性卵巢癌组织和20例正常卵巢组织中COX-2和p53表达。结果:COX-2和p53在上皮性卵巢癌组织中阳性表达率分别为48.1%和59.3%,正常卵巢组织均未见表达,差异有极显著性(P<0.01);COX-2和p53表达呈显著正相关(P<0.01)。COX-2表达与患者病理类型、临床分期、病理分级及年龄无关,与术后残留灶直径有显著相关性(P<0.01)。COX-2和p53阳性表达率,耐药组和非耐药组相比均有显著差别(P<0.01)。多因素分析显示,卵巢癌患者COX-2、p53表达和术后残留灶直径是与化疗耐药密切相关的独立因素。结论:COX-2表达是与化疗耐药相关的独立危险因素。COX-2过表达与抑癌基因p53的突变可能具有相互促进作用,在卵巢癌化疗耐药中起重要作用。     

肝细胞生长因子及其受体c-met在卵巢癌细胞中的表达

 目的 探讨肝细胞生长因子（HGF）及其受体c-met蛋白表达与卵巢肿瘤临床病理特征间的关系。方法 采用免疫组织化学SABC法对不同病理类型的卵巢肿瘤组织中HGF／c-met蛋白的表达进行定位，定量分析研究。结果 在卵巢癌组织中，HGF阳性细胞呈黄色或棕黄色着色，且在上皮细胞中的表达较强；c-met在上皮细胞强着色，间质细胞则着色较弱。HGF和c-met在卵巢癌组织中表达较交界性肿瘤和良性肿瘤组织有统计学意义（P＜0.05）。手术病理分期Ⅲ ～ Ⅳ 期HGF和c-met蛋白表达也较Ⅰ～Ⅱ期显著升高（P＜0.05）。病理分级中、高分化与中分化、低分化间存在明显差异（P＜0.05）。结论 卵巢肿瘤组织中存在HGF和c-met蛋白的表达且两者存在相关关系，它们与卵巢癌的发生、侵袭和转移密切相关。     

EGR4在上皮性卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测EGR4在卵巢肿瘤组织中的表达,分析EGR4与上皮性卵巢癌临床病理因素间的关系,并探讨EGR4与上皮性卵巢癌耐药性的相关性.方法:收集2006年11月至2012年11月于西京医院就诊的有完整病史和临床资料的原发性上皮性卵巢癌患者86例.应用免疫组织化学染色的方法检测86例上皮性卵巢癌、17例良性上皮性卵巢肿瘤和14例交界性上皮性卵巢肿瘤组织中EGR4的表达情况.分析EGR4表达与患者临床病理因素及化疗耐药性之间的关系.结果:上皮性卵巢癌组织中EGR4蛋白表达较良性卵巢肿瘤和交界性卵巢肿瘤组织中表达明显增高,三组之间有统计学意义(P<0.05);上皮性卵巢癌组织中EGR4高表达与患者手术-病理分期、病理类型、腹水及肿瘤细胞减灭术有关(P<0.05),而与患者年龄、组织分化程度、淋巴结转移及肿瘤大小等指标无关(P>0.05);上皮性卵巢癌组织中EGR4表达与患者化疗耐药性无关(P>0.05).结论:EGR4在上皮性卵巢癌组织中呈高表达,且 EGR4高表达与患者手术-病理分期、病理类型、腹水及肿瘤细胞减灭术有关,提示EGR4可能参与上皮性卵巢癌的发生发展等过程;上皮性卵巢癌组织中EGR4表达与患者化疗耐药性无关.     

上皮性卵巢癌组织中环氧化酶-2的表达与化疗耐药及预后的相关性研究

目的：探讨上皮性卵巢癌组织中环氧化酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）表达与卵巢癌化疗耐药和预后的关系，以及与p53表达的相关性。方法：采用免疫组化SP法检测54例上皮性卵巢癌组织和20例正常卵巢组织中COX-2和p53表达，分析其与上皮性卵巢癌临床病理因素、化疗耐药的关系，同时对预后进行多因素的Cox生存分析。结果：COX-2和p53在上皮性卵巢癌组织中阳性表达率分别为48．1％和59．3％，正常卵巢组织均未见表达，差异有极显著性（P〈0．01）；两者间表达呈显著正相关（P=0．01）。COX-2表达与患者病理类型、手术病理分期、病理分级及年龄无关，与术后残留灶直径有显著相关性（P〈0．01）。COX-2、p53阳性表达率在耐药组和非耐药组之间相比有显著差异（P〈O．01）。多因素生存分析显示，手术病理分期、COX-2表达和术后残留灶直径是影响患者预后的独立危险因素。结论：COX-2表达与上皮性卵巢癌组织化疗耐药相关，是影响患者预后的独立危险因素。COX-2表达与抑癌基因p53的突变可能具有相互促进作用，在卵巢癌化疗耐药中起重要作用。     

上皮性卵巢癌组织中TUBB3和ERCC1的表达

目的通过检测TUBB3和ERCC1在上皮性卵巢癌组织中的表达情况,探讨两者与上皮性卵巢癌化疗疗效及预后的关系。方法采用免疫组化技术检测25例正常卵巢组织和50例上皮性卵巢癌组织中TUBB3和ERCC1蛋白的表达情况。结果 TUBB3和ERCC1在上皮性卵巢癌组织中的阳性率明显高于正常卵巢组织（P〈0.05）,两者的阳性表达率与上皮性卵巢癌的分化程度及临床分期有关。上皮性卵巢癌组织中TUBB3和ERCC1蛋白表达呈正相关关系（r=0.332,P〈0.05）。TUBB3、ERCC1阳性表达患者化疗有效率分别为34.6%和31.4%,均明显低于阴性患者的91.7%和93.3%（P〈0.05）。结论上皮性卵巢癌组织中TUBB3、ERCC1的表达可能影响化疗疗效及其预后存,两者阳性表达可能提示上皮性卵巢癌化疗耐药,可作为上皮性卵巢癌化疗耐药和预后检测的重要指标。     

CB和MMP-2在上皮性卵巢癌中的表达及其相关性的研究

目的：探讨组织蛋白酶B（cathepsinB,CB）和基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinases-2,MMP-2）在上皮性卵巢癌中的表达及其相关性。方法：采用免疫组化法检测60例上皮性卵巢癌组织、20例卵巢良性肿瘤、20例交界性上皮性卵巢肿瘤以及10例正常卵巢组织中CB和MMP-2的表达情况。结果：CB和MMP-2在正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤、卵巢交界性肿瘤、上皮性卵巢癌中表达水平呈明显上升趋势,CB和MMP-2在上皮性卵巢癌中的表达与组织病理分级、淋巴结转移均呈正相关,与临床分期、组织学分型无关。二者在上皮性卵巢癌中的表达呈正相关。结论：CB和MMP-2表达升高在上皮性卵巢癌的发生、分化、进展过程中起重要的作用,CB和MMP-2基因有可能成为治疗卵巢癌的新靶点.     

卵巢上皮性癌BRCA1和p53基因表达的临床意义及相互关系研究

目的：探讨BRCA1、p53基因蛋白在卵巢上皮性癌中的表达情况及相互关系。方法：应用S-P免疫组织化学法检测50例卵巢上皮性癌组织中BRCA1和p53蛋白的表达。采用Kaplan—Meier法分析两种蛋白表达情况与患者预后的关系。结果：1)BRCA1蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率仅为30％，明显低于正常卵巢组织(100％)和良性肿瘤组织(90％)(P＜0．01)；BRCA1在低分化癌、有淋巴结转移的卵巢癌组织中表达减少甚至缺失。2)p53蛋白在卵巢癌组织中的表达率为64％，而在正常卵巢及良性肿瘤组织中无表达；其表达仅与病理学分级有关。3)两种基因蛋白表达比较呈显著负相关(P＜0．01)。4)患者生存随访表明，有BRCA1表达的患者平均生存期长于无表达者；而p53对生存时间无影响。结论：BRCA1基因在转录后水平的下调对卵巢上皮性癌的发生发展有重要的作用．同时BRCA1基因与p53基因协同促进肿瘤的演进恶化。     

Expressions of Beta-catenin, E-cadherin and MMP-7 in ovarian epithelial tumors

Objective： To investigate the expressions of Beta-catenin, E-cadherin and MMP-7 and their implications in ovarian epithelial tumor. Methods： Immunohistochemical staining with SP method was conducted to identify the expressions of Beta-catenin, E-cadherin and MMP-7 in ovarian epithelial tumor in 66 cases. Results： The abnormal expression rate of Beta-catenin in malignant ovarian epithelial tumor was higher than those in borderline and benign epithelial tumors （P〈0.05）. The positive rates of E-cadherin in benign and borderline ovarian epithelial tumors were significantly greater than that in malignant epithelial tumor. The expression rates of MMP-7 in malignant and borderline ovarian epithelial tumors were higher than that in benign epithelial tumor （P〈0.05）. Conclusion： The abnormal expressions of Beta-catenin, E-cadherin and MMP-7 might be used to indicate the malignance transform of ovarian epithelial tumors, but they have no significant correlation with peritoneal dropsy invasion, caul invasion and appendant invasion in ovarian epithelial tumor.